العزلة والتبني نقل الملح عالية يعامل عرض مستضد الخلايا الجذعية

الملح الغذائية الزائدة عامل خطر رئيسي لارتفاع ضغط الدم. ^{1 , 2} "جمعية القلب الأمريكية" توصي كحد أقصى 2,300 مليغرام (ملغم) من تناول الصوديوم (Na⁺) في اليوم الواحد، ومع ذلك؛ أقل من 10% سكان الولايات المتحدة تلاحظ هذه التوصية. ^{3 , 4} تخفيضات متواضعة في المدخول نا⁺ انخفاض ضغط الدم، وتقليل حالات جديدة سنوياً من مرض القلب التاجي والسكتة الدماغية في الولايات المتحدة بنسبة 20%. ⁵ مشكلة رئيسية مع الزيادة في استهلاك الملح هو أن 50 في المائة من السكان ارتفاع ضغط الدم والمعارض الملح-حساسية، ويعرف بزيادة 10 مم زئبق في ضغط الدم بعد نا^{نا+ تحميل أو حدوث انخفاض مماثل في ضغط الدم +} القيد وإدرار البول. ⁶ الملح حساسية كما يحدث في 25% أفراد نورموتينسيفي، وهو توقع مستقلة من الموت وأحداث القلب والأوعية الدموية. ^{7 , 8} آليات الاستشعار عن الملح في ارتفاع ضغط الدم التي تنطوي على الكلي درست؛ بيد أن الدراسات الحديثة تشير إلى أن الخلايا المناعية يمكن الشعور نا⁺. ^{9 , 10}

تشير الدلائل الأخيرة إلى أن التغييرات في خارج الكلوية نا⁺ التعامل مع يمكن أن تسبب تراكم نا⁺ في إينتيرستيتيوم وتشجيع التهاب. ^{11 , 12} مختبرنا وغيرها قد أظهرت أن خلايا نظام المناعة الفطرية والتكيف تسهم في تفاقم ارتفاع ضغط الدم. ^{9 , 13 , 14 , 15} المحفزات فرط ضغط الدم المختلفة، بما في ذلك وحيدات انجيوتنسين الثاني وإفراز والسبب الملح الضامة، والخلايا الليمفاوية T التسلل في الكلي والمفرج وتشجيع استبقاء نا⁺ ، تضيق الأوعية، وضغط الدم الارتفاع، وتلف الجهاز نهاية. ^{9 , 16 , 17 , 18 , 19 , 20} وفي الدراسات السابقة، وجدنا أن وحدات تحكم المجال Dc تتراكم إيسوليفوجلاندين (إيسولج)-أدوكتس البروتين في الاستجابة للمحفزات فرط ضغط الدم المختلفة بما في ذلك انجيوتنسين الثاني والملح دوكا ارتفاع ضغط الدم. ¹⁴ إيسولجس منتجات وبيروكسيد شدة رد الفعل بسرعة وتساهمي أدوكت إلى ليسينيس على البروتينات وتراكمها ويرتبط مع التنشيط DC. ¹⁴ وقد أنشأنا مؤخرا أن نا مرتفعة⁺ حافز قوي للبروتين إيسولج أدوكت تشكيل في الفئران وساطة وحدات تحكم المجال Dc-⁹ غ⁺ الدخول إلى وحدات تحكم المجال Dc عن طريق ناقلي amiloride الحساسة. ثم يتم تبادل نا⁺ للكالسيوم (Ca^{2 +}) عن طريق⁺Na/Ca^{2 +} المبادل. Ca^{2 +} تنشيط بروتين كيناز ج (PKC) الذي ينشط أوكسيديز نادف مما أدى إلى زيادة أكسيد فائق (س₂^·-) والبروتين إيسولج أدوكت تشكيل. ⁹ نقل التبني المعرضة للملح ضغط الدم يعبي وحدات تحكم المجال Dc استجابة لجرعة موترة الفرعي من انجيوتنسين الثاني. ⁹

تحديد CD11c⁺ وحدات تحكم المجال Dc من الأنسجة قد اقتصر سابقا على إيمونوهيستوتشيميستري و RT-PCR، والعزلة من وحدات تحكم المجال Dc قد اقتصر على الخلية الفرز حسب التدفق الخلوي. على الرغم من أن التدفق الخلوي الخلية الفرز وسيلة قوية لعزل الخلايا المناعية، مكلفة وتستغرق وقتاً طويلاً، ويؤدي إلى انخفاض عائد من خلايا قابلة للحياة. ولذلك، نحن الأمثل بروتوكول خطوة بخطوة لهضم الأنسجة والتحفيز في المختبر، والتبني نقل CD11c⁺ وحدات تحكم المجال Dc لدراسة ارتفاع ضغط الدم.

وافقت جامعة فاندربيلت رعاية الحيوان المؤسسية واللجنة استخدام الإجراءات الموضحة هنا. يسكن الفئران ورعايتهم وفقا للدليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية (الصحافة الأكاديميات الوطنية. 2010 المنقحة).

1-عزل الطحال من الفئران

1. إعداد 1640 RPMI: 10% FBS، 0.10 مم حبيس، بيروفات صوديوم 1 مم، 50 ميكرومتر β-mercaptoethanol والبنسلين/ستربتوميسين 1%.
2. Euthanize 10 – 12 أسبوع-القديمة C57bl/6 ذكور الفئران باستنشاق أول أكسيد الكربون₂ . رش الصدر والجانبين للماوس مع الإيثانول 70%. على الجانب الأيسر، بعناية فتح الجلد والتجويف الصفاقى لفضح الطحال.
3. استخدام الملقط الصغيرة، حذر تحريك الأمعاء والكبد في الجانب الأيمن من الماوس، واستخدام مقص غرامة بلطف المكوس الطحال.
   ملاحظة: هذه الخطوة يجب أن يتم بعناية فائقة كما تلف الجهاز الهضمي يمكن حمل التلوث.
4. ضع كل الطحال قصت في الأنبوبة المسماة 15 مل المخروطية التي تحتوي على 3 مل متوسط RPMI 1640.

2-جيل تعليق خلية مفردة من الطحال

ملاحظة: يمكن فصل الطحال في تعليق خلية واحدة فقط عن طريق الجمع بين الانفصال الميكانيكية بالإضافة إلى الهضم الأنزيمي.

1. إعداد الحل الهضم الطحال عن طريق إضافة كولاجيناز د (1 ملغ/مل؛ 0.29 يو/mg المجففة بالتبريد) والدناز الأول (0.1 مغ/مل) لإعداد المتوسط RPMI 1640 (راجع الخطوة 1، 1)
2. استخدام الملقط لنقل الطحال في أنبوب ج (أنبوب الانفصال) التي تحتوي على 3 مل من محلول الهضم الطحال.
3. إجراء الانفصال الميكانيكية باستخدام الخالطون شبه إليه وفقا لإرشادات الشركة المصنعة.
   1. ضع الأنبوب ج على الخالطون شبه الآلي، ضمان أن الأنبوب ج يوضع مشددة على الذراع الدورية. حالما يتم وضع أنبوب ج، اضغط على زر ابدأ في الخالطون شبه الآلي تشغيل بروتوكول 04.01 الطحال ل 60 ثانية.
      ملاحظة: يمكن أيضا إجراء الانفصال الميكانيكية عن طريق وضع عامل تصفية 40 ميكرومتر على رأس أنبوب مخروطي 50 مل بلطف طحن الطحال من خلال عامل تصفية. بعد طحن الطحال، عن طريق شطف تصفية 40 ميكرومتر مع 10 مل الإعلام ربمي.
4. بعد الانفصال الميكانيكية، فصل الأنبوب من الخالطون وأداء الهضم الأنزيمي. احتضان هذه العينات لمدة 15 دقيقة عند 37 درجة مئوية تحت التناوب المستمر (20 لفة في الدقيقة).
5. نقل الحل عن طريق بيبيتينج في أنبوب 50 مل مخروطية بعد عملية التصفية من خلال مصفاة 40 ميكرومتر. أغسل مصفاة ميكرومتر 40 مع 10 مل من برنامج تلفزيوني في دولبيكو (دببس). الطرد المركزي الخلايا في 300 x ز لمدة 10 دقائق في 4 درجات مئوية.
6. بعد الطرد المركزي، نضح المادة طافية تماما وتغسل بيليه ريسوسبيندينج في 10 مل دببس. أجهزة الطرد المركزي في 300 x ز لمدة 10 دقائق في 4 درجات مئوية.

3-عزل CD11c⁺ وحدات تحكم المجال Dc من تعليق خلية مفردة الطحال

1. ريسوسبيند بيليه الخلية في 5 مل دببس، وحساب عدد الخلايا باستخدام هيموسيتوميتير وتريبان الأزرق الاستبعاد.
2. بيليه الخلايا التي سينتريفوجينج في 300 س ز، لمدة 10 دقائق في 4 درجات مئوية.
3. نضح المادة طافية تماما وريسوسبيند بيليه في 400 ميليلتر (ماك) فرز الخلايا مغناطيسيا المخزن المؤقت.
4. إضافة 100 ميليلتر من ميكروبيدس CD11c (انظر الجدول للمواد) كل 1 × 10⁸ خلايا.
5. دوامة تعليق خلية واحتضان لمدة 10 دقائق في الثلاجة على 4 درجة مئوية.
6. أضف 10 مل من المخزن المؤقت لأجهزة ماكينتوش لغسل الخلايا. أجهزة الطرد المركزي في 300 x ز لمدة 10 دقائق في 4 درجات مئوية.
7. نضح المادة طافية تماما وريسوسبيند في 500 ميليلتر من المخزن المؤقت لأجهزة ماكينتوش.

4-الفصل المغناطيسية بين CD11c⁺ وحدات تحكم المجال Dc

ملاحظة: الفصل المغناطيسي يتم يدوياً مع فاصل مغناطيسي (انظر الجدول للمواد) تجهيزه مع "أعمدة ليرة سورية". يمكن أيضا أن يتم فصل المغناطيسية تلقائياً مع فاصل مغناطيسي الآلي. (انظر الجدول للمواد).

1. مكان العمود LS في المجال المغناطيسي لفاصل أجهزة ماكينتوش وأنبوب مخروطي 15 مل تحت كل عمود جمع في التدفق من خلال.
2. شطف العمود LS مع 3 مل من المخزن المؤقت.
3. وضع تعليق خلية على كل عمود LS وجمع-التدفق عبر تحتوي على خلايا غير مسمى.
4. أغسل العمود LS مع 3 مل من المخزن المؤقت لأجهزة ماكينتوش جمع الخلايا غير المسماة التي تمر عبر. أغسل العمود LS 2 مرات أكثر.
5. إزالة العمود LS من الفاصل المغناطيسي. إضافة 5 مل من أجهزة ماكينتوش المخزن المؤقت لكل عمود وفورا طرد الخلايا المسماة مغناطيسيا بشدة تغرق العمود LS أنبوب مخروطي نظيف 15 مل.
   ملاحظة: من المهم القيام عزل مزدوج من الخلايا CD11c للحصول على تعليق خلية درجة نقاء عالية. ولذلك، كرر الخطوات 3.1 خلال 4.5. ويشير الرقم 4 لمعايير النقاء. هذه الخطوة ويحسن نقاء CD11c⁺ الخلايا إلى 90 – 95%.
6. تحديد CD11c⁺ DC الرقم على هيموسيتوميتير استخدام الاستبعاد تريبان الأزرق. تمييع عينة خلية في إضعاف 1:1 في حل تريبان الأزرق 0.4 في المائة.
   ملاحظة: الخلايا عدم البقاء سوف الملون الأزرق، بينما تبقى خلايا قابلة للحياة أونستينيد.
   1. للقيام بذلك، بعناية ملء هيموسيتوميتير مع 10 ميليلتر لتمييع عينة الخلية واحتضان لمدة 1 دقيقة.
   2. حساب عدد الخلايا في المربعات 4 1 × 1 مم² في الدائرة التي تم تحميل إلى تحديد عدد الخلايا قادرة على البقاء.

5-في معاملة المختبر عالية الملح CD11c⁺ وحدات تحكم المجال Dc

1. تعد العاصمة الثقافة المتوسطة بإضافة 10% FBS، 0.1 مم حبيس، بيروفات صوديوم 1 مم، 50 ميكرومتر β-ميركابتوثانول والبنسلين/ستربتوميسين 1% إلى 500 مل 1640 ربمي.
2. إعداد 10 × DC خلية الملح عالية الثقافة الإعلامية (400 ملم) وزنها إلى 1.17 غرام من كلوريد الصوديوم ووضعه في أنبوب فالكون 50 مل عقيمة. إضافة 50 مل وسائط الثقافة العقيمة خلية DC (أعد في الخطوة 5، 1) للأنبوب فالكون 50 مل ودوامه حتى كلوريد الصوديوم في الحل.
3. فورا تصفية عالية الملح DC ثقافة وسائل الإعلام استخدام الترشيح الفراغ من خلال عامل تصفية 0.2 ميكرومتر في غطاء ثقافة خلية.
4. الطرد المركزي كل تعليق خلية من الطحال في 300 x ز لمدة 10 دقائق في 4ºC. ريسوسبيند بيليه كل خلية في العاصمة الثقافة الإعلام بتركيز 1 × 10⁶ خلايا/مل.
5. "الماصة؛" 900 ميكروليتر (حوالي 1 × 10⁶ خلايا) تعليق DC في قاع لوحة الصقر شقة 24-جيدا. إضافة 100 ميليلتر من ارتفاع الملح DC ثقافة وسائل الإعلام لكل بئر لتركيز صوديوم نهائية من 190 ملم. تسمية اللوحة ومكان في 37 درجة مئوية هوميفيد CO₂ حاضنة ح 48.

6-التبني نقل الملح عالية معاملة CD11c⁺ وحدات تحكم المجال Dc

1. بعد التحفيز في المختبر ح 48، إزالة اللوحة من 37 درجة مئوية هوميفيد CO₂ حاضنة.
2. "الماصة؛" خلية ثقافة وسائل الإعلام ووصولا إلى ريسوسبيند CD11c⁺ DCs. ماصة CD11c جميع⁺ DC تعليق في المقابل يسمى أنبوب 1.6 مل. كرر هذه الخطوة لكل فرد مطلي بشكل جيد.
3. الطرد المركزي كل CD11c⁺ DC تعليق في 300 x ز لمدة 10 دقائق في 4 درجات مئوية. نضح المادة طافية. ريسوسبيند بيليه DC مع 100 ميليلتر من دببس العقيمة.
4. تعليق رسم DC في محقن 1 مل مزودة بإبرة ز 27 نصف بوصة.
5. ضع السذاجة 10 أسبوع C57bl/6 الفئران الذكور تحت 2% إيسوفلوراني لتحقيق طائرة جراحية مستقرة. التحقق من مستوى التخدير مع عدم وجود دواسة العاكسة. حالما يتحقق طائرة جراحية مستقرة، ببطء وبعناية إدخال الإبرة في الفضاء المداري الرجعية بزاوية حوالي 30 °.
   ملاحظة: ينبغي أن يشير المجسم مشطوف الحواف ز 27 الإبرة إلى أسفل، بعيداً عن العين، للحيلولة دون تلف العين.
6. حقن ببطء وسلاسة CD11c⁺ DC تعليق (حوالي 1 × 10⁶ خلايا). بمجرد اكتمال الحقن، بعناية إزالة الإبرة للفضاء المداري الرجعية يجري واعية عدم الأضرار العين.
   ملاحظة: بعد الحقن، ينبغي أن يكون النزيف قليلاً أو لا. نقل التبني من CD11c⁺ وحدات تحكم المجال Dc يمكن أن يؤديها أيضا استخدام أسلوب رابعا الحقن (مثل الوريد الذيل). تلقي الفئران التحكم CD11c⁺ وحدات تحكم المجال Dc التي تم مثقف في وسائل الإعلام الملح العادي.
7. إزالة الفئران من مخروط الآنف ورصد لهم لمدة حوالي 30 دقيقة أثناء التعافي من التخدير.

7-إعداد يوم 14 جرعة منخفضة انجيوتنسين الثاني (140 نانوغرام/كغ/دقيقة)

1. إعداد المخزن المؤقت الثاني انجيوتنسين بإضافة 500 ميكروليتر من 5 م كلوريد الصوديوم و 300 ميكروليتر من حمض الخليك. كمية كافية (QS) تصل إلى 30 مل من منزوع ح₂0.
2. حل انجيوتنسين الثاني إلى 5 ملغ/مل الحل الأسهم مع المخزن المؤقت الثاني انجيوتنسين. تمييع انجيوتنسين الثاني حل الأسهم مع المخزن المؤقت الإضافي لتحقيق تركيز نهائي أن مينيبومب ناضح سيلقي انجيوتنسين الثاني في معدل 140 نانوغرام/كغ/دقيقة استناداً إلى وزن الجسم لكل الماوس.
   ملاحظة: الأساسية "انجيوتنسين الثاني" (ملغ) = (الماوس الوزن (ز) × 0.2 مغ/يوم x 14 يوما)/1,000
   أعد "انجيوتنسين الثاني" (ملغ) = (انجيوتنسين الأساسي الثاني x 260 ميليلتر)/المضخة معدل (0.25 ميكروليتر/ساعة)
   حجم المخزون الثاني انجيوتنسين (ميكروليتر) = استعداد انجيوتنسين الثاني/الأسهم التركيز (5 ملغ/مل) x 1,000
   تخفف من حجم (ميكروليتر) = 270-انجيوتنسين الثاني حجم المخزون
3. إضافة تمييع انجيوتنسين الثاني حجم المخزون (انجيوتنسين الثاني العازلة) استناداً إلى الكميات المحسوبة في الخطوة 7، 2.
4. تحت غطاء ثقافة خلية عقيمة، فتح مينيبومب ناضح.
5. إضافة الحل الثاني انجيوتنسين المخفف وطرد أي هواء من المحاقن والإبر. أدخل الإبرة التي تم توفيرها في الجزء السفلي من مينيبومب ناضح وحقن ببطء الحل الثاني انجيوتنسين أثناء تراجعه ببطء وبعناية الإبرة من المثانة.
6. إدراج رأس مينيبومب ناضح المثانة ناضح تماما، اهتماما لا للحصول على أي الهواء في المثانة.

8-غرس يوم 14 جرعة منخفضة انجيوتنسين الثاني ناضح مينيبومبس

1. عشرة أيام بعد التبني نقل CD11c⁺ DCs، مكان الفئران في دائرة إيسوفلوراني لبدء التخدير وثم نقل الفئران لمخروط الآنف باستمرار تلقي isoflurane 2% تحقيق وصيانة طائرة جراحية مناسبة.
2. إزالة الفراء على طول الجانب الظهرية من الرقبة مع لوس أنجليس كليبرز لإعداد موقع الجراحية. تنظيف منطقة حلق مع الإيثانول 70% تليها تدين 7.5 في المائة قبل بدء الجراحة.
3. إنشاء شق صغير (حوالي 1.5 سم) في الجلد. إدراج هيموستاتس في شق لخلق جيب تحت الجلد لموضع مينيبومب ناضح.
4. إدراج في مينيبومب في الجيب تحت الجلد. إغلاق الجرح بدبابيس جراحية 2-3 الجلد وتطبيق تطبيق آخر لتدين 7.5% على الجرح والمواد الغذائية الأساسية للوقاية من العدوى.
5. مراقبة الفئران لمدة 30 – 60 دقيقة أثناء الاسترداد من التخدير قبل إعادتهم إلى اقفاصها.
   ملاحظة: الفئران بحاجة إلى أن يكون رصد بعد غرس مينيبومب ناضح تصل إلى 3 – 4 أيام.

9-عزل الطحال فئران المستفيدة لتحليل تدفق سيتوميتريك

1. بعد 14 يوما تسريب الثاني انجيوتنسين جرعة منخفضة، عزل الطحال من الفئران تلقي الملح عالية في المختبر تعامل وحدات تحكم المجال Dc بنقل التبني. اتبع الخطوات المحددة المذكورة أعلاه (الخطوات 1 و 2).

10-السطحية تلطيخ

1. نقل سبلينوسيتيس التي هي حراكه في برنامج تلفزيوني x 1 البوليستيرين أنبوب نظام مراقبة الأصول الميدانية وأجهزة الطرد المركزي في 350 x ز لمدة 8 دقائق في 4 درجات مئوية. نضح المادة طافية بعد الطرد المركزي. تغسل مرتين مع 1 مل من "المخزن المؤقت لأجهزة ماكينتوش" والطرد المركزي (350 x ز, 8 دقيقة, 4 درجة مئوية).
   1. تقسيم سبلينوسيتيس نفس القدر إلى أنابيب مختلفة البوليستيرين نظام مراقبة الأصول الميدانية استناداً إلى العدد الألواح سيتوميتريك التدفق المطلوب.
2. أداء "تلطيخ بقاء الخلية" حية/ميتة، غسل الخلايا مع برنامج تلفزيوني x 1 وأجهزة الطرد المركزي (350 x ز, 8 دقيقة, 4 درجة مئوية). ريسوسبيند في 1 مل من برنامج تلفزيوني 1 x وإضافة 1 ميليلتر الخلية-الصلاحية وصمة عار (انظر الجدول المواد). احتضان لمدة 15 دقيقة في 4 درجات مئوية (الثلاجة أو على الجليد) المشمولة في إحباط لحماية من الضوء.
3. أثناء الحضانة من وصمة عار بقاء الخلية، إعداد كوكتيل أجسام مضادة لسطح الخلية تلطيخ في زيادة حجم المخزن المؤقت لأجهزة ماكينتوش مناسبة.
4. تغسل الخلايا مع 1 مل من المخزن المؤقت لأجهزة ماكينتوش، أجهزة الطرد المركزي (350 x ز، 8 دقيقة، 4 درجة مئوية)، وريسوسبيند كل خلية بيليه مع 100 ميليلتر من جسم كوكتيل. احتضان محمية من الضوء لمدة 30 دقيقة في 4 درجات مئوية.
   ملاحظة: كل جسم التدفق الخلوي فريدة من نوعها، وأنها مفيدة للغاية والموصى بها لتحديد مقدار المثلى للأجسام المضادة اللازمة عن طريق إجراء منحنى معايرة جرعة لكل جسم معين.
5. تغسل الخلايا مرتين مع 1 مل من المخزن المؤقت لأجهزة ماكينتوش وريسوسبيند سبلينوسيتيس في مبلغ مناسب لأجهزة ماكينتوش المخزن المؤقت لتحليل تدفق سيتوميتريك.

ويمثل الشكل 1 تخطيطي الخطوات الموصوفة أعلاه. يتم فرز الطحال مورين معزولة عن CD11c+ وحدات تحكم المجال Dc بالخلية المغناطيسية الفرز ومطلي في وسائل الإعلام الملح العادي (NS؛ 150 ميللي مول كلوريد الصوديوم) أو الوسائط الملح العالية (HS؛ ملمول 190 كلوريد الصوديوم) على 48 h. CD11c+ وحدات تحكم المجال Dc ثم يتم نقل أدوبتيفيلي بالرجعية-المداري حقن الفئران المستفيدة من السذاجة. بعد عشرة أيام، يتم زرعها الفئران مع مينيبومبس ناضح لجرعة منخفضة انجيوتنسين الثاني التسريب (140 نانوغرام/كغ/دقيقة) لمدة 14 يوما. أثناء ضخ 14 يوم من انجيوتنسين الثاني، بالقياس الإذاعة أو بليثيسموجرافي الذيل-الرباط تسجيل ضغط الدم.

يمثل إجراء تحليل نموذجي ضغط الدم عقب نقل التبني من وحدات تحكم المجال Dc وناضح مينيبومبس للتسريب الثاني انجيوتنسين الجرعات المنخفضة هي مزروع في الشكل 2 (معدلة من باربارو et al.9). من المذكرة، هذه الجرعات المنخفضة من انجيوتنسين الثاني (140 نانوغرام/كغ/دقيقة) هو جرعة موترة فرعية التي لا يزيد ضغط الدم في ماوس عادية. الفئران تلقي CD11c المعالجة الملح العادي+ DCs (دوائر سوداء) الحفاظ على ضغط الدم طبيعي خلال التسريب الثاني انجيوتنسين، بينما الفئران تلقي عالية الملح المعالجة CD11c+ المعرض DCs (دوائر حمراء) بزيادة في ضغط الدم الانقباضي. ويبين الشكل 2 معاملة الملح عالية CD11c+ ضغط الدم رئيس الوزراء وحدات تحكم المجال Dc استجابة لجرعة موترة فرعية من انجيوتنسين الثاني.

لتحديد نقاء CD11c معزولة+ الخلايا، أجرينا تحليل التدفق الخلوي استخدام استراتيجية النابضة الموضحة في الشكل 3ألف. وجدنا أنه مقارنة إجمالي سبلينوسيتيس، حققنا زيادة إثراء CD11c+ الخلايا (الشكل 3ب). ونحن تستخدم CD11c ميكروبيد تركيزات مختلفة لاستكشاف أخطاء بروتوكول الشركة المصنعة في الشكل 4. بعد فصل المغناطيسية سبلينوسيتيس استخدام 100 ميكروليتر (الشكل 4أ)، ينتج 200 ميكروليتر (الشكل 4ب)، أو 300 ميكروليتر (الشكل 4ج) من ميكروبيدس CD11c حوالي 65%، 55%، و 50% من CD11c+ الإيجابية الخلايا على التوالي. ثم قمنا بتضمين مانع FcR (5 ميكروليتر في الطحال) + 100 ميكروليتر من ميكروبيد CD11c، مغناطيسيا المنفصلين عن ذويهم، ووجدت أن الحصار FcR غلة حوالي 65% CD11c الخلايا إيجابية (الشكل 4د). في تجارب إضافية، نحن المحتضنة سبلينوسيتيس في 100 ميكروليتر CD11c ميكروبيدس وفصل المغناطيسية عن طريق عمود ليرة سورية. ثم المحتضنة الخلايا المنفصلة مع ميكروليتر 100 إضافية من ميكروبيدس CD11c، ويفصل مرة أخرى من خلال عمود ليرة سورية. عزل مزدوج سبلينوسيتيس أسفرت عن 92% CD11c+ الخلايا (الشكل 4ه).

الشكل 1 : شكل توضيحي لنقل التبني في المختبر تعامل CD11c + DCs. CD11c+ DCs معزولة من الطحال فئران ومطلي في أما العادي عالية أو الملح الملح وسائل الإعلام ل 24 h. CD11c+ وحدات تحكم المجال Dc ثم تنقل أدوبتيفيلي أوربيتالي الرجعية في الفئران المستفيدة من السذاجة. ويتم رصد مينيبومب ناضح غرس جرعة منخفضة انجيوتنسين الثاني هو مزروع وضغط الدم لمدة 14 يوما. وهذا الرقم تكييف من باربارو et al.) 9- الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

الشكل 2 : تأثير الملح عالية معاملة CD11c + وحدات تحكم المجال Dc في ضغط الدم الانقباضي- تم عزل الخلايا الجذعية ومثقف في الملح العادي (NS) أو الملح العالية (HS) حاء 48 وحدات تحكم المجال Dc أدوبتيفيلي نقلوا إلى البرية نوع من السذاجة الفئران. تم زرعها الثاني إنج مينيبومبس (140 نانوغرام/دقيقة) ورصد ضغط الدم بإذاعة القياس عن بعد. تقاس بالقياس عن بعد إذاعة (يعني ± ووزارة شؤون المرأة) ضغط الدم الانقباضي (SBP). وهذا الرقم مقتبس من باربارو et al.9الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

الشكل 3 : تحليل سيتوميتريك من سبلينوسيتيس مغناطيسيا المنفصلين عن تدفق. (أ) النابضة استراتيجية تحديد التحليل للسكان CD11c + DC. يتم فصل الخلايا من الحطام، ويتم تحديد الخلايا الحية استناداً إلى استبعاد وصمة خلية حية/قتيلا. تحديد خلايا القميص وثم تحليلها للايجابية CD45. ثم يتم تحليل الخلايا CD45 ل CD11c. (ب) بعد فصل المغناطيسية، هناك إثراء كبيرا CD11c + الخلايا. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

الشكل 4 : تحليل سيتوميتريك من CD11c مغناطيسيا المنفصلين عن تدفق+ سبلينوسيتيس بعد عزل مختلف البروتوكولات. تم فصل الخلايا من الحطام والخلايا الحية. وجرى تحليل الخلايا الحية-آب والإيجابية CD11c. (أ) في المائة من CD11c+ الخلايا بعد فصل المغناطيسية التي كانت معزولة مع 100 ميكروليتر، (ب) 200 ميليلتر، (ج) 300 ميكروليتر من ميكروبيدس CD11c. (د) في المائة من CD11c+ الخلايا بعد فصل المغناطيسية التي كانت معزولة مع الحصار FcR (FcR المضادة؛ 5 ميكروليتر) + 100 ميكروليتر CD11c ميكروبيدس. (ﻫ) في المائة من CD11c+ الخلايا بعد فصل المغناطيسية التي كانت معزولة مع فرز الخلية المغناطيسية مزدوجة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.