مقالة منهجية

التحليل الرقمي للتلطيخ المناعي للبروتين المتفاعل ZW10 في أنسجة الرئة البشرية

4.8K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/58551

⸱

مايو 1, 2019

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Hematology, Zhongnan Hospital of Wuhan University, 2Department of Thoracic Surgery, Renmin Hospital of Wuhan University, 3Department of Human Anatomy, Histology and Embryology, Institute of Basic Medical Sciences, Chinese Academy of Medical Sciences, School of Basic Medicine, Peking Union Medical College, 4Department of Immunology, School of Basic Medical Sciences, Wuhan University, 5Department of Gastroenterology, Central Hospital of Wuhan, 6Department of Transfusion, Zhongnan Hospital of Wuhan University

في هذه المقالة

ملخص

يشارك البروتين المتفاعل ZW10 (ZWINT) في نقطة التفتيش المغزل الميتوميووووووومرض السرطاني. هنا، نقدم منهجية لتلطيخ المناعة من ZWINT في أنسجة سرطان الرئة البشرية، تليها المسح الرقمي للشرائح بأكملها وتحليل الصور. ويمكن لهذه المنهجية أن توفر صورا رقمية عالية الجودة ونتائج موثوقة.

الملخص

الغرض من هذه الدراسة هو إدخال منهجية لتلطيخ المناعة من أنسجة الرئة البشرية، تليها المسح الرقمي الكامل الشريحة وتحليل الصور. المسح الرقمي هو وسيلة سريعة لمسح كومة من الشرائح وإنتاج الصور الرقمية ذات جودة عالية. يمكن أن تنتج نتائج متوافقة مع الفحص المجهري الضوء التقليدية (CLM) من قبل علماء الأمراض. وعلاوة على ذلك، فإن توافر الصور الرقمية يجعل من الممكن أن نفس الشريحة يمكن ملاحظتها في وقت واحد من قبل عدة أشخاص. وعلاوة على ذلك، يمكن تخزين الصور الرقمية للشرائح في قاعدة بيانات، مما يعني تجنب التدهور الطويل الأجل للشرائح الزجاجية. القيود المفروضة على هذه التقنية هي كما يلي. أولا، فإنه يحتاج إلى الأنسجة عالية الجودة المعدة والكيمياء المناعية الأصلية (IHC) الشرائح دون أي ضرر أو بقايا تسرب الزائدة. ثانيا، يجب تحديد مناطق الورم أو غير الأورام من قبل علماء الأمراض ذوي الخبرة قبل التحليل باستخدام البرمجيات، من أجل تجنب أي التباس حول مناطق الورم أو غير الورم أثناء التسجيل. ثالثاً، يحتاج المشغل إلى التحكم في استنساخ الألوان خلال عملية الرقمنة في تصوير الشريحة الكاملة.

المقدمة

ZW10 تفاعل البروتين (ZWINT) هو عنصر ضروري من مجمع kinetochore الذي يشارك في نقطة التفتيش المغزل الميتوميك1،2،3. وقد أفيد أن استنفاد ZWINT يؤدي إلى فصل الكروموسوم المبكر الشاذ1،2،3. وقد أشارت الدراسات الحديثة إلى أن ZWINT تشارك في مسببات الأمراض من الأورام المتعددة من خلال تعزيز انتشار الخلايا السرطانية4،5. أبلغنا سابقا الإفراط في التعبير عن ZWINT في سرطان الرئة5. وقد كان من المقبول على نطاق واسع أن تحليل الشرائح من قبلعلماء الأمراض باستخدام CLM هو مضيعة للوقت وليس كميا 6،7،8. وعلاوة على ذلك، فإن تدهور الشرائح الزجاجية المخزنة قد يجعل من المستحيل سحب الشرائح التي تم إنشاؤها مسبقًا. قد تتغلب الطريقة الناشئة للتصوير الرقمي الكامل للشرائح المستندة إلى الكمبيوتر (WSI) على هذه القيود6و7و8 .

ولهذا الغرض، نقوم بوصف منهجية لوصم ة مناعية من ZWINT في أنسجة سرطان الرئة البشرية، إلى جانب المسح الرقمي الكامل الشريحة وتحليل الصور المستندة إلى البرامج. والميزة الرئيسية لهذه المنهجية هي إنتاج نتائج متوافقة مع CLM. ويمكن استخدام هذه التكنولوجيا على نطاق واسع في مجالات التهديف المرضية من تلطيخ الهيماتوكسيلين-يوسين (H&E) وIHC، الفلورة في موقع التهجين (FISH)، microarrays الأنسجة (TMA)، واكتشاف المخدرات وتطويرها.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة على جميع الطرق الموصوفة هنا من قبل اللجنة الأخلاقية لمستشفى تشونغنان بجامعة ووهان ومستشفى رينمين بجامعة ووهان.

1. إعداد الشرائح IHC

  1. إصلاح عينة أنسجة الرئة عن طريق غمر جزء أنسجة الرئة البشرية (حوالي 3 × 3 سم) في 4٪ paraformaldehyde في الفوسفات المخزنة المالحة (PBS) لمدة 24 ساعة في درجة حرارة الغرفة (RT).
  2. تجفيف الأنسجة في 80٪، 95٪، و 100٪ الإيثانول لمدة 15 دقيقة، 20 دقيقة، و 20 دقيقة، على التوالي، في درجة حرارة الغرفة. وأخيرا، تزج الأنسجة في 100٪ إكسيلين 3X لمدة 20 دقيقة لكل منهما في درجة حرارة الغرفة.
  3. للدمج، تزج الأنسجة في البارافين (63 درجة مئوية) لمدة 30 دقيقة. وأخيرا، تغيير البارافين مرة أخرى وتزج الأنسجة في ذلك لمدة 1 ساعة إضافية.
  4. استخدام microtome دوارة لقطع الأنسجة إلى 5 أقسام ميكرومتر سميكة ووضعها على 20 ميكروغرام / مل بولي-L-يسين المغلفة الشرائح.
  5. لإزالة الصبح، ضع الشرائح في فرن 65 درجة مئوية لمدة 2 ساعة، ثم اغمر المقاطع في ثنائي ميثيل البنزين لمدة 15 دقيقة، تليها نقع في 100٪ إكسيلين لمدة 15 دقيقة.
  6. ترطيب الشرائح مع أقسام الأنسجة 2X لمدة 5 دقائق في 100٪ الإيثانول، تليها علاج مع الإيثانول المخفف تسلسليا من 5 دقائق في الإيثانول 95٪، 5 دقيقة في الإيثانول 80٪، 5 دقيقة في 70٪ الإيثانول، و 5 دقيقة في الإيثانول 50٪.
  7. إجراء إصلاح مستضد.
    1. تمييع حامض الستريك إصلاح السائل (20X) إلى 1X مع مزدوج المقطر H2O (ddH2O).
    2. ضع الشرائح مع أقسام الأنسجة و1X حامض الستريك إصلاح السائل (300 مل) في مربع إصلاح مستضد، ومن ثم، تسخينها في فرن الميكروويف في قوة عالية لمدة 2 دقيقة، تليها التدفئة في الطاقة المنخفضة للحفاظ على الغليان لمدة 6 دقائق.
    3. السماح للأقسام لتبرد بشكل طبيعي إلى درجة حرارة الغرفة.
    4. استبدال السائل إصلاح حامض الستريك مع 0.01 M PBS، وغسل أقسام 3X، في كل مرة لمدة 5 دقائق، في شاكر الدوارة في درجة حرارة الغرفة.
  8. القضاء على بيروكسيداز الذاتية.
    1. تخفيف 30٪ من H2O2 إلى 3٪ مع ddH2O، إضافته إلى الشرائح (تأكد من أنه يغطي جميع الأنسجة)، واحتضان الشرائح في مربع الرطب في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة.
      ملاحظة: الصندوق الرطب هو مربع من البلاستيك من 10 × 15 سم ويمكن أن تحتوي على الماء.
    2. غسل الشرائح 3X، في كل مرة لمدة 5 دقائق، مع 0.01 M PBS في شاكر دوارة في درجة حرارة الغرفة.
  9. حظر مستضد غير محدد.
    1. تمييع مصل الماعز الطبيعي المركز إلى 10٪ مصل الماعز مع PBS مع 0.1٪ توين 20 (PBST).
    2. أضف 10% من مصل الماعز إلى الشرائح واحتضنها في المربع الرطب عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
      ملاحظة: يجب أن يغطي مصل الماعز جميع الأنسجة في الشرائح.
  10. وصمة عار الأنسجة.
    1. احتضان الشرائح مع الأرنب المضادة للإنسان المضادة للجسم المضاد ZWINT (1:50) في 4 درجة مئوية بين عشية وضحاها.
    2. غسل الشرائح 3X، في كل مرة لمدة 5 دقائق، مع 0.01 M PBST (1 مل من 0.1٪ توين 20 في 1000 مل PBS) في شاكر الدوارة في درجة حرارة الغرفة.
    3. احتضان الشرائح مع الأجسام المضادة الثانوية (نظام الكشف عن الأرانب، 1:200) لمدة 30 دقيقة في 37 درجة مئوية.
    4. غسل الشرائح 3X، في كل مرة لمدة 5 دقائق، مع 0.01 M PBST في شاكر الدوارة.
  11. لتصور تلطيخ المناعة، أضف الشرائح إلى 300 ميكرولتر من 3,3-diaminobenzidine الطازجة، وبعد ذلك، غسل الشرائح مع مياه الصنبور في درجة حرارة الغرفة.
    ملاحظة: يتم رصد درجة الصباغة تحت المجهر (التكبير 10X - 40X).
  12. وصمة عار مضادة للأنسجة. وصمة عار الشرائح مع محلول تلطيخ الهيماتوإكسلين لمدة 2 دقيقة في درجة حرارة الغرفة، وبعد ذلك، وغسل الشرائح مع مياه الصنبور لمدة 15 دقيقة.
    ملاحظة: تظهر النواة باللون الأزرق تحت المجهر (التكبير 10X - 40X). إذا كانت درجة تلطيخ الأزرق هو أكثر فعالية، يمكن استخدام التمايز الكحول الهيدروكلوريك لمدة 3- 5 ثانية، تليها الرينة الأنسجة مرة أخرى إلى اللون الأزرق مع مياه الصنبور لمدة 15 دقيقة لتسهيل تلطيخ بارز من الأنسجة.
  13. تجفيف الشرائح لمدة 5 دقائق في 50٪ الإيثانول، 5 دقيقة في 70٪ الإيثانول، 2X في 80٪ الإيثانول لمدة 5 دقائق، 5 دقيقة في 95٪ الإيثانول، وأخيرا، 2X لمدة 5 دقائق لكل في 100٪ الإيثانول في درجة حرارة الغرفة.
  14. للشفافية، تزج أقسام الأنسجة في خزان يحتوي على 100٪ إكسيلين لمدة 15 دقيقة ونقل المقاطع إلى خزان آخر يحتوي على 100٪ إكسيلين لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
  15. لختم، واتخاذ 50 - 100 درجة مئوية من اللثة محايدة وإضافة 5٪ إكسيلين إلى الخليط (تجنب الخلط في فقاعات). إضافة 15 درجة مئوية من الخليط المذكور أعلاه إلى أقسام أنسجة الرئة. ختم الفيلم مع الزجاج غطاء واضغط بلطف فقاعات بها.

2. التلقائي كامل الشريحة المسح الضوئي من الشرائح IHC

  1. السماح للشرائح مختومة لتجف لمدة 12 ساعة في درجة حرارة الغرفة لdesiccate لهم.
  2. حدد الخيار حقل مشرق يدويًا وأدخل واجهة المسح اليدوي.
  3. قم بمراجعة اسم الشرائح وحدد مسار تخزين للصور.
  4. قم بتعيين منطقة المسح واختيار نماذج المسح الضوئي الخيار باستخدام عتبات مجموعة المستخدم. العتبة حوالي 50 مع مساحة المسح الضوئي توسيع قيمة 200 ميكرومتر.
  5. قم بتعيين قيمة تركيز التركيز المسحي، وحدد التركيز تلقائيًا — حيث يتراوح من 1050 إلى 2650 — وأخيراً، حدد وضع طبقة واحدة.
  6. قم بتحميل شرائح IHC على محطة العمل وابدأ المسح الضوئي التلقائي.
    ملاحظة: تأكد من عدم تلف الشرائح. الحفاظ على الشرائح نظيفة وشفافة وتجنب الغبار، حلويات، وبقايا مانع التسرب الزائد على الشرائح. يجب أن تكون الشريحة الزجاجية وغطاء الغلاف خالية من العلامات. لا تقم بتنظيف الشرائح باستخدام الزيلين. يتم إعطاء حجم الشرائح في الجدول 1.
  7. قم بالمسح الضوئي تلقائيًا إلى مقطع الأنسجة بأكمله على شريحة بتكبير 20X أو 40X أو 100X.
  8. جمع وتخزين الصور في نهاية المسح الضوئي الشريحة كاملة.

3. تحليل الشرائح عن طريق برامج التصوير

  1. بدء تشغيل برنامج تحليل الصور الأنسجة المرضية وحدد الكمبيوتر المحلي.
  2. افتح الملف الذي يقوم بتخزين بيانات المسح الضوئي.
  3. حدد مستوى التكبير/التصغير المناسب من النطاق 2X إلى 40X.
  4. ضبط اللون لتعيين التباين الأمثل عن طريق تبديل ضبطاللون.
  5. دائرة يدويا وتسمية أجزاء من الاهتمام على كل صورة.
    ملاحظة: على سبيل المثال، يمكنك دائرة منطقة واحدة وتسميتها منطقة الورم.
  6. حدد الإضافات ومراقبة الجودة. في هذا الوقت، منشئ السيناريو للملوثات العضوية الثابتة.
  7. حدد كمية الكثافة وقم بضبط شريط الكشف.
    ملاحظة: ينبغي تنفيذ هذه العملية بعناية. يتم استخدام شريط التسامح الأزرق لضبط لون النواة الخلوية. يتم استخدام شريط التسامح براون لضبط تشبع لون التعبئة في الصورة. وينبغي أن تكون نتائج الصور بعد التعديلات متسقة مع النظراء الأصليين.
  8. ضبط مستويات نقاط لجعل كثافة تلطيخ المناطق الدائرة مماثلة لتلك التي من الصور الأصلية.
    ملاحظة: البني الداكن يشير إلى إيجابية قوية، أصفر بني إيجابي معتدل، أصفر فاتح إيجابي ضعيف، والأبيض سلبي.
  9. تخزين وتسمية الطراز كملف. تطبيق النموذج على شرائح أخرى وحدد التعليق التوضيحي المحدد".
  10. دع البرنامج يقوم بحساب درجة H تلقائيًا للمناطق الدائرية في الصورة.

4. القياس الكمي للدرجات باستخدام نظامH-التهديف 9،10

  1. حساب النسبة المئوية للتلطيخ المناعي وكثافة تلطيخ (0: سلبي، 1 +: ضعيف، 2 +: معتدل، 3+: قوي).
  2. استخدام نظام التهديف (H-درجة) لحساب التهديف المرضية للورم والمناطق غير الورم المجاورة.
    ملاحظة: H-درجة = (٪ من الخلايا مع ضعف كثافة × 1) + (٪ من الخلايا مع كثافة معتدلة × 2) + (٪ من الخلايا مع كثافة قوية × 3). لذلك، الحد الأقصى H-درجة هو 300 إذا تم كمي 100٪ من الخلايا مع كثافة قوية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

قمنا بقياس مستويات التعبير من ZWINT في 28 زوجا من سرطان الرئة غير الخلايا الصغيرة (NSCLC) عينات (الورم والأنسجة غير الورم المجاورة)، بما في ذلك 14 سرطان الخلايا الحرشفية (SCCs) و 14 سرطان الغدة الدرقية (ADCs)، من قبل IHC. المسح الرقمي الكامل للشرائح يوفر صور رقمية ذات جودة عالية (الشكل1A). وأظهرت النتائج أن درجة H من سرطان الرئة كانت أعلى بكثير من تلك التي من الأنسجة غير السرطانية المجاورة (P < 0.0001, اثنين من الذيل t-اختبار) (الشكل

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

مسح كامل الشريحة أصبح موضوعا ساخنا لمسحها قوية وإنتاج صور عالية الجودة لأغراض السريرية والبحث11،12،13. يمكن إنتاج الصور بواسطة المجاهر المسح الضوئي الشريحة في غضون دقائق11،12،13. من خلال تطبيق هذه المنهجية، حصلنا على صور عالية الجودة لشرائح ZWINT IHC وقارننا درجة H بين الأنسجة السرطانية وغير الورمية. في البروتوكول المعروض هنا، فإن أهم ا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

وقد تم دعم هذا المشروع من قبل المؤسسة الطبيعية الوطنية الصينية (رقم 81500151 و81400121 و81270607 و81541027 و81501352) والمؤسسة الطبيعية لمقاطعة هوبي (الصين) (رقم 2017CFB631). ويعرب المؤلفون عن تقديرهم لغو تشين، وتشانغ مين، ولي هوي، وزملائهم في شركة ووهان للتكنولوجيا البيولوجية المحدودة على دعمهم التقني. كما يشكر المؤلفون محمد جمال على تحرير اللغة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
Pannoramic MIDI3D HISTECHCat: PMIDI-040709ماسح ضوئي رقمي آلي للشرائح مع مجموعة ميزات رائعة: سعة 12 شريحة ، ومسح مضان ، وغير ذلك الكثير.
تم تنزيل QuantCenter3D HISTECHمن الموقع الرسمي للشركةإطار عمل تطبيقات تحليل الصور في 3DHISTCH.
LEICA RM2235Leica MicrosystemsCat: 14050038604ستضيف الدقة المحسنة للملحقات الجديدة الراحة لمنع نهج السكين بالإضافة إلى اتجاه العينة.
الأرانب المضادة للإنسان المضادة للجسم المضاد ZWINTAbcamCat: ab197794التحليل الكيميائي المناعي ل ZWINT في أنسجة الرئة البشرية.
الجسم المضاد الثانوي المضاد للأرانبووهان جودبيو TechnologyCat: GB23303-1الجسم المضاد الثانوي لتلوين IHC.
محلول ملحي مخزن بالفوسفاتووهان جودبيو TechnologyCat: G0002محلول يحتوي على عازلة الفوسفات.
أوليمبوس CX23أوليمبوسالقط: 6M87620مجهر للكشف عن H& شرائح E أو IHC.
كاشف كيميائي ثنائي ميثيل بنزينشنغهاي لينغفنغالقط: 1330-20-7سائل عديم اللون وقابل للاشتعال يستخدم كمذيب وعامل توضيح في تحضير أقسام الأنسجة للدراسة المجهرية.
محلول تلطيخ الهيماتوكسيلينووهان ServicebiotechnologyCat: G1039يستخدم بشكل شائع للدراسات النسيجية ، وألوان نوى الخلايا باللون الأزرق.
توين 20بيتجكات: 2005-64-5وهو خافض للتوتر السطحي غير أيوني من نوع بولي سوربات يتكون من إيثوكسيلة السوربيتان قبل إضافة حمض اللوريك. يتم استخدامه كرادع ومستحلب في التطبيقات الدوائية.
سائل إصلاح حامض الستريكووهان ServicebiotechnologyCat: G1202يستخدم لإصلاح المستضد بعد التثبيت أثناء إجراء IHC.
LEICA ASP200sLeicaCat: 14048043626تم تصميمه لعلم الأنسجة المرضي الروتيني والبحثي لما يصل إلى 200 شريط قصب.
LEICA Arcadia HLeicaCat: 14039354103إنها محطة تضمين البارافين الساخنة وتسمح بالتشغيل البسيط والتحكم الدقيق ، مما يؤدي إلى تحسين الجودة وسير العمل السلس والموثوقية.
LEICA Arcadia CLeicaCat: 14039354102إنها صفيحة باردة تحتوي على أكثر من 60/65 كاسيت على سطح العمل الكبير. تم تصميمه بوحدة تحكم تكيفية للبيئة للتأكد من استقرار درجة حرارة التشغيل دائما عند -6 درجة مئوية.
برنامج CaseViewer3DHISTECH

المراجع

  1. Endo, H., Ikeda, K., Urano, T., Horie-Inoue, K., Inoue, S. Terf/TRIM17 stimulates degradation of kinetochore protein ZWINT and regulates cell proliferation. The Journal of Biochemistry. 151 (2), 139-144 (2012).
  2. Wang, H., et al. Human Zwint-1 specifies localization of Zeste White 10 to kinetochores and is essential for mitotic checkpoint signaling. Journal of Biological Chemistry. 279 (52), 54590-54598 (2004).
  3. Lin, Y. T., Chen, Y., Wu, G., Lee, W. H. Hec1 sequentially recruits Zwint-1 and ZW10 to kinetochores for faithful chromosome segregation and spindle checkpoint control. Oncogene. 25 (52), 6901-6914 (2006).
  4. Ying, H., et al. Overexpression of Zwint predicts poor prognosis and promotes the proliferation of hepatocellular carcinoma by regulating cell-cycle-related proteins. OncoTargets and Therapy. 11, 689-702 (2018).
  5. Yuan, W., et al. Bioinformatic analysis of prognostic value of ZW10 interacting protein in lung cancer. OncoTargets and Therapy. 11, 1683-1695 (2018).
  6. Higgins, C. Applications and challenges of digital pathology and whole slide imaging. Biotechnic & Histochemistry. 90 (5), 341-347 (2015).
  7. Webster, J. D., Dunstan, R. W. Whole-slide imaging and automated image analysis: considerations and opportunities in the practice of pathology. Veterinary Pathology. 51 (1), 211-223 (2014).
  8. Al-Janabi, S., Huisman, A., van Diest, P. J. Digital pathology: current status and future perspectives. Histopathology. 61 (1), 1-9 (2012).
  9. Bonomi, P. D., et al. Predictive biomarkers for response to EGFR-directed monoclonal antibodies for advanced squamous cell lung cancer. Annals of Oncology. 29 (8), 1701-1709 (2018).
  10. Villalobos, M., et al. ERCC1 assessment in upfront treatment with and without cisplatin-based chemotherapy in stage IIIB/IV non-squamous non-small cell. Medical Oncology. 35 (7), 106(2018).
  11. Griffin, J., Treanor, D. Digital pathology in clinical use: where are we now and what is holding us back? Histopathology. 70 (1), 134-145 (2017).
  12. Huisman, A., Looijen, A., van den Brink, S. M., van Diest, P. J. Creation of a fully digital pathology slide archive by high-volume tissue slide scanning. Human Pathology. 41 (5), 751-775 (2010).
  13. Gray, A., Wright, A., Jackson, P., Hale, M., Treanor, D. Quantification of histochemical stains using whole slide imaging: development of a method and demonstration of its usefulness in laboratory quality control. Journal of Clinical Pathology. 68 (3), 192-199 (2015).
  14. Hofman, F. M., Taylor, C. R. Immunohistochemistry. Current Protocols in Immunology. 103, Unit 21.4 (2013).
  15. Ramos-Vara, J. A. Principles and Methods of Immunohistochemistry. Methods in Molecular Biology. 1641, 115-128 (2017).
  16. Otali, D., Fredenburgh, J., Oelschlager, D. K., Grizzle, W. E. A standard tissue as a control for histochemical and immunohistochemical staining. Biotechnic & Histochemistry. 91 (5), 309-326 (2016).
  17. Clarke, E. L., Treanor, D. Colour in digital pathology: a review. Histopathology. 70 (2), 153-163 (2017).
  18. Potts, S. J. Digital pathology in drug discovery and development: multisite integration. Drug Discovery Today. 14 (19-20), 935-941 (2009).
  19. Tabata, K., et al. Whole-slide imaging at primary pathological diagnosis: Validation of whole-slide imaging-based primary pathological diagnosis at twelve Japanese academic institutes. Pathology International. 67 (11), 547-554 (2017).
  20. Saco, A., Bombi, J. A., Garcia, A., Ramírez, J., Ordi, J. Current Status of Whole-Slide Imaging in Education. Pathobiology. 83 (2-3), 79-88 (2016).
  21. Griffin, J., Treanor, D. Digital pathology in clinical use: where are we now and what is holding us back? Histopathology. 70 (1), 134-145 (2017).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

DAB APE ZWINT

مقالات ذات صلة