يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

نانومولسيون تريبيبتيدي استقرت حمض الأولييك

8.6K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/59034

⸱

فبراير 27, 2019

 ,  ,  ,  , 
1Department of Chemistry, Brooklyn College, The City University of New York, 2Ph.D. Program in Chemistry, The Graduate Center of The City University of New York, 3Ph.D. Program in Biochemistry, The Graduate Center of The City University of New York, 4Department of Genetics and Genomic Sciences, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, 5Women's Health Research Institute, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, 6Laboratory for Translational Research, Western Connecticut Health Network

في هذه المقالة

ملخص

ويصف هذا البروتوكول طريقة فعالة لتجميع نانومولسيون من المتقارن الاوليك acids-platinum(II) استقرت مع تريبيبتيدي يسين-تيروزين-فينيلالاناين (الكيف). أشكال نانومولسيون في ظروف معتدلة الاصطناعية عن طريق التجميع الذاتي الكيف والمتقارن.

الملخص

يصف لنا طريقة لإنتاج نانومولسيون تتألف من أساسية acids-Pt(II) الاوليك وطلاء (كيف) يسين-تيروزين-فينيلالاناين (الكيف-Pt-شمال شرق). الكيف-Pt-ني تغليف Pt(II) على 10% بالوزن، والتي يبلغ قطرها 107 ± 27 نانومتر وتهمة سطحية سلبية. الكيف-Pt-ني مستقرة في الماء وفي مصل الدم، وهو النشطة بيولوجيا. تصريف فلوروفوري على الكيف يسمح توليف نانومولسيون الفلورسنت مناسب لتصوير البيولوجية. يتم توليف نانومولسيون في بيئة مائية، والكيف-Pt-ني أشكال عن طريق التجميع الذاتي من ببتيد كيف قصيرة والمتقارن acids-platinum(II) الاوليك. عملية التجميع الذاتي يعتمد على درجة حرارة الحل، ونسبة المولى ركائز، ومعدل التدفق لإضافة الركازة. وتشمل الخطوات الحاسمة الحفاظ على معدل التحريك الأمثل من خلال التوليف والسماح بوقت كاف للتجميع الذاتي، وقبل التركيز نانومولسيون تدريجيا في مركز الطرد مركزي.

المقدمة

في السنوات الأخيرة، كان هناك اهتمام متزايد في الهندسة لجسيمات نانوية للتطبيقات الطبية الحيوية مثل إيصال الأدوية وبيويماجينج1،2،،من34. وكثيراً ما يتطلب التعدد الوظيفي للأنظمة المستندة إلى نانوحبيبات إدماج مكونات متعددة ضمن صياغة واحدة. اللبنات الأساسية التي تعتمد على الدهون أو البوليمرات غالباً ما تختلف من حيث خصائصها الفيزيائية، فضلا عن توافق مع الحياة وتحلل الأحيائي، التي قد تؤثر في نهاية المطاف وظيفة نانوستروكتوري1، 5،6. وقد اعترف منذ وقت طويل المواد المشتقة بيولوجيا، مثل البروتينات والببتيدات، كعناصر واعدة للنانو متعددة الوظائف بسبب هم تسلسل المرونة7،8. الببتيدات تجميع ذاتي في مرتبة عالية من أبنية supramolecular تشكيل حلزوني شرائط السقالات الليفي11،12،9،10واكبر بكثير، مما يمهد السبيل لبناء النانو الهجين على أساس بيوموليكولي من أسفل إلى أعلى باستخدام نهج13.

تم استكشاف الببتيدات للتطبيقات في مجال الطب والتكنولوجيا الحيوية، خاصة بالنسبة لعلاج السرطان14 و أمراض القلب والأوعية الدموية15 ، وكذلك فيما يتعلق بتطوير المضادات الحيوية16،17، الأيضية اضطرابات18، و19من الإصابات. وهناك أكثر من 100 من المداواة الببتيد الصغيرة تمر بالتجارب السريرية20. الببتيدات من السهل تعديل وسريعة لتجميع تكلفة منخفضة. وباﻹضافة إلى ذلك، فالقابلة للتحلل، مما يسهل إلى حد كبير على التطبيقات البيولوجية والمستحضرات الصيدلانية21،22. يتضمن استخدام الببتيدات كالمكونات الهيكلية الهندسية جسيمات نانوية قادرة على الاستجابة وعلى أساس الببتيد والمستودعات المائية للإفراج التي تسيطر عليها24،23،،من2526 , 27، وأجهزة استشعار العوامل البيولوجية على أساس الببتيد،من2829،،من3031، أو الأجهزة الإلكترونية الحيوية32،،من3334. الأهم من ذلك، تم العثور على الببتيدات قصيرة حتى مع اثنين أو ثلاثة من مخلفات الأحماض الأمينية التي تحتوي فينيلألانين دليل التجميع الذاتي العمليات35،،من3637 وخلق استقرار المستحلبات38 .

المخدرات على أساس البلاتين، نظراً لفعاليتها العالية، تستخدم في كثير من نظم المعالجة السرطان، وحدها سواء في تركيبة مع سائر وكلاء39،40. حمل مركبات البلاتين تلف الحمض النووي عن طريق تشكيل متقاطعة مونوادوكتس وإينتراستراند أو إينتيرستراند. الآفات Pt-الحمض النووي يتم الاعتراف بها أجهزة الهاتف الخلوي، وإذا لم يتم إصلاح، تؤدي إلى المبرمج الخلوي. هو الآلية الأكثر أهمية، الذي يساهم Pt(II) موت الخلايا السرطان، تثبيط الحمض النووي النسخ41،42. ومع ذلك، هي تقلص فوائد العلاج البلاتين بالسمية الشاملة من Pt(II) الذي يقوم بتشغيل تأثيرات جانبية شديدة. وهذا يؤدي إلى انخفاض الجرعات السريرية Pt(II)43، التي غالباً ما تسفر عن التركيزات العلاجية الفرعية من البلاتين التوصل إلى الحمض النووي. نتيجة لذلك، يسهم إصلاح الحمض النووي الذي يلي سرطان الخلية البقاء على قيد الحياة والحصول على المقاومة Pt(II). العلاج الكيماوي-مقاومة البلاتين مشكلة رئيسية في علاج السرطان والسبب الرئيسي لفشل العلاج44،45.

وقد وضعنا نانوسيستيم مستقرة تقوم بتغليف الوكيل Pt(II) بغية توفير تأثير التدريع في الدوران الجهازي ويقلل من الآثار الجانبية التي يسببها Pt الثاني. النظام يستند إلى acids-Pt(II) الاوليك أساسية استقرت مع تريبيبتيدي كيف لتشكيل نانومولسيون (الكيف-Pt-شمال شرق)46. اللبنات الأساسية للكيف-Pt-ني، الأحماض الأمينية تريبيبتيدي، فضلا عن حمض الأولييك، بمركز عموما المعترف بها كآمنة (غرا) مع الغذاء والدواء (FDA). الكيف-Pt-ني مستعدة باستخدام أسلوب نانوبريسيبيتيشن47. باختصار، هو المتقارن الاوليك acids-Pt(II) المذاب في مذيب عضوي وثم إضافة دروبويسي إلى حل كيف مائي (الشكل 1) عند 37 درجة مئوية. الحل هو آثار لعدة ساعات للسماح للتجميع الذاتي للكيف-Pt-كرسبوندنس نانومولسيون تتركز في 10 مركزات الطرد المركزي كاتشين وغسلها ثلاث مرات بالماء. تعديل الكيف مع فلوروفوري الكيميائية يسمح توليف الفلورسنت فيتك-الكيف-Pt-ني مناسبة للتصوير الطبي الحيوي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1-تجميع المتقارن الاوليك Acids–Platinum(II)

  1. تفعيل سيسبلاتين
    1. تعليق 50 ملغ (0.167 ملمول) من سيسبلاتين في 4 مل من الماء (مثلاً، نانوبوري) عند 60 درجة مئوية.
    2. إضافة مغ 55.2 dropwise (0.325 ملمول) إنيو3 في 0.5 مل من الماء لحل سيسبلاتين وآثاره رد فعل على الأقل 2 ح عند 60 درجة مئوية. وسوف تشكل ترسبات بيضاء من AgCl تشير إلى التقدم المحرز في رد فعل.
    3. لتحديد إذا كان رد فعل التنشيط اكتمال، إجراء الاختبار مع 10% HCl لوجود أيون Ag+ الحرة في الحل. ينبغي أن يكون الاختبار السلبي (وينبغي أن تشكل لا ترسبات AgCl إضافية).
    4. الطرد المركزي خليط رد فعل في س 3,220 ز لمدة 10 دقائق وإزالة ترسبات بيضاء من AgCl.
    5. جمع المادة طافية وتصفيته عن طريق عامل تصفية حقنه 0.2 مم. اختبار المادة طافية لوجود البلاتين بتطبيق 2-3 قطرات الحل عن طريق ماصة باستور سنكل2 بلورات. الاختبار إيجابي إذا كان لون تنسيق معقدة من القصدير مع البلاتين الأصفر/البرتقالي الداكن.
    6. استخدام المادة طافية مع Pt(II) المنشط للخطوة الثانية.
  2. تفاعل حمض الأولييك مع Pt(II) المنشط
    1. تعليق 94.2 مغ حمض الأولييك (0.333 ملمول) في 3 مل من الماء عند 60 درجة مئوية.
    2. إضافة مغ 13.3 (0.333 ملمول) من هيدروكسيد الصوديوم في 1 مل من الماء، وتخلط مع حل Pt(II) المنشط من الخطوة 1، 1
    3. إثارة رد فعل ح 2 عند 60 درجة مئوية والتالي في درجة حرارة الغرفة بين عشية وضحاها. النفط الخام المنتج متسرعا براون/أصفر زيتي.
    4. الطرد المركزي خليط رد فعل في س 3,220 ز لمدة 10 دقائق وإزالة المادة طافية. الجاف المنتج الخام عند 25 درجة مئوية باستخدام مبخر دوراني. تنقية المنتج من يغسل متعددة مع الاسيتو الانيتريل. لون نقي acids–Pt(II) الاوليك المتقارن النهائي أصفر باهت.

2-تجميع الكيف-Pt-ني، والمسمى فيتك نانومولسيون فيتك-الكيف-Pt-شمال شرق

  1. توليف تريبيبتيدي الكيف وتريبيبتيدي المسمى فلوريسسينتلي فيتك-الكيف
    1. توليف الكيف استخدام الكيمياء الببتيد الحالة الصلبة القياسية. استخدام المعيار التالي اقتران الشروط إرفاق كل من الأحماض الأمينية: وانغ الراتنج (2.19 ملمول)، الأحماض الأمينية معتدلاً المحمية (4.38 ملمول)، 2-(1H-Benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetramethylaminium رباعي فلوروبورات (تبتو) (4.38 ملمول) ودييسوبروبيليثيلاميني (ديبا) (8.76 مليمول). حل الأحماض الأمينية مع تبتو في dimethylformamide (DMF) وديبا.
    2. نقع ز 5.7 معتدلاً-L-Phe 4-الكوكسيبينزيل الكحول راتنج (0.382 meq/g) في 25 مل DMF ل 1 ح قبل الاستخدام.
    3. ديبروتيكت مجموعة أمين من الحمض الأميني L-فينيلالاناين مع 15 مل محلول piperidine/DMF 20% لمدة 5 دقائق وتجاهل المذيب وتكرار الغسيل بدوره 20 دقيقة.
    4. أغسل الراتنج لمدة 1 دقيقة مع المذيبات التالية: DMF، الكحول الأيزوبروبيل (IPA)، DMF، معهد الإدارة العامة، DMF، معهد الإدارة العامة، DMF، DMF. تجاهل المذيب بعد كل غسل.
    5. إجراء اختبار كايزر لتحديد وجود المجموعة2 NH الحرة في الراتنج (انظر سوبستيبس) وإذا الإيجابية (وبذرة الراتنج الأرجواني)، بإضافة الأحماض الأمينية معتدلاً-لتيروزين إجراء الاقتران بين عشية وضحاها.
      1. إعداد كايزر اختبار حلول في زجاجات منفصلة.
      2. حل 5 غ نينهيدرين في 100 مل إيثانول.
      3. حل ز 80 من الفينول في 20 مل إيثانول.
      4. خلط 2 مل محلول مائي 0.001 M سيانيد البوتاسيوم مع
        98 مل بيريدين.
      5. إضافة 2-3 قطرات من كل كايزر اختبار حلول للعينة والحرارة في الماء المغلي لمدة 5 دقائق.
    6. عند نجاح اقتران من الأحماض الأمينية الثانية، إجراء اختبار كايزر، وإذا كانت سلبية المضي قدما في البروتوكول deprotection (الخطوات من 2.1.3 إلى 2.1.5). كرر هذه العملية مع الحمض الأميني معتدلاً-فينيلالاناين.
      1. عند اقتران من جميع الأحماض الأمينية، غسل الراتنج لمدة 1 دقيقة مع 5 مل من DMF، معهد الإدارة العامة، و DMF، الميثانول، الميثان والأثير ثنائي إثيل، بعد تجاهل كل غسل المذيبات. حفظ الراتنج لمزيد من المعالجة.
      2. استخدام نصف من الراتنج للخطوات التالية (2.1.7-2.1.9) لتعديل الببتيد مع فيتك. للحصول على تريبيبتيدي الكيف غير معدلة، اتبع الإجراء بدءاً من 2.1.10.
    7. تعديل الحمض الأميني الطرفي ن للكيف على الكيف-ن3 مع حمض 6-أزيدوهيكسانويك. وتحقيقا لهذه الغاية، مزيج ز 1 (0.382 ملمول) راتنج "وانغ الكيف" وملغ 120.1 (0.764 ملمول) حمض أزيدوهيكسانويك 6 مع ملغ 245.2 (0.764 ملمول) تبتو وملغ 197.1 (1.528 ملمول) من ديبا في 30 مل DMF. إثارة رد فعل بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة.
    8. الحصول على الكيف-فيتك من توليف الكيف-ن3 مع فلوريسسين بروبارجيل عن طريق فعل انقر فوق. وتحقيقا لهذه الغاية، مزيج مغ 253 (0.097 ملمول) الكيف-ن3 راتنج وانغ مع مغ 3.78 (0.019 ملمول) لكوي الصلبة وملغ 71.9 (0.193 ملمول) fluorescein بروبارجيل 2.24 مغ (0.017 ملمول) من ديبيا. رد الفعل يجب أن يتغير لون من الأخضر إلى البنى.
    9. بعد 24 ساعة، تغسل الراتنج لمدة 1 دقيقة بالتناوب مع 5 مل من DMF وأصد خمس مرات، والميثانول والماء ثلاث مرات و DMF والمياه ثلاث مرات، والميثان والأثير ثنائي إثيل ثلاث مرات. تجاهل المذيب بعد كل غسل.
    10. تنشق بالكيف-فيتك أو الببتيد الكيف من الراتنج بمحلول حامض trifluoroacetic (تفا)/ترييسوبروبيلسيلاني (نصائح)/H2س في نسبة 95/2.5/2.5 أكثر من 3 ساعات.
    11. يعجل الببتيد الخام في البرد إثيل أثير، يغسل ثلاث مرات مع الاثير الباردة والجافة ثم تحت الفراغ.
  2. توليف نانومولسيون فيتك-الكيف-استقرت مع Pt(II) (فيتك-الكيف-Pt-شمال شرق) والكيف-Pt-ني
    1. حل 10 ملغ (0.0126 ملمول) المتقارن الاوليك acids–Pt(II) في 1.5 مل الكحول ومكان في حقنه 5 مل.
    2. ضع المحاقن مع المتقارن الاوليك acids–Pt(II) في مضخة الحقن وضبط التدفق إلى 0.1 مل/دقيقة.
    3. من أجل توليف فيتك-الكيف-Pt-ني، حل 1 ملغ (0.00105 ملمول) فيتك-الكيف والكيف 1 ملغ (0.00219 ملمول) (نسبة 1:2 المولى فيتك-KYF:KYF) في 20 مل الماء، وضبط درجة الحرارة للحل إلى 37 درجة مئوية. وتغطي جدران الحاوية مع رقائق الألومنيوم لتجنب فوتوبليتشينج fluorophore فيتك. لتوليف الكيف-Pt-ني، حل 2 مغ (0.0044 ملمول) من تريبيبتيدي الكيف في 20 مل الماء وضبط درجة الحرارة للحل إلى 37 درجة مئوية.
    4. إضافة المتقارن الاوليك acids–Pt(II) دروبويسي لحل تريبيبتيدي فيتك-الكيف/الكيف أو الكيف. تنفيذ هذه الخطوة تحت غطاء محرك السيارة.
    5. إثارة الحل بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة تتبخر المذيبات العضوية والسماح التجميع الذاتي فيتك-الكيف-Pt-ني أو الكيف-Pt-كرسبوندنس
    6. تركز فيتك-الكيف-Pt-ني أو الكيف-Pt-ني في مركز الطرد مركزي (ك 10 موكو)، وغسل ثلاث مرات مع 4 مل الماء نانوبوري.
    7. تخزين المحاليل الكيف-Pt-ني وفيتك-الكيف-Pt-ني في 4 درجات مئوية.
    8. تحليل لمحتوى البلاتين باستخدام مطيافية الامتصاص الذري (العاص)، عقب الصانع دليل48.
      1. إعداد معايير البلاتين في 10% من محلول HCl لمنحنى المعايرة (المدى الفعال لأنصار السنة ما بين 100 إلى 1,200 جزء في البليون (أجزاء من البليون)).
      2. حل 50 ميليلتر من حل الكيف-Pt-ني من الخطوة 2، 2 في 100 ميليلتر من ريجيا أكوا (خليط 3:1 تركيز حمض الهيدروكلوريك وحمض النيتريك) وترك في درجة حرارة الغرفة بين عشية وضحاها. إضافة 850 ميليلتر من الماء لتصل إلى حجم عينة نهائي 1 مل. تحليل العينة باستخدام العاص. وينبغي تركيز حامض النهائية 10% في جميع العينات التي تم تحليلها.
      3. تسجيل القراءة من نقطة التركيز في جزء في البليون، وحساب المحتوى النهائي البلاتين في العينة (حساب لتمييع عينة والتخزين الأولية من نانومولسيون).

3-[كنفوكل] تصوير لاستيعاب الخلوية فيتك-الكيف-Pt-ني

  1. البذور 6 خطوط خلايا سرطان المبيض (A2780، CP70، SKOV3، OV90، TOV21G، و ES2)، إلى 4 أطباق [كنفوكل] الدائرة جيدا في كثافة 4.7 × 104 خلايا كل دائرة، وقبل الثقافة بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية.
  2. بعد 24 ساعة، تغسل الخلايا ثلاث مرات مع الفوسفات المالحة المخزن المؤقت (PBS) واحتضان مع فيتك-الكيف-Pt-ني في خلية الثقافة المتوسطة (راجع الخطوة 6.1 للخلية خط تفاصيل محددة) لمدة 15 دقيقة عند 37 درجة مئوية.
  3. وبعد الحضانة، قم بإزالة الوسائط وتغسل الخلايا ثلاث مرات مع برنامج تلفزيوني.
  4. إصلاح الخلايا مع الميثانول البارد لمدة 5 دقائق في-20 درجة مئوية، وتغسل ثلاث مرات مع 1 مل من برنامج تلفزيوني.
  5. بيرميبيليزي الخلايا مع 1 مل 0.1% تريتون-X لمدة 10 دقيقة في درجة حرارة الغرفة ويغسل ثلاث مرات مع 1 مل من برنامج تلفزيوني.
  6. احتضان الخلايا لمدة 90 دقيقة مع جسم LAMP1 مترافق مع أليكسا فلور 647 (1 مل) في 01:50 تمييع في برنامج تلفزيوني في درجة حرارة الغرفة. وبعد ذلك، غسل الخلايا 3 مرات مع برنامج تلفزيوني.
  7. تمييع الحل DAPI الأسهم (1 ملغ/مل) إلى 1 مغ/مل في برنامج تلفزيوني. ثم أضف 1 مل الحل المخفف لكل دائرة، واحتضان لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. تغسل الخلايا 3 مرات مع برنامج تلفزيوني.
  8. جبل كوفيرسليبس على شريحة باستخدام المتوسط المتصاعدة.
  9. صورة الخلايا باستخدام مجهر [كنفوكل] خلية حية في الطول الموجي الإثارة من 405 نانومتر، 488 نانومتر و 633 نانومتر. تعيين معلمات الكشف كما يلي: قوة الليزر من 0.2% ولا يزيد عن 1%، وحدة "بينولي 1 جيدة التهوية"، الحصول على ماجستير 650-750، الرقمية الإزاحة 0.
  10. فتح الصورة في برامج التصوير. تحت الصورة المعروضة، حدد الرسومات وتحديد، إدراج شريط مقياسلإدراج شريط مقياس للصورة.

4-المخدرات الإفراج عن الدراسات

  1. القيام بدراسات الإفراج عن المخدرات في برنامج تلفزيوني. ضبط قيم الأس الهيدروجيني ثلاثة مخازن برنامج تلفزيوني إلى 7.4، 6.8 و 5.0 على التوالي.
  2. تمييع 5 ميكروليتر من الكيف-Pt-ني في ميكروليتر 180 درجة الحموضة المناسبة برنامج تلفزيوني المخزن المؤقت، ونقل إلى 3.5 كاتشين موكو الغسيل الكلوي ميني كوب واحتضانها في 37 درجة مئوية في برنامج تلفزيوني.
  3. إزالة المخزن المؤقت من كل ثلاثة أنابيب الغسيل الكلوي مصغرة في 2، 4، 6، 24، 48 وح 140، وقياس تركيزات البلاتين من العاص. إعداد جميع العينات وفقا للخطوة 2.2.8 ولكن ضبط الحجم النهائي للعينة إلى 500 ميليلتر.

5-خلية الثقافة أساليب

  1. خلية ثقافة خطوط A2780، CP70، سكوف-3، OV-90، طوف-21 ز، دإط-2 في الخلية الثقافة المتوسطة (دميم) تستكمل مع 10% (A2780، CP70، سكوف-3، دإط-2) أو مصل الدم البقري الجنين 15% (طوف-21 ز، OV-90) (FBS)، مع لام الجلوتامين والبنسلين/ستربتوميسين. تنمو جميع الخلايا في شركة 5%2، وجو الماء المشبعة عند 37 درجة مئوية.
  2. البذور 3 × 105 خلايا في كل لوحة 96-جيدا وثقافة ما قبل بين عشية وضحاها لتجارب الاحتضان في المختبر. إعداد الحلول الكيف-Pt-ني، سيسبلاتين، وكاربوبلاتين في المياه. ضبط تركيز Pt(II) في الكيف-Pt-ني لتتناسب مع تركيز كاربوبلاتين وسيسبلاتين لكل خط الخلية. احتضان لمدة 72 ساعة عند 37 درجة مئوية.
  3. بعد الحضانة، تقييم جدوى الخلوية تستخدم مقايسة اللونية (مقايسة تكاثر الخلايا MTT). بإيجاز، إزالة المتوسطة وإضافة ميكروليتر 110% 10 MTT في المتوسط لكل خير واحتضانها ح 2 في 37 درجة مئوية. ثم إضافة 100 ميكروليتر المنظفات لكل بئر واحتضانها ح 5 في 37 درجة مئوية.
  4. تحقق من امتصاص في 570 نانومتر باستخدام قارئ لوحة. تحليل النتائج باستخدام التحليل الإحصائي مع اختبار Z واختبار ف.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

صورة الممثل تيم الكيف-Pt-ني المعدة باستخدام هذا البروتوكول يرد في الشكل 2 ألف. الكيف-Pt-الدائرة الوطنية للتوظيف كروية في التشكل، مشتتة، وموحدة في الحجم. قطر الأساسية الكيف-Pt-الدائرة الوطنية للتوظيف، يقاس مباشرة من ثلاث صور تيم مع الحد أدنى من 200 القياسات القيام به، 107 ± 27 نانومتر. قطر هيدرودينامية الكيف-Pt-ني، تحليلها باستخدام التحليل الطيفي الخفيفة الديناميكية (DLS)، وجد أن 240 نيوتن متر مع مؤشر polydispersity 0.156. تم تحديد إمكانات زيتا الكيف-Pt-ني في ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

وتشمل الخطوات الحاسمة في التوليف نانومولسيون ضبط نسبة المولى ركائز والحفاظ على مراقبة معدل درجة الحرارة والتدفق أثناء إضافة acids–Pt(II) الاوليك، وتوفير الوقت الكافي للتجميع الذاتي وتنقية المنتج باستخدام عمود مركزات الطرد المركزي. هذه المعلمات تؤثر على حجم ومورفولوجية الكيف-Pt-ني؛ وبالتالي، من المهم خاصة الحفاظ على نسبة المولى السليم وضبط الظروف الاصطناعية بشكل صحيح.

نسبة ركائز خلال التوليف نانومولسيون (الخطوة 3) حاسمة بالنسبة لعملية التجميع الذاتي ويحدد الحجم النهائي للمنتج. الكيف لنسبة المول...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

لم يكن لديك المؤلفين تضارب في الكشف.

شكر وتقدير

نعترف مع الامتنان بالدعم المالي المقدم من المعهد الوطني للسرطان، منح SC2CA206194. يتم تعريف لا تضارب المصالح المالية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
2- (1H-benzotriazole-1-yl) -1،1،3،3-tetramethyluronium
رباعي فلوروبورات (TBTU)		ANASPEC INC.:AS-20376SPPS
4-well غرفة طبق متحد البؤرLab-Tek II ، Thermo Fisher Scientific154526للتصوير
6-bromohexanoic acidChem-Impex INT ' شركة L24477انقر فوق تعديل الببتيد
A2780تم تقديمه بسخاء من قبل البروفيسور جون مارتينيتي من خط خلايا سرطان المبيض في مستشفى
تنقية المياهBarnstead NanopureThermo FisherD11901
BUCHI rotavapor R-3BuchiZ568090لإزالة المذيبات وتجفيف العينات
جهاز طرد مركزي 5810 Reppendorf5811Fلفصل مركب البلاتين
Cis-dichlorodiaamineplatinum (II) 99٪Acros Organics19376-0050في الاختبارات المختبرية
CP70بسخاء من قبل البروفيسور جون مارتينيتي من خط خلايا سرطان المبيض في مستشفى
حمام مائي رقميVWR97025-134لتسخين الوسائط لزراعة الخلايا
تشتت الضوء الديناميكي (DLS)شركة Brookhaven Instrument Corporationلقياس حجم الجسيمات النانوية
ES-2ATCCCRL-1978خط خلايا سرطان المبيض
Fmoc-L-Lys(Boc) -OH 99.79٪Chem-Impex INT ' شركة L00493SPPS
Fmoc-L-Phe 4-alkoxybenzyl راتنج الكحول (0.382 meq / g) ،Chem-Impex INT شركة L01914SPPS
Fmoc-LTyr (tBu) -OH 98٪Alfa AesarH59730SPPS
HERACELL 150i حاضنة CO2حاضنةعلمية حرارية
حقنة الضغط العاليNew Era1010-USلإضافة معقدة البلاتين في تخليق الجسيمات النانوية
لوح تسخين / نمامVWR12365-382لتحريك العينات وتسخينها
LAMP-1 الجسم المضاد (مقترن مع Alexa Fluor 647)سانتا كروز للتكنولوجيا الحيويةsc-18821 AF647للتصوير
N ، N-diisopropylethylamine (DIPEA)Oakwood Chemical005027SPPS
Ninhydrin 99٪Alfa AesarA10409اختبار Kaiser
حمض الأوليكChem-Impex INT ' شركة L01421لتخليق مركب البلاتين
OV90ATCCCRL-11732خط خلايا سرطان المبيض
PBSCorning21-031-CVلغسل الخلايا
تركيب بيرمونت متوسطفيشر كيميكالSP15-100للتصوير
فينولفيشر كيميكالA92500اختبار كايزر
حمض الفوسفوتونغستيكفيشر الكيميائيةA248-25وصمة عار سلبية ل TEM
Piperidine 99٪BTC219260-2.5LSPPS
Platinum AAS القياسيةAlfa Aesar880861000ug / ml لمنحنى المعايرة
Propargyl bromide 97٪Alfa AesarL10595لتعديل الألكين للفلورسين
خزانة بيولوجية علميةThermo Scientific Fisher1385Bio-hood لثقافة الخلايا
نظام الفراغ ذاتي التنظيفWelch2028مضخة تفريغ لبخار الروتابخار
نترات الفضةAcros Organics19768-0250تنشيط سيسبلاتين
SKOV3ATCCHTB-77خط خلايا سرطان المبيض
هيدروكسيد الصوديومفيشر ScientificS313-1لتخليق البلاتين المركب
كلوريدالقصدير (II)اختبار 208256 سيجما ألدريتشلوجود البلاتين
TOV21GATCCCRL-11730خط خلايا سرطان المبيض
حمض ثلاثي فلورو أسيتيك 99٪ (TFA) ألفاإيسارL06374SPPS
ثلاثي الأيزوبروبيل سيلان (TIPS)Chem-Impex INT شركة L01966SPPS
Triton-XSigma AldrichT8787-100MLلتصوير
مسحوق اليورانين 40٪فيشر S25328Aالعلمي لتعديل الألكين للفلوريسين
Vivaspin 20 (10000 MWCO)SartoriousVS2001لغسل الجسيمات النانوية والتكثيف
المجهر المقلوبVWR89404-462لمراقبة زراعة الخلايا
ماونت سيناي نظام ماونت سينايفيشر مضخة

المراجع

  1. Agrahari, V., Agrahari, V., Mitra, A. K. Nanocarrier fabrication and macromolecule drug delivery: challenges and opportunities. Therapeutic Delivery. 7 (4), 257-278 (2016).
  2. Anselmo, A. C., Mitragotri, S. Nanoparticles in the clinic. Bioengineering & Translational Medicine. 1 (1), 10-29 (2016).
  3. Peer, D., Karp, J. M., Hong, S., Farokhzad, O. C., Margalit, R., Langer, R. Nanocarriers as an emerging platform for cancer therapy. Nature Nanotechnology. 2 (12), 751-760 (2007).
  4. Roy Chowdhury, M., Schumann, C., Bhakta-Guha, D., Guha, G. Cancer nanotheranostics: Strategies, promises and impediments. Biomedicine & Pharmacotherapy. 84, 291-304 (2016).
  5. Jeevanandam, J., Chan, Y. S., Danquah, M. K. Nano-formulations of drugs: Recent developments, impact and challenges. Biochimie. , 99-112 (2016).
  6. Meerum Terwogt, J. M., Groenewegen, G., Pluim, D., Maliepaard, M., Tibben, M. M., Huisman, A., ten Bokkel Huinink, W. W., Schot, M., Welbank, H., Voest, E. E., Beijnen, J. H., Schellens, J. M. Phase I and pharmacokinetic study of SPI-77, a liposomal encapsulated dosage form of cisplatin. Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 49 (3), 201-210 (2002).
  7. Fan, Z., Sun, L., Huang, Y., Wang, Y., Zhang, M. Bioinspired fluorescent dipeptide nanoparticles for targeted cancer cell imaging and real-time monitoring of drug release. Nature Nanotechnology. 11 (4), 388-394 (2016).
  8. Jeong, Y., et al. Enzymatically degradable temperature-sensitive polypeptide as a new in-situ gelling biomaterial. Journal of Controlled Release. 137 (1), 25-30 (2009).
  9. Uesaka, A., et al. Morphology control between twisted ribbon, helical ribbon, and nanotube self-assemblies with his-containing helical peptides in response to pH change. Langmuir. 30 (4), 1022-1028 (2014).
  10. Hwang, W., Marini, D. M., Kamm, R. D., Zhang, S. Supramolecular structure of helical ribbons self-assembled from a B-sheet peptide. Journal of Chemical Physics. 118 (1), 389-397 (2003).
  11. Svobodova, J., et al. Poly(amino acid)-based fibrous scaffolds modified with surface-pendant peptides for cartilage tissue engineering. Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 11 (3), 831-842 (2017).
  12. Kumar, V. A., et al. Highly angiogenic peptide nanofibers. ACS Nano. 9 (1), 860-868 (2015).
  13. Romera, D., Couleaud, P., Mejias, S. H., Aires, A., Cortajarena, A. L. Biomolecular templating of functional hybrid nanostructures using repeat protein scaffolds. Biochemical Society Transactions. 43 (5), 825-831 (2015).
  14. Medina, S. H., Schneider, J. P. Cancer cell surface induced peptide folding allows intracellular translocation of drug. Journal of Controlled Release. 209, 317-326 (2015).
  15. Recio, C., Maione, F., Iqbal, A. J., Mascolo, N., De Feo, V. The Potential Therapeutic Application of Peptides and Peptidomimetics in Cardiovascular Disease. Frontiers in Pharmacology. 7, 526(2016).
  16. McCarthy, K. A., et al. Phage Display of Dynamic Covalent Binding Motifs Enables Facile Development of Targeted Antibiotics. Journal of the American Chemical Society. 140 (19), 6137-6145 (2018).
  17. Lazar, V., et al. Antibiotic-resistant bacteria show widespread collateral sensitivity to antimicrobial peptides. Nature Microbiology. 3 (6), 718-731 (2018).
  18. Czeczor, J. K., McGee, S. L. Emerging roles for the amyloid precursor protein and derived peptides in the regulation of cellular and systemic metabolism. Journal of Neuroendocrinology. 29 (5), (2017).
  19. Branco, M. C., Sigano, D. M., Schneider, J. P. Materials from peptide assembly: towards the treatment of cancer and transmittable disease. Current Opinion in Chemical Biology. 15 (3), 427-434 (2011).
  20. Cheetham, A. G., et al. Targeting Tumors with Small Molecule Peptides. Current Cancer Drug Targets. 16 (6), 489-508 (2016).
  21. Ndinguri, M. W., Solipuram, R., Gambrell, R. P., Aggarwal, S., Hammer, R. P. Peptide targeting of platinum anti-cancer drugs. Bioconjugate Chemistry. 20 (10), 1869-1878 (2009).
  22. Eskandari, S., Guerin, T., Toth, I., Stephenson, R. J. Recent advances in self-assembled peptides: Implications for targeted drug delivery and vaccine engineering. Advanced Drug Delivery Reviews. 110, 169-187 (2017).
  23. Zhou, J., Du, X., Yamagata, N., Xu, B. Enzyme-Instructed Self-Assembly of Small D-Peptides as a Multiple-Step Process for Selectively Killing Cancer Cells. Journal of the American Chemical Society. 138 (11), 3813-3823 (2016).
  24. Sun, J. E., et al. Sustained release of active chemotherapeutics from injectable-solid beta-hairpin peptide hydrogel. Biomaterials Science. 4 (5), 839-848 (2016).
  25. Lock, L. L., Reyes, C. D., Zhang, P., Cui, H. Tuning Cellular Uptake of Molecular Probes by Rational Design of Their Assembly into Supramolecular Nanoprobes. Journal of the American Chemical Society. 138 (10), 3533-3540 (2016).
  26. Kalafatovic, D., Nobis, M., Son, J., Anderson, K. I., Ulijn, R. V. MMP-9 triggered self-assembly of doxorubicin nanofiber depots halts tumor growth. Biomaterials. 98, 192-202 (2016).
  27. Frederix, P. W., et al. Exploring the sequence space for (tri-)peptide self-assembly to design and discover new hydrogels. Nature Chemistry. 7 (1), 30-37 (2015).
  28. Horsley, J. R., et al. Photoswitchable peptide-based 'on-off' biosensor for electrochemical detection and control of protein-protein interactions. Biosensors and Bioelectronics. 118, 188-194 (2018).
  29. Hoyos-Nogues, M., Gil, F. J., Mas-Moruno, C. Antimicrobial Peptides: Powerful Biorecognition Elements to Detect Bacteria in Biosensing Technologies. Molecules. 23 (7), 1683(2018).
  30. Xiao, X., et al. Advancing Peptide-Based Biorecognition Elements for Biosensors Using in-Silico Evolution. ACS Sensors. 3 (5), 1024-1031 (2018).
  31. Puiu, M., Bala, C. Peptide-based biosensors: From self-assembled interfaces to molecular probes in electrochemical assays. Bioelectrochemistry. 120, 66-75 (2018).
  32. Wang, J., et al. Developing a capillary electrophoresis based method for dynamically monitoring enzyme cleavage activity using quantum dots-peptide assembly. Electrophoresis. 38 (19), 2530-2535 (2017).
  33. Etayash, H., Thundat, T., Kaur, K. Bacterial Detection Using Peptide-Based Platform and Impedance Spectroscopy. Methods in Molecular Biology. 1572, 113-124 (2017).
  34. Handelman, A., Apter, B., Shostak, T., Rosenman, G. Peptide Optical waveguides. Journal of Peptide Science. 23 (2), 95-103 (2017).
  35. Chen, C., Liu, K., Li, J., Yan, X. Functional architectures based on self-assembly of bio-inspired dipeptides: Structure modulation and its photoelectronic applications. Advances in Colloid and Interface Science. 225, 177-193 (2015).
  36. Reddy, S. M., Shanmugam, G. Role of Intramolecular Aromatic pi-pi Interactions in the Self-Assembly of Di-l-Phenylalanine Dipeptide Driven by Intermolecular Interactions: Effect of Alanine Substitution. Chemphyschem. 17 (18), 2897-2907 (2016).
  37. Marchesan, S., et al. Unzipping the role of chirality in nanoscale self-assembly of tripeptide hydrogels. Nanoscale. 4 (21), 6752-6760 (2012).
  38. Scott, G. G., McKnight, P. J., Tuttle, T., Ulijn, R. V. Tripeptide Emulsifiers. Advanced Materials. 28 (7), 1381-1386 (2016).
  39. Galanski, M., Jakupec, M. A., Keppler, B. K. Update of the preclinical situation of anticancer platinum complexes: novel design strategies and innovative analytical approaches. Current Medicinal Chemistry. 12 (18), 2075-2094 (2005).
  40. Wheate, N. J., Walker, S., Craig, G. E., Oun, R. The status of platinum anticancer drugs in the clinic and in clinical trials. Dalton Transactions. 39 (35), 8113-8127 (2010).
  41. Oberoi, H. S., Nukolova, N. V., Kabanov, A. V., Bronich, T. K. Nanocarriers for delivery of platinum anticancer drugs. Advanced Drug Delivery Reviews. 65 (13-14), 1667-1685 (2013).
  42. Fichtinger-Schepman, A. M., van Oosterom, A. T., Lohman, P. H., Berends, F. cis-Diamminedichloroplatinum(II)-induced DNA adducts in peripheral leukocytes from seven cancer patients: quantitative immunochemical detection of the adduct induction and removal after a single dose of cis-diamminedichloroplatinum(II). Cancer Research. 47 (11), 3000-3004 (1987).
  43. Englander, E. W. DNA damage response in peripheral nervous system: coping with cancer therapy-induced DNA lesions. DNA Repair. 12 (8), 685-690 (2013).
  44. Galluzzi, L., et al. Molecular mechanisms of cisplatin resistance. Oncogene. 31 (15), 1869-1883 (2012).
  45. Boeckman, H. J., Trego, K. S., Turchi, J. J. Cisplatin sensitizes cancer cells to ionizing radiation via inhibition of nonhomologous end joining. Molecular Cancer Research. 3 (5), 277-285 (2005).
  46. Dragulska, S. A., et al. Tripeptide-Stabilized Oil-in-Water Nanoemulsion of an Oleic Acids-Platinum(II) Conjugate as an Anticancer Nanomedicine. Bioconjugate Chemistry. 29 (8), 2514-2519 (2018).
  47. Martinez Rivas,, J, C., et al. Nanoprecipitation process: From encapsulation to drug delivery. International Journal of Pharmaceutics. 532 (1), 66-81 (2017).
  48. Agilent Technologies. Analytical Methods for Graphite Tube Atomizers, User's Guide Manual, 8th edition. , (2012).
  49. Park, S. Y., et al. A smart polysaccharide/drug conjugate for photodynamic therapy. Angewandte Chemie. 50 (7), 1644-1647 (2011).
  50. Canton, I., Battaglia, G. Endocytosis at the nanoscale. Chemical Society Reviews. 41 (7), 2718-2739 (2012).
  51. Lokich, J., Anderson, N. Carboplatin versus cisplatin in solid tumors: an analysis of the literature. Annals of Oncology. 9 (1), 13-21 (1998).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

مُقترن حمض الأوليك والبلاتينطلاء ببتيد KYFعملية التجميع الذاتيالتركيز بالطرد المركزيمستحلب نانوي فلوريتحرر البلاتينخلايا سرطان المبيضالمجهر الإلكتروني النافذطريقة مضخة السرنجة
نانومولسيون تريبيبتيدي استقرت حمض الأولييك
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.