الإنزيم ATP قياس بسيط ويعيش/الميت تلطيخ الأسلوب استخدمت لتحديد ووضع تصور لبقاء النيسرية البنية بعد العلاج مع سيفترياكسون. هذا البروتوكول يمكن أن تمتد إلى دراسة آثار مضادات الميكروبات أي المضادات الحيوية ويمكن استخدامها لتعريف الحد الأدنى المثبطة تركيز المضادات الحيوية في الأغشية الحيوية البكتيرية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
فحص كمية "من قابلية المضادات الحيوية" النيسرية البنية التجارية استخدام ATP "باستخدام المجاميع فحوصات" و "تلطيخ" لايف/الميت
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
ظهور مقاومة للمضادات الحيوية النيسرية البنية (GC) تهديدا لصحة في جميع أنحاء العالم ويسلط الضوء على الحاجة إلى تحديد الأفراد الذين يمتنعون عن العلاج. تسبب هذه البكتيريا سلبية الغرام السيلان حصرا في البشر. خلال العدوى، أنها قادرة على مجاميع النموذج و/أو الأغشية الحيوية. اختبار تركيز الحد الأدنى المثبطة (MIC) يستخدم لتحديد قابلية للمضادات الحيوية وتحديد العلاج المناسب. ومع ذلك، إليه المجراة في استئصال وعلاقتها بالنتائج المختبرية غير معروفة. وقد وضعت أسلوب الذي يدرس كيفية تجميع GC يؤثر على قابلية المضادات الحيوية ويبين العلاقة بين المساحة الإجمالية وقابلية المضادات الحيوية. عندما GC إجمالاً، فأكثر مقاومة للمضادات الحيوية من القتل، مع البكتيريا في الوسط الباقين على قيد الحياة سيفترياكسون معاملة أفضل من تلك الموجودة في المحيط. وتشير البيانات إلى أن تجميع البنية أ. يمكن أن تقلل من قابليتها سيفترياكسون، الذي ينعكس في عدم استخدام أساليب أجار القياسية المستندة إلى لوحة هيئة التصنيع العسكري. تسمح الطريقة المستخدمة في هذه الدراسة الباحثين لاختبار قابلية البكتيرية في ظل الظروف ذات الصلة سريرياً.
المقدمة
مرض السيلان مشترك تنتقل العدوى (STI)1. النيسرية البنية (GC)، بكتيريا سلبية الغرام ديبلوكوككال، هو المسبّب لهذا المرض. يمكن أن ينتج أعراض العدوى التناسلية الألم أثناء التبول والأم الأعضاء التناسلية المعمم واحليلي التفريغ. العدوى في كثير من الأحيان أعراض2،3،،من45، وهذا يسمح لاستعمار الموسعة. هذه الإصابات غير المعالجة مصدر قلق رئيسيا لصحة، كما لديهم إمكانات لتسهيل انتقال الكائن الحي، وهذا يمكن أن يؤدي إلى مضاعفات مثل مرض التهاب الحوض (PID) ونشر العدوى بالمكورات البنية (DGI)6. مرض السيلان ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1-العام الحفاظ على سلالات GC
- متتالية السلالات البنية أ. أجار جك مع 1% كيلوغ يكمل18 (الجدول 1، الجدول 2) من الأرصدة المجمدة واحتضان 37 درجة مئوية مع 5% CO2 ل 16-18 h. MS11 استخدام التعبير عن أوبا متغير المرحلة (MS11Opa +)، لا يوجد قانون التلوث النفطي (MS11ΔOpa)، أو لوس مبتوراً (MS11ΔLgtE).
- بعناية اختيار بيلي السلبية (مستعمرة دون حافة الظلام) أو إيجابية (مستعمرة مع حافة الظلام) المستعمرات من كل سلالة استناداً إلى مستعمرة مورفولوجيا19 باستخدام مجهر تشريح الخفيفة والانتصارات على صفيحة جك جديدة.
- احتضان عند 37 درجة مئوية مع 5% CO2 لح 16-18 قبل الاستخ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
واستخدمت طريقتين: فحص استخدام ATP ومقايسة المصبوغة العيش/قتيلا. النتائج يمكن أما مجتمعة أو منفردة المستخدمة لبحث بقاء البكتيرية ضمن المجاميع بعد العلاج بالمضادات الحيوية. لقد ثبت الفحص استخدام ATP لقياس البكتيريا قادرة على البقاء بدقة في المذهبة س. الأغشية الحيوية20،21. هنا، MS11Opa + بيل + سلالة استخدمت لدراسة دور تجميع GC في قابلية المضادات الحيوية. عدم تجميع MS11Opa + بيل +، مجمعة MS11Opa + بيل +، أو تجميعها ثم عطلها s.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
يمكن أن تشكل البكتيريا الأغشية الحيوية أثناء الإصابة بجسم الإنسان. اختبار هيئة التصنيع العسكري التقليدي قد لا تعكس تركيز اللازمة للقضاء على البكتيريا في بيوفيلم. لاختبار تأثيرات مضادات الميكروبات في بيوفيلم، يمكن أن تكون أساليب تستند بيوفيلم الكتلة الأحيائية، فضلا عن تصفيح كفوس خاطئة بسبب أثر هيكل بيوفيلم. على سبيل المثال، يعمل الأسلوب الطلاء فقط إذا كان يمكن أن تتعطل بيوفيلم. ومن ثم، قد يكون زيمبابوي حصلت على أقل من العدد الفعلي للبكتيريا قادرة على البقاء. نحققها البكتيريا القتلى ويعيش داخل بيوفيلم وضعت لقياس بقاء البكت.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
شكر وتقدير
وأيد هذا العمل منحة من "المعهد الوطني للصحة" D.C.S. وكان AI123340. لام-C.W.، وشوبان، ميلان، وتم دعم E.N. في جزء/المشاركة في برنامج "السنة الأولى الابتكار البحوث تجربة" الممول من جامعة ميريلاند. وكان الممولين أي دور في قرار دراسة التصميم وجمع البيانات، والتحليل، ونشر، أو إعداد المخطوطة. ونعترف "كبمج الخفة التصوير الأساسية" لجميع تجارب الفحص المجهري.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| ملحق 100x Kellogg | |||
| Agar | الولايات المتحدة البيولوجية | A0930 | |
| BacTiter Assay | Promega | G8232 | |
| Ceftriaxone | TCI | C2226 | |
| Difco GC قاعدة متوسطة | 228950 | دينار بحريني | |
| نترات الحديديك ، غير الهيدرات | سيجما ألدريتش | 254223-10G | |
| الجلوكوز | الحراري فيشر العلمي | BP350-1 | |
| L-الجلوتامين مسحوق بلوري | فيشر Scientific | BP379-100 | |
| BacLight تلطيخ حي / ميت | Invitrogen | L7012 | |
| MS11 سلالة | مقدمة من الدكتور هيرمان شنايدر ، معهد والتر ريد للجيش ل أبحاث | ||
| فوسفات البوتاسيوم ثنائي القاعدة (K2HPO4)Fisher | Scientific | P290-500 | |
| فوسفات البوتاسيوم أحادي القاعدة (KH2PO4) | Fisher Scientific | BP329-1 | |
| Proteose Peptone | BD Biosciences | 211693 | |
| كلوريد الصوديوم (كلوريد الصوديوم) | فيشر ساينتفيك | S671-10 | |
| النشا القابل للذوبان | سيجما-ألدريتش | S9765 | |
| بيروفوسفات الثيامين | سيجما ألدريتش | C8754-5G | |
| معدات | |||
| أطباق بتري | VWR | 25384-302 | |
| 8 آبار غرفة الغطاء السفلي | Thermo Fisher Scientific | 155411 | |
| ألواح زراعة الأنسجة ذات 96 بئر | Corning، Falcon | 3370 | |
| خزانة السلامة الحيوية (NU-425-600 الفئة الثانية، A2 التدفق الرقائقي Biohazard Hood) | Nuaire | 32776 | |
| CO2 حاضنة | فيشر العلمية | نموذج 3530 | |
| مجهر متحد البؤر مزود بغرفة التصوير الحي | Leica | SP5X | |
| Corning 96 Well Black Polystyrene Microplate | Corning | 3904 | |
| Glomax Illuminator | ماصة Promega | E6521 | |
| (0.1-10 & micro; L) | Thermo Fisher Scientific | 02-717-133 | |
| أطراف الماصة (1000 & micro; L) | VWR | 83007-382 | |
| أطراف ماصة (200 وميكرو ؛ L) | VWR | 53509-007 | |
| مقياس الطيف الضوئي Ultrospec 2000 UV | Pharmacia Biotech | 80-2106-00 | |
| أنابيب مخروطية معقمة 15 مل | VWR | 21008-216 | |
| أنابيب الطرد المركزي الدقيقة المعقمة (1.7 مل) | سورنسون بيوساينس | 16070 | |
| تطبيق معقمة برأس بوليستر | فيشر ساینتفيك | 23-400-122 | |
| Sonicator | Kontes | المكافئ ل 9110001 |
المراجع
- CDC STD Facts. Centers for Disease Control and Prevention. , Available from: http://www.cdc.gov/std/gonnorrhea/STDFact-gonorrhea-detailed.htm (2017).
- den Heijer, C. D., et al. A comprehensive overview of urogenital, anorectal and oropharyngeal Neisseria gonorr....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
