يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

والرزن Efflux الفائق المسمى نيتروبينزوكساديازولي نسبة الكولسترول في الدم

8.7K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/58891

⸱

يناير 7, 2019

 ,  , 
1Group of Genomics and Pharmacogenomics in HIV, Laboratory of Retrovirology and Viral Immunopathogenesis, IDIBAPS, Hospital Clínic de Barcelona

في هذه المقالة

ملخص

قياس القدرة افلوكس نسبة الكولسترول في الدم في المختبر للمصل أو البلازما في نماذج خلية سنخية أداة واعدة كالعلامات البيولوجية لتصلّب الشرايين. في الدراسة الحالية، وتحسين وتوحيد أسلوب efflux بنك دبي الوطني-الكوليسترول فلورسنت ووضع تحليل الفائق باستخدام لوحات 96-جيدا.

الملخص

تصلب الشرايين يؤدي إلى أمراض القلب والأوعية الدموية (الرسوم التعويضية). لا يزال غير واضح ما إذا كان تركيز الكوليسترول في الدم-الحميد (تشدل) يلعب دوراً سببية في تطور تصلب الشرايين. ومع ذلك، عاملاً هاما في المراحل الأولى من تشكيل اللوحة عصيدة هو الكوليسترول افلوكس القدرة على الحميد (قدرة جسيمات HDL على قبول نسبة الكولسترول في الدم من الضامة) تفاديا لتشكيل خلية الرغاوي. هذا خطوة أساسية في تجنب تراكم الكولسترول في البطانة وجزء من الكوليسترول عكس النقل (RCT) للقضاء على نسبة الكولسترول في الدم عن طريق الكبد. نسبة الكولسترول في الدم افلوكس القدرات للمصل أو البلازما في نماذج خلية سنخية هو أداة واعدة التي يمكن استخدامها كالعلامات البيولوجية لتصلّب الشرايين. وتقليدياً، [ح]3[-الكوليسترول وقد استخدمت في فحوصات افلوكس نسبة الكولسترول في الدم. في هذه الدراسة، ونحن نهدف إلى وضع استراتيجية أكثر أماناً وأسرع استخدام الفلورية المسمى-الكوليسترول (دبي-الكوليسترول) في مقايسة خلوية لتتبع عملية امتصاص و efflux الكولسترول في الضامة THP-1-مشتقة. أخيرا، نحن تحسين وتوحيد الأسلوب efflux بنك دبي الوطني-الكوليسترول ووضع تحليل الفائق باستخدام لوحات 96-جيدا.

المقدمة

ووفقا "منظمة الصحة العالمية"، هي الحالية الأسباب الرئيسية للوفاة في العالم مرض القلب الاقفاري والسكتة الدماغية (في حساب إجمالي الوفيات 15.2 مليون)1. كلاهما أمراض القلب والأوعية الدموية (الرسوم التعويضية) التي يمكن أن تكون مسبوقة بتصلب الشرايين وتمزق لويحات عصيدة في الأوعية الدموية2،3.

تصلب الشرايين هو سفينة جدار مرض تحريضية التي الضامة وخلايا T وخلايا ماست والخلايا الجذعية التسلل البطانة وتتراكم في الدم، في نهاية المطاف تشكيل لويحات تصلب الشرايين. يقدم لويحات تصلب الشرايين الدهون البلورات الأساسية ونسبة الكولسترول في الدم، ويتضح من قياسات الموجات فوق الصوتية ب-وضع الاستبانة البطانية السباتي الوسائط سمك4،5. الضامة، ينفذ efflux الكولسترول نحو جزيئات الدهن يقبلون بالوسائل مستقبلات كاسيت (ABC) ملزمة ATP ABCA1، ATP ملزمة كاسيت الفصيلية ز الأعضاء 1 (ABCG1)، ومستقبلات الزبال ريال والثنائي. ويعتبر عدم التوازن في تدفق نسبة الكولسترول في الدم وافلوكس في الضامة عملية رئيسية في تصلب الشرايين بدء6. افلوكس نسبة الكولسترول في الدم ويعتبر خطوة أساسية في القضاء على نسبة الكولسترول في الدم من الأنسجة الطرفية للبلازما والكبد في عملية تسمى الكوليسترول عكس النقل (RCT). يتم نقل الكوليسترول في الدم من الضامة أساسا إلى الابوليبوبروتين A1 (ApoA1) الموجودة على سطح جزيئات البروتين الدهني الكثافة (HDL). ثم النقل HDLs الكوليسترول إلى الكبد لإفراز وإعادة استعمال7،،من89.

تقليديا، الكولسترول وصفت الإذاعة التريتيوم (3ح) قد استخدمت في نسبة الكولسترول في الدم افلوكس10. إشارة الانبعاثات من النظائر المشعة هي حساسة للغاية10؛ ومع ذلك، يعرض الكولسترول وصفت الإذاعة المعوقات الواضحة مثل بروتوكولات طويلة وخطر التعرض للإشعاعات المؤينة، والحاجة إلى مرافق النشاط الإشعاعي الخاصة والمعدات لضمان المناولة الآمنة للانبعاثات المشعة. على العكس من ذلك، أدرجت الأسفار بنجاح في تقنيات التشخيص نظراً لبساطته في الكشف عن إشارة الفلورسنت، وتشكيله واسعة من فلوروفوريس المتاحة، و سلامة11. استخدمت عدة والاستيرولات المسمى الفلورسنت لدراسة الأيض نسبة الكولسترول في الدم بما في ذلك ديهيدرورجوستيرول (مع الأسفار الجوهرية)، والكوليسترول دانسيل، 4, 4-ديفلورو-3 أ، 4adiaza-s-إينداسيني (بوديبي)-نسبة الكولسترول في الدم، و 22-(N-(7- Nitrobenz-2-Oxa-1,3-Diazol-4-yl)Amino)-23,24-Bisnor-5-Cholen-3β-Ol (دبي-الكوليسترول في الدم). خاصة، يقدم بنك دبي الوطني-الكوليسترول كفاءة امتصاص في الخلايا البشرية12. اثنين مختلفة بنك دبي الوطني المسمى الكولسترول المتوفرة حاليا: 22-(N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino)-23,24-bisnor-5-cholen-3b-ol (22-بنك دبي الوطني) و 25-(N-[(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)-methyl]amino)-27-norcholesterol (25-بنك دبي الوطني؛ الشكل 1). نسبة الكولسترول في الدم المسمى مع مجموعة 22-بنك دبي الوطني قد تناسب الدراسات افلوكس نسبة الكولسترول في الدم، بينما 25-دبي-الكولسترول وهي تستخدم أساسا في الغشاء الخلوي ديناميات البحث13،14.

هي خطوط الخلايا المستخدمة عادة في نسبة الكولسترول في الدم في المختبر فحوصات efflux الوحيدات مثل الخلايا مثل الخلايا البشرية THP-1 المستمدة من سرطان الدم أو الخلايا 264.7 الخام موريني15J774.1. كل من هذه الخلايا يمكن أن تكون متباينة في الضامة في المختبر باستخدام phorbol 12-ميريستاتي 13-خلات (سلطة النقد الفلسطينية)، ولكن تعكس THP-1-المستمدة الضامة (دمثب-1) أفضل وتقليد الضامة البشرية16.

في الدراسة الحالية، وتحسين وتوحيد أسلوب الفائق فلورسنت لتحديد قدرة efflux الكولسترول عينات المصل في دمثب-1، باستخدام الكولسترول-22-بنك دبي الوطني كبديل ل [ح]3[-نسبة الكولسترول في الدم. وباﻹضافة إلى ذلك، قارنا تقنية نيون الأمثل مع التناظرية المشعة القياسية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

لهذه الدراسة، تم الحصول على الموافقة الخطية، علم من جميع المواضيع وموافقة اللجنة الأخلاقية (Comitè Ètic d 'Investigació Clínica،"مستشفى عيادة"، برشلونة؛ والموافقة على عدد شتلويرث/سداسي كلورو البنزين/2014).

1-إعداد الكولسترول-بنك دبي الوطني

  1. حل بنك دبي الوطني-الكوليسترول (494.63 ميغاواط؛ انظر الجدول للمواد) في الإيثانول النقي للحصول على الأوراق المالية (2 مم). لقنينة 10 ملغ، إذابة محتويات القنينة كاملة في وحدة تخزين مل 10.1 من الإيثانول للحصول على أسهم 2 مم.
  2. تمييع بنك دبي الوطني-الكوليسترول من المخزون في ربمي 1640 تستكمل مع 10% الجنيني البقري المصل و 5% البنسلين/ستربتوميسين (R10 المتوسطة) للوصول إلى تركيز نهائي من 5 ميكرومترات (مثل، الحصول على 10 مل من بنك دبي الوطني-الكولسترول في 5 ميكرومترات التركيز النهائي) التي تمييع 25 ميكروليتر من الأسهم بنك دبي الوطني-نسبة الكولسترول في الدم (2 مم) في المتوسط R10. هذا المجلد كاف لصفيحة 96-جيدا.

2-خلية الثقافة وبذر (اليوم-2)

  1. الثقافة THP-1 الخلايا في المتوسطة R10 على 37 درجة مئوية، وأول أكسيد الكربون 5%2. ضبط إلى 0.3 × 106 خلايا/مل كل 3 أيام.
  2. بذور الخلايا في صفيحة 96-بئر أبيض مع قاع مسطح، واضحة في 0.2 × 106 خلايا/بئر في R10 المتوسطة (100 ميكروليتر كل بئر).
  3. علاج الخلايا مع 100 نانومتر phorbol 12-ميريستاتي 13-خلات (سلطة النقد الفلسطينية؛ ومن أصل 10 ميكرومترات) ح 48 – 72، تفرخ في 37 درجة مئوية، الخلايا 5% CO2 التفريق بين THP-1 دمثب-1.
    ملاحظة: من المستحسن استخدام 5 ميكروليتر من سلطة النقد الفلسطينية الأسهم (10 ميكرومترات) في 500 ميكروليتر من المتوسطة R10. وقبل ذلك، إعداد 10 ميكرومترات الأسهم سلطة النقد الفلسطينية بتذويب قنينة ز 1 المجففة بالتبريد في 10 مل من ثنائي ميثيل سلفوكسيد ([دمس])، الكوة، والأوراق المالية في-20 درجة مئوية.
  4. وبدلاً من ذلك (اقتراح) الجمع بين الخطوات 2.2 و 2.3 لتجانس أفضل. إعداد 10 مل خلايا THP-1 في أنبوب 15 مل وإضافة 200 ميكروليتر من سلطة النقد الفلسطينية الأسهم (10 ميكرومترات) وتخلط بلطف وفورا البذور 100 ميكروليتر كل بئر على اللوحة. احتضان الخلايا كما هو موضح في الخطوة 2، 3.

3-الابوليبوبروتين ب المنضب المصل (أبدس) إعداد (اليوم 2 أو 3)

  1. إعداد حلاً البولي إثيلين غليكول (شماعة)، يؤدي إلى تمييع جليكاين في برنامج تلفزيوني 10% (مع العقيم ح2س) بتركيز 200 ملم في درجة الحموضة 7.4. إضافة 40 مل من 200 مم جليكاين إلى 10 غم من 8000 ربط الحصول على شماعة 20% (w/v). مزيج من الحل بقوة تجانسه.
  2. تطبيق 4 أجزاء من 20% ربط كل 10 أجزاء من المصل/بلازما في كل عينة المصل/البلازما في أنبوب 1.5 مل وترك الخليط على الجليد ل 25 دقيقة17 (على سبيل المثال، لإضافة 100 ميكروليتر من البلازما أو المصل، 40 ميكروليتر من 20% ربط الحل).
  3. الطرد المركزي متسرعا شماعة-الابوليبوبروتين ب في س 13,000 ز لمدة 15 دقيقة في 4 درجات مئوية.
  4. تجاهل متسرعا. نقل المادة طافية إلى أنبوب جديد.
    ملاحظة: ونحن نقترح إعداد أبدس في اليوم 3 (جديد). إذا لم يكن ذلك ممكناً، إعداد أبدس في يوم 2 وإبقائه في 4 درجات مئوية بين عشية وضحاها.

4-بنك دبي الوطني-الكوليسترول خلية التحميل (2 يوم)

  1. تجاهل المتوسطة الثقافة دمثب-1 وغسل الخلايا مرتين مع 1 × مخزنة الفوسفات المالحة (PBS).
  2. تحميل الخلايا مع 5 ميكرومترات بنك دبي الوطني-نسبة الكولسترول في الدم (100 ميكروليتر كل بئر) في المتوسط R10 واحتضان بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية، وأول أكسيد الكربون 5%2.

5-حضانة مع المتقبلين لنسبة الكولسترول في الدم (اليوم الثالث)

  1. تجاهل على المديين المتوسط وغسل الخلايا مرتين مع برنامج تلفزيوني.
  2. احتضان الخلايا مع أبدس 2-5% أو التركيز المطلوب من يقبلون المنقاة في الدهون (الكوليسترول الجيد، وبرنامج عمل ألماتي، والذين، إلخ) مخففة في المتوسط RPMI 1640 عديم اللون (100 ميكروليتر كل بئر) النسبة ح 4 – 6 عند 37 درجة مئوية.
    ملاحظة: تضمين عنصر تحكم سلبية (ج-) تتكون من عديم اللون المتوسط RPMI 1640 دون المتقبلين وعنصر إيجابي (ج +) (مثلاً، أبدس من مجموعة مانحين صحي) أو HDLs المنقي. علما بأن عنصر التحكم الإيجابي ينطبق خاصة عندما تكون عينات المرضى (الحالات المرضية) حلل (تكميلية الشكل 1).
  3. إعداد مخزون 200 مل من حل تحلل الخلية 1 (العازلة تريس 50 مم, 150 مم كلوريد الصوديوم، ح2س). مزيج نسبة الحل 1 في 1:1 (الخامس: الخامس) تحلل الخلية مع الإيثانول النقي للحصول على حل تحلل 2.

6. التقاط إشارة فلوري (اليوم الثالث)

  1. كشف الكولسترول بنك دبي الوطني-وسائط الإعلام
    1. إزالة متوسط الخلية من اللوحات وأنه جمع في صفيحة 96-جيدا بيضاء جديدة مع أسفل شقة معتمة.
    2. اكتشاف إشارات أمثل fluorescence في عينات وسائل الإعلام، لإضافة 100 ميكروليتر من الإيثانول النقي إلى 100 ميكروليتر من كل عينة متوسطة للحصول على نسبة 1:1 في لوحة بيضاء 96-جيدا.
    3. إبقاء اللوحة مع وسائل الإعلام تعامل لتدبير آخر كثافة الفلورية (وأي فأي) في الطول موجي نانومتر (الإثارة/الانبعاثات) 463⁄536 في لومينوميتير.
  2. كشف بنك دبي الوطني-الكولسترول داخل الخلايا
    1. تغسل الخلايا مرتين مع برنامج تلفزيوني.
    2. للحصول على نسبة الكولسترول في الدم داخل الخلايا، الخلايا التي تفرخ لهم مع 100 ميكروليتر من تحلل الحل 2 كل بئر ويهز اللوحة في درجة حرارة الغرفة (RT) لمدة 25 دقيقة.
    3. لالتقاط الكشف عن إشارة fluorescence أمثل في عينات ليساتي الخلية، شدة الأسفار ليساتيس خلية بنفس اللون الأبيض أسفل لوحة 96-جيدا مع واضحة مسطحة (نفس اللوحة التي كانت تبذر الخلايا في الخطوة 2، 2).
  3. 6.3 قياس كثافة الفلورية (وأي فأي) في لومينوميتير حين ضبط المعلمة حساسية إلى 50 في البرنامج (انظر الجدول للمواد).

7-نتائج التحليل

  1. التعبير عن معدل الكوليسترول افلوكس من عينة كنسبة مئوية محسوبة بالمعادلة:
    figure-protocol-1
  2. الحصول على المقياس النهائي لنسبة الكولسترول في الدم افلوكس (CE) بطرح CE السيطرة السلبية (عينة محملة بدبي-الكوليسترول ولكن المحتضنة مع المتوسط RPMI 1640 عديم اللون، دون المتقبلين لنسبة الكولسترول في الدم) من CE من نظراً للعينات:
    figure-protocol-2

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

هدف التحليل افلوكس نسبة الكولسترول في الدم تحديد في المختبر قدرة efflux الكولسترول مصل معين أو البلازما، أو المادة طافية تحتوي على جزيئات الكوليسترول الجيد. الأسلوب الذي يتكون من تحميل الكوليسترول المسمى إلى ثقافة خط خلية سنخية القياسية وحمل الاتصال مع عينة الاختبار المخفف في وسائل الإعلام الحرة FBS مع الخلايا. أخيرا، يتم قياس مستويات الفلورسنت من بنك دبي الوطني في وسائل الإعلام وخلية ليساتي. لتحسين القياسات، مختلطة مع حجم واحد من المذيبات التي تحتوي على الإيثانول الكوليسترول افلوكسيد من الخلايا لوسائل الإعلام. بنك دبي ا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

الكوليسترول المسمى الفلورسنت استراتيجية واعدة لتحليل والتحقيق في خصائص واستقلاب الكوليسترول الطبيعية في المختبر. مميزاتها الرئيسية هي أنه يمكن أن تتناولها الخلايا، ويسمح لداخل الخلية والغشاء توزيع الدراسات، ويمكن تطبيقها على نسبة الكولسترول في الدم افلوكس فحوصات مثل هذا البروتوكول (الشكل 7). تسمح بعض والاستيرولات المسمى الفلورسنت الكولسترول تتبع في المختبر بما في ذلك بوديبي-نسبة الكولسترول في الدم والكوليسترول دانسيل وديهيدروجروستيرول والكولسترول 22 و 25 بنك دبي الوطني12

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب تود أن تعلن أن هم المخترعين طلب البراءة (17 مايو 2018 البراءات؛ 18382337.6-1118) بعنوان "أسلوب لتحديد نسبة الكولسترول في الدم افلوكس" استناداً إلى هذا الأسلوب.

شكر وتقدير

دعمت هذا العمل جزئيا بالمنح البحثية الجبهة الإسلامية للإنقاذ (PS12/00866) من معهد الصحة كارلوس الثالث، مدريد، إسبانيا؛ ش الفقرة Europeo فوندو التنمية الإقليمية (فدر)؛ الأحمر لبحوث أون سيدا (RIS)، إيسسيي-ريتيك (RD16/0025/0002) وبرنامج سيركا/محافظة كاتالونيا. يشكر المؤلفون ريتروفيرولوجي والفيروسية مختبر إيمونوباثولوجي من معهد d'Investigacions Biomèdiques آب/أغسطس Pi I سونير (إيديبابس). نشكر ت. Escribà وجيم-روفيرا هورتادو جيم للمساعدة و Cufí س. من مكتب نقل التكنولوجيا والمعرفة لتوجيهاتها في حماية الاختراع.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
لوحة تجميع 96 بئرCorning IncCostar 3912صفيحة بيضاء 96 بئر مع قاع شفاف غير شفاف
96 بئر لوحة ثقافةCorning IncCostar 3610صفيحة بيضاء 96 بئر ذات قاع شفاف مسطح
مجموعة فحص تدفق الكوليسترول (قائم على الخلية) < / em >Abcamab196985 < / em >مجموعة الفحص التجارية عالية الإنتاجية القائمة على الخلايا تهدف إلى تحديد مجموعة الفحص التجارية عالية الإنتاجية القائمة على الخلايا تدفق الكوليسترول
عديم اللون RPMI 1640Sigma-AldrichR7509RPMI 1640 بدون pehnol-red
Gen5 برنامج تحليل البياناتBioTekالإصدار 2.0
GlycineSigma-AldrichG8790-100GGlycine ، غير الحيواني
LuminometerBiotekSYNERGY HTMulti-Detection
Reader Lysis Solution 1داخلي50 ملي مولار تريس عازلة ، 150 ملي كلوريد الصوديوم و H2< / sub>
O محلول التحلل 2محللالإيثانول النقي وتحلل الخلية 1: 1 (v: v)
NBD-cholesterolThermo-FisherN114822- (N- (7-Nitrobenz-2-Oxa-1،3-Diazol-4-yl) Amino) -23،24-Bisnor-5-Cholen-3 & beta ؛ -Ol
PBSSigma-AldrichP3813Fossil-Buffered  ؛ محلول ملحي
PEG 8000سيجما ألدريتش202452-250 جرامبولي إيثيلين جلايكول
PMAسيجما ألدريتش79346فوربول 12-ميريستات ب أسيتات.
R10RPMI 1640 الداخلي مكمل بمصل بقري للجنين بنسبة 10٪ و 5٪ بنسلين / ستربتومايسين.
RPMI 1640Sigma-AldrichR8758RPMI 1640 مع 2 ملي مولار من الجلوتامين يحتوي على 1.5 جم / لتر بيكربونات الصوديوم و 4.5 جم / لتر من خلايا الجلوكوز
THP-1Sigma-AldrichATCC ، #TIB-202خط يشبه الخلية الأحادية مشتق من سرطان الدم من طفل يبلغ من العمر عاما
واحدا Tween 80Sigma-AldrichP1754
Microplate

المراجع

  1. The top 10 causes of death. , Available from: http://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/the-top-10-causes-of-death (2018).
  2. Hansson, G. K., Hermansson, A. The immune system in atherosclerosis. Nature Immunology. 12 (3), 204-212 (2011).
  3. Libby, P., Ridker, P. M., Hansson, G. K. Progress and challenges in translating the biology of atherosclerosis. Nature. 473 (7347), 317-325 (2011).
  4. Ilhan, F. Atherosclerosis and the role of immune cells. World Journal of Clinical Cases. 3 (4), 345(2015).
  5. Greaves, D. R., Gordon, S. Immunity, atherosclerosis and cardiovascular disease. Trends Immunol. 22, (2001).
  6. Yamamoto, S., Narita, I., Kotani, K. The macrophage and its related cholesterol efflux as a HDL function index in atherosclerosis. Clinica Chimica Acta. 457, 117-122 (2016).
  7. Escolà-Gil, J. C., Rotllan, N., Julve, J., Blanco-Vaca, F. In vivo macrophage-specific RCT and antioxidant and antiinflammatory HDL activity measurements: New tools for predicting HDL atheroprotection. Atherosclerosis. 206 (2), 321-327 (2009).
  8. Santos-Gallego, C. G., Ibanez, B., Badimon, J. J. HDL-cholesterol: Is it really good? Differences between apoA-I and HDL. Biochemical Pharmacology. 76 (4), 443-452 (2008).
  9. Rothblat, G. H., Phillips, M. C. High-density lipoprotein heterogeneity and function in reverse cholesterol transport. Current Opinion in Lipidology. 21 (3), 229-238 (2010).
  10. Hafiane, A., Genest, J. HDL-mediated cellular cholesterol efflux assay method. Annals of Clinical and Laboratory Science. 45 (6), 659-668 (2015).
  11. Szalaia, R., Hadzsiev, K., Melegh, B. Cytochrome P450 Drug Metabolizing Enzymes in Roma Population Samples: Systematic Review of the Literature. Current Medicinal Chemistry. 23, 1-26 (2016).
  12. Mcintosh, A. L., et al. Fluorescent Sterols for the Study of Cholesterol Trafficking in Living Cells. Probes and Tags to Study Biomolecular Function: for Proteins, RNA, and Membranes. , 1-33 (2008).
  13. Ostašov, P., et al. FLIM studies of 22- and 25-NBD-cholesterol in living HEK293 cells: Plasma membrane change induced by cholesterol depletion. Chemistry and Physics of Lipids. 167, 62-69 (2013).
  14. Song, W., et al. Characterization of fluorescent NBD-cholesterol efflux in THP-1-derived macrophages. Molecular Medicine Reports. 12 (4), 5989-5996 (2015).
  15. Liu, N., Wu, C., Sun, L., Zheng, J., Guo, P. Sesamin enhances cholesterol efflux in RAW264.7 macrophages. Molecules. 19 (6), 7516-7527 (2014).
  16. Qin, Z. The use of THP-1 cells as a model for mimicking the function and regulation of monocytes and macrophages in the vasculature. Atherosclerosis. 221 (1), 2-11 (2012).
  17. Low, H., Hoang, A., Sviridov, D. Cholesterol Efflux Assay. Journal of Visualized Experiments. (61), 5-9 (2012).
  18. Gimpl, G., Gehrig-Burger, K. Cholesterol reporter molecules. Bioscience Reports. 27 (6), 335-358 (2007).
  19. Zhang, J., Cai, S., Peterson, B. R., Kris-Etherton, P. M., Heuvel, J. P. Vanden Development of a Cell-Based, High-Throughput Screening Assay for Cholesterol Efflux Using a Fluorescent Mimic of Cholesterol. ASSAY and Drug Development Technologies. 9 (2), 136-146 (2011).
  20. Rader, D. D. J. Molecular regulation of HDL metabolism and function: implications for novel therapies. Journal of Clinical Investigation. 116 (12), 3090-3100 (2006).
  21. Davidson, W. S., et al. The effects of apolipoprotein B depletion on HDL subspecies composition and function. Journal of Lipid Research. 57 (4), 674-686 (2016).
  22. Park, S. H., et al. Sage weed (Salvia plebeia) extract antagonizes foam cell formation and promotes cholesterol efflux in murine macrophages. International Journal of Molecular Medicine. 30 (5), 1105-1112 (2012).
  23. Litvinov, Y., Savushkin, E. V., Garaeva, E. A. D. A. Cholesterol Efflux and Reverse Cholesterol Transport: Experimental Approaches. Current Medicinal Chemistry. 371 (25), 2383-2393 (2016).
  24. Phillips, A., Mucksavage, M. L., Wilensky, R. L., Mohler, E. R. Cholesterol efflux capacity, high-density lipoprotein function, and atherosclerosis. N Engl J Med. 364 (2), 127-135 (2011).
  25. Rohatgi, A., et al. HDL Cholesterol Efflux Capacity and Incident Cardiovascular Events. New England Journal of Medicine. 371 (25), 2383-2393 (2014).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

NBD THP 1 96 HDL
والرزن Efflux الفائق المسمى نيتروبينزوكساديازولي نسبة الكولسترول في الدم
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.