في هذه الورقة، ونحن نهدف إلى وصف أداء تقنية الطرد المركزي التدرج الكثافة وتطبيقه في بحوث فسيولوجيا الحيوانات المنوية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
جمع الحيوانات المنوية فرق الجودة باستخدام الكثافة المتدرجة الطرد المركزي
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
في التناسل الجنسي، الصمامات خلية الحيوانات المنوية أو مشيج الذكور مع مشيج أنثى لتحقيق الإخصاب. ومع ذلك، عدد كبير من الخلايا المنوية مع التسميد القدرة مطلوبة لتتفاعل مع مشيج الإناث لضمان الإخصاب. على هذا النحو، قدرة تخصيب الخلايا المنوية الفردية أمر حاسم لنجاح الاستنساخ. وقد استخدمت الكثافة المتدرجة الطرد المركزي لعدة عقود كأسلوب استنساخه، وسريعة، والكفاءة والفعالية والغاية قابلة للتكيف لجمع فقط جودة الحيوانات المنوية لاستخدامها في مساعدة التكنولوجيا الإنجابية. البروتوكولات ونحن المبينة في هذا التقرير تركز على استخدام أسلوب التدرج الطرد المركزي (بدجك) الكثافة بركل متقطع لعزل السكان ثلاثة متميزة من الحيوانات المنوية الديك بجودتها. كنا قادرين على جمع منخفضة ومتوسطة وعالية الجودة الحيوانات المنوية. كما يصف لنا استنساخه من البروتوكولات التي يترتب عليها تحديد إمكانات خصوبة الحيوانات المنوية بتقييم الجدوى والتنقل بينيترابيليتي. جمع الحيوانات المنوية بجودتها باستخدام تقنية بدجك سوف يكون من المفيد بدقة ودقة توصيف الحيوانات المنوية مع الخصوبة التفاضلية المحتملة.
المقدمة
في الفقاريات، الأمشاج الذكور الخضوع لضغوط مكثفة انتقائية؛ ولذلك اللياقة البدنية التناسلية للذكور محوري لتحقيق نجاح الإخصاب. الذكور من أي الأنواع الفقارية معين يجب أن يكون قادراً على إنتاج خلايا الحيوانات المنوية بكميات كبيرة وذات نوعية كافية لتلبية احتياجات التسميد. خلايا الحيوانات المنوية، وقد رأس الحيوانات المنوية والسوط، هي الخلايا الأكثر استقطابا في الجسم. فأيضا متباينة للغاية في جودة الحيوانات المنوية (منخفضة حية وميتة شكلياً العادي وغير طبيعي وغير متحركة، متنقلة وعالية المتنقلة)، التي كشفت من خلال التفاوت الواسع في الكفاءة التناسلية للذكور. أكبر نسبة عالية الجودة من الحيوانات المنوية، أقل عدد ماتينجس المطلوبة لتسميد بنجاح البويضة. ومع ذلك، تحقيقا للخصوبة، خلايا ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
عليها جميع الأساليب الموصوفة هنا "رعاية الحيوان المؤسسية" واستخدام اللجنة (إياكوك) من جامعة جورجيا.
1-الغسيل باستخدام "الطرد المركزي التقليدي"
- إعداد الفوسفات المخزن المؤقت الحل (PBS). إضافة ز 8.0 من كلوريد الصوديوم، 0.2 جم بوكل، ز 1.44 غ2هبو4 و 0.24 ز خ2ص4 إلى 800 مل ماء المقطر (dH2س). ضبط ال pH إلى 7.4 استخدام 0.1 N HCl وجلب الحل إلى 1 لتر استخدام dH2o.
- إعداد المخزن المؤقت للحركة. إضافة 6.5 غرام من كلوريد الصوديوم، 4.5 غرام السكر، ز 0.444 كاكل2 و 11.5 ز ن-تريس-[هيدروكسيميثيل] حامض الميثيل-2-أمينو اثانيسولفونيك (الامتحانات) لمل 800 dH2
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تقنية بدجك وأسفر فصل متميزة من ثلاث طبقات من الحيوانات المنوية بدرجة من الجودة عبر كافة المعلمات. ويفصل بين الحيوانات المنوية إلى طبقة عالية الجودة فيما يلي الحل كثافة أعلى، طبقة متوسطة الجودة بين أعلى وأقل كثافة الحل وطبقة منخفضة الجودة أعلاه حل أقل كثافة. والدليل هذه الاختلافات في نوعية هي فروق واضحة في البقاء (الشكل 4) والتنقل (الشكل 5) بينيترابيليتي (الشكل 6). الحيوانات المنوية معزولة من طبقة عال.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الخصوبة ليس فقط يحدد ربحية الإنتاج الحيواني ولكن أيضا بمثابة وسيلة للانتقاء الطبيعي للأنواع للوجود. الوظيفة في نهاية المطاف من خلية الحيوانات المنوية لتخصيب البويضة. تحديد قناة للإناث فقط تلك الحيوانات المنوية الأصلح ضمانا لاخصاب البويضة23،24. وأظهرت الدراسات في المختبر أيضا ارتباط وثيق بين الصفات النوعية الحيوانات المنوية والإخصاب النجاح4،11،،من23
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| أككودينز | للكيماويات والعلوم الدقيقة ، ويستبري ، نيويورك ، الولايات المتحدة الأمريكية | AN7050 | |
| Percoll ؛ | سيجما ألدريتش ، كورب ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية | P7828 | |
| شيف كاشف | Sigma-Aldrich، Corp.، سانت لويس، ميزوري، الولايات المتحدة الأمريكية | 3952016 | |
| TES | Sigma-Aldrich، Corp.، سانت لويس، ميزوري، الولايات المتحدة الأمريكية | T1375 | |
| Eosin Y | Sigma-Aldrich، Corp.، St. Louis، MO، USA | E4009 | |
| Nigrosin | Sigma-Aldrich، Corp.، St. Louis، MO، الولايات المتحدة الأمريكية | 198285 | |
| ST 40R أجهزة الطرد المركزي | Thermo Scientific ، Waltham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية | 75004524 | |
| DU 530 Life Sciences UV / Vis Spectrophotometer | Beckman Coulter ، Brea ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية | لم يتم العثور على كتالوج | |
| أوليمبوس IX 71 المجهر الفلوري المقلوب وتباين | الطور Olympus America Inc. ، PA ، الولايات المتحدة الأمريكية | يتم العثور على كتالوج |
المراجع
- Spargo, S. C., Hope, R. M. Evolution and nomenclature of the zona pellucida gene family. Biology Reproduction. 68, 358-362 (2003).
- Okamura, F., Nishiyama, H. The passage of spermatozoa through the vitelline membrane in the domestic fowl, Gall....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
