Method Article

جمع الحيوانات المنوية فرق الجودة باستخدام الكثافة المتدرجة الطرد المركزي

DOI:

10.3791/58833

⸱

November 29th, 2018

 ,  , 
1Department of Poultry Science, University of Georgia

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في هذه الورقة، ونحن نهدف إلى وصف أداء تقنية الطرد المركزي التدرج الكثافة وتطبيقه في بحوث فسيولوجيا الحيوانات المنوية.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في التناسل الجنسي، الصمامات خلية الحيوانات المنوية أو مشيج الذكور مع مشيج أنثى لتحقيق الإخصاب. ومع ذلك، عدد كبير من الخلايا المنوية مع التسميد القدرة مطلوبة لتتفاعل مع مشيج الإناث لضمان الإخصاب. على هذا النحو، قدرة تخصيب الخلايا المنوية الفردية أمر حاسم لنجاح الاستنساخ. وقد استخدمت الكثافة المتدرجة الطرد المركزي لعدة عقود كأسلوب استنساخه، وسريعة، والكفاءة والفعالية والغاية قابلة للتكيف لجمع فقط جودة الحيوانات المنوية لاستخدامها في مساعدة التكنولوجيا الإنجابية. البروتوكولات ونحن المبينة في هذا التقرير تركز على استخدام أسلوب التدرج الطرد المركزي (بدجك) الكثافة بركل متقطع لعزل السكان ثلاثة متميزة من الحيوانات المنوية الديك بجودتها. كنا قادرين على جمع منخفضة ومتوسطة وعالية الجودة الحيوانات المنوية. كما يصف لنا استنساخه من البروتوكولات التي يترتب عليها تحديد إمكانات خصوبة الحيوانات المنوية بتقييم الجدوى والتنقل بينيترابيليتي. جمع الحيوانات المنوية بجودتها باستخدام تقنية بدجك سوف يكون من المفيد بدقة ودقة توصيف الحيوانات المنوية مع الخصوبة التفاضلية المحتملة.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في الفقاريات، الأمشاج الذكور الخضوع لضغوط مكثفة انتقائية؛ ولذلك اللياقة البدنية التناسلية للذكور محوري لتحقيق نجاح الإخصاب. الذكور من أي الأنواع الفقارية معين يجب أن يكون قادراً على إنتاج خلايا الحيوانات المنوية بكميات كبيرة وذات نوعية كافية لتلبية احتياجات التسميد. خلايا الحيوانات المنوية، وقد رأس الحيوانات المنوية والسوط، هي الخلايا الأكثر استقطابا في الجسم. فأيضا متباينة للغاية في جودة الحيوانات المنوية (منخفضة حية وميتة شكلياً العادي وغير طبيعي وغير متحركة، متنقلة وعالية المتنقلة)، التي كشفت من خلال التفاوت الواسع في الكفاءة التناسلية للذكور. أكبر نسبة عالية الجودة من الحيوانات المنوية، أقل عدد ماتينجس المطلوبة لتسميد بنجاح البويضة. ومع ذلك، تحقيقا للخصوبة، خلايا ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

عليها جميع الأساليب الموصوفة هنا "رعاية الحيوان المؤسسية" واستخدام اللجنة (إياكوك) من جامعة جورجيا.

1-الغسيل باستخدام "الطرد المركزي التقليدي"

  1. إعداد الفوسفات المخزن المؤقت الحل (PBS). إضافة ز 8.0 من كلوريد الصوديوم، 0.2 جم بوكل، ز 1.44 غ2هبو4 و 0.24 ز خ2ص4 إلى 800 مل ماء المقطر (dH2س). ضبط ال pH إلى 7.4 استخدام 0.1 N HCl وجلب الحل إلى 1 لتر استخدام dH2o.
  2. إعداد المخزن المؤقت للحركة. إضافة 6.5 غرام من كلوريد الصوديوم، 4.5 غرام السكر، ز 0.444 كاكل2 و 11.5 ز ن-تريس-[هيدروكسيميثيل] حامض الميثيل-2-أمينو اثانيسولفونيك (الامتحانات) لمل 800 dH2

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تقنية بدجك وأسفر فصل متميزة من ثلاث طبقات من الحيوانات المنوية بدرجة من الجودة عبر كافة المعلمات. ويفصل بين الحيوانات المنوية إلى طبقة عالية الجودة فيما يلي الحل كثافة أعلى، طبقة متوسطة الجودة بين أعلى وأقل كثافة الحل وطبقة منخفضة الجودة أعلاه حل أقل كثافة. والدليل هذه الاختلافات في نوعية هي فروق واضحة في البقاء (الشكل 4) والتنقل (الشكل 5) بينيترابيليتي (الشكل 6). الحيوانات المنوية معزولة من طبقة عال.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الخصوبة ليس فقط يحدد ربحية الإنتاج الحيواني ولكن أيضا بمثابة وسيلة للانتقاء الطبيعي للأنواع للوجود. الوظيفة في نهاية المطاف من خلية الحيوانات المنوية لتخصيب البويضة. تحديد قناة للإناث فقط تلك الحيوانات المنوية الأصلح ضمانا لاخصاب البويضة23،24. وأظهرت الدراسات في المختبر أيضا ارتباط وثيق بين الصفات النوعية الحيوانات المنوية والإخصاب النجاح4،11،،من23

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
أككودينزللكيماويات والعلوم الدقيقة ، ويستبري ، نيويورك ، الولايات المتحدة الأمريكيةAN7050
Percoll  ؛سيجما ألدريتش ، كورب ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكيةP7828
شيف كاشفSigma-Aldrich، Corp.، سانت لويس، ميزوري، الولايات المتحدة الأمريكية3952016
TESSigma-Aldrich، Corp.، سانت لويس، ميزوري، الولايات المتحدة الأمريكيةT1375
Eosin YSigma-Aldrich، Corp.، St. Louis، MO، USAE4009
NigrosinSigma-Aldrich، Corp.، St. Louis، MO، الولايات المتحدة الأمريكية198285
ST 40R أجهزة الطرد المركزي Thermo Scientific ، Waltham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية75004524
DU 530 Life Sciences UV / Vis SpectrophotometerBeckman Coulter ، Brea ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكيةلم يتم العثور على كتالوج
أوليمبوس IX 71 المجهر الفلوري المقلوب وتباينالطور Olympus America Inc. ، PA ، الولايات المتحدة الأمريكيةيتم العثور على كتالوج
شركة لم

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Spargo, S. C., Hope, R. M. Evolution and nomenclature of the zona pellucida gene family. Biology Reproduction. 68, 358-362 (2003).
  2. Okamura, F., Nishiyama, H. The passage of spermatozoa through the vitelline membrane in the domestic fowl, Gall....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Sperm CollectionDensity Gradient CentrifugationPercoll Density GradientSperm Quality AssessmentViability Mobility PenetrabilityDiscontinuous Percoll TechniqueSemen Sample PreparationLayer Isolation ProtocolAvian Sperm AnalysisFertility Potential Evaluation

Related Articles