Method Article

نموذج المصفوفة خارج الخلية العظام ثلاثية الأبعاد ل Osteosarcoma

DOI:

10.3791/59271

⸱

April 12th, 2019

 ,  , 
1MOE Key Laboratory of Gene Function and Regulation, School of Life Sciences, Sun Yat-sen University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نموذج المصفوفة خارج الخلية (BEM) العظام osteosarcoma (OS) راسخة وهو موضح هنا. يمكن استخدامه سقالة مناسبة لمحاكاة الورم الرئيسي النمو في المختبر ، وتقدم نموذجا مثاليا لدراسة تباين النسجية وفحص نظام التشغيل.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أوستيوساركوما (نظام التشغيل) هو الأكثر شيوعاً وورم العظام الأولية شديدة عدوانية. فهو يتسم بالاختلافات التشريحية ونسيجية جنبا إلى جنب مع صعوبات التشخيص أو تشخيصية. ويتألف نظام التشغيل الخلايا السرطانية غير متجانسة جينوتيبيكالي وفينوتيبيكالي. وأثبتت العناصر المكروية العظام لحساب لتطور الورم عدم التجانس والمرض. عظم المصفوفة خارج الخلية (BEM) يحتفظ بمصفوفات ميكروستروكتورال والبيوكيميائية عناصر المصفوفة خارج الخلية الأصلية. يوفر هذا المتخصصة الخاصة بالانسجة سقالة مواتية وطويلة الأجل للخلية OS البذر وانتشار. توفر هذه المقالة بروتوكول لإعداد نموذج BEM وتطبيقه التجريبية. يمكن أن تنمو الخلايا OS وتفرق في متسقة مع تعقيد نسيجية من العينات السريرية OS متعددة تعمل. يسمح النموذج أيضا التصور مورفولوجيس المتنوعة وارتباطها مع التعديلات الوراثية والآليات التنظيمية الأساسية. كمثلي للبشرية نظام التشغيل، يمكن وضع هذا النموذج BEM-نظام التشغيل وتطبيق لعلم الأمراض والبحوث السريرية لنظام التشغيل.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Osteosarcoma (OS) يحدث عادة في مناطق، ميتافيسيس العظام الطويلة، زراعة بنشاط خلال فترة المراهقة. أكثر من 80% المواقع المتضررة من نظام التشغيل لديها تفضيل ميتافيسيس الدانية الساق وعظم العضد الدانية، فضلا عن عظم الفخذ البعيدة والقريبة على حد سواء، المقابلة لموقع لوحة النمو1. يتألف نظام التشغيل متعددة الأنواع الفرعية الخلية مع خصائص الوسيطة وتنوع كبير في ميزات النسجية والصف. أدلة تدعم الخلايا الجذعية الوسيطة (MSCs) وخلايا الاوستيوبلاستس ملتزمة السلائف وبيريسيتيس كخلايا المنشأ2،3،،من45. هذه الخلايا يمكن أن تتراكم التعديلات الوراثية أو جينية وأن تؤدي إلى نظام التشغيل تحت تأثير بعض الإشارات ميكرونفيرونمينتال العظام. الآليات الذاتية والخارجية على السواء تؤدي إلى عدم الاستقرار المجيني والتباين في نظام التشغيل، مع عدة تعمل الخصائص المورفولوجية والسريرية6،7. للعلاجات الفردية أو فحص العقاقير الجديدة، يلزم نماذج الرواية توليدها إلى ضد عدم التجانس أو غيرها من الاضطرابات السريرية.

نظام التشغيل ورم صلبة خبيث داخل العظمى. تعقيد والنشاط المحيطة العناصر المكروية يضفي الاختلافات المظهرية والوظيفية على خلايا نظام التشغيل في مواقع مختلفة من الورم. عظم المصفوفة خارج الخلية (BEM) يوفر سقالة الهيكلية والبيوكيميائية للترسبات المعدنية وإعادة عرض العظام. الجزء العضوي من المصفوفة خارج الخلية (ECM) يتكون بشكل رئيسي من نوع أنا الكولاجين يفرز من خلايا النسب أوستيوبلاستيك، بينما حصتها غضاريف تتكون من فوسفات الكالسيوم في شكل هيدروكسيباتيت8. الدور الدينامي لشبكات إدارة المحتوى في المؤسسة لتنظيم التصاق الخلايا، التمايز، عبر الحديث والأنسجة تعمل صيانة9.

وقد استخدمت بنجاح في خلية ثقافة الهلاميات المائية BEM وإدارة المحتوى في المؤسسة ديمينيراليزيد ويمكن تعزيز خلية انتشار10،11. يمكن تنظيم المركبة مثل العظام ECM حجم التجمع، ومصير القرارات وتطور النسب MSCs12،،من1314. وعلاوة على ذلك، الأدلة النتائج أهميته السريرية لتقديم نشاط osteogenic بتحفيز العمليات الخلوية خلال العظم تشكيل وتجديد15،،من1617.

في هذه المادة، ينشئ مجموعتنا نموذج تم التعديل والبديل مواتية لثقافة طويلة الأجل ثلاثي الأبعاد. تقديم الخلايا OS حقن BEM المستمدة من الأنسجة النمط الظاهري الوسيطة بين سهولة مقارنة بالبلاستيك الثقافات ثنائي الأبعاد. BEM المستمدة من الأنسجة المتجانسة الخاصة بالموقع وتظهر ميزته درامية كما يجري مكانة أصلي لنظام التشغيل الخلايا في المختبر ويتمتع بإمكانات كبيرة في مجال البحوث النظرية والسريرية OS. هذا المنهاج بم تتسم بسيطة ولكنها فعالة للبحث في المختبر ، ويجوز تمديدها في النمذجة سرطانات متعددة.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

رعاية الحيوان واستخدام تجري وفقا "المعاهد الوطنية للصحة دليل" لرعاية واستخدام للحيوانات المختبرية (المعاهد الوطنية للصحة المنشور NO.80-23، المنقح في عام 1996) بعد الحصول على موافقة لجنة الأخلاقيات الحيوان في صن يأت-صن "جامعة".

1-إعداد العظام

  1. الحصول على 4 إلى 6 عاماً الأسبوع بالب/ج الفئران (دون اشتراط الجنس). Euthanize ماوس أسيبتيكالي بخلع عنق الرحم وقطعت الشظية الطازجة والساق وعظم الفخذ من اللكتات مع مقص الجراحية المعقمة. تقشر الأنسجة الظهارية، ثم قم بإزالة جزء كبير من الأنسجة اللينة ممكن استخدام مقص وملاقط.
  2. شطف في عظام الساق مع 10 ملم معقمة الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) مرتين لإزالة الدم في طبق 6 سم. تزج العظام في الإيثانول 75% لمدة 3 دقائق، ثم شطف مع برنامج تلفزيوني مرتين. يمكن تخزين عظام نظيفة في أنبوب الطرد مركزي عقيمة 50 مل مع PBS العقيمة في-80 درجة مئوية لمدة أشهر حتى المطلوبة.
    ملاحظة: برنامج تلفزيوني المستخدمة في كافة الخطوات التالية على 10 مم ص43−.

2-العظام القعود وديسيلولاريزيشن

  1. ذوبان العظام المجمدة في درجة حرارة الغرفة، ومن ثم تجميد مرة أخرى في-80 درجة مئوية حاء 1 رهنا بالعظام أكثر من 2 – 3 دورات تجميد أذاب لانهيار الأنسجة وتحلل الخلية.
  2. احتضان العظام في أنبوب الطرد مركزي عقيمة 50 مل مع 0.5 N HCl بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة على شاكر منصة أو المداري هزاز مع لطيف هزاز/تهتز لضمان تغطية كاملة وحتى العظام.
    ملاحظة: تأكد من العظام مغمورة تماما أثناء الحركة في الحامض وليس تسوية أثناء العملية. ينبغي أن يكون حجم HCl الحل أكثر من عشر مرات للعظام.
  3. وبعد ديكالسيفيكيشن، صب حل HCl تماما وشطف تحت الماء ح 1. ثم غسل العظام مرتين لمدة 15 دقيقة كل الغسيل بماء مقطر على شاكر منصة أو المداري هزاز.
    ملاحظة: تأكد من إزالة الحل أو المياه بين يغسل وبعد الغسيل النهائي مع الماء المقطر.
  4. استخراج الدهون في العظام ديمينيراليزيد مع خليط 1:1 من الميثانول وكلوروفورم في أنبوب الطرد مركزي 50 مل ملفوفة برقائق القصدير ح 1 في درجة حرارة الغرفة10.
  5. ثم، المقطر نقل العظام إلى أنبوب آخر من الميثانول ملفوفة برقائق القصدير للحد الأدنى 30 إزالة الميثانول شكل كامل وشطف بالماء مرتين لمدة 15 دقيقة مع الهز برفق. صب الماء يغسل النهائي والمضي قدما في الخطوات التالية تحت ظروف معقمة.
    ملاحظة: أثناء الخطوة الاستخراج، ويجب تجنب الضوء لمنع التحلل كلوروفورم. يمكن تخزين المخلوط في حاويات مقاومة للضوء أو أنبوب الطرد مركزي ملفوفة برقائق القصدير. القيام بجميع أنواع العلاج وتغسل الخطوات تحت التناوب متواضعة أو هزاز الحركة.
  6. شطف العظام في طبق 6 سم مع PBS العقيمة لمدة 3 دقائق ومن ثم نقل العظام في أنبوب 50 مل أجهزة الطرد مركزي جديدة. إضافة 40 مل العقيمة 0.05% التربسين-يدتا (TE) في الأنبوب واحتضان عظام ح 23 في حاضنة2 CO في18من 37 درجة مئوية.
  7. تجاهل حل الشركة المصرية للاتصالات وشطف مرتين مع PBS العقيمة وتستكمل مع 90 ميكروغرام/مل الأمبيسلّين و 90 ميكروغرام/مل كاناميسين. بعد الصب النهائي يغسل برنامج تلفزيوني تماما، وتجديد مع 40 مل PBS العقيمة. غسل جيدا لمدة 24 ساعة في درجة حرارة الغرفة مع هزاز لطيف أو تهتز لامتصاص المضادات الحيوية.
    ملاحظة: كل برنامج تلفزيوني المعقمة المستخدمة في هذا المجال والخطوات التالية تحتوي على 90 ميكروغرام/مل الأمبيسلّين و 90 ميكروغرام/مل كاناميسين. يتم تنفيذها بين عشية وضحاها الغسيل تحت التناوب أو هزاز الحركة لفترات طويلة الغمر شامل مع المضادات الحيوية لتحقيق التعقيم الفعالة من مسام ممنوع.
  8. إزالة برنامج تلفزيوني ونقل العظام في أنبوب الطرد مركزي 50 مل جديدة مليئة PBS العقيمة. ديمينيراليزيد الذي أعد وعظام ديسيلولاريزيد تسمى العظام المصفوفة خارج الخلية (BEM)، ويمكن تخزينها في 4 درجات مئوية لمدة شهرين حتى المطلوبة.

3-الخلية البذر والثقافة

  1. تأخذ بها BEM من الثلاجة 4 درجات مئوية وأنها تزج في الإيثانول 75% ل 30 ثانية، ثم شطف مع برنامج تلفزيوني مرتين. نقل BEM على طبق من ذهب في ثقافة خلية نظيفة 6-جيدا. إضافة 2 مل المتوسطة ثقافة كاملة (دولبيكو لتعديل المتوسطة/F12 النسر (DF12) التي تحتوي على 5% مصل بقرى الجنين، 90 ميكروغرام/مل الأمبيسلّين و 90 ميكروغرام/مل كاناميسين). احتضان BEM بين عشية وضحاها في حاضنة2 CO في 37 درجة مئوية.
  2. الحصول على البشرية خطوط الخلايا في نظام التشغيل (مننج/هوس وملغ-63). تعليق ما يقرب من 1.0 × 105 OS الخلايا مع برنامج تلفزيوني 100 ميكروليتر المحتوية على الفينول الأحمر كمؤشر.
    ملاحظة: لتحسين تعقب ومراقبة الخلايا المتعددة الطبقات ضمن نموذج BEM ثلاثي الأبعاد، مننج/هوس وملغ-63 مصابون بناقل لينتيفيرال الإعراب عن مشري الفلورسنت والبروتينات الفلورية الخضراء (التجارة والنقل).
  3. بعد هو تماما غارقة في BEM في الأجل المتوسط، حقن الخلايا OS في BEM من epiphysis القريبة أو البعيدة عندما تصل الإبرة إلى تجويف النخاع BEM. تبني نموذج نظام التشغيل--BEM للحد ني ح 2 في هوميديفيد 5% CO2 الغلاف الجوي في 37 درجة مئوية لضمان حقن الخلايا بشدة الانضمام إلى BEM.
    ملاحظة: الحارة قبل جميع وسائل الإعلام المستخدمة لزراعة الخلايا. حاضنة المستخدمة لزراعة الخلايا وقد هوميديفيد 5% CO2 الغلاف الجوي عند 37 درجة مئوية.
  4. أضف 1 مل كامل الثقافة المتوسطة إلى لوحة لمعطف تماما على سطح الثقافة BEM بين عشية وضحاها في حاضنة2 CO في 37 درجة مئوية.
  5. بلطف نقل نظام التشغيل--BEM النموذجية في بئر جديدة للوحة 6-جيدا مع ملقط معقم والمتوسطة ثقافة جديدة ريفيد 1 مل. الثقافة النموذجي لمدة 14 يوما في حاضنة2 CO في 37 درجة مئوية وتحديث المتوسط الثقافة وفقا لحالة انتشار الخلايا نظام التشغيل.
  6. الحفاظ على مراقبة حالة اللون وخلية متوسطة تحت المجهر المقلوب fluorescence أثناء عملية الثقافة. عند توسيع خلايا نظام التشغيل للوحة، بلطف نقل النموذجي BEM نظام التشغيل إلى آخر جديد تماما مع ملقط معقم.
    ملاحظة: المتوسط الثقافة أحمر في درجة الحموضة 7.4، الذي هو قيمة pH المثلى لمعظم الثدييات خلية ثقافة. إذا كان المتوسط يتحول إلى أصفر برتقالي أو حتى، فورا تحديث وسيلة للحفاظ على بيئة صحية لخلايا نظام التشغيل.
  7. نقل طراز OS-BEM في بئر جديدة بملاقط وشطف بلطف مع برنامج تلفزيوني لإزالة المتوسطة الثقافة. ثم نقل إلى أنبوب الطرد مركزي 15 مل وإصلاحها مع الفورمالين 10% مخزنة لتحديد النسيجي.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بعد القعود وديسيلولاريزيشن، يبدو أن BEM شفافة مع مرونة وتماسك العظام الماوس الأصلي بالمقارنة مع أقوى. بقايا العضلات قليلاً والفضاء من تجويف النخاع يمكن وضوح ملاحظة (الشكل 1أ، ب). لتحديد ديسيلولاريزيشن فعالة من بم، بم جزءا لا يتجزأ من البارافين بعد التثبيت، وشرائح ثم إلى 3 – 5 ميكرومترات أقسام لتلوين الهيماتوكسيلين ويوزين (H & E). إزالة شاملة لنواة الخلية يظهر بواسطة تصوير مشرق الميدانية. ترتيب شبكة بنية والكولاجين المسامية الطبيعية جيدا ويحتفظ BEM ديسيلولاريزيد (

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

عموما، يمكن تصنيف نظام التشغيل كما أوستيوبلاستيك، الأنواع الفرعية تشوندروبلاستيك، و fibroblastic حسب عنصرها النسجية المسيطرة. التكهن به يعتمد ليس فقط على المعلمات النسجية بل أيضا على موقعها التشريحية. وقد يحدث داخل العظام (في إينتراميدولاري أو حجرة إينتراكورتيكال)، على أسطح العظام، وفي مواقع اكستراوسيوس19. يمكن توضيح ظهور والتباين في نظام التشغيل كما اقتران الأحداث النمطان ودفعه ميكرونفيرونمينتال كاف، تليها زيادة التنمية والهجرة إلى الأجهزة البعيدة20،

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب يعلن أن لديهم لا تضارب المصالح المالية.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب قيمة دعم تشن ليويينج للمساعدة الإدارية و "طويلة جاو" لها لمساعدته التقنية ممتازة أثناء تشييد السقالات المصفوفة خارج الخلية العظام. يتم اعتماد هذه الدراسة من المنح المقدمة من "مؤسسة العلوم الطبيعية الوطنية الصينية" (31871413).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
أنبوب الطرد المركزي 15 ملGreiner188271
50 مل أنبوب الطرد المركزيGreiner227270
طبق ثقافة الخلايا 6 سمGreiner628160
لوحة 6 آبارGreiner657160
AmpicillinSigma-AldrichA9393
C57-BL / 6J ماوسمختبر جامعة صن يات صن مركز
CO2< / sub> حاضنةSHEL LABSCO5A
ثنائي القاعدة فوسفات الصوديوممصنع الكواشف الكيميائي قوانغتشوBE14-GR-500G
DMEM / F12Sigma-AldrichD0547
مصل الأبقار الجنينيHycloneSH30084.03
مقياس الدمBLAU717805
KanamycinSigma-AldrichPHR1487
MG-63الأكاديمية الصينية للعلوم ، شنغهاي سيل بنكخط خلايا الساركوما العظمية البشرية
MNG / HOSالأكاديمية الصينية للعلوم ، شنغهاي سيل بنكخط خلايا الساركوما العظمية البشرية
الفينول الأحمرسيجما ألدريتشP4633يتم استخدام محلول الفينول الأحمر كمؤشر لدرجة الحموضة: يظهر لونه انتقالا تدريجيا من الأصفر إلى الأحمر على نطاق الأس الهيدروجيني 6.6 إلى 8.0.
كلوريد البوتاسيومسانجون للتكنولوجيا الحيويةA100395
فوسفات البوتاسيوم أحادي القاعدةسانجون التكنولوجيا الحيويةA501211
كلوريد الصوديومسانجون التكنولوجيا الحيويةA501218

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Longhi, A., Errani, C., De Paolis, M., Mercuri, M., Bacci, G. Primary bone osteosarcoma in the pediatric age: State of the art. Cancer Treatment Reviews. 32, 423-436 (2006).
  2. Mohseny, A. B., et al. Osteosarcoma originates from mesenchymal stem cells in consequence of aneuploidization and genomic loss of Cdkn2. Journal of Pathology. 219, 294-305 (2009).
  3. Mutsaers, A. J., Walkley, C. R. Cells of origin in osteosarcoma: mesenchymal stem cells or osteoblast committed cells. Bone. 62, 56-63 (2014).
  4. Sato, S., et al. Mesenchymal tumors can derive from Ng2/Cspg4-Expressing pericytes with β-Catenin modulating the neoplastic phenotype. Cell Reports. 16, 917-927 (2016).
  5. Patane, S., et al. MET overexpression turns human primary osteoblasts into osteosarcomas. Cancer Research. 66, 4750-4757 (2006).
  6. Poos, K., et al. Genomic heterogeneity of osteosarcoma - shift from single candidates to functional modules. PLoS One. 10, 123082(2015).
  7. Martin, J. W., Squire, J. A., Zielenska, M. The genetics of osteosarcoma. Sarcoma. 2012, 1-11 (2012).
  8. Alfranca, A., et al. Bone microenvironment signals in osteosarcoma development. Cellular and Molecular Life Sciences. 72, 3097-3113 (2015).
  9. Alford, A. I., Kozloff, K. M., Hankenson, K. D. Extracellular matrix networks in bone remodeling. The International Journal of Biochemistry & Cell Biology. 65, 20-31 (2015).
  10. Sawkins, M. J., et al. Hydrogels derived from demineralized and decellularized bone extracellular matrix. Acta Biomaterialia. 9, 7865-7873 (2013).
  11. Alom, N., Peto, H., Kirkham, G. R., Shakesheff, K. M., Bone White, L. J. Bone extracellular matrix hydrogel enhances osteogenic differentiation of C2C12 myoblasts and mouse primary calvarial cells. Journal of Biomedical Materials Research Part B-Applied Biomaterials. 106, 900-908 (2018).
  12. Datta, N., Holtorf, H. L., Sikavitsas, V. I., Jansen, J. A., Mikos, A. G. Effect of bone extracellular matrix synthesized in vitro on the osteoblastic differentiation of marrow stromal cells. Biomaterials. 26, 971-977 (2005).
  13. Rubio, R., et al. Bone environment is essential for osteosarcoma development from transformed mesenchymal stem cells. Stem Cells. 32, 1136-1148 (2014).
  14. Sadr, N., et al. Enhancing the biological performance of synthetic polymeric materials by decoration with engineered, decellularized extracellular matrix. Biomaterials. 33, 5085-5093 (2012).
  15. Gautschi, O. P., Frey, S. P., Zellweger, R. Bone morphogenetic proteins in clinical applications. Anz Journal of Surgery. 77, 626-631 (2007).
  16. Rochet, N., et al. Modification of gene expression induced in human osteogenic and osteosarcoma cells by culture on a biphasic calcium phosphate bone substitute. Bone. 32, 602-610 (2003).
  17. Spang, M. T., Christman, K. L. Extracellular matrix hydrogel therapies: in vivo applications and development. Acta Biomaterialia. 68, 1-14 (2018).
  18. Schenke-Layland, K., et al. Impact of decellularization of xenogeneic tissue on extracellular matrix integrity for tissue engineering of heart valves. Journal of Structural Biology. 143, 201-208 (2003).
  19. Klein, M. J., Siegal, G. P. Osteosarcoma: anatomic and histologic variants. American Journal of Clinical Pathology. 125, 555-581 (2006).
  20. Lipinski, K. A., et al. Cancer evolution and the limits of predictability in precision cancer medicine. Trends in Cancer. 2, 49-63 (2016).
  21. McGranahan, N., Swanton, C. Clonal heterogeneity and tumor evolution: past, present, and the future. Cell. 168, 613-628 (2017).
  22. Brown, H. K., Schiavone, K., Gouin, F., Heymann, M., Heymann, D. Biology of bone sarcomas and new therapeutic developments. Calcified Tissue International. 102, 174-195 (2018).
  23. Abarrategi, A., et al. Osteosarcoma: cells-of-origin, cancer stem cells, and targeted therapies. Stem Cells International. 2016, 1-13 (2016).
  24. Tsukamoto, S., et al. Mesenchymal stem cells promote tumor engraftment and metastatic colonization in rat osteosarcoma model. International Journal of Oncology. 40, 163-169 (2012).
  25. Rodriguez, C. J., et al. Aerosol gemcitabine: preclinical safety and in vivo antitumor activity in osteosarcoma-bearing dogs. Journal of Aerosol Medicine and Pulmonary Drug Delivery. 23, 197-206 (2010).
  26. Rodriguez, C. J. Using canine osteosarcoma as a model to assess efficacy of novel therapies: Can old dogs teach us new tricks. Advances in Experimental Medicine and Biology. 804, 237-256 (2014).
  27. Mohseny, A. B., et al. An osteosarcoma zebrafish model implicates Mmp-19 and Ets-1 as well as reduced host immune response in angiogenesis and migration. Journal of Pathology. 227, 245-253 (2012).
  28. Saalfrank, A., et al. A porcine model of osteosarcoma. Oncogenesis. 5, 210(2016).
  29. Zhang, Y., Pan, Y., Xie, C., Zhang, Y. MiR-34a exerts as a key regulator in the dedifferentiation of osteosarcoma via PAI-1–Sox2 axis. Cell Death & Disease. 9, (2018).
  30. Hashimoto, Y., et al. The effect of decellularized bone/bone marrow produced by high-hydrostatic pressurization on the osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells. Biomaterials. 32, 7060-7067 (2011).
  31. Benders, K. E. M., et al. Extracellular matrix scaffolds for cartilage and bone regeneration. Trends in Biotechnology. 31, 169-176 (2013).
  32. Grayson, W. L., et al. Effects of initial seeding density and fluid perfusion rate on formation of tissue-engineered bone. Tissue Engineering Part A. 14, 1809-1820 (2008).
  33. Mikulic, D., et al. Tumor angiogenesis and outcome in osteosarcoma. Pediatric Hematology and Oncology. 21, 611-619 (2004).
  34. Ren, K., et al. Vasculogenic mimicry: a new prognostic sign of human osteosarcoma. Human Pathology. 45, 2120-2129 (2014).
  35. Bonuccelli, G., et al. Role of mesenchymal stem cells in osteosarcoma and metabolic reprogramming of tumor cells. Oncotarget. 5, 7575-7588 (2014).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Bone Extracellular MatrixOsteosarcoma ModelDecellularization ProtocolFreeze Thaw CyclesHCl DecalcificationLipid ExtractionTE Solution TreatmentSterilization WashOS Cell SeedingImmunohistochemical Analysis

Related Articles