Method Article

استخدام النظم الآلية للعملية وتضمين Colonic موريني عينات لإجراء تحاليل نسيجية

DOI:

10.3791/58654

⸱

January 7th, 2019

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Pathology Unit, Fondazione IRCCS Cà Granda, Ospedale Maggiore Policlinico, 2Department of Experimental Oncology, European Institute of Oncology, 3Gastroenterology and Endoscopy Unit, Fondazione IRCCS Cà Granda, Ospedale Maggiore Policlinico, 4Department of Pathophysiology and Transplantation, Università degli Studi di Milano

In This Article

Erratum Notice

Important: There has been an erratum issued for this article. Read More ...

Erratum

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Formal Correction: Erratum: Using Robotic Systems to Process and Embed Colonic Murine Samples for Histological Analyses
Posted by JoVE Editors on 2/03/2019. Citeable Link.

An erratum was issued for: Using Robotic Systems to Process and Embed Colonic Murine Samples for Histological Analyses.  An author affiliation was updated.

The affiliation for Claudia Burrello and Federica Facciotti was updated from:

Department of Experimental Oncology, European Institute of Oncology

to:

Department of Experimental Oncology, IEO, European Institute of Oncology IRCCS

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الافتقار إلى التوحيد القياسي لتجهيز الأنسجة موريني يقلل نوعية التحليل نسيجية موريني مقارنة بالعينات البشرية. نقدم هنا، وضع بروتوكول لتنفيذ دراسة نسيجية مورين الأنسجة colonic ملتهبة وأونينفلاميد لإظهار جدوى نظم الروبوتية المستخدمة بصورة روتينية لتجهيز وتضمينها العينات البشرية.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

فهم الأمراض البشرية قد اتسع إلى حد كبير بفضل دراسة نماذج حيوانية. ومع ذلك، يلزم نسيجية تقييم نماذج تجريبية دقيق الذي طبق للعينات البشرية. في الواقع، استخلاص نتائج موثوق بها ودقيقة حاسمة تتأثر بنوعية إعداد قسم الأنسجة. هنا، نحن وصف بروتوكول نسيجية تحليل الأنسجة موريني الذي يقوم بتنفيذ عدة خطوات الآلي أثناء الإجراء، من إعداد أولية لتضمين البارافين العينات موريني. يسهم في الحد المتغيرات المنهجية من خلال توحيد بروتوكول صارم من إجراءات التشغيل الآلي إلى زيادة الموثوقية العام للتحليل الباثولوجي مورين. على وجه التحديد، يصف استخدام التجهيز الآلي لهذا البروتوكول وتضمين أنظمة روبوتية، المستخدمة بشكل روتيني لمعالجة الأنسجة وتضمين البارافين العينات البشرية، لمعالجة العينات مورين من التهاب الأمعاء. نخلص إلى أن موثوقية نسيجية فحص الأنسجة مورين هو زيادة كبيرة عند إدخال تقنيات موحدة ومؤتمته.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في العقود الأخيرة، وضعت عدة نماذج تجريبية لتشريح الآليات المسببة للأمراض المؤدية إلى الأمراض البشرية1،2. من أجل تقييم مدى خطورة المرض، يجب تقييم تأثير العلاج الباحثين ودراسة الاختلافات المعمارية الخلوية وغذائها أو مقدار التهاب3. هناك حاجة لتنفيذ تلك النماذج التجريبية، تحليلاً مفصلاً نسيجية، غالباً ما مقارنة العينات مورين والبشرية4،5.

بالإضافة إلى ذلك، عادة تجهيز العينات البشرية وسجل بالمرافق الأساسية التشريح المرضى والباثولوجيا البشرية ذوي الخبرة من خلال معايير نسيجية وأساليب موحدة. على العكس من ذلك، ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

إجراءات الحيوان كانت وافقت عليها وزارة الصحة (المصادقة 127/15، 27/13) الإيطالية واتبعت المبادئ التوجيهية لرعاية الحيوان للمعهد الأوروبي لعلم الأورام إياكوك (لجنة الاستخدام ورعاية الحيوان مؤسسية)

1. المزمن التهاب القولون التعريفي بالإدارة المتكررة مفاجآت صيف دبي

  1. العمر منفصلة والجنس مطابقة الفئران في المجموعات 2 (العلاج DSS مقابل السيطرة ح2س، ليتيرماتيس الفئران على الأقل 5 كل مجموعة تجريبية).
  2. إدارة 2.5% DSS (كاتشين 40) في مياه الشرب 7 أيام لمجموعة العلاج والمياه للسيطرة على المجموعة.
    ملاحظة: يدفع هذا النموذج التهاب الأمعاء مزمن ترانسمورال9.
  3. بعد 7 أيام، وقف ال....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التجريبية التهاب القولون المزمن الناجم عن الإدارة المتكررة لإدارة السلامة والأمن في مياه الشرب نموذج موريني من التهاب الأمعاء تشبه8،بنك التنمية بين الأمريكتين البشرية9. ويصف الشكل 1 آثار العلاج إدارة السلامة والأمن، بما في ذلك القولون تقصير (الشكل 1A)، معلمة تستخدم على نطاق واسع لنقاط وجود التهاب المستحثة بمفاجآت صيف دبي، والتعبير colonic برو التحريضية الجينات بما في ذلك .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

فنحن نستخدم مختلف الخطوات الآلي أثناء إعداد الأنسجة مورين لتحليل الأنسجة. ويهدف هذا البروتوكول توفير تلميحات التقنية لزيادة في إمكانية تكرار نتائج والتوحيد للعملية برمتها، ومن ثم تعزيز الجودة الشاملة للتقييم النهائي نسيجية. قمنا بتنفيذ الصكوك الآلي وأساليب الإعداد والتضمين من الأنسجة، وتستخدم بشكل روتيني في علم الأمراض المرافق الأساسية لدراسة العينات البشرية.

وللتدليل على إمكانية تطبيق هذا الأسلوب، اخترنا إعداد تجريبية مورين مزمنة من التهاب الأمعاء، يسمى نموذج التهاب القولون المزمن الناجم عن م.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ونشكر إدارة علم الأمراض من مستشفى Policlinico إيرككس وميلانو للدعم التقني ومرفق IEO الحيوان للمساعدة في تربية الحيوانات.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

كاشف

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
الإيثانول المطلق اللامائيكارلو إرباكاشف 414605
المطلق ETOHHoneywell02860-1L
كاشف كبريتات البوتاسيوم الألومنيومSIGMAA6435كاشف
أنيلين الأزرقSIGMAكاشف 415049
كاربول فوشينSIGMAC4165كاشف
CD11b (استنساخ M1 / 70)TONBO biosciences35-0112-U100الجسم المضاد
CD20 IHC (استنساخ SA275A11)Biolegend150403الجسم المضاد
CD3 (17A2)TONBO biosciences35-0032-U100الجسم المضاد
CD4 (GK1.5) BDBiosciences552051الجسم المضاد
CD45.2 (استنساخ 104) BioLegend109837الجسم المضاد
CD8 (53-6.7)دينار بحريني Biosciences553031الأجسام المضادة
Citrate Buffer درجة الحموضة 6 10xSIGMAC9999كاشف
DabVector Laboratoriesكاشف SK-4100كاشف
DPBS 1xMicrogemL0615-500كاشف
DSSTdB ConsultancyDB001كاشف
EDTASIGMAE9884كاشف
EnVision Flex كاشف حجب البيروكسيديزDAKOcompreso في GV80011-2
EnVision Flex SubstrateDAKOcompreso في GV80011-2
EnVision Flex / HRPDAKOcompreso في GV80011-2
EnVision Flex + Rat LinkerDAKOcompreso في GV80011-2
EosinVWR1.09844كاشف
F4 / 80 (استنساخ BM8)BioLegend123108الجسم المضاد
الفورمالينPanReac2،529،311،215كاشف
حمض الخليك الجليديSIGMA71251كاشف
الماعز المضاد للجرذان HRPAgilent DAKOP0448الجسم المضاد
للهيماتوكسيلينDIAPATHC0303
كاشف LEICA الروتاري الميكروتوم (RM2255)لايكاRM2255المعدات
Ly6g (استنساخ 1A8)BD Biosciences551459الجسم المضاد
Mercury II أكسيدSIGMAكاشف
203793 Omnis Clearify عامل المقاصةDAKOCACLEGALالكاشف
Omnis EnVision Flex TRSDAKOGV80011-2كاشف
البرتقال GSIGMAO3756كاشف
البارافينكاشف ساكورا7052
معدات بيلوريسليكا
كاشف PercollSIGMAP4937
RPMI 1640 بدون كاشف L-GlutamineMicrogemL0501-500كاشف
STS020معدات Leica
Tissue-Teck Paraform كاسيت قابل للتقسيمSAKURA7022معدات
Tissue-Tek تضمين البارافين الآليمعدات ساكورا
كاشف XyleneJT Baker8080.1000

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Gibson-Corley, K. N., et al. Successful Integration of the Histology Core Laboratory in Translational Research. Journal of histotechnology. 35, 17-21 (2012).
  2. Olivier, A. K., et al. Gen....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Robotic Tissue ProcessingMurine Sample EmbeddingHistological Analysis ProtocolAutomated Paraffin EmbeddingColonic Murine TissueIntestinal Inflammation ModelH E Staining ValidationImmunohistochemical StainingTissue Cassette PreparationAutomated Processor Operation

Related Articles