Method Article

طريقة إعداد عينة من المسح الضوئي وانتقال المجهر الإلكتروني لزوائد خنفساء الخشب

DOI:

10.3791/59251

⸱

February 3rd, 2020

 ,  ,  ,  , 
1The Key Laboratory for Silviculture and Conservation of the Ministry of Education, School of Forestry, Beijing Forestry University, 2School of Forestry, Inner Mongolia Agricultural University, 3Institute of Medicinal Plant Development, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, 4School of Forestry, Fujian Agriculture and Forestry University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

من أجل مراقبة البنية الفائقة للsensilla الحشرات ، تم عرض المسح الضوئي والمجهر الإلكتروني للإرسال (SEM و TEM ، على التوالي) بروتوكول إعداد العينة في الدراسة. تمت إضافة Tween 20 إلى المثبت لتجنب تشوه العينة في SEM. كان المجهر الفلوري مفيدًا لتحسين دقة التقطيع في TEM.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وصف هذا التقرير طرق إعداد العينة التي تقوم بمسح وانتقال ملاحظات المجهر الإلكتروني ، التي تجلت من خلال إعداد الزوائد من الخنفساء الخشبية ، Chlorophorus caragana Xie & Wang (2012) ، لكلا النوعين من المجهر الإلكتروني. واستند بروتوكول إعداد عينة المجهر الإلكتروني المسح (SEM) على تثبيت عينة الكيميائية، والجفاف في سلسلة من حمامات الإيثانول، والتجفيف، وطلاء البولتر. بإضافة Tween 20 (Polyoxyethylene sorbitan laurate) إلى محلول الغسيل والمثبت ، تم غسل سطح جسم الحشرات من خنفساء الخشب بشكل أكثر نظافة في SEM. هذه الدراسة المجهرية الإلكترونية انتقال (TEM) إعداد عينة شملت سلسلة من الخطوات بما في ذلك التثبيت، وجفاف الإيثانول، والتضمين في الراتنج، وتحديد المواقع باستخدام المجهر الفلوري، والقسمة، وتلطيخ. Fixative مع Tween 20 تمكين اختراق جدار جسم الحشرات من خنفساء الخشب أكثر سهولة مما كان عليه من دون Tween 20 ، وبالتالي أفضل الأنسجة الثابتة والأعضاء في الجسم ، وبالتالي أسفرت عن ملاحظات المجهر الإلكتروني انتقال واضح من الهياكل الفائقة sensilla الحشرات. وكانت الخطوة التالية من هذا الإعداد تحديد مواقف sensilla الحشرات في العينة جزءا لا يتجزأ من كتلة الراتنج باستخدام المجهر الفلوري لزيادة دقة تحديد المواقع sensilla الهدف. هذا تحسين دقة تشريح.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المسح المجهري الإلكترون هو أداة هامة في العديد من الدراسات مورفولوجيا، أن SEM يظهر هياكل السطح1،2. نداء المجهر الإلكتروني ناقل الحركة هو أنه يمكن استخدامه لدراسة مجموعة واسعة من الهياكل البيولوجية على مقياس نانومتر، من الهندسة المعمارية للخلايا والبنية الفائقة للorganelles، إلى بنية المجمعات الجزيئية الكلية والبروتينات. TEM يظهر الهياكل الداخلية3،4،5.

Coleoptera هي أكبر مجموعة من الحشرات ، بما في ذلك حوالي 182 أسرة و 350،000 نوع. معظم الحشرات الكولوبثران ، ولا سيما الخنفساء الخشبية ، تتغذى ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تنبيه: راجع أوراق بيانات سلامة المواد الخاصة بالكواشف قبل استخدامها. العديد من المواد الكيميائية المستخدمة أثناء إعداد العينة سامة، مطفرة، مسرطنة، و / أو سامة. استخدام معدات الحماية الشخصية (القفازات، معطف المختبر، والسراويل كامل الطول، والأحذية مغلقة إصبع القدم) والعمل تحت غطاء الدخان أثناء التعامل مع العينة.

1. SEM إعداد عينة والتصوير

  1. عينة التثبيت والتنظيف
    1. العمل في منطقة حيث C. كاراغانا تحدث، وجذب البالغين إلى الفخاخ الحقل الطعم مع النباتات الجاذبة، مثل الإيسوفورون16. الحفاظ على الهيئات النظيفة من الكبار C. كاراغانا في 0.1 موللتر -1 الفوسفات العازلة المالحة (PBS, درجة ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

باستخدام التنظيف والحل المثبت مع Tween 20 ، لوحظت صورة SEM أنظف من ذلك بدون Tween 20(الشكل 3). Tween 20 حل تحديد اخترقت حل تحديد glutaraldehyde في الأنسجة. وشوهد هيكل Microtubule بوضوح. صورة TEM للهيكل الداخلي للعينة كانت غير واضحة دون Tween 20(الشكل 4).

figure-results-1
الشكل 3: sensilla تحديد .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في هذه المقالة ، قدمنا مخطط إعداد عينة للمسح الضوئي والمجهر الإلكتروني لنقل هينخة مملة الخشب. باستخدام ملحق الحشرات كموضوع دراسة تمثيلي ، أظهرنا العديد من التحسينات على طرق إعداد العينة التقليدية.

يتم استحلاب الزيت السائل المنفصل عن السطح الصلب إلى قطرات صغيرة ، والتي يمكن تفريقها وتعليقها بشكل جيد في وسط الغسيل لتقليل إعادة الإيداع على سطح الجسم. يشمل أداء غسيل السطحي جميع الخصائص الأساسية مثل التبلل ، والنفاذية ، والممتلكات المستحلبة ، والتشتت ، والذوبان11،.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدينا تضارب في المصالح للكشف عنه.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ونحن نقدر المساعدة السخية التي قدمتها كلية بيجين المهنية للزراعة، ومعهد تطبيق الطاقة الذرية (الأكاديمية الصينية للعلوم الزراعية)، ومركز البحوث البيولوجية التابع لجامعة بيجين للغابات، والبروفيسور شان - غان تشانغ من معهد علم الحيوان، الأكاديمية الصينية للعلوم. تم دعم هذا البحث من قبل البرنامج الوطني للبحث والتطوير الرئيسي في الصين (2017YFD0600103)، والمؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (المنحة رقم 31570643، 81774015)، البحث العلمي للغابات في الرفاه العام في الصين (201504304)، منغوليا الداخلية الجامعة الزراعية عالية المستوى خطة بدء تشغيل البحوث المواهب (203206038)، ومنطقة منغوليا الداخلية ذاتية الحكم مشروع بحوث التعليم العالي (NJZZ18047)، منطقة منغوليا الداخلية ذاتية....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
العدسة التشريحيةتشونغتشينغ للسيارات البصرية
شركة ذات مسؤولية		محدودة 1425277
شريط لاصق الكربونSPI Supplies ، قسم مجسات الهيكل ، Inc.7311
رابع كلوريد الكربونسيجما56-23-5
شبكات نحاسيةGilderGridsG300
فوسفات الهيدروجين ثنائي الصوديومكاشف كيميائي لمجموعة Sinopharm ، LTD10039-32-4
الإيثانولJT Baker64-17-5
قوالب التضمين المسطحةHyde Venture (Beijing) Biotechnology Co.، Ltd.70900
مجهر مضانLEICADM2500
جلوتارالديهايدسيجما ألدريتش111-30-8اللامائي EM الصف
IsophoroneSigma78-59-1
سترات الرصاصSigma512-26-5
الميثانولSigma67-56-1
فوسفات الصوديوم أحادي القاعدة مجموعة الكاشف الكيميائي المحدودة7558-80-7
ميكرومتر موضوعيأوليمبوس0-001-034
رابع أكسيد الأوزميومسيجما541-09-3
طبق بتريألدريتش1998
شفرة الحلاقةجيليت
راتنجسبورERL4221
مشرطLianhuiGB / T19001-2008
SEMهيتاشيS-3400
هلام السيليكا المجففسوتشو لونغهوي المجفف المحدودة112926-00-8
فرشاة صغيرةمارتولG1220
هيدروكسيد الصوديومسيجما1310-73-2
أداة أيون الرشهيتاشي كوكي المحدودة ، طوكيو ، اليابانE-1010
مجهر ستيريولايكاEZ4 HD
TEMهيتاشيH-7500
توين 20تيانجين داماو الكاشف الكيميائي9005-64-5
UltramicrotomeLeicaUC6
منظف بالموجات فوق الصوتيةGT SonicGT-X1
أسيتات يورانيلسيجما6159-44-0
شركة

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Song, Y. Q., Dong, J. F., Sun, H. Z. Scanning Electron Microscope Technology of Insect Material. Hubei Agricultural Sciences. 52, 1064-1065 (2013).
  2. Liu, C. The develo....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Scanning Electron MicroscopyTransmission Electron MicroscopySample PreparationTween 20 FixativeEthanol DehydrationFluorescence MicroscopyUltramicrotome SectioningUranyl Acetate StainingLead Citrate StainingIon Sputtering

Related Articles