مقالة منهجية

كشف الذيفان في تركيبات النانو باستخدام فحوصات ليستي (ال) أموبوسيتي ليمولوس

DOI:

10.3791/58830

⸱

يناير 30, 2019

 , 
1Nanotechnology Characterization Lab., Cancer Research Technology Program, Frederick National Laboratory for Cancer Research sponsored by National Cancer Institute

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكشف عن اندوتوكسينس في المواد النانوية المهندسة يمثل أحد التحديات الكبرى في مجال لطب النانوي. نقدم هنا، دراسة حالة يصف إطار يتألف من ثلاثة أشكال لل مختلفة لتقدير احتمال تلوث الذيفان في جسيمات نانوية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

عندما تكون موجودة في المنتجات الصيدلانية، الذيفان مكون جدار الخلية البكتيريا سلبية الغرام (يسمى غالباً أيضا lipopolysaccharide) يمكن أن يسبب التهاب وحمى وقصور-أو ارتفاع ضغط الدم، وفي الحالات القصوى، يمكن أن يؤدي إلى تلف الجهاز والأنسجة التي قد تصبح قاتلة. ولذلك، كميات الذيفان في المنتجات الصيدلانية، دقة تخضع. بين الطرق المتاحة لكشف الذيفان والتقدير الكمي، ويشيع استخدام الإنزيم ليمولوس أموبوسيتي ليستي (ال) في جميع أنحاء العالم. بينما أي منتج الأدوية يمكن أن تتداخل مع المقايسة لل، نانو-تركيبات تمثل تحديا خاصا بسبب تعقيدها. والغرض من هذه الورقة تقديم دليل عملي للباحثين عديمي الخبرة في تقدير اندوتوكسينس في هندسة المواد النانوية وصاغت نانوحبيبات المخدرات. وتناقش هذه الوثيقة، توصيات عملية لأداء ثلاث صيغ لل بما في ذلك التكدر، اللونية وفحوصات تجلط هلام. يمكن استخدام هذه الاختبارات لتحديد التلوث الذيفان في المنتجات المستندة إلى تقنية النانو العقاقير واللقاحات والمواد المساعدة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الذيفان لبنة من جدار الخلية البكتيريا سلبية الغرام1،2. يمكن تنشيط الخلايا المناعية في جداً منخفضة (حلول) تركيزات1،2. الوسطاء proinflammatory (السيتوكينات، اليوكوترين، ايكوسانويدس، إلخ) التي تنتجها الخلايا في الاستجابة إلى الذيفان المسؤولة عن الحمى وانخفاض ضغط الدم، وارتفاع ضغط الدم، وأشد المشاكل الصحية بما في ذلك فشل الجهاز متعددة 1 , 2 , 3-شدة المناعي بوساطة الآثار الجانبية الناجمة عن الذيفان يعتمد على فاعلية ما يحدده تكوين الذيفان وهيكل ويقاس في الذيفان الدولية وحدات (IUs أو أوروبا)3. عدد هذه الوحدات للكيلوغرام الواحد من وزن الجسم يستخدم لتعيين عتبة ﻻنبعاثات جرعة الذيفان. هذه الجرعة من الاتحاد الأوروبي 5/كغ للمنتجات الدوائية التي تديرها عبر جميع الطرق لكن الطريق إينتراثيكال. الأدوية مداوي كل متر مربع من سطح الجسم والسوائل اللاصقة والمواد المشعة والمنتجات التي تدار عن طريق توجيه intrathecal لها جرعة •انبوب عتبة مختلفة، وهو 100 الاتحاد الأوروبي/م2، 0.2 مليلتر الاتحاد الأوروبي، الاتحاد الأوروبي 175/V (حيث الخامس حجم المنتج المقصود للإدارة)، والاتحاد الأوروبي 0.2/كغ على التوالي4. مزيد من التفاصيل حول الجرعة ﻻنبعاثات عتبة لمختلف المنتجات الدوائية والأجهزة ومناقشتها في مكان آخر4،،من56.

الحيوانات تختلف على نطاق واسع في حساسيتها لردود الفعل بوساطة الذيفان. البشر والرئيسيات غير البشرية والأرانب من بين الأنواع الأكثر بالغة الحساسية إلى اندوتوكسينس3. لتجنب الآثار الجانبية بوساطة الذيفان في المرضى ومنع استنتاجات غير دقيقة للسمية الإكلينيكية والدراسات فعالية، من الضروري لدقة كشف وتحديد endotoxins في صياغات الصف السريرية وقبل السريرية على حد سواء. العديد من الأساليب المتاحة حاليا ويمكن تحقيق هذه المهمة. واحد منهم هو الإنزيم ليمولوس أموبوسيتي ليستي (ال)، الذي يستخدم عادة في جميع أنحاء العالم للمنتجات الطبية الحيوية الشاشة للتلوث الذيفان المحتملة، فضلا عن الكشف عن الإصابات البكتيرية7،،من89. مستعدة من أموبوسيتيس، والخلايا الموجودة في دم سرطان حدوة الحصان ليمولوس بوليفيموس يقيمون في الساحل الشرقي لقارة أمريكا الشمالية7. من المثير للاهتمام، وهناك عدد قليل من أنواع مختلفة من سرطان حدوة الحصان (تاتشيبليوس gigas و تريدينتاتوس تاتشيبليوس) في آسيا10. ليستي أموبوسيتي تاتشيبليوس (تل) يستخدم في العديد من البلدان الآسيوية للكشف عن الذيفان مماثلة لكيفية استخدام ال في أخرى [كونتريس10. ليساتيس (لل وتل) تحتوي على مجموعة من البروتينات التي تمنح النشاط حوزتي عند التنشيط. يتم تنشيط واحدة من هذه البروتينات، وعامل ما يسمى ج عند الاتصال مع الذيفان. تنشيط "عامل ج" كليفس "عامل ب"، الذي بدوره أيضا يصبح حوزتي وكليفس إنزيم تخثر الموالية لإنتاج إنزيم تخثر. ونتيجة لهذا السلسلة من ردود الفعل هو تكوين هلام، زيادة في تعكر عينة، وحضور الركازة اللونية، مظهر المنتج الملونة، التي تكون بمثابة أساس لجل-كلوت والتعكر وفحوصات اللونية، على التوالي. بينما لا يوجد أي شكل لل إلزامية، يشرح "لنا الغذاء" والدواء (FDA) في التوجيه بشأن الوثيقة الصناعة، أنه في حالة الاختلاف في نتائج الاختبار بين صيغ مختلفة لل، هو اتخاذ القرار استناداً إلى المقايسة هلام-كلوت5 .

كثير يشيع استخدام المواد الكيميائية المختبرية (على سبيل المثال-، يدتا) وفحوصات المخدرات المعروفة المنتجات (مثل البنسلين) تتداخل مع ال11. عادة ما يتم تعريفه التدخل بتقييم انتعاش الذيفان الموحدة ارتفعت بتركيز معلوم في محلول يحتوي على مادة الاختبار. إذا كان الانتعاش سبايك أقل من 50% أو أكثر من 200%، ثم نتيجة لل الاعتداء لمواد الاختبار المعطى غير صحيح بسبب تثبيط أو تعزيزها، على التوالي4. صيغ على أساس تكنولوجيا النانو غالباً ما تكون معقدة وتتداخل مع ال من خلال مجموعة متنوعة من الآليات12،،من1314. وقد وصف العديد من النهج للتغلب على التدخل: إعادة تشكيل عينة في مخازن محددة والتوتر السطحي، المنظمة البروتين بالتدفئة، تدمير القاعدة الدهنية المواد جوفاء بالتدفئة والمكمل للعينة مع فائض الكاتيونات ديفالينت5،12،13،،من1415. كما وقد وصف أساليب بديلة لحالات عندما لا يمكن التغلب على التدخل لل: أليسا, خط خلية مراسل HEK TLR4 المقايسة، والطيف الكتلي16،،من1718، 19.

هنا، يتم وصف الإجراءات التجريبية لإجراء هلام-كلوت والتعكر واللونية لل فحوصات. هذه الاختبارات متاحة أيضا على موقع مختبر توصيف تكنولوجيا النانو (نكل)20 في البروتوكولات STE1.2 (التعكر لل)، STE1.3 (لل جل-كلوت) و STE1.4 (لل اللونية). من المستحسن القيام بشكلين مختلفين على الأقل لوصف نفس النانو-الصيغة. عندما اختلف نتائج التعكر وال اللونية، تعتبر النتائج تجلط جل5. عندما اختلف نتائج صيغتين لل، أجرى إضافية النتائج التي توصلت إليها الدراسات باستخدام اختبار التنشيط الوحيدات (حصيرة) أو اختبار مولد أرنب (RPT) للتحقق من ال21. من المهم أن نلاحظ أن كل أسلوب يستخدم للكشف عن الذيفان وتقييم بيروجينيسيتي له مزايا وقيود21،22،،من2324. إذ تسلم بالقيود المفروضة على الإجراءات المستخدمة لوصف صيغة معينة تقنية النانو ضروري للحصول على مبرر علمي للاستخدام الإجراء الأمثل لذلك النانو-الصياغة.

في هذه الدراسة، استخدمت ميتوتريكسات الاسمافرون سي كصيغة نانوحبيبات نموذجي. هذه الصيغة تم وافق "لنا إدارة الأغذية والعقاقير" في عام 1995 وتستخدم لعلاج مرضى السرطان في جميع أنحاء العالم25.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1-إعداد العينات نانوحبيبات

  1. إعداد عينة الدراسة في ال المياه الصف.
  2. إذا كان الرقم الهيدروجيني عينة خارج نطاق 6-8، ضبط الرقم الهيدروجيني باستخدام هيدروكسيد الصوديوم خالية من مولد أو حمض الهيدروكلوريك.
  3. استخدام ال الصف المياه يعد تخفيف العديد من عينة الدراسة. تأكد من أن إضعاف أعلى لا تتجاوز الحد الأقصى تمييع صالحة (MVD). الرجوع إلى قسم النقاش لمزيد من التفاصيل حول تقدير MVD.

2-إعداد الكواشف المشتركة بين صيغ ال

  1. الأسهم مخفف من هيدروكسيد الصوديوم تركيز استخدام خالية من مولد ال كاشف المياه لإعداد حل عامل بتركيز 0.1 n.
  2. تمييع الأسهم حمض الهيدروكلوريك تركيز استخدام خالية من مولد ال كاشف المياه وتعد حلاً عامل نهائي بتركيز 0.1 n.
  3. إعداد الذيفان التحكم القياسية (CSE)
    1. إعادة تشكيل CSE وفقا لشهادة التحليل تم توفيره بواسطة الشركة المصنعة.
      ملاحظة: تشير إلى قسم مناقشة الملاحظات الهامة فيما يتعلق بالمعلومات الواردة في الشهادة. الرجوع إلى الجدول للمواد للحصول على التفاصيل المتعلقة بعدد النشرة المصورة وتطبيق صيغة CSE المعطى في تنسيقات مختلفة لل.
  4. إعداد الكاشف لل
    1. إعادة تشكيل الكاشف لل وفقا لشهادة التحليل التي توفرها الشركة المصنعة.
      ملاحظة: راجع قسم مناقشة تفاصيل هامة تتعلق بإعداد كاشف لل. الرجوع إلى الجدول للمواد للحصول على التفاصيل المتعلقة بعدد النشرة المصورة وتطبيق صيغة ال كاشف معين في تنسيق مختلف لل.

3-التعكر المقايسة لل

  1. إعداد معايير المعايرة
    1. استخدام ميليلتر 900 لل الصف المياه و 100 ميليلتر من CSE، إعداد العديد من تخفيف المتوسطة حسب الحاجة لتمكين إعداد معايرة قياسية بتركيز يتراوح من 0.001 إلى الاتحاد الأوروبي 1/مل.
    2. أولاً تسمية أنابيب وإضافة 900 ميكروليتر من المياه الصالحة لل في كل أنبوب. قم بإضافة 100 ميكروليتر من سولوتيون الاتحاد الأوروبي/مل 10 إعداد المعايرة القياسية مع تركيز 1EU/mL.
    3. كرر تمييع الوقت المسلسل كما هو موضح أعلاه لإعداد ثلاثة معايير المعايرة أقل. تحقق من أن أربعة معايير معايرة تتراوح بين 0.001 إلى الاتحاد الأوروبي 1/mL قد أعدت.
  2. إعداد عناصر تحكم الجودة
    1. إعداد عنصر تحكم جودة الاتحاد الأوروبي/mL 0.05 بالجمع بين 50 ميليلتر من الحل CSE الاتحاد الأوروبي/ملليلتر 1 ميليلتر 950 من المياه الصالحة لل.
      ملاحظة: تشير إلى قسم النقاش لمزيد من التفاصيل بشأن إعداد عنصر التحكم.
  3. إعداد الضوابط تثبيط/تعزيز (IEC)
    1. تعد اللجنة الانتخابية المستقلة مع تركيز 0.05 الاتحاد الأوروبي/mL بضم 25 ميليلتر من الحل CSE الاتحاد الأوروبي/ملليلتر 1 و 475 ميليلتر من نانوماتيريال الاختبار في إضعاف معين.
      ملاحظة: راجع قسم المناقشة للحصول على تفاصيل إضافية.
  4. الإجراء التجريبي
    1. تسمح أداة الاحماء بتحويلها على ما يقرب من 30 دقيقة في وقت مبكر. الإعداد الكشف عن الطول الموجي إلى 660 نيوتن متر كهذا المناسب التعكر لل.
    2. تسجيل الدخول بكتابة اسم المستخدم وكلمة المرور.
    3. افتح البرنامج (جدول المواد) بواسطة النقر فوق الرمز المطابق على شاشة كمبيوتر.
    4. حدد تجميع البيانات في شاشة البرنامج الرئيسية. أدخل معلومات مجموعة اختبار البيانات ومعرف في المساحة المقابلة في علامة التبويب عام على الشاشة الرئيسية.
    5. انقر فوق علامة التبويب الأجهزة اختيار نوع الصك من قائمة منسدلة.
    6. الإعداد الكشف عن الطول الموجي إلى 660 شمال البحر الأبيض المتوسط حيث أن هذا مناسب التعكر لل التي تنحاز الأسلوب التعكر لل.
    7. تحقق من أن الرقم التسلسلي ومعرف النظام ومعلومات المنفذ التسلسلي تظهر على الشاشة. انقر فوق "موافق". انقر فوق موافق مرة أخرى للتأكيد.
    8. أدخل معرف العينة بنفس الترتيب التي يتم اختبار العينة. استخدم الأزرار الافتراضية لإدخال المراقبة السلبية، القياسية منحنى واختبار العينات.
    9. إعداد أنابيب المكررة لكل عينة وإضافة 200 ميليلتر (اختبار نسبة 4:1) أو 100 ميليلتر (اختبار نسبة 1:1) لمراقبة سلبية (المياه)، معايير المعايرة، مراقبة الجودة، وجسيمات نانوية اللجنة الانتخابية المستقلة، واختبار في أنابيب زجاجية المسمى مسبقاً.
    10. إضافة 50 ميليلتر (اختبار نسبة 4:1) أو 100 ميليلتر (اختبار نسبة 1:1) من ال كاشف لأول اختبار قنينة، دوامة أنه بإيجاز، وإدراج في اختبار فتحه في دائري الصك. إذا تم استخدام نسبة 1:1، هو حجم الكاشف لل 100 ميليلتر.
    11. كرر الإجراء الموضح أعلاه لعينات أخرى. عملية عينات في وقت واحد.
      ملاحظة: تشير إلى قسم النقاش لمزيد من التفاصيل.

4-اللونية لل

  1. إعداد معايير المعايرة
    1. استخدام ميليلتر 900 لل الصف المياه و 100 ميليلتر من CSE، إعداد العديد من تخفيف المتوسطة حسب الحاجة لتمكين إعداد معايرة قياسية مع تركيز الاتحاد الأوروبي 1/مل.
    2. استخدام المياه الصالحة لل ميليلتر 900 و 100 ميليلتر لمعايرة الاتحاد الأوروبي/ملليلتر 1 القياسية، يعد معياراً معايرة ثانية بتركيز 0.1 الاتحاد الأوروبي/مليلتر.
    3. كرر تمييع الوقت المسلسل كما هو موضح أعلاه لإعداد معايير المعايرة أقل اثنين. تحقق من أن أربعة معايير معايرة تتراوح بين 0.001 إلى الاتحاد الأوروبي 1/mL قد أعدت.
  2. إعداد ضوابط الجودة.
    1. إعداد عنصر تحكم جودة الاتحاد الأوروبي/mL 0.05 بالجمع بين 50 ميليلتر من الحل CSE الاتحاد الأوروبي/ملليلتر 1 ميليلتر 950 من المياه الصالحة لل.
      ملاحظة: تشير إلى قسم النقاش لمزيد من التفاصيل بشأن إعداد عنصر التحكم.
  3. إعداد الضوابط تثبيط/تعزيز (IEC)
    1. يعد الاتحاد الأوروبي مليلتر 0.05 بالجمع بين 25 ميكروليتر من الحل CSE الاتحاد الأوروبي/ملليلتر 1 ميكروليتر 475 من اختبار نانوماتيريال.
      ملاحظة: راجع قسم المناقشة للحصول على تفاصيل إضافية.
  4. الإجراء التجريبي
    1. تسمح أداة الاحماء بتحويلها على ما يقرب من 30 دقيقة في وقت مبكر. الإعداد الكشف عن الطول الموجي إلى 405 نانومتر كهذا المناسب التعكر لل.
    2. افتح البرنامج بالنقر على أيقونة المقابلة على شاشة كمبيوتر. تسجيل الدخول بكتابة اسم المستخدم وكلمة المرور.
    3. حدد تجميع البيانات في شاشة البرنامج الرئيسية. أدخل معلومات المجموعة معرف وبيانات الاختبار إلى الفضاء المقابلة في علامة التبويب عام على الشاشة الرئيسية.
    4. انقر فوق علامة التبويب الأجهزة اختيار نوع الصك من قائمة منسدلة. اختيار الصك.
    5. تحقق من أن الرقم التسلسلي ومعرف النظام ومعلومات المنفذ التسلسلي تظهر على الشاشة. انقر فوق "موافق". انقر فوق موافق مرة أخرى للتأكيد.
    6. أدخل معرف العينة بنفس الترتيب التي يتم اختبار العينة. استخدم الأزرار الافتراضية لإدخال المراقبة السلبية، القياسية منحنى واختبار العينات.
    7. إعداد أنابيب المكررة لكل عينة وإضافة 200 ميليلتر (اختبار نسبة 4:1) أو 100 ميليلتر (اختبار نسبة 1:1) لمراقبة سلبية (المياه)، معايير المعايرة، مراقبة الجودة، وجسيمات نانوية اللجنة الانتخابية المستقلة، واختبار في أنابيب زجاجية المسمى مسبقاً.
    8. إضافة 50 ميليلتر (اختبار نسبة 4:1) أو 100 ميليلتر (اختبار نسبة 1:1) من ال كاشف لأول اختبار قنينة، دوامة أنه بإيجاز، وإدراج في اختبار فتحه في دائري الصك. إذا تم استخدام نسبة 1:1، هو حجم الكاشف لل 100 ميليلتر.
    9. كرر الإجراء الموضح أعلاه لعينات أخرى. عملية عينات في وقت واحد.

5-جل-كلوت لل

ملاحظة: يحدد هذا الفحص وجود endotoxins في العينة على أساس الملاحظة البصرية والكشف عن تجلط في أنبوب رد فعل. فيما يلي الخطوات التجريبية. استخدام ورقة البدلاء لتسجيل النتائج. هذه الورقة مقاعد البدلاء ليس إلزامياً، وطرق أخرى لتسجيل نتائج الفحص مقبولة أيضا. ويرد مثال على ورقة البدلاء في المواد التكميلية لراحة القارئ. لامدا (l) حساسية المقايسة جل جلطة وهو 0.03 الاتحاد الأوروبي/مل.

  1. قم بتسمية العديد من رد فعل الأنابيب اللازمة لاستيعاب عدد عينات الاختبار تم تحليلها. الرجوع إلى ورقة البدلاء للحصول على تفاصيل حول عدد replicates المستخدمة في الخطوة 1 والخطوة 2 والخطوة 3 للمقايسة.
  2. الكوة 100 ميكروليتر من عينة المياه أو عناصر التحكم أو اختبار كل أنبوب.
  3. يعد محرك البحث أن تركيز نهائي يساوي 4λ.
  4. الجمع بين 100 ميكروليتر من المعايير المذكورة أعلاه مع 100 ميكروليتر من عينة المياه أو اختبار لتحقيق التركيز النهائي لمحرك البحث 2λ. كرر ثلاث مرات أكثر لتحقيق أمداً ونصف-أمداً وربع لامدا.
  5. تأكد من أن درجة الحرارة في حوض ماء 37 درجة مئوية.
  6. إضافة 100 ميكروليتر من في أنبوبة الاختبار، دوامة بإيجاز ووضع على الرف مع جميع الأنابيب في حمام الماء ح 1.
  7. عكس الأنبوب مع حركة ناعمة.
  8. نتائج السجل يدوياً باستخدام "+" (شركة جلطة) أو "–" (لا جلطة أو جلطة فضفاضة) على ورقة مقاعد البدلاء.
  9. المضي قدما في التحليل وفقا لجامعة جنوب المحيط الهادئ الرهان 854؛ واستخدام ورقة البدلاء كمواد الدعم

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

على سبيل المثال البيانات التي تم إنشاؤها بعد اختبار هذه الصيغة في فحوصات ال يرد في الجدول 1. وتدخلت ميتوتريكسات الاسمافرون سي ال اللونية في تمييع 5. ومع ذلك، تم التغلب على هذا التدخل بتخفيف أكبر. كان الانتعاش ارتفاع يتراوح بين 50 و 200 في المائة عندما تم اختبار هذه الصيغة في تخفيف 50 و 500 في التعكر وال اللونية، فضلا عن إضعاف 5 في التعكر لل. عند تعديل معامل التخفيف، وكانت النتائج متسقة بين تخفيف في كلا فحوصات. وعلاوة على ذلك، كانت النتائج متسقة بين الأشكال الثلاثة المقايس...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المعلومات الواردة في هذا البروتوكول قد وصفت قبل15،26 وتعتمد على العديد من الوثائق التنظيمية التي نشرتها لنا الغذاء والدواء (إدارة الأغذية والعقاقير الأمريكية أو إدارة الأغذية والعقاقير) ودستور الأدوية الأمريكية (USP)4 , 5 , 6 , 27، وهي متاحة أيضا على الموقع نكل20 في البروتوكولات STE1.2 (التعكر لل)، STE1.3 (لل جل-...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الدراسة تدعمها الأموال الفيدرالية من المعهد الوطني للسرطان، "المعاهد الوطنية للصحة"، وبموجب العقد HHSN261200800001E. محتوى هذا المنشور لا تعكس بالضرورة وجهات نظر أو سياسات لوزارة الصحة والخدمات الإنسانية، ولا أذكر الأسماء التجارية، والمنتجات التجارية، أو المنظمات يعني موافقة "الحكومة الأمريكية".

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
<قوي > تعكر LAL Assay< / قوي>
هيدروكسيد الصوديومSigmaS2770عند الحاجة ، يتم استخدامه لضبط درجة الحموضة العينة لتكون بين 6-8
حمض الهيدروكلوريكSigmaH9892عند الحاجة ، يتم استخدامه لضبط درجة الحموضة في العينة لتكون بين 6-8
LAL ReagentAssociates of Cape CodT0051استخدام هذا الكاشف مع التعكر الفحص فقط
التحكم في السموم الداخلية القياسيةمن كيب كودE0005يمكن استخدام هذا الكاشف مع فحوصات التعكر والجلطة الهلامية
LAL من كيب كودWP0501يمكن استخدام هذا الكاشف مع أي تنسيق LAL
Glucashield BufferAssociates of Cape CodGB051-25يستخدم لمنع الاستجابة الإيجابية الكاذبة من بيتا جلوكان
أنابيب تخفيف الزجاج الخالية من السموم الداخلية التي يمكن التخلص منها 12 × 75 ممشركاء كيب كودTB240يمكن استخدام هذه الأنابيب مع جميع المقايسات الثلاثة
أنابيب تفاعل زجاجية خالية من السموم الداخلية يمكن التخلص منها 8 × 75 ممشركاء كيب كودTK100يمكن استخدام هذه الأنابيب مع العكارة والمقايسات الكروموجينيكية
نصائح خالية من البيروجين بأحجام 0.25 و 1.0 ملRAININPPT25 ، قد تمتص أطراف وماصات PPT10 السموم الداخلية وتطلق المواد القابلة للترشيح التي تتداخل مع مقايسة LAL. يتم استخدام أطراف RAININ هذه لأنه تم التحقق من أدائها الأمثل في مقايسة LAL وتأكيده
أنابيب الطرد المركزي الدقيقة الخالية من البيروجين ، 2.0 ملEppendorf22600044يمكن استخدام مستلزمات مكافئة أخرى
كومبيتيب رسوم البيروجين ، 5 ملEppendorf30089669يمكن استخدام مستلزمات أخرى مكافئة
ماصةEppendorf4982000020يمكن استخدام مستلزمات أخرى مكافئة
أيعلامة تجارية من قبل أي علامة تجارية
ثلاجة ، 2-8 درجة مئويةأي علامة تجاريةيمكن استخدام أي علامة تجارية
يمكن استخدام أيعلامة تجارية يمكن استخدام أي علامة تجارية
فريزر ، -20 درجة مئويةأي علامة تجاريةاستخدام أي علامة تجارية
Pyros Kinetix أو Pyros Kinetix Flex readerAssociates of Cape CodPKF96يمكن استخدام أدوات أخرى. ومع ذلك ، قد تتطلب كواشف LAL ومعايير السموم الداخلية المستخدمة في هذا الاختبار التحسين. عند استخدام أجهزة أخرى ، يرجى الرجوع إلى الشركات المصنعة للأداة ومجموعة LAL للحصول على التعليمات
< قوية > مقايسة LAL < / strong>
Pyrochrome LAL ReagentAssociates of Cape CodCG1500-5هذا الكاشف خاص ب Macroogenic
Control EndotoxinAssociates of Cape CodEC010يختلف هذا المعيار عن المعيار المستخدم في التعكر والجلطة الهلامية. تم تحسينه للحصول على الأداء الأمثل في الفحص الكروموجينيكي
هيدروكسيد الصوديومSigmaS2770عند الحاجة ، يتم استخدامه لضبط درجة الحموضة في العينة لتكون بين 6-8
حمض الهيدروكلوريكSigmaH9892عند الحاجة ، يتم استخدامه لضبط درجة الحموضة العينة لتكون بين 6-8
LALدرجة المياه Associates of Cape CodWP0501يمكن استخدام هذا الكاشف مع أي تنسيق LAL
Glucashield Bufferشركاء كيب كودGB051-25تستخدم لمنع الاستجابة الإيجابية الكاذبة من بيتا جلوكان
أنابيب تخفيف زجاجية خالية من السموم الداخلية يمكن التخلص منها 12 × 75 ممشركاء كيب كودTB240يمكن استخدام هذه الأنابيب مع جميع المقايسات الثلاثة
أنابيب تفاعل زجاجية خالية من السموم الداخلية يمكن التخلص منها 8 × 75 ممشركاء كيب كودTK100استخدام هذه الأنابيب مع فحوصات
التعكر والكروموجينيكأطراف خالية من البيروجين بأحجام 0.25 و 1.0 ملRAININPPT25 و PPT10السموم الداخلية وتطلق المواد القابلة للترشيح التي تتداخل مع اختبار LA. يتم استخدام أطراف RAININ هذه لأنه تم التحقق من أدائها الأمثل في مقايسة LAL وتأكيده
أنابيب الطرد المركزي الدقيقة الخالية من البيروجين ، 2.0 ملEppendorf22600044يمكن استخدام مستلزمات مكافئة أخرى
كومبيتيب رسوم البيروجين ، 5 ملEppendorf30089669يمكن استخدام مستلزمات أخرى مكافئة
ماصةEppendorf4982000020يمكن استخدام مستلزمات أخرى مكافئة
أيعلامة تجارية من قبل أي علامة تجارية
ثلاجة ، 2-8 درجة مئويةأي علامة تجاريةيمكن استخدام أي علامة تجارية
يمكن استخدام أيعلامة تجارية يمكن استخدام أي علامة تجارية
فريزر ، -20 درجة مئويةأي علامة تجاريةاستخدام أي علامة تجارية
Pyros Kinetix أو Pyros Kinetix Flex readerAssociates of Cape CodPKF96يمكن استخدام أدوات أخرى. ومع ذلك ، قد تتطلب كواشف LAL ومعايير السموم الداخلية المستخدمة في هذا الاختبار التحسين. عند استخدام أجهزة أخرى ، يرجى الرجوع إلى مصنعي الأدوات ومجموعة LAL للحصول على التعليمات
Gel-Clot LAL Assay
LAL ReagentAssociates of Cape CodG5003هذا الكاشف خاص بفحص الجلطة الهلامية
للتحكم في السموم الداخلية القياسيةمن Cape CodE0005استخدام هذا الكاشف مع فحوصات التعكر والجلطة الهلامية
هيدروكسيد الصوديومSigmaS2770عند الحاجة ، يتم استخدامه لضبط درجة الحموضة في العينة لتكون بين 6-8
حمض الهيدروكلوريكSigmaH9892عند الحاجة ، يتم استخدامه لضبط درجة الحموضة العينة لتكون بين 6-8
LAL درجة المياهAssociates of Cape CodWP0501يمكن استخدام هذا الكاشف مع أي تنسيق LAL
Glucashield BufferAssociates of Cape CodGB051-25تستخدم لمنع الاستجابة الإيجابية الكاذبة من بيتا جلوكان
أنابيب تخفيف زجاجية خالية من السموم الداخلية يمكن التخلص منها 12 × 75 ممشركاء كيب كودTB240يمكن استخدام هذه الأنابيب مع جميع المقايسات الثلاثة
أنابيب تفاعل زجاجية خالية من السموم الداخلية يمكن التخلص منها 10 × 75 ممشركاء كيب كودTS050هذه الأنابيب مخصصة للاستخدام مع مقايسة جلطة الهلام
أطراف خالية من البيروجين بأحجام 0.25 و 1 ملRAININقد تمتص أطراف وماصات PPT25 و PPT10السموم الداخلية وتطلق المواد القابلة للترشيح التي تتداخل مع مقايسة LAL. يتم استخدام أطراف RAININ هذه لأنه تم التحقق من أدائها الأمثل في مقايسة LAL وتأكيده
أنابيب الطرد المركزي الدقيقة الخالية من البيروجين ، 2.0 ملEppendorf22600044يمكن استخدام مستلزمات مكافئة أخرى
كومبيتيب رسوم البيروجين ، 5 ملEppendorf30089669يمكن استخدام مستلزمات أخرى مكافئة
ماصةEppendorf4982000020يمكن استخدام مستلزمات أخرى مكافئة
علامة تجاريةميكروسيتريفوجيأي علامة
ثلاجة ، 2-8 درجة مئويةأي علامة تجاريةيمكن استخدام أي علامة تجارية
دوامةأي علامة تجاريةاستخدام أي علامة تجارية
فريزر ، -20 درجة مئويةأي علامة تجاريةاستخدام أي علامة تجارية
حمام مائي ، 37 درجة مئويةأي علامة تجاريةيمكن استخدام أي علامة تجارية ، ومع ذلك ، من المهم إما إيقاف تشغيل دوران المياه أو استخدام حمام مائي غير دائري لأن تدفق المياه سيؤثر على تكوين الجلطة ويؤدي إلى نتائج سلبية كاذبة
يمكن يمكن استخدام يمكن Standard يمكن قد تمتص أطراف وماصات يمكن استخدام يمكن يمكن يمكن استخدام أي تجارية يمكن يمكن

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Perkins, D. J., Patel, M. C., Blanco, J. C., Vogel, S. N. Epigenetic Mechanisms Governing Innate Inflammatory Responses. Journal of Interferon & Cytokine Research. 36 (7), 454-461 (2016).
  2. Vogel, S. N., Awomoyi, A. A., Rallabhandi, P., Medvedev, A. E. Mutations in TLR4 signaling that lead to increased susceptibility to infection in humans: an overview. Journal of Endotoxin Research. 11 (6), 333-339 (2005).
  3. Dobrovolskaia, M. A., Vogel, S. N. Toll receptors, CD14, and macrophage activation and deactivation by LPS. Microbes and Infection. 4 (9), 903-914 (2002).
  4. US Pharmacopeia. Bacterial Endotoxins Test. , (2011).
  5. FDA, U. Guidance for Industry: Pyrogen and Endotoxins Testing: Questions and Answers. , (2012).
  6. FDA, U. Endotoxin Testing Recommendations for Single-Use Intraocular Ophthalmic Devices. , (2015).
  7. Fennrich, S., et al. More than 70 years of pyrogen detection: Current state and future perspectives. Alternatives to Laboratory Animals. 44 (3), 239-253 (2016).
  8. Kumar, M. S., Ghosh, S., Nayak, S., Das, A. P. Recent advances in biosensor based diagnosis of urinary tract infection. Biosensors and Bioelectronics. 80, 497-510 (2016).
  9. Solano, G., Gomez, A., Leon, G. Assessing endotoxins in equine-derived snake antivenoms: Comparison of the USP pyrogen test and the Limulus Amoebocyte Lysate assay (LAL). Toxicon. , 13-18 (2015).
  10. Akbar John, B., Kamaruzzaman, B. Y., Jalal, K. C. A., Zaleha, K. TAL - a source of bacterial endotoxin detector in liquid biological samples. International Food Research Journal. 19 (2), 423-425 (2012).
  11. Fujita, Y., Tokunaga, T., Kataoka, H. Saline and buffers minimize the action of interfering factors in the bacterial endotoxins test. Analytical Biochemistry. 409 (1), 46-53 (2011).
  12. Dobrovolskaia, M. A. Pre-clinical immunotoxicity studies of nanotechnology-formulated drugs: Challenges, considerations and strategy. Journal of Controlled Release. 220 (Pt B), 571-583 (2015).
  13. Dobrovolskaia, M. A., et al. Ambiguities in applying traditional Limulus amebocyte lysate tests to quantify endotoxin in nanoparticle formulations. Nanomedicine (London). 5 (4), 555-562 (2010).
  14. Dobrovolskaia, M. A., Neun, B. W., Clogston, J. D., Grossman, J. H., McNeil, S. E. Choice of method for endotoxin detection depends on nanoformulation. Nanomedicine (London). 9 (12), 1847-1856 (2014).
  15. Neun, B. W., Dobrovolskaia, M. A. Considerations and Some Practical Solutions to Overcome Nanoparticle Interference with LAL Assays and to Avoid Endotoxin Contamination in Nanoformulations. Methods in Molecular Biology. 1682, 23-33 (2018).
  16. Boratynski, J., Szermer-Olearnik, B. Endotoxin Removal from Escherichia coli Bacterial Lysate Using a Biphasic Liquid System. Methods in Molecular Biology. 1600, 107-112 (2017).
  17. Li, H., Hitchins, V. M., Wickramasekara, S. Rapid detection of bacterial endotoxins in ophthalmic viscosurgical device materials by direct analysis in real time mass spectrometry. Analytica Chimica Acta. 943, 98-105 (2016).
  18. Uhlig, S., et al. Profiling of 3-hydroxy fatty acids as environmental markers of endotoxin using liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry. Journal of Chromatography A. 1434, 119-126 (2016).
  19. Smulders, S., et al. Contamination of nanoparticles by endotoxin: evaluation of different test methods. Particle and Fibre Toxicology. 9, 41(2012).
  20. NCL. NCL assay cascade. , Available from: https://ncl.cancer.gov/resources/assay-cascade-protocols (2015).
  21. Dobrovolskaia, M. A., Germolec, D. R., Weaver, J. L. Evaluation of nanoparticle immunotoxicity. Nature Nanotechnology. 4 (7), 411-414 (2009).
  22. Borton, L. K., Coleman, K. P. Material-mediated pyrogens in medical devices: Applicability of the in vitro Monocyte Activation Test. Altex. , (2018).
  23. Stoppelkamp, S., et al. Speeding up pyrogenicity testing: Identification of suitable cell components and readout parameters for an accelerated monocyte activation test (MAT). Drug Testing and Analysis. 9 (2), 260-273 (2017).
  24. Vipond, C., Findlay, L., Feavers, I., Care, R. Limitations of the rabbit pyrogen test for assessing meningococcal OMV based vaccines. Altex. 33 (1), 47-53 (2016).
  25. Barenholz, Y. Doxil(R)--the first FDA-approved nano-drug: lessons learned. Journal of Controlled Release. 160 (2), 117-134 (2012).
  26. Neun, B. W., Dobrovolskaia, M. A. Detection and quantitative evaluation of endotoxin contamination in nanoparticle formulations by LAL-based assays. Methods in Molecular Biology. 697, 121-130 (2011).
  27. FDA, U. Guidance for Industry: Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers. , (2005).
  28. Mohan, P., Rapoport, N. Doxorubicin as a molecular nanotheranostic agent: effect of doxorubicin encapsulation in micelles or nanoemulsions on the ultrasound-mediated intracellular delivery and nuclear trafficking. Molecular Pharmaceutics. 7 (6), 1959-1973 (2010).
  29. Dabbagh, A., et al. Low-melting-point polymeric nanoshells for thermal-triggered drug release under hyperthermia condition. International Journal of Hyperthermia. 31 (8), 920-929 (2015).
  30. Li, Y., et al. Optimising the use of commercial LAL assays for the analysis of endotoxin contamination in metal colloids and metal oxide nanoparticles. Nanotoxicology. 9 (4), 462-473 (2015).
  31. Li, Y., et al. Bacterial endotoxin (lipopolysaccharide) binds to the surface of gold nanoparticles, interferes with biocorona formation and induces human monocyte inflammatory activation. Nanotoxicology. 11 (9-10), 1157-1175 (2017).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

LAL

مقالات ذات صلة