هنا، نحن وصف إعداد لتسجيل متزامنة كهربية وضغط الدم الشرياني داخل (BP) في الفئران التجريبية، التي يمكن القيام به مع المعدات القياسية في مرافق الحيوانات ويمكن تطبيقها على فسيولوجية أو الدوائي دراسات للتحقيق في الآليات المسببة للأمراض أو العلاجية في طب القلب والأوعية الدموية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تسجيل كهربية متزامنة والدم الغازية الضغط القياس في الفئران
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الدراسات المتصلة فسيولوجيا القلب والأوعية الدموية أو الفيزيولوجيا المرضية، يتم ضغط الدم (BP) وكهربيه البارامترات الأساسية للمراقبة. بحوث تركز على نماذج الأمراض القلبية الوعائية، والأهداف العلاجية القلبية الوعائية المحتملة أو وكلاء الأدوية يتطلب التقييم المنهجي الشرياني ضغط وقلب إيقاع التغييرات. في الحالات حيث نظم القياس عن بعد إذاعة ليست متاحة أو معقولة، أسلوب cannulation شريان فخذي طريقة بديلة للحصول على تسجيلات الموجي الضغط داخل الشرايين والجهازية BP القياسات. هذا الأسلوب من الناحية الاقتصادية، ويمكن تنفيذها مع المعدات القياسية في مرافق الحيوانات. ومع ذلك، يتطلب تسجيل الضغط الشرياني الغازية cannulation الشرايين الصغيرة، التي يمكن أن تكون مهارة جراحية صعبة. هنا، نحن نقدم البروتوكولات خطوة بخطوة لشريان فخذي الإجراءات كانولاتيون. وتشمل الإجراءات الرئيسية معايرة نظام حيازة البيانات و cannulation التشريح وشريان فخذي الأنسجة، وإعداد نظام تسجيل الضغط الشرياني cannulation. إجراءات تسجيل كهربية السطحية مدرجة أيضا. ونقدم أيضا أمثلة من تسجيلات شركة بريتيش بتروليوم من الفئران نورموتينسيفي وارتفاع ضغط الدم. ويسمح هذا البروتوكول تسجيلات مباشرة موثوقة من BP المنهجي مع كهربية متزامنة.
المقدمة
ضغط الدم (BP) وكهربيه (ECG) هي المعالم الأساسية لفسيولوجيا القلب والأوعية الدموية، والطب. نماذج حيوانية تجريبية قد طبقت على نطاق واسع في البحوث الطبية الحيوية لمختلف أمراض القلب والأوعية الدموية مثل ارتفاع ضغط الدم قصور القلب1 والإجراءات المتعلقة بتسجيل تخطيط القلب، ويمكن إجراء قياس BP في الفئران التجريبية.
هناك ثلاثة أساليب لقياس BP في الفئران: cannulation داخل الشرايين (توسعية)2، ذيل الكفة بليثيسموجرافي (موسع)3، وراديو القياس عن بعد (توسعية). يمكن أن تتأثر موثوقية القياس BP بذيل الكفة بليثيسموجرافي بالحيوان معالجة أثناء التسجيل. على سبيل المثال، تهون الكفة ذيل الأساسية BP التغييرات التي تحدث في وقت واحد خلال مراحل ضبط النفس وقياس4. ويعتبر القياس عن بعد إذاعة أفضل أسلوب "المعيار الذهبي" ل BP الرصد ومعدل ضربات القلب في يقظة والانتقال بحرية الحيوانات5. ومع ذلك، منذ إذاعة القياس الأجهزة والبرمجيات مكلفة، يستخدم cannulation داخل الشرايين أيضا على نطاق واسع كبديل اقتصادي.
يتطلب قدرا كبيرا من المهارة microsurgical كانوليشن داخل الشرايين لكن غلة في الطول الموجي الحقيقية للضغط الشرياني. يمكن تسجيل BP من خلال إدراجها في شعاعي، الفخذ، أو في شريان عضدي قسطرة مملوءة بالمياه المالحة. يتطلب هذا الأسلوب لقياس BP الغازية مباشرة إعداد الحيوانات قبل العمليات الجراحية، والتخدير، وتجميد للحيوانات المختبرية، والمهارة الجراحية في تشريح الأنسجة والشرايين كانوليشن، والمعايرة الصحيحة قبل الحصول على قياس .
ECG السطحية القوارض مشابه لتخطيط القلب البشري. وقد فأر ECG متواليات من موجات P ومجمعات قيود الكمية وموجات T و فترات كيو تي6. موجه P، والفاصل الزمني للعلاقات العامة، وقيود الكمية المعقدة، وموجات T تعكس أذينية depolarization، التوصيل دفعة من الرجفان عقده AV والبطين ديبولاريزيشن، وريبولاريزيشن، على التوالي. الفاصل الزمني كيو تي تعرف بأنها الفترة من بدء موجه Q إلى نقطة النهاية الموجه T فيها فإنه يعود إلى الأساس iso الكهربائية1.
يشير إلى تخطيط القلب االنقباض القلب ومراحل االنبساط؛ ولذلك، يرتبط التسجيل المتزامن لتخطيط القلب السطحية بقياس BP الغازية. باستخدام مزيج من المنهجيات، من الممكن لتوضيح التغييرات الفيزيولوجية المرضية في نموذج مرض أو التأثيرات الدوائية للمخدرات أو العلاج في طب القلب والأوعية الدموية.
تم الحصول على سلالة جرذ (باستفاض) ضغط الدم العفوي بالاستيلاد جرذان ويستار مع BP عالية في اليابان. BP ترتفع من 5 إلى 10 أسابيع عمر، وتصبح ثابتة من 30 إلى 35 أسبوعا من العمر7. جرذان ويستار-كيوتو (وكي) BP الانقباضية حول 130 ملم زئبق7 وتستخدم عادة كعنصر تحكم نورمو المتوتر. كنا باستفاض ووكي لإثبات نتيجة لتسجيل BP وتخطيط القلب كانوليشن إينترارتيريال.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وافق جميع التجارب على الحيوانات ووصف برعاية الحيوان المؤسسية واستخدام اللجنة كاوشيونغ الطبية الجامعية.
1. رعاية الحيوان
- لتجنب كانولاتيون صعبة نظراً لصغر حجم الشرايين، استخدم الفئران مع ما يزيد على 200 جرام من وزن الجسم.
- إزالة تشو من القفص والفئران بسرعة بين عشية وضحاها.
- توفر المياه الإعلانية ليبيدوم ما لم يكن هناك تصميم تجريبية خاصة.
2-إعداد تجريبي
- الحصول على المواد التالية: الملقط مع الأسنان (الشكل 1A)، وأخرى-الأدوات الجراحية (الشكل 1B)، الملقط مع نصائح الجميلة (الشكل 1، 1 د)، الملقط مع نصائح الزاوية (الشكل 1E)، لدغ المشبك الأوعية الدموية (الشكل 1F )، سلسلة الحرير حوالي 20 سم في الطول (الشكل 1)، والمقص الصغير (ح رقم 1)، قنية داخل الشرايين، وأنبوب معقم البولي إيثيلين (PE) مع قطرها داخلي 0.5 مم وقطر خارجي من 0.9 مم، 25-30 سم في الطول، ومتصل إلى 1/2 x 26 '' إبرة (الرقم 1I)، مليئة اثنين ستوبكوكس الثلاثية (الشكل 1J) لتوصيل قنية داخل الشرايين والمحاقن محول الطاقة (الشكل 1 K)، و 1 مل الضغط هيبارينيزيد المالحة (100 وحدة دولية/مل).
-
إعداد الحيوانات
- تخدير الفئران باستنشاق إيسوفلوراني (وضع الفئران في 25 سم × 25 سم × 14 سم التعريفي الدائرة مشبعة إيسوفلوراني 4 ٪، تليها استخدام نوسيكوني مع إيسوفلوراني 3%).
ملاحظة: إذا لم يتم تخديره الحيوان بما فيه الكفاية، بدوره يصل معدل التدفق إيسوفلوراني. - اختبار منعكس الألم معسر الأصابع.
- وضع الفئران في موقف ضعيف من قبل قطع الستايروفوم المجلس (أو الورق المقوى السميك). إصلاح أربعة أرجل مع الأربطة المطاطية شل الجسم (الشكل 2A).
ملاحظة: لتجنب احتمال الضوضاء أثناء تسجيل تخطيط القلب، يجب أن لا موصلة كهربائياً السطح التنسيب.
- تخدير الفئران باستنشاق إيسوفلوراني (وضع الفئران في 25 سم × 25 سم × 14 سم التعريفي الدائرة مشبعة إيسوفلوراني 4 ٪، تليها استخدام نوسيكوني مع إيسوفلوراني 3%).
- إعداد أدوات لتسجيل BP وتخطيط القلب. وتشمل وحدة إدخال التناظري للحصول على إشارات، ضغط على المفاتيح بلوحة وصل متوافقة وثلاثة القطبين مقلوب إبرة رسم القلب يؤدي وجهاز كمبيوتر مع برنامج مناسب.
3-الضغط على المفاتيح المعايرة
- قبل البدء في تسجيل شركة بريتيش بتروليوم، معايرة بمقياس ضغط الدم قياسية الزئبق (الشكل 1 لتر).
- إزالة ضغط الرباط من مقياس ضغط الدم والاتصال محبس الحنفية الثلاثية على أنبوب التضخم الضغط على المفاتيح (الشكل 1 ك) نظام الاستحواذ على البيانات.
- برغي الهواء-الإفراج عن صمام عكس اتجاه عقارب الساعة. إبقاء العين على المقياس والحفاظ على ضخ لمبة التضخم. عندما يظهر المقياس 100 ملم زئبق، التبديل في محبس الحنفية ثلاثة طريقة للاتصال الضغط على المفاتيح. استخدام 100 ملم زئبقي الضغط للمعايرة. سيتم تلقائياً تحديد معامل التحويل لحساب شركة بريتيش بتروليوم.
- الإفراج عن الضغط بالشد صمام الهواء-الإفراج عن عكس اتجاه عقارب الساعة حتى يتم ضغط مقياس ضغط الدم العودة إلى الصفر.
- كرر الخطوة 3، 2 مع الضغط من 200 ملم زئبق.
- فصل الضغط على المفاتيح من الزئبق مقياس ضغط الدم.
- الاتصال الضغط على المفاتيح بمحبس الحنفية ثلاثي لقسطرة PE (1I الشكل).
4-جراحة صغيرة كانوليشن شريان فخذي
-
تحديد الهوية التاريخية السطحية والختان في الجلد (الشكل 2)
- التعرف على مكان تجعد الاربية (المسافة البادئة في مفترق الطرق بين البطن والفخذ) (متقطع خط في الشكل 2 أ).
- قرصه على طبقة كاملة من الجلد في مركز تجعد الاربية. وقد حلق الفراء أو أزيلت من الموقع باستخدام مقص كهربائي أو كريم مزيل الشعر قبل شق شق.
- رفع الجلد وقطع عليه مع المقص الجراحي في اتجاه مواز تقريبا في الفخذ عن (الشكل 2). العصب الفخذي والسفن تحت النسيج تحت الجلد المكشوفة (الشكل 2).
-
تشريح الأنسجة لفضح شريان فخذي
- تشريح الأنسجة باستخدام الملقط مع نصائح الجميلة، وطبقة بعد طبقة. إيقاف تشريح على مستوى الفخذ السفن. تأكد من أن التشريح هو عدم إصابة السفن تحت.
- استخدام الملقط (الشكل 1 أو د 1) لمسح خارج الأنسجة اللينة على طول العصب الفخذي والسفن للحصول على مراقبة جيدة بعناية. العصب مثل الألياف في النسيج. وعلى المنوال أرجواني داكن وهو الشريان نابض (الشكل 3A).
- استخدام الملقط مع نصائح الزاوية (الشكل 1E) بتمديد فترة يتعرض فخذي الشريان والوريد (الشكل 3B).
-
كانولاتيون شريان فخذي (الشكل 3)
- استخدام الملقط منفصلاً على المنوال فخذي الشريان وتنطبق المشبك لدغ في شريان فخذي cranially ممكن (الشكل 3).
- جعل تعادل فضفاضة السلسلتين الحرير، وواحد فقط أدناه المشبك لدغ والآخر في محطة والذيلية لشريان فخذي مكشوفة (الشكل 3D).
- جعل ثقب صغير على الجانب البطني من شريان فخذي (3E الشكل) باستخدام مقص الصغرى (الشكل 1 ح).
- إدراج تلميح القسطرة PE من خلال ثقب صغير وتقدم القسطرة cranially.
ملاحظة: لا يتم تطبيق التواء أثناء النهوض بالقسطرة PE. قوة الالتواء قد تطور شريان فخذي ويؤدي إلى تضيق لومينال. - إزالة المشبك لدغ بعد القسطرة PE بأمان متقدمة في التجويف شريان فخذي.
ملاحظة: إبقاء العين على القسطرة PE أثناء إزالة المشبك لدغ من شريان فخذي. ويؤكد مراقبة باكفلوش الدم في القسطرة PE المرتبطة بالمراقبة لنبض موضعه في التجويف الشرياني. - تشديد السلسلة الحرير العلوي لتأمين موقف القسطرة PE.
ملاحظة: يمكن أن يؤدي أي سحب عرضي أو خلع القسطرة PE في نزيفا كبيرا. - تشديد السلسلة الحرير أقل منع النزيف من جانب شريان فخذي والذيلية.
-
تأكيد نجاح cannulation شريان فخذي
- استخدم حقنه 1 مل حقن 0.1-0.2 مل من المحلول الملحي هيبارينيزيد في شريان فخذي. يجب أن تكون المقاومة على حقن تافهة. إذا لاحظت أي مقاومة واضحة عند الحقن، تحقق من كانوليشن كله مرة أخرى.
ملاحظة: تأكد من أن يتم تبديل ستوبكوكس ثلاثي مناسب قبل تطبيق أي ضغط سلبي أو حقن المالحة في قنية شريان فخذي. في هذه النقطة الزمنية، أي حقن في الضغط على المفاتيح سوف تحتاج إعادة معايرة. - التحقق من ما إذا كان هناك أي ناز المحيطة بموقع كانوليشن. إذا لم يكن الأمر كذلك، تغطية الموقع الجراحي مع كرة القطن رطب.
- استخدم حقنه 1 مل حقن 0.1-0.2 مل من المحلول الملحي هيبارينيزيد في شريان فخذي. يجب أن تكون المقاومة على حقن تافهة. إذا لاحظت أي مقاومة واضحة عند الحقن، تحقق من كانوليشن كله مرة أخرى.
5-تسجيل ضغط الدم
- بعد تدفق سلس للقسطرة PE، نعلق في محبس الحنفية ثلاثة طريقة القسطرة PE واحد على الضغط على المفاتيح (الشكل 4).
- تأكد من أن هناك لا فقاعات الهواء في النظام كانوليشن. أيضا التحقق من الوصلات اتصال من محبس الحنفية الثلاثية.
- تبدأ البيانات أثبت نظام حيازة مع أخذ العينات من تردد هرتز 1,000 لسجل موجات الضغط الشرياني هناك سيكون (الشكل 6).
- يسمح الإعداد كلها لتحقيق الاستقرار لمالا يقل عن 3-5 دقائق. في الحالات مع إشارات متقلب، يمكن تمديد الوقت تحقيق الاستقرار لمدة 15 دقيقة.
- تحقق من موقع كانوليشن بصورة دورية للتأكد من أن هناك لا نزيف.
ملاحظة: عند الحصول على بيانات من ضغط على المفاتيح، من المهم وضع محول على مستوى القلب للحيوان.
6-سطح الرسم الكهربائي للقلب
- تحقق من الثلاثة يؤدي تخطيط القلب بين القطبين للتأكد من إيجابية وسلبية، واقطاب مرجعية البلاتين سليمة.
- إدراج العملاء المتوقعين تحت الجلد على اليسار قوله، وقوله الحق، والحق هيندليج (الشكل 5).
- إرفاق محاور القطب إلى مكبر للصوت ECG مبنية خصيصا مع تواتر أخذ العينات من التردد هرتز 1,000 وتصفية من 3 – 500 هرتز. ثابت يؤدي "الاحتفاظ بتخطيط القلب" أثناء التسجيل. يمكن أن تنتج الحركة يؤدي ECG أساسات متقلب والتحف.
7-الحيوان القتل الرحيم بعد الانتهاء من التجربة
- بعد الانتهاء من شركة بريتيش بتروليوم وتسجيل تخطيط القلب، وقف نظام حيازة. إزالة الأقطاب. سد شريان فخذي بتشديد السلسلة الحرير الموضوعة سابقا الحق بعد سحب القسطرة PE.
- مكان الفئران على حدة في دائرة القتل الرحيم مرئية متصلة بضغطها باسطوانات غاز ثاني أكسيد الكربون (CO2). ختم الجزء العلوي بشكل أمن.
- إدخال 100% CO2 مع معدل تعبئة لحوالي 10% إلى 30% حجم الدائرة للدقيقة الواحدة.
- إبقاء عينيك على الفئران؛ يجب أن يظهر عدم التنفس والعيون باهتة اللون داخل 2−3 دقيقة.
ملاحظة: إذا لم يحدث وقف حركة التنفس بعد 3 دقائق، وينبغي دراسة النظام لمعدل ملء الدائرة، وأول أكسيد الكربون2 توريد، أو تسرب. - يتوقف تدفق2 المحافظة على أول أكسيد الكربون إلى الدائرة لمدة 1 دقيقة أكثر بعد التنفس.
- التحقق من القبض على القلب والجهاز التنفسي وملاحظة التلاميذ الثابتة والمتوسعة لتأكيد الوفاة.
ملاحظة: إذا الفئران ليست ميتة ولكن في الخدر2 CO، تستخدم أسلوب القتل الرحيم مثل thoracotomy الثنائية ثانوية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
نحن شراء باستفاض وجرذان ويستار-كيوتو "وكي" نورموتينسيفي من المركز الوطني للحيوانات المختبرية (تايبيه، تايوان). تم إيواء جميع الحيوانات في مركز التحكم في درجة الحرارة (20−22 درجة مئوية) مع حرية الوصول إلى المياه وتشو القياسية في دائرة ضوء/الظلام ح 12.
كنا ست عمرها 47 الأسبوع الفئران وأنها بوزن قبل قياس BP وتخطيط القلب. وسم الممثل من تسجيل المتزامنة لتخطيط القلب وشركة بريتيش بتروليوم في الانضم ووكي تظهر في الش...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
Cannulation الشرياني الغازية يتيح قياس درجة عالية من الدقة من شركة بريتيش بتروليوم. يمكن أن يتم مع أنبوب PE دون الحاجة إلى قسطرة باهظة الثمن. يمكن أيضا إجراء الغازية BP القياس في وقت واحد مع تسجيل تخطيط القلب السطحية.
منحنى التعلم الرئيسية لهذا الأسلوب هي المهارة التجريبية اللازمة كانولاتي من الأوعية الدموية الصغيرة. في أيدي ذوي الخبرة، يمكن نهج معدل النجاح لشريان فخذي كانولاتيون 100%. ويوصي بالممارسة قبل إجراء تجارب حقيقية. بعض النقاط الجديرة بالذكر أثناء الإجراء: (1) جعل متأكد من الحيوانات ه...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
شكر وتقدير
أيد هذه الدراسة "تايوان وزارة العلوم" والتكنولوجيا منح الأكثر 104-2314-B-037-080-MY3 والأكثر 107-2314-ب-037-110 على HCL، ومعاهد البحوث الصحية الوطنية في تايوان منح المؤسسات الوطنية-EX107-10724SC.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| أنبوب البولي إيثيلين | BECTON DICKINSON | 427401 | القطر الداخلي 0.5 مم ، القطر الخارجي 0.9 مم |
| 26 جم × 1/2 بوصة إبرة | TERUMO | 160426D | |
| Adson ملقط | TOP Line | 12-540 | 12 سم (4.75 بوصة) طويل ، مستقيم ، 1 × 2 أسنان |
| مشبك الأوعية الدموية بولدوج | Teleflex | 357581 | 8 مم |
| كمبيوتر ؛ | الخارجي AUSUS | X453M | |
| iWorx | T5141538 | يسمح هذا بتسجيل ما يصل إلى ثلاث قنوات من ECG أو EMG أو EEG بالإضافة إلى GSR (توصيل الجلد) من مدخل iWire واحد على وحدة التسجيل. | |
| ملقط Graefe | AESCULAP الأدوات الجراحية | BD312R | ملقط ضمادة صغيرة ، منحني ، مسنن ، 105 مم ، 4 1/8 &NBSP ؛ |
| ضغط Mecury | Spirit | CK-101 | |
| محول ضغط | iWorx | IworxBP100 | |
| ملقط سيمكين | MEDE TECHNIK | 10-104 | 100 مم |
| مقص برمجي | LabScribe3 | ||
| جراحية | HEBU | 1714 | بطول 14.5 |
| سم (1 مل) | TERUMO | 160426D | |
| محبس ثلاثي الاتجاهات | Cole-Parmer | EW-30600-23 | |
| ملقط مائل | أدوات الدقة العالمية | 504506 | بطول 11 سم ، 0.1 × 0.06 مم نصائح |
| مقص Vannas | World Precision Instruments | 500086 | بطول 8.5 سم ، مستقيم ، نصائح 0.025 × 0.015 مم ، شفرات فائقة الدقة 7 مم |
المراجع
- Shiou, Y. -L., Huang, I. C., Lin, H. -T., Lee, H. -C. High fat diet aggravates atrial and ventricular remodeling of hypertensive heart disease in aging rats. Journal of the Formosan Medical Association. , (2017).
- Parasuraman, S., Raveendran, R. Measurement of invasive blood pressure in rats. Journal of Pharmacology, Pharmacotherapeutics. 3 (2), 172-177 (2012).
- Fink, G. D. Does Tail-Cuff Plethysmography Provide a Reliable Estimate of Central Blood Pressure in Mice? Journal of the American Heart Association: Cardiovascular and Cerebrovascular Disease. 6 (6), e006554(2017).
- Wilde, E., et al. Tail-Cuff Technique and Its Influence on Central Blood Pressure in the Mouse. Journal of the American Heart Association: Cardiovascular and Cerebrovascular Disease. 6 (6), (2017).
- Braga, V. A., Prabhakar, N. R. Refinement of Telemetry for Measuring Blood Pressure in Conscious Rats. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science : JAALAS. 48 (3), 268-271 (2009).
- Kaese, S., Verheule, S. Cardiac electrophysiology in mice: a matter of size. Frontiers in Physiology. 3 (345), (2012).
- Okamoto, K., Aoki, K. Development of a strain of spontaneously hypertensive rats. Japanese Circulation Journal. 27, 282-293 (1963).
- Van Vliet, B. N., Chafe, L. L., Antic, V., Schnyder-Candrian, S., Montani, J. P. Direct and indirect methods used to study arterial blood pressure. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 44 (2), 361-373 (2000).
- Alam, M. A., Parks, C., Mancarella, S. Long-term Blood Pressure Measurement in Freely Moving Mice Using Telemetry. Journal of Visualized Experiments. (111), e53991(2016).
- Irvine, R. J., White, J., Chan, R. The influence of restraint on blood pressure in the rat. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 38 (3), 157-162 (1997).
- Nvd Vosse, F., Stergiopulos, N. Pulse Wave Propagation in the Arterial Tree. Annual Review of Fluid Mechanics. 43 (1), 467-499 (2011).
- Cosson, E., et al. Aortic stiffness and pulse pressure amplification in Wistar-Kyoto and spontaneously hypertensive rats. The American Journal of Physiology: Heart and Circulatory Physiology. 292 (5), H2506-H2512 (2007).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
