هنا، نقوم بإظهار الرنين المغناطيسي (MR) الموجهة الحمل الحراري تعزيز التسليم (CED) من النواقل الفيروسية في القشرة كنهج فعال ومبسط لتحقيق التعبير البصري الجيني عبر المناطق القشرية الكبيرة في الدماغ macaque.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الحمل الحراري تعزيز التسليم من ناقلات الفيروسية المرتبطة الغدينو البصريات إلى قشرة ريسوس Macaque تحت توجيه الصور بالرنين المغناطيسي على الانترنت
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
في الجينات البصرية غير البشرية (NHP)، غالباً ما تكون إصابة المناطق القشرية الكبيرة بالنواقل الفيروسية مهمة صعبة وتستغرق وقتاً طويلاً. هنا، نبرهن على استخدام الرنين المغناطيسي (MR) الموجهة الحمل الحراري تعزيز التسليم (CED) من ناقلات الفيروسية البصرية في الحسية الجسدية الأولية (S1) والمحرك (M1) القشرية من المكاك للحصول على كفاءة، والتعبير القشرية على نطاق واسع من قنوات أيون حساسة للضوء. تم حقن ناقلات الفيروسية المرتبطة بالغدينو (AAV) التي ترمز إلى أوبسين C1V1 المنصهر ة إلى بروتين فلوري أصفر (EYFP) في قشرة المكاك ريسوس تحت CED الموجهة بالرنين المغناطيسي. بعد ثلاثة أشهر من التسريب، أكد التصوير الفلورسنت مناطق كبيرة منالتعبير البصري (> 130 مم 2) في M1 و S1 في اثنين من المكاك. وعلاوة على ذلك، تمكنا من تسجيل استجابات موثوقة للفيزيولوجيا الكهربائية التي تثير الضوء من المناطق التي تعبر عن ذلك باستخدام صفائف الكورتيكوستيصور ية الدقيقة. في وقت لاحق التحليل النسيجي وتلطيخ المناعة ضد مراسل كشفت عن التعبير البصريات واسعة النطاق وكثيفة في M1 و S1 المقابلة للتوزيع المشار إليه من قبل التصوير الفلورسنت. هذه التقنية تمكننا من الحصول على التعبير عبر مناطق واسعة من القشرة في غضون فترة أقصر من الزمن مع الحد الأدنى من الضرر مقارنة مع التقنيات التقليدية ويمكن أن يكون النهج الأمثل للتسليم الفيروسي البصري في الحيوانات الكبيرة مثل NHPs. هذا النهج يدل على إمكانات كبيرة للتلاعب على مستوى الشبكة من الدوائر العصبية مع خصوصية من نوع الخلية في النماذج الحيوانية التطورية القريبة من البشر.
المقدمة
علم الوراثة البصرية هو أداة قوية تسمح بالتلاعب في النشاط العصبي ودراسة اتصالات الشبكة في الدماغ. تنفيذ هذه التقنية في الرئيسيات غير البشرية (NHPs) لديه القدرة على تعزيز فهمنا للحساب العصبي على نطاق واسع, الإدراك, والسلوك في الدماغ الرئيسيات. على الرغم من أن علم الوراثة البصرية قد نفذت بنجاح في NHPs في السنوات الأخيرة1،2،3،4،5،6،7،وهو التحدي الذي يواجه الباحثون تحقيق مستويات عالية من التعبير عبر مناطق الدماغ الكبيرة في هذه الحيوانات. هنا، نحن نقدم نهج فعال ومبسط لتحقيق مستويات عالية من التعبير البصري في جميع أنحاء مناطق واسعة من القشرة في المكاك. هذه التقنية لديها إمكانات كبيرة لتحسين الدراسات البصريات الحالية في هذه الحيوانات في تركيبة مع الدولة من بين الفن تسجيل8و9 والتحفيز البصري10 التكنولوجيات.
الحمل الحراري تعزيز التسليم (CED) هو وسيلة راسخة لتسليم العوامل الدوائية وغيرها من الجزيئات الكبيرة، بما في ذلك ناقلات الفيروسية، إلى الجهاز العصبي المركزي11،12،13. في حين أن طرق التسليم التقليدية تنطوي على ضخ اتّصال منخفض الحجم متعدد موزع ة عبر مناطق صغيرة من الدماغ، يمكن أن يحقق CED توزيعًا أوسع وأكثر تكافؤًا للعوامل مع عدد أقل من التسريبات. تدفق السوائل السائبة الناجمة عن الضغط (الحمل الحراري) أثناء التسريب يسمح بنقل الأنسجة المستهدفة على نطاق أوسع وبشكل موحد عند تقديم ناقلات الفيروسية مع CED. في الدراسات الحديثة، أظهرنا الانتراب واللاحقة التعبير الجيني لمساحات كبيرة من المحرك الأولي (M1) والحسية الجسدية (S1) القشرية9 والمهاد14 باستخدام الرنين المغناطيسي (MR) الموجهة CED.
هنا، نحن الخطوط العريضة لاستخدام CED لتحقيق التعبير البصري الوراثي عبر المناطق القشرية الكبيرة مع عدد قليل فقط من الحقن القشرية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وقد وافقت جامعة كاليفورنيا، لجنة الرعاية والاستخدام المؤسسية للحيوانية في سان فرانسيسكو، على جميع الإجراءات، وهي متوافقة مع دليل رعاية واستخدام الحيوانات المختبرية. تم تنفيذ الإجراء التالي باستخدام اثنين من الذكور البالغين rhesus macaques من 8 و 7 سنوات من العمر، وزنها 17.5 كجم و 16.5 كجم (القرد G والقرد J)، على التوالي.
ملاحظة: استخدم تقنيات العقيم القياسية لجميع العمليات الجراحية.
1. التصوير الأساسي
- تخدير وتنبيب الحيوان والحفاظ على التخدير العام تحت isoflurane (تركيز تغير بين 0 إلى 5٪ حسب الحاجة، اعتمادا على العلامات الحيوية مثل معدل التنفس ومعدل ضربات القلب). مراقبة درجة حرارة الحيوان، ومعدل ضربات القلب، وتشبع الأكسجين، والاستجابات القلبية، والضغط الجزئي نهاية المد والجزر من ثاني أكسيد الكربون2 طوال الإجراء.
- ضع الحيوان في إطار مجسم متوافق مع MR (راجع جدولالمواد) حيث سيبقى طوال الإجراء. قم بتوصيل الحيوان بآلة isoflurane محمولة متوافقة مع MR ونقلها إلى الماسح الضوئي بالرنين المغناطيسي (3 T).
- الحصول على معيار T1 (زاوية الوجه = 9 درجة، وقت التكرار / صدى = 668.6، حجم المصفوفة = 192 × 192 × 80، سمك شريحة = 1 ملم) و T2 (زاوية الوجه = 130 درجة، تكرار الوقت / صدى الوقت = 52.5، حجم المصفوفة = 256 × 256 × 45، سمك شريحة = 1 ملم) صور MR التشريحية كخط الأساس المرجعية والتخطيط الجراحي.
- استعادة الحيوان من التخدير ونقله إلى منطقة إسكان الحيوانات.
- استخدم الصور التي تم الحصول عليها T1 وT2 لتحديد موضع استئصال الجمجمة. يمكن تحديد موقع استئصال الجمجمة بدقة عن طريق مطابقة المنطقة القشرية ذات الاهتمام من MR مع أطلس الدماغ macaque (Paxinos، هوانغ، Petride، Toga 2الطبعة الثانية). وبالإضافة إلى ذلك، يمكن أن توفر هذه الصور الأساسية تقديرا لمواقع التسريب الفيروسي. المناطق القشرية من الاهتمام أظهرت هنا هي M1 و S1.
2. زرع غرفة متوافقة مع MR
- تخدير وتنبيب الحيوان والحفاظ على التخدير العام مع مراقبة التخدير القياسية كما هو الحال في 1.1.
- ضع الحيوان في الإطار المجسم المتوافق مع MR حيث سيبقى في جميع أنحاء زرع الغرفة وتسليم ناقلات الفيروسية. قم بتوصيل الحيوان بآلة isoflurane متوافقة مع MR المحمولة.
- إنشاء شق المترهل حوالي 2 سم من خط الوسط مع طول حوالي 5 سم مع مشرط.
- إزالة الأنسجة الرخوة الكامنة من الجمجمة باستخدام المصاعد (انظر جدولالمواد).
- إنشاء استئصال الجمجمة الدائري (قطر2.5 سم) لتغطية المسارات المخططة مسبقا للحقن باستخدام تريفين (انظر جدولالمواد).
- خفض نقطة توسيط من trephine الماضي حافة trephine. إنشاء المسافة البادئة في مركز استئصال الجمجمة المخطط لها في عمق ما يكفي في الجمجمة لرسو التريبين باستخدام نقطة توسيط قابل للتعديل من التريبين. توخي الحذر لتجنب اختراق تماما من خلال عمق الجمجمة لأن هذا يمكن أن يسبب ضررا للأنسجة العصبية الكامنة.
- غسل المنطقة بشكل دوري مع المالحة حسب الحاجة للحفاظ على رطوبة الأنسجة في جميع أنحاء استئصال الجمجمة.
- مرة واحدة وقد تم إجراء المركز، وانخفاض trephine على الجمجمة وتدوير trephine في اتجاه عقارب الساعة وعكس اتجاه عقارب الساعة في حين تطبيق الضغط التنازلي حتى يمكن إزالة غطاء العظام مع ملقط. توخي الحذر لتجنب إتلاف الأنسجة الكامنة مع التريبين.
- خيط خياطة غرامة (حجم 6-0) من خلال دورا في وسط استئصال الجمجمة ورفع دورا عن طريق سحب بلطف خياطة من سطح الدماغ خلق خيمة في وسط استئصال الجمجمة.
- بعد ذلك، ثقب دورا على مقربة من وسط الخيمة باستخدام مقص العين غرامة لتجنب الإضرار الدماغ. ثم قطع دورا من المركز إلى حافة استئصال الجمجمة ومواصلة على طول الحافة مع مقص أوبحلميك غرامة.
- قم بتركيب الغرفة الأسطوانية المتوافقة مع التصويربالرنين المغناطيسي (الشكل 1؛ انظر القسم 4 للاطلاع على تعليمات الإنتاج) إلى الجمجمة أعلى استئصال الجمجمة لتوفير دعم قنية أثناء ضخ CED بحيث محاذاة انحناء شفة الغرفة بشكل جيد مع انحناء الجمجمة.
- تأمين يزرع إلى الجمجمة باستخدام إما مسامير بلاستيكية والاكريليك الأسنان أو عدد قليل من مسامير التيتانيوم.
3. تسليم ناقلات الفيروسية
- بعد وقت قصير من زرع غرفة متوافقة مع MR وإدراج شبكة حقن قنية (الشكل1A-B، الشكل التكميلي1) في الغرفة، وملء الشبكة مع المالحة (0.9٪ NaCl) لتصور مواقع الحقن عن طريق الصور التشريحية MR و ملء تجاويف الغرفة مع الجيلاتين المعقمة الرطبة القابلة للامتصاص للحفاظ على رطوبة الدماغ (الشكل1F).
- تغطية الجلد والاسطوانة مع الستائر المضادة للميكروبات معقمة قطع للحفاظ على عقم الاسطوانات أثناء النقل وضخ MR. ضع كبسولة فيتامين E لوضع علامة على الجزء العلوي من شبكة الحقن لتحديد إيجابي.
- في حين أن الحيوان لا يزال منبّا، فصل أنبوب الرغامى من دائرة التخدير وإعادة إرفاقه إلى آلة isoflurane متوافقة مع MR المحمولة ونقل الحيوان إلى الماسح الضوئي التصوير بالرنين المغناطيسي.
- الحصول على صور T1 (زاوية الوجه = 9 درجة، وقت التكرار / صدى = 668.6، حجم المصفوفة = 192 × 192، سمك شريحة = 1 ملم، 80 شرائح) لحساب المسافة من الجزء العلوي من شبكة الحقن والسطح القشري. كبسولة فيتامين E مرئية بوضوح في الصور T1 وينبغي أن تستخدم كعلامة لأعلى شبكة الحقن (الشكل2A). استخدم أداة مسطرة برنامج التصوير بالرنين المغناطيسي لقياس المسافة بين الجزء العلوي من شبكة الحقن والسطح القشري.
- الحصول على صور T2 (زاوية الوجه = 130 درجة، وقت التكرار / صدى = 52.5، حجم المصفوفة = 256 × 256، سمك شريحة = 1 ملم، 45 شرائح) لتحديد أدلة قنية الأمثل لكل موقع على أساس الموقع المستهدف للتسريب (الشكل2B-C). كما ذكر سابقا، يتم تعبئة شبكة قنية مع المالحة التي هي أفضل مرئية في الصور T2. باستخدام برنامج التصوير بالرنين المغناطيسي، انتقل من خلال الطائرات الإكليلية والمترهلة للعثور على الموقع المستهدف للتسريب.
- بعد إذابة ناقلات الفيروسية لبضع ساعات في درجة حرارة الغرفة، مزيج ناقلات الفيروسية مع عامل التباين MR gadoteridol (نسبة 250:1؛ 2MM Gd-DTPA، انظر جدولالمواد) عن طريق ماصة أو دوامة خلط.
ملاحظة: تم اختبار التقنية المقدمة لناقلات AAV مع تعبير كامكيا المروج القيادة من C1V1 تنصهر إلى EYFP (AAV2.5-CamKII-C1V1-EYFP، titer: 2.5 × 1012 جزيئات الفيروس / مل؛ انظر جدول المواد). - تحميل الفيروس مختلطة في أنابيب الضغط العالي 0.2 مل IV (انظر جدول المواد).
- إنشاء حقل معقم خارج الماسح الضوئي MR لإعداد خط التسريب الفيروسي.
- باستخدام أنابيب الضغط العالي IV، قم بتوصيل خط تمديد طويل (حوالي 3-5 أمتار، اعتمادا على موقع مضخة التسريب فيما يتعلق بتتحمل MR) إلى حقنة 3 مل متوافقة مع MR وبرايم مع المالحة.
- ربط الطرف القاصي من خط التمديد الطويل إلى نهاية القريبة من أنابيب 4 0.2 مل محملة بالفيروس وإرفاق قنية مقاومة للارتجاع مع طرف 1 ملم صعدت (الشكل2D؛ انظر القسم 5 لتعليمات إنتاج قنية) إلى نهاية القاصي من هذا التجمع مع موصل القسطرة نمط المشبك (انظر جدولالمواد) (الشكل2E).
- وأخيرا، تعيين الحقنة في مضخة متوافقة مع MR (انظر جدولالمواد). ضع وحدة تحكم المضخة في غرفة التحكم في الماسح ة لأنها غير متوافقة مع MR.
- باستخدام خط الأساس التصوير بالرنين المغناطيسي التشريحي التي تم الحصول عليها من قبل، حدد موقع شبكة حقن القنية وعمق الإدراج اللازم للوصول إلى موقع التسريب المستهدف. وضع علامة على عمق الإدراج على قنية باستخدام شريط معقم.
- بدء التسريب بمعدل 1 ميكرولتر / دقيقة والتحقق بصريا من تدفق السائل في خط التسريب عن طريق مراقبة طرد السائل من طرف قنية.
- إدراج قنية يدويا من خلال شبكة الحقن إلى عمق الهدف مع الحفاظ على تدفق في خط التسريب، وهذا سوف يمنع الأنسجة توغلت من انسداد قنية أثناء الإدراج.
- الحصول على سريع (2 دقيقة) فلاش T1 الصور المرجحة (زاوية الوجه = 30 درجة، تكرار الوقت / صدى = 3.05، حجم المصفوفة = 128 × 128، سمك شريحة = 1 ملم، 64 شرائح) لرصد عبر الإنترنت من ضخ ناقلات الفيروسية.
- بعد غرس ~ 10 درجة مئوية من ناقلات بحيث يتم غرس ما يكفي من الفيروس للكشف في الماسح الضوئي MR، والحصول على صور MR للتحقق من وضع قنية الصحيح كما يتضح من انتشار الفيروس لوحظ. إذا كان عمق قنية إدراج غير صحيح، ضبط العمق وفقا لذلك أو ببطء إزالة قنية وإعادة محاولة الإدراج كما في 3.12.
- رصد التسريب عن طريق توجيه الصور MR على الانترنت (فلاش T1 المرجحة) وزيادة معدل التسريب إلى 5 ميكرولتر / دقيقة من 1 درجة مئوية / دقيقة الخطوات كل بضع دقائق (الشكل3A).
- بعد غرس ما يقرب من 40 درجة مئوية من ناقلات الفيروسية، والبدء في خفض معدل التسريب من قبل 1 درجة مئوية / دقيقة الخطوات ووقف التسريب بعد حقن ~ 50 درجة مئوية وترك قنية في مكان لمدة 10 دقائق.
- إزالة ببطء قنية من الدماغ والانتقال إلى الموقع التالي. كرر الخطوات من 3.9 إلى 3.19 لكل موقع.
- تغطية الاسطوانة مع الستائر المعقمة في نهاية الحقن، قبل نقل الحيوانات. ثم نقل الحيوان مرة أخرى إلى غرفة العمليات.
- إما استبدال الغرفة المتوافقة مع MR وإغلاق الشق الجراحي عن طريق استبدال رفرف العظام والعضلات فوق وخياطة الجلد باستخدام تقنيات العقيم القياسية أو استبدال الغرفة مع اسطوانة التيتانيوم ودورا الاصطناعية (انظر يزدان شاهمراد وآخرون 20169) للتسجيل العصبي والتحفيز.
4. MR- متوافق مع غرفة الإنتاج
- تصنيع شبكة حقن قنية النايلون (الشكل1A-B)عن طريق الآلات وفقا للأبعاد المحددة (الشكلالتكميلي1).
- 3D طباعة اسطوانة متوافقة مع MR من أكريلونيتريل بيوتادين الستايرين (ABS0 البلاستيك (الشكل1C-E)(انظر الملف التكميلي 1-3؛ انظر جدول المواد للطابعة والمواد 3D).
ملاحظة: تصميم واحد يحافظ على شبكة حقن قنية ثابتة داخل اسطوانة متوافقة مع MR (الشكل1C)،في حين يسمح آخر لتناوب الشبكة، وتوسيع منطقة الحقن (الشكل1D-E). - مؤشر ترابط شبكة حقن قنية والاستفادة من تجويف المقابلة للغرفة متوافقة مع MR بحيث تظهر كل من القطع نفس الخيوط.
ملاحظة: يمكن استخدام أي نوع من مؤشرات الترابط بشرط أن يكون كلا المكونين نفس مؤشر الترابط. - إدراج شبكة حقن قنية النايلون عن طريق الشد في حفرة استغلالها من اسطوانة متوافقة مع MR.
5- إنتاج قنية مقاومة للارتجاع13
- قطع أنابيب السيليكا بطول 30 سم مع معرف 0.32 مم و 0.43 مم OD لأنابيب السيليكا الداخلية (انظر جدولالمواد) باستخدام شفرة الحلاقة.
- قطع أنابيب السيليكا بطول 7.5 سم و5 سم طويلة مع معرف 0.45 مم و0.76 مم OD لأنابيب السيليكا الخارجية (انظر جدولالمواد).
- التمسك الأنابيب الخارجية 7.5 سم إلى الأنابيب الداخلية 30 سم مع cyanoacrylate بحيث يمتد الأنبوب الداخلي 1 ملم وراء الأنبوب الخارجي، مما يجعل خطوة مقاومة للارتجاع (الشكل2D). للتأكد من أن cyanoacrylate لا يدخل داخل الأنابيب الداخلية، ضع السيانوكريلات على الجزء الخارجي من الأنابيب الداخلية بعيدا عن طرف قنية.
- قم بلصق أنابيب السيليكا التي يبلغ طولها 5 سم إلى الطرف الآخر من الأنابيب الداخلية للإرفاق بموصل القسطرة على غرار المشبك (انظر الخطوة 3.10).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
التسليم المعزز للتصوير الحراري (CED) تحت إرشادات التصوير بالرنين المغناطيسي
تم رصد انتشار ناقلات الفيروسية خلال ضخ CED تحت إشراف صور MR على الانترنت (الشكل3A). في هذه الدراسة، تم استهداف S1 و M1 من اثنين من الالقردة (الشكل3B). تم تقدير أحجام التوزيع ثلاثية الأبعاد في تحليل ما بعد مخصص للصور MR (الشكل3C)كما وصفها يزدان شاهمر...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هنا، نحدد تقنية مجدية وفعالة لتحقيق التعبير البصري على نطاق واسع في القشرة الحسية الجسدية والحركية الأولية NHP من قبل التصوير بالرنين المغناطيسي الموجه. استخدام الرنين المغناطيسي الموجه MR يقدم مزايا كبيرة على الأساليب التقليدية للتسريب الفيروسي في الدماغ NHP. وتتمثل إحدى هذه المزايا في القدرة على التعبير عن العبرة في مناطق واسعة مع عدد أقل من التسريبات المطلوبة. على سبيل المثال، مع الأساليب التقليدية، حقن متعددة من 1-2 ميكرولتر منالتعبير العائد ناقلات في منطقة قطرها 2-3 ملم 1،
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
PNS لديها مصلحة مالية في Neuroink كورب، وهي الشركة التي تقوم بتطوير العلاجات السريرية باستخدام تحفيز الدماغ.
شكر وتقدير
وقد تم دعم هذا العمل من قبل جمعية القلب الأمريكية زمالة ما بعد الدكتوراه (AY)، وكالة مشاريع البحوث المتقدمة الدفاع (DARPA) إعادة التنظيم واللدونة لتسريع الانتعاش الإصابة (REPAIR; N66001-10-C-2010)، R01. NS073940، ومن قبل مركز التصوير في علم الأعصاب UCSF. كما تم دعم هذا العمل من قبل معهد يونيس كينيدي شيفير الوطني لصحة الطفل والتنمية البشرية التابع للمعاهد الوطنية للصحة تحت جائزة رقم K12HD073945، ومركز واشنطن الوطني لبحوث الرئيسيات (WaNPCR، P51 OD010425)، و مركز تكنولوجيا الأعصاب (CNT، وهو مركز البحوث الهندسية للمؤسسة الوطنية للعلوم تحت منحة EEC-1028725). نشكر كاميلو دياز بوتيا، تيم هانسون، فيكتور خرازيا، دانيال سيلفرسميث، كارين ج. ماكلويد، جوليانا ميلاني، وبليكلي أندروز على مساعدتهم في التجارب ونان تيان، جيوي هي، بيتر ليدوكوبيتش، ميشيل ماهاربيز، وتوني هاون على المساعدة التقنية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 0.2 مل ارتفاع ضغط IV أنابيب | سميث الطبية Inc. ، دبلن ، أوهايو ، الولايات المتحدة الأمريكية | 533640 | |
| 0.32 مم معرف ، 0.43 مم OD أنابيب السيليكا | Polymicro Technologies | 1068150027 | |
| 0.45 مم معرف ، 0.76 مم OD أنابيب السيليكا | Polymicro Technologies | 1068150625 | |
| AAV2.5-CamKII-C1V1-EYFP | Penn Vector Core ، جامعة بنسلفانيا | ||
| ABS بلاستيك | ستراتاسيس ، مينيسوتا ، الولايات المتحدة الأمريكية | ABSplus-P430 | |
| شق مضادة للميكروبات | 3M | 6650EZ | Ioban |
| Drape Dental Acrylic | Henry Schein، Inc. | 1013117 | ربط الأكريليك |
| مصاعد | VWR International، LLC. | 10196-564 | مصعد Langenbeck ، |
| خياطة رفيعة | عريض McKesson Medical Surgical Inc. | 1034505 | |
| Gadoteridol | Prohance ، Bracco Diagnostics ، برينستون ، نيوجيرسي | 0270-1111-04 | |
| ليزر لتحفيز الضوء | Omicron-Laserage ، ألمانيا | PhoxX 488-60 | |
| MR متوافق مع 3 سم مكعب حقنة | هارفارد ، هوليستون ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية | 59-8377 | |
| MR Imaging | Pixmeo | OsiriX MD 10.0 | |
| MR متوافق مع مضخة | هارفارد ، هوليستون ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية | هارفارد دكتوراه 2000 | |
| متوافق مع MR إطار تجسيمي | KOPF | 1430M التصوير | |
| Perifix Clamp نمط القسطرة موصل | B-Braun ، بيت لحم ، بنسلفانيا ، الولايات المتحدة الأمريكية | N / A | |
| مسامير بلاستيكية | 1 | 0-80 × 1 / 8N | مسامير نايلون |
| مسامير التيتانيوم كريست | إنسترومنت كو.، إنك. | 6-YCX-0312 | مسامير العظام ذاتية التنصت |
| Trephine | GerMedUSA Inc ، | SKU: GV70-42 | |
| uPrinter SE طابعة ثلاثية الأبعاد | Stratasys ، MN ، الولايات المتحدة الأمريكية | N / A | |
| فيتامين E كبسولة | تغليف نقي ، ذ م م. | DE1 | |
| الجيلاتين الرطب المعقم القابل للامتصاص | شركة Pfizer Inc. | AZL0009034201 | جلفوم |
المراجع
- Ruiz, O., et al. Optogenetics through windows on the brain in the nonhuman primate. Journal of Neurophysiology. 110 (6), 1455-1467 (2013).
- Diester, I., et al. An optogenetic toolbox designed for primates. Nature Neuroscience. 14 (3), 387-397 (2011).
- Ohayon, S., Grimaldi, P., Schweers, N., Tsao, D. Y. Saccade modulation by optical and electrical stimulation in the macaque frontal eye field. Journal of Neuroscience. 33 (42), 16684-16697 (2013).
- Gerits, A., et al. Optogenetically induced behavioral and functional network changes in primates. Current Biology. 22 (18), 1722-1726 (2012).
- Jazayeri, M., Lindbloom-Brown, Z., Horwitz, G. D. Saccadic eye movements evoked by optogenetic activation of primate V1. Nature Neuroscience. 15 (10), 1368-1370 (2012).
- Dai, J., Brooks, D. I., Sheinberg, D. L. Optogenetic and electrical microstimulation systematically bias visuospatial choice in primates. Current Biology. 24 (1), 63-69 (2014).
- Afraz, A., Boyden, E. S., DiCarlo, J. J. Optogenetic and pharmacological suppression of spatial clusters of face neurons reveal their causal role in face gender discrimination. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (21), 6730-6735 (2015).
- Ledochowitsch, P., et al. Strategies for optical control and simultaneous electrical readout of extended cortical circuits. Journal of Neuroscience Methods. 256, 220-231 (2015).
- Yazdan-Shahmorad, A., et al. A Large-Scale Interface for Optogenetic Stimulation and Recording in Nonhuman Primates. Neuron. 89 (5), 927-939 (2016).
- Ju, N., Jiang, R., Macknik, S. L., Martinez-Conde, S., Tang, S. Long-term all-optical interrogation of cortical neurons in awake-behaving nonhuman primates. PLoS Biology. 16 (8), e2005839(2018).
- Bankiewicz, K. S., et al. Convection-enhanced delivery of AAV vector in parkinsonian monkeys; in vivo detection of gene expression and restoration of dopaminergic function using pro-drug approach. Experimental Neurology. 164 (1), 2-14 (2000).
- Kells, A. P., et al. Efficient gene therapy-based method for the delivery of therapeutics to primate cortex. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (7), 2407-2411 (2009).
- Krauze, M. T., et al. Reflux-free cannula for convection-enhanced high-speed delivery of therapeutic agents. Journal of Neurosurgery. 103 (5), 923-929 (2005).
- Yazdan-Shahmorad, A., et al. Widespread optogenetic expression in macaque cortex obtained with MR-guided, convection enhanced delivery (CED) of AAV vector to the thalamus. Journal of Neuroscience Methods. 293, 347-358 (2018).
- Yazdan-Shahmorad, A., Silversmith, D. B., Kharazia, V., Sabes, P. N. Targeted cortical reorganization using optogenetics in non-human primates. Elife. 7, (2018).
- Yazdan-Shahmorad, A., et al. Demonstration of a setup for chronic optogenetic stimulation and recording across cortical areas in non-human primates. SPIE BiOS. , (2015).
- Lerchner, W., Corgiat, B., Der Minassian, V., Saunders, R. C., Richmond, B. J. Injection parameters and virus dependent choice of promoters to improve neuron targeting in the nonhuman primate brain. Gene Therapy. 21 (3), 233-241 (2014).
- Acker, L., Pino, E. N., Boyden, E. S., Desimone, R. FEF inactivation with improved optogenetic methods. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (46), E7297-E7306 (2016).
- Bobo, R. H., et al. Convection-enhanced delivery of macromolecules in the brain. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (6), 2076-2080 (1994).
- Lieberman, D. M., Laske, D. W., Morrison, P. F., Bankiewicz, K. S., Oldfield, E. H. Convection-enhanced distribution of large molecules in gray matter during interstitial drug infusion. Journal of Neurosurgery. 82 (6), 1021-1029 (1995).
- Lonser, R. R., Gogate, N., Morrison, P. F., Wood, J. D., Oldfield, E. H. Direct convective delivery of macromolecules to the spinal cord. Journal of Neurosurgery. 89 (4), 616-622 (1998).
- Szerlip, N. J., et al. Real-time imaging of convection-enhanced delivery of viruses and virus-sized particles. Journal of Neurosurgery. 107 (3), 560-567 (2007).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
