يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

تحليل تريساكتشاريديس الحليب فوكوسيلاتيد الإنسان في سياق التكنولوجيا الأحيائية باستخدام جينياً ترميز أجهزة استشعار العوامل البيولوجية

5.9K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/59253

⸱

أبريل 13, 2019

 , 
1Department of Chemical and Biological Engineering, Iowa State University

في هذه المقالة

ملخص

يصف لنا هنا كشف الفائق والتقدير الكمي فوكوسيلاتيد لبن oligosaccharides (إهمال) استخدام بيوسينسور كامل الخلية. كما نبدي هنا، تكييف هذا البرنامج نحو تحليل لسلالات إنتاج مؤمن، مع التركيز على تحسين إشارة إلى نسبة الضوضاء.

الملخص

Oligosaccharides اللبن البشري (إهمال) عناصر الكربوهيدرات المعقدة في لبن الثدي البشري الذي يحمل فوائد وفيرة على صحة الرضع. ومع ذلك، يقتصر التحسين على التوليف التكنولوجيا الحيوية الإنتاجية منخفضة نسبيا من الكشف والتحديد الكمي لأحادي والروابط. وتشمل التقنيات التقليدية لتحليل جليكان طرق الكروماتوغرافي/الجماهيري-والمطيافيه مع الإنتاجية بناء على أمر من مئات العينات يوميا دون التنفيذ التلقائي. نظهر هنا، بيوسينسور بكتيرية مرمزة وراثيا لكشف الفائق، والخاصة بالربط والتقدير الكمي لهياكل فوكوسيلاتيد مؤمن و 2-فوكوسيلاكتوسي 3-فوكوسيلاكتوسي، الذي يمكننا تحقيقه عن طريق مغايرة التعبير عن فوكوسيداسيس. كما يمكن أن يؤدي وجود اللاكتوز في الحليب أو في العمليات الحيوية لايجابيات كاذبة، علينا أن نبرهن أيضا الحد الإشارات من اللاكتوز استخدام استراتيجيات مختلفة. نظراً للإنتاجية العالية لهذه التقنية، يمكن جزيئي العديد من شروط رد فعل أو معلمات مفاعل حيوي في نفس الوقت في بضع ساعات، مما يسمح للاستفادة المثلى التصنيع مؤمن.

المقدمة

Oligosaccharides اللبن البشري (إهمال) هي مشتقة من اللاكتوز-oligosaccharides، عادة ما تتألف من ثلاث إلى ثماني السكر مونومرات. لديهم اللاكتوز (غال-β1، 4-جنة الضوء الأخضر) الحد من نهاية وهي ممدود المزيد من الروابط glycosidic (بيتا-1، 3-أو β-1، 6-) الجلوكوز (الأخضر)، واللبن (Gal)، أو ن-أسيتيلجلوكوساميني (جلكناك). وباﻹضافة إلى ذلك، فوكوسي (الجبهة، α-1، 2--أو α-1، 3-) أو حمض اللعابي (سيا أو نيواك، α-2 و 3-أو α-2، 6-) المخلفات غالباً ما يتم إضافة1.

التحليل الحالي أوليجوساكتشاريديس والكربوهيدرات الأخرى محدودة في الإنتاجية والنطاق بالحاجة إلى والمطيافيه الكروماتوغرافي/الكتلة (MS) التكنولوجيا2،3،،من45، 6 , 7، والذي يمكن أن يستغرق حوالي ساعة كل عينة، ناهيك عن الضرورة لمعدات غالية الثمن والأعمدة المتخصصة ووكلاء ديريفاتيزينج والخبرة في تشغيل هذه المعدات8. الروابط oligosaccharide تتسم بصعوبة خاصة لتحديد، تتطلب متقدمة MS9،10 أو تقنيات الرنين المغناطيسي النووي (الرنين المغناطيسي النووي)11. التحسين السريع لتوليف لهذه أوليجوساكتشاريديس وبالتالي يحد من الإنتاجية من هذه الخطوة التحليلية بطيئة.

في هذه الدراسة، ونظهر الكشف الخاصة بالربط من تريساكتشاريدي فوكوسيلاتيد إهمال يستند اللاكتوز، مع التركيز على 2 '--فوكوسيلاكتوسي (2-فلوريدا) هو مؤمن الأكثر وفرة في اللبن البشري، وراثيا تم ترميزه باستخدام خلية كله الإشريكيّة القولونية بيوسينسور حدا للكشف على 4 مغ/لتر. من السمات هامة لهذا بيوسينسور هو قدرته على التفريق بين تريساكتشاريديس متجازئه. يستند مبدأ التصميم إلى التعبير عن فوكوسيداسيس محددة في كولاي أن تحرير اللاكتوز من إهمال، هو الكشف عن وجود التي بها مشغل أمريكا اللاتينية والكاريبي ، الذي يولد بدوره إشارة فلورسنت. يمكننا تحقيق ذلك من خلال بناء نظام بلازميد اثنين، واحد إيواء فوكوسيداسي الخاصة بالربط والآخر بروتين مراسل فلورسنت. منصة بيوسينسور هذا مناسبة للفرز الفائق بالتدفق الخلوي أو قارئ لوحة صغيرة. كما نبدي الاستفادة بيوسينسور في التحديد الكمي 2 '--فلوريدا التي تنتجها سلالة المهندسة12. ضمن هذه الدراسة، كما نقدم ثلاث استراتيجيات في إزالة انتقائية من اللاكتوز التي يمكن أن تسفر عن إشارة إيجابية كاذبة من بيوسينسور، نظراً لأن يزرع سلالة منتج هندسيا على اللاكتوز.

أخذت معا، هذه الأجهزة المشفرة جينياً يسمح لنا بكشف وتحديد إهمال في طريقة الربط على حدة، وصعبة حتى مع الكروماتوغرافي، مرض التصلب العصبي المتعدد، أو الرنين المغناطيسي تقنيات. ينبغي أن يكون هذا الأسلوب نظراً للإنتاجية العالية وسهولة الاستخدام، تطبيقات على نطاق واسع في الهندسة الأيضية وتوليف من إهمال.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1-خلية ظروف الثقافة والتوجيه

ملاحظة: في التجارب التالية، ثلاث سلالات المستخدمة: BL21 كولاي (DE3) مع موجه فارغ، BL21 كولاي (DE3) مع البلازميدات بأفكا14 و pET28:green نيون البروتين (التجارة والنقل)، و BL21 كولاي (DE3) مع البلازميدات بافكب14 و pET28:GFP. وتزرع جميع سلالات في مرق لوريا بيرتاني (رطل) أو الحد الأدنى من وسائل الإعلام مع المضادات الحيوية المناسبة. إعداد حلول الأسهم 1,000 x كاناميسين (50 ملغم/مل) وكاربينيسيلين (100 مغ/مل) في منزوع (DI) المياه.

  1. إعداد الوسائط
    1. تحضير الوسائط رطل بإضافة ز 25 رطل مسحوق المخزون إلى 1 لتر مياه دي. اﻷوتوكﻻف الحل في 121 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة لتعقيم. الانتظار حتى يتم تعقيم رطل وسائل الإعلام درجة الحرارة أقل من 60 درجة مئوية قبل إضافة 1 ميليلتر من مخزون المضادات الحيوية لكل 1 مل من وسائل الإعلام رطل.
    2. لإعداد لوحات رطل، إضافة أجار ز 15 إلى وسائل الإعلام رطل قبل التعقيم. الانتظار حتى يتم تعقيم رطل أجار درجة الحرارة أقل من 60 درجة مئوية قبل إضافة المضادات الحيوية.
    3. 1.1.3 للخلايا بيوسينسينج، وإعداد وسائل الإعلام أو لوحات مع المضادات الحيوية المزدوج، كاناميسين، وكاربينيسيلين.
  2. مستحثات الكربوهيدرات
    1. إعداد حلول الأسهم من مستحثات الكربوهيدرات في معادلات المولى إلى 20 غرام/لتر لاكتوز: 29 غ/لتر 2 '--فلوريدا و 3-فلوريدا.
      ملاحظة: يتطلب كل ميليلتر 200 من الخلايا 20 ميليلتر 2 '--فلوريدا أو 3-فلوريدا.
    2. حمل 200 ميليلتر من الخلايا مع 2.0 غرام/لتر التركيز النهائي للتركيز النهائي اللاكتوز أو 2.9 غرام/لتر من إينكوباتي 2 '--FL/3-سائلة في 37 درجة مئوية مع الرج المستمر والسماح للثقافات التي تنمو بين عشية وضحاها.
  3. خلية ثقافة
    1. البذور قبل التجربة اليوم 5 مل من رطل المتوسطة وتستكمل مع كاناميسين وكاربينيسيلين من مستعمرة بكتيرية جديدة، باستخدام تقنية تعقيم.
    2. احتضان جميع الثقافات في 37 درجة مئوية مع إثارة وتنمو الثقافات بين عشية وضحاها.
    3. نقل 50 ميليلتر للثقافة بين عشية وضحاها إلى 5 مل الإعلام رطل/M9 الطازجة مع كاناميسين وكاربينيسيلين. احتضان عند 37 درجة مئوية مع الرج المستمر والنمو حتى وصلت الثقافة الكثافة البصرية 600 نانومتر (OD600) من 0.5 – 0.7. في هذه المرحلة سجل منتصف، يمكن أن يتسبب الخلايا.

2-قياس الأسفار وحدود الكشف

  1. إعداد الخلايا للتدفق الخلوي
    1. نقل الثقافات بين عشية وضحاها إلى 1.5 مل أنابيب وأجهزة الطرد المركزي في 12,500 س ز لمدة 1 دقيقة.
    2. تجاهل المادة طافية وإعادة تعليق بيليه في 500 ميليلتر من س 1 الملحية مخزنة الفوسفات (برنامج تلفزيوني؛ 6 مم نا2هبو4مم 1.8 نة2بو4، 145 مم كلوريد الصوديوم في مياه DI، الرقم الهيدروجيني 7.2) بإعداد تعليق خلية مفردة ونقل خلية مفردة تعليق لمل 5 التدفق الخلوي أنابيب.
    3. تبقى الخلايا في الظلام في 4 درجات مئوية حتى تشغيل العينات على سيتوميتير تدفق. للحصول على أفضل النتائج، قم بتحليل الخلايا أسرع.
    4. حدد 488 نانومتر الليزر تثير التجارة والنقل. جمع fluorescein isothiocyanate (فيتك) الأسفار مستويات (أحداث 20,000 – 40,000، بوابات مبعثر إلى الأمام والجانب لتجنب الخلايا المجمعة والحطام) مع عامل تصفية ممر الموجه nm 525/50.
  2. معايرة بيوسينسور
    1. لجعل منحنى معايرة، جعل تخفيف 8 – 10 من معيار 2 '--فلوريدا بملغ النطاق 0-2,500/l.
    2. الثقافة الخلايا بيوسينسينج 2 '--فلوريدا (تحتوي على بأفكا و pET28:GFP) وحملها بتخفيف الموحدة، كما هو موضح سابقا في الفرع 1-3. القيام بثلاثة البيولوجية وإنشاء نسخ متماثلة لتمييع كل.

3-الكشف والتحديد الكمي ل 2 '--فلوريدا في سلالة منتج

  1. زراعة سلالة منتج
    1. لتقديم الحد الأدنى من وسائل الإعلام، وإعداد حلول منفصلة من 1 م ك2مكتب البراءات الهنغاري4، فيسو4·7H2س وسترات الصوديوم والثيامين م 1-HCl. تعقيم الحلول باستخدام عامل تصفية 0.22 ميكرومتر. مزيج من وسائل الإعلام M9 مسحوق مرق مع 1 لتر مياه دي. اﻷوتوكﻻف الحل M9 في 121 درجة مئوية للحد الأدنى 15 بارد الحل وصولاً إلى 50 درجة مئوية. إضافة مجسو4كاكل2، ك2هبو4، فيسو4·7H2س، وسترات الصوديوم، والثيامين التركيزات النهائية من 2 مم، 0.1 ملم، 12 غرام/لتر، 11 مغ/لتر، 75 مغ/لتر و 7.5 ميكروغرام/لتر، على التوالي.
    2. بدء ثقافة 2 '--فلوريدا إنتاج سلالة، مثلاً، JM109 جوبك-F2، في 5 مل الإعلام رطل وتركها تنمو بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية، كما هو موضح في بومغارتنر et al.12.
    3. ثقافة فرعية في 1% كما هو موضح في وقت سابق في خطوة 1.3.3 في 250 مل من وسائل الإعلام الحد الأدنى إعدادها في الخطوة 3.1.1. إضافة الجلسرين إلى نهائي تركيز 10 غرام/لتر، واحتضان ثقافة عند 37 درجة مئوية.
    4. عندما يصل الثقافة التطوير التنظيمي600 من 0.5 – 0.7، إضافة الأيزوبروبيل β-د-1-ثيوجالاكتوبيرانوسيدي (إيبتج) بتركيز نهائي من 0.5 مم واللاكتوز بتركيز نهائي 2 غ/ل.
    5. احتضان عند 37 درجة مئوية مع الرج المستمر والسماح للثقافات التي تنمو على ح 24.
  2. استخراج 2 '--فلوريدا
    1. نقل الثقافات بين عشية وضحاها إلى أنابيب معقمة 50 مل وأجهزة الطرد المركزي في 900 x ز لمدة 15 دقيقة.
    2. 3.2.2 تجاهل المادة طافية وتعليق إعادة بيليه في المياه دي. كرر الخطوة يغسل ثلاث مرات لإزالة اللاكتوز المتبقية، وأخيراً إعادة تعليق في 5 مل مياه دي.
    3. لتعليق خلية، استخدم سونيكاتور في السلطة 30 ٪، في 30 ثانية البقول. تبقى الخلايا على الجليد في جميع الأوقات.
    4. الطرد المركزي الخلايا ليسيد لمدة 25 دقيقة في 2,000 س ز. إزالة المادة طافية، يمر عليه عقيمة (مثلاً، 0.22 ميكرومتر) تصفية وتخزينها في 4 درجات مئوية حتى التحليل.
  3. القياس الكمي مع بيوسينسور
    1. تلقيح ثقافة الخلايا بيوسينسينج 2 '--فلوريدا وفي سجل منتصف المرحلة، حمل مع خلية ما يعادل ليستي المقدرة بتركيزات من 2'--فلوريدا تستخدم لجعل منحنى المعايرة كما هو موضح في القسم 2-2. إجراء المعايرة في الوسط نفسه كنموذج لتحليل (على سبيل المثال، الخلية ليستي) عن طريق إضافة تخفيف 2 '--فلوريدا لمراقبة (أي غير المنتجة) خلية المصفاة قبل حمل الخلايا بيوسينسور.
    2. تشغيل العينات على سيتوميتير تدفق. إنشاء منحنى استجابة لجرعة بالتآمر الإخراج fluorescence ضد تركيز oligosaccharide. مقارنة استجابة للمعايير للخلية ليستي.

4-انتقائية إزالة اللاكتوز

ملاحظة: الخلايا بيوسينسينج حساسة اللاكتوز، ومن المرغوب فيه أن بيوسينسور للكشف عن إهمال بشكل انتقائي على اللاكتوز. وستشمل استراتيجية واحدة الغسيل للخلايا كما هو موضح في المقطع 3.2. ويرد أدناه ثلاث استراتيجيات أخرى.

  1. المعاملة مع التجاري المنقي β-جالاكتوسيداسي
    1. حل جالاكتوسيداسي β المجففة بالتبريد للوحدات (لجنة الاتصالات الفدرالية اللاكتاز) 1,000/mL, 1 مم مجكل2 أو استخدام تجاري β-جالاكتوسيداسي في الحل.
    2. لتحديد تركيز المثلى للانزيم اللازم، تنمو العدوى خلايا بيوسينسينج 2 '--فلوريدا وحمل مع اللاكتوز 2 غرام/لتر و 2.9 غ/ل 2'--فلوريدا في منتصف المرحلة سجل.
    3. 100 ميليلتر الثقافات، إضافة كميات متغيرة من β-جالاكتوسيداسي، يصل إلى 12 وحدة، والسماح للثقافات تنمو بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية مع الرج المستمر.
    4. قياس الأسفار النحو المبين في الفرع 2-1 وحساب وحدات الإنزيم اللازمة بتحديد تركيز إنزيم الحد الأدنى لتحقيق التوهين المرجوة من الإشارات الأمثل.
    5. 2-فلوريدا إنتاج الخلايا نمت عن ح 24، إضافة وحدات الأمثل من β-جالاكتوسيداسي واحتضان بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية. المضي قدما في البروتوكول المتعلق بتحديد عيار 2 '--فلوريدا كما هو موضح في القسم 3.3.
  2. ما قبل المعالجة مع لاكز + سلالة
    1. تبدأ ثقافة 25 مل من سلالة 2 '--فلوريدا المنتجة ومجرد فعل في سجل منتصف المرحلة، واحتضان الثقافة في 37 درجة مئوية ح 24.
    2. تطعيم BL21 كولاي الثقافة (DE3) في رطل، أنها تنمو إلى سجل منتصف المرحلة عند 37 درجة مئوية وإضافة 50 مل الثقافة (2:1) لثقافة ح 24.
    3. احتضان في 37 درجة مئوية حاء 3 المضي قدما مع البروتوكول لتحديد عيار 2 '--فلوريدا كما هو موضح في القسم 3.3.
  3. هطول الأمطار اللاكتوز مع الإيثانول
    ملاحظة: هذا القسم هو مقتبس من وماتسوكى et al.12.
    1. تبدأ ثقافة 25 مل من سلالة 2 '--فلوريدا المنتجة ومجرد فعل في سجل منتصف المرحلة، واحتضان في 37 درجة مئوية ح 24.
    2. إضافة مجلدين من الإيثانول 100% للثقافة، يهز جيدا، واحتضان في 37 درجة مئوية ح 4.
    3. الطرد المركزي من التعليق في 900 x ز 15 دقيقة جمع المادة طافية واحتضان بين عشية وضحاها في 4 درجة مئوية، ورواسب اللاكتوز.
    4. إزالة اللاكتوز سرع بتمرير الحل عن طريق ورقة تصفية (11 ميكرومتر). جمع فيلتراتي التي هي الخلية الذي يحتوي على 2 '-فلوريدا، التي يمكن قياسها كمياً بالمقطع التالي 3.3.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

لقد قمنا بتصميم بيوسينسور خلية كله معينة إلى 2 '--فلوريدا التي يمكن استخدامها بالاقتران مع إنتاج التكنولوجيا الأحيائية oligosaccharide. وهذا يعتمد على الانقسام الانزيمية محددة لتعديل السكريات محطة توليد اللاكتوز وبالتالي تفعيل مشغل أمريكا اللاتينية والكاريبي ، تؤدي إلى التعبير عن البروتين الفلورسنت مراسل تحت مروج إيندوسيبلي لاكتوز، نسبة إلى كمية 2 '--فلوريدا. كما تم اختبار لإثبات خصوصيته الربط، 3-فوكوسيلاكتوسي (3-فلوريدا)، أيسومر،. الدائرة الوراثية يحتوي على قسمين: استنساخ جين فو...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

نقدم استراتيجية الفائق لكشف الروابط الخاصة فوكوسيلاتيد أوليجوساكتشاريديس اللبن البشري. كان ذلك عن طريق بناء خلية كله أجهزة استشعار العوامل البيولوجية عن طريق الهندسة وراثيا كولاي التي تستجيب مع إشارة فلورسنت عند الاستقراء مع جليكانس محددة. تفاصيل البروتوكول أيضا على كيف يمكن استخدامها في بيوسينسور لكشف وتحديد إهمال في سلالة بكتيرية أيضي هندسيا.

لدينا بروتوكول يوفر مزايا أكثر من الأساليب البديلة بسبب إنتاجية عالية بالإضافة إلى الربط خصوصيته بالمقارنة مع طرق الكروماتوغرافي/MS. يسمح انخف...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

شكر وتقدير

وأيد هذا العمل "أموال بدء التشغيل جامعة الدولة آيوا". جزئيا في تمويله هو زمالة ترينيكت جبهة الخلاص الوطني والاستاذية هوبة مانلي. T.J.M. أيده جزئيا كارين وزمالة كلية فوغن ديني. يشكر المؤلفون آيوا جامعة الدولة تدفق مرفق الخلوي ومختبر أبحاث جميع كيك للمساعدة مع الأسفار ودراسات LC-مرض التصلب العصبي المتعدد.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
2'-Fucosyllactose Carbosynth 41263-94-9
3-Fucosyllactose Carbosynth 41312-47-4
أجارفيشر BP9744500
كلوريد الكالسيوم, ديهيدراتفيشر العلميC79-500
Carbenicillin فيشر BP26481
سكر العنب (D-Glucose) ، مقياساللامائي فيشر العلميD16-1
BDFACSCanto Plus
RUO HPLCAgilent Technologies1100 Series نظام HPLC
عمودHPLC LunaC18 عمود الطور المعكوس
KanamycinFisher Scientific11815024
LB Broth, Miller فيشر سيانتيفيك12-795-027
اللاكتوزفيشر العلمي64044-51-5
M9 ، أملاح دنيا ، 5xSigma-AldrichM6030
كبريتات المغنيسيوم ، اللامائيةفيشر ScientificM65-500
MSAgilent Technologiesكاشف المصيدة الانتقائية الكتلية
SL كلوريد الصوديومسيجما-ألدريتش7647-14-5
فوسفات الصوديوم ثنائي القاعدةسيجما ألدريتش7558-79-4
فوسفات الصوديوم أحادي القاعدةسيجما ألدريتش13472-35-0
التدفق الخلوي

المراجع

  1. Ninonuevo, M. R., et al. A strategy for annotating the human milk glycome. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 54 (20), 7471-7480 (2006).
  2. Kailemia, M. J., Ruhaak, L. R., Lebrilla, C. B., Amster, I. J. Oligosaccharide analysis by mass spectrometry: a review of recent developments. Analytical Chemistry. 86 (1), 196-212 (2014).
  3. Royle, L. Chapter 8 - Glycans and Monosaccharides. Liquid Chromatography. , 185-202 (2013).
  4. Shubhakar, A., Reiding, K. R., Gardner, R. A., Spencer, D. I. R., Fernandes, D. L., Wuhrer, M. High-Throughput Analysis and Automation for Glycomics Studies. Chromatographia. 78 (5-6), 321-333 (2015).
  5. Goubet, F., Jackson, P., Deery, M. J., Dupree, P. Polysaccharide analysis using carbohydrate gel electrophoresis: a method to study plant cell wall polysaccharides and polysaccharide hydrolases. Analytical Biochemistry. 300 (1), 53-68 (2002).
  6. Evangelista, R. A., Liu, M. -S., Chen, F. -T. A. Characterization of 9-Aminopyrene-1,4,6-trisulfonate Derivatized Sugars by Capillary Electrophoresis with Laser-Induced Fluorescence Detection. Analytical Chemistry. 67 (13), 2239-2245 (1995).
  7. Jiao, J., Zhang, H., Reinhold, V. N. High Performance IT-MS Sequencing of Glycans (Spatial Resolution of Ovalbumin Isomers). International Journal of Mass Spectrometry. 303 (2-3), 109-117 (2011).
  8. Doherty, M., et al. An automated robotic platform for rapid profiling oligosaccharide analysis of monoclonal antibodies directly from cell culture. Analytical Biochemistry. 442 (1), 10-18 (2013).
  9. Hsu, H. C., Liew, C. Y., Huang, S. -P., Tsai, S. -T., Ni, C. -K. Simple Method for De Novo Structural Determination of Underivatised Glucose Oligosaccharides. Scientific Reports. 8 (1), 5562(2018).
  10. Mank, M., Welsch, P., Heck, A. J. R., Stahl, B. Label-free targeted LC-ESI-MS2 analysis of human milk oligosaccharides (HMOs) and related human milk groups with enhanced structural selectivity. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 411 (1), 231-250 (2019).
  11. Chai, W., Piskarev, V. E., Zhang, Y., Lawson, A. M., Kogelberg, H. Structural determination of novel lacto-N-decaose and its monofucosylated analogue from human milk by electrospray tandem mass spectrometry and 1H NMR spectroscopy. Archives of Biochemistry and Biophysics. 434 (1), 116-127 (2005).
  12. Baumgärtner, F., Seitz, L., Sprenger, G. A., Albermann, C. Construction of Escherichia coli strains with chromosomally integrated expression cassettes for the synthesis of 2’-fucosyllactose. Microbial Cell Factories. 12 (1), 1-13 (2013).
  13. Matsuki, T., et al. A key genetic factor for fucosyllactose utilization affects infant gut microbiota development. Nature Communications. 7, 11939(2016).
  14. Enam, F., Mansell, T. J. Linkage-Specific Detection and Metabolism of Human Milk Oligosaccharides in Escherichia coli. Cell Chemical Biology. 25 (10), 1292-1303 (2018).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

أوليميروساكاريدات الحليب البشرية المفركزةالكشف بالمستشعر الحيويقياس التدفق الخلويالفرز عالي الإنتاجيةتداخل اللاكتوزبيتا غالاكتوزيدازالهندسة الوراثيةالتعبير في بكتيريا E.Coliالتقدير الكمي للأوليميروساكاريداتنوعية الارتباط
تحليل تريساكتشاريديس الحليب فوكوسيلاتيد الإنسان في سياق التكنولوجيا الأحيائية باستخدام جينياً ترميز أجهزة استشعار العوامل البيولوجية
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.