$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
وقد وافقت لجنة الرعاية والاستخدام المؤسسية لكلية لو موين على جميع الإجراءات. وكان جميع استخدام الحيوانات بالاتفاق مع السياسات المبينة في دليل رعاية واستخدام الحيوانات المختبرية8.
ملاحظة: (حرجة) قبل التجريب، والحصول على جميع الموافقات اللازمة والتدريب اللازم ة للاستخدام الحيواني. من المهم أن يتم التعرف على التجارب مع سلوكيات الماوس ومستويات النشاط ، بما في ذلك علامات النوم والضيق و / أو حركة القطع الأثرية مقابل الشم العادي والتنفس.
1. كامل الجسم البارومتر ية غرفة التصوير البليسيوم
- قراءة أدلة المستخدم المناسبة لغرفة التصوير الجنبي البارومترية، بما في ذلك الموصلات، حلقات O، وما إلى ذلك، وإنشاء ملف بروتوكول قياسي لتحديد محللات (مثل الأيض) والمعلمات الخاصة بالبرنامج.
- تأكد من توصيل جميع الخراطيم والأنابيب بالغرفة. قم بتوصيل أنبوب تدفق الغاز (التدفق) وأنبوب فراغ (تدفق التدريجي) مباشرة إلى غرفة التصوير البُنى البارومتري.
ملاحظة: يجب إرفاق التدفق الداخلي بتدفق التحيزالمميز لفتح.
- إرفاق CO2،O2،وN2 خزانات الغاز إلى خلاط الغاز. تأكد من أن جميع خزانات الغاز في وضع مفتوح قبل التجريب.
2- معايرة غرفة البريثيسموغراف البارومترية
- معايرة تدفق عالية ومنخفضة من الغاز عن طريق تحديد الإعداد 7700 مكبر للصوت تحت علامة التبويب الأجهزة من برنامج التصوير بالجنب ة البارومترية.
- تعيين فراغ (تدفق من الغرفة) مناسبة للتصميم التجريبي ومحللات الغاز (~ 0.1 لتر / دقيقة).
ملاحظة: يجب أن يظل معدل التدفق إلى الخارج كما هو طوال المعايرة والتجربة للحصول على تسجيلات استقلابية دقيقة.
- تعيين تدفق منخفض من الهواء عن طريق إزالة أنبوب تدفق من الغرفة وإيقاف الفراغ.
- تسجيل التدفق صفر بإدخال 0 في خلية وحدة منخفضة للغرفة المقابلة. انقر نقرا مزدوجا على خلية كال منخفضة، وتغيير الوقت إلى 3 s، وضرب قياس.
- إعادة ربط أنبوب تدفق والسماح للغاز (20.93٪ O2، متوازنة N2)لتدفق من خلال غرفة الجنبية البارومترية من خلاط الغاز.
- تحويل التدفق من لتر / دقائق إلى ملليلتر / ثانية. انقر فوق خلية الوحدة العليا للغرفة المقابلة وأدخل القيمة بالملليلتر/الثانية. انقر نقرا مزدوجا عالية كال،وتغيير الوقت إلى 3 s، وانقر فوق قياس.
- اترك علامة التبويب إعداد 7700-Amplifier مفتوحة لمعايرة محللات التمثيل الغذائي إلى برنامج التصوير البُعد يُعد بمقياس الجنب.
3. معايرة محلل التمثيل الغذائي
- في برنامج خلاط الغاز، تعيين خلاط الغاز لإطلاق تدفق الغاز الذي يحتوي على 20.93٪ O2 و 79.07٪ N2.
- على محللات التمثيل الغذائي، تعيين مستوى معايرة O2 إلى 20.93٪ وCO2 لقراءة 0٪. أعد الاتصال الهاتفي إلى نموذج بمجرد إدخال القيم المناسبة.
- تعيين نسبة O2 عالية. انقر على علامة التبويب ABCD-4 من برنامج التصوير بالجنب ة البارومترية ثم أدخل 20.93 تحت الوحدة العالية لخط C2. تحت كال عالية،وتغيير الوقت إلى 3 s وضرب التدبير.
- تعيينالنسبة المئوية المنخفضة لثاني أكسيد الكربون. أدخل 0 تحت كال منخفض من خط C3، ثم قم بتغيير الوقت إلى 3 s وانقر فوق قياس تحت كال منخفض.
- في برنامج خلاط الغاز، قم بتغيير قيمة O2 إلى 10% وقيمة ثاني أكسيد الكربونإلى 5%. انتظر عدة دقائق حتى يتكيف تدفق الغاز مع هذه القيم. على محللات التمثيل الغذائي، بدوره مقابض التكيف لمعايرة CO2 يساوي 5٪. تأكد من إعادة تشغيل الطلب إلى العينة بمجرد معايرة القيم.
- تعيينالنسبة المئوية العالية لثاني أكسيد الكربون. تأكد من استقرار قراءات المحلل قبل إدراج القيم المناسبة في O2 و CO2 على برنامج التصوير بالجنبة البارومترية. انقر فوق الوحدة العالية تحت C3 وأدخل 5. تغيير كال عالية إلى 3 s وضرب التدبير.
- تعيين النسبة المئوية المنخفضة O2. انقر فوق وحدة منخفضة تحت الخيار C2 وأدخل 10. انقر فوق كال منخفض،إدخال 3 ق، وانقر فوق قياس.
- تغيير قيم الغاز على خلاط الغاز مرة أخرى إلى 20.93٪ O2 و 79.07٪ N2. انتظر عدة دقائق حتى تتكيف الغرفة مع هذه القيم. كرر الخطوات 3.1\u20123.7 إذا لم تقرأ محللات التمثيل الغذائي تلقائيًا 20.93٪ O2 و 0% CO2، لضمان المعايرة المناسبة. تأكيد المعايرة المناسبة بشكل روتيني مع خزانات الغاز المعتمدة.
- إعادة فحص متر التدفق المتصلة بغرفة التصوير البُطفيب البارومتري. ضبط تدفق الهواء من وإلى الغرفة إلى معدلات مناسبة للتجربة (عادة، 0.1-0.3 لتر / دقيقة).
- بمجرد تطبيق جميع الإعدادات على برنامج التصوير بالبُنى البُنى البارومتري، انقر فوق موافق لبدء التسجيل.
4- التصوير البُقيّم البُرّيّ غير المقيّد
- تسجيل وزن الماوس ودرجة حرارة الجسم الأولية. انتظر 10 دقيقة قبل وضع الماوس في الغرفة، لجمع بيانات O2 و CO2 من غرفة فارغة. العمل في منطقة هادئة مألوفة للفئران حتى الضوضاء والروائح لا تتداخل مع جمع البيانات. تجنب أي أعطال محتملة، بما في ذلك فتح وإغلاق الأبواب أو الموظفين الذين ينتقلون إلى غرفة جمع البيانات أو خارجها.
ملاحظة: استخدم هذا البروتوكول المحدد 22 شهرا من العمر ذكر C57BL/6J الماوس.
- خلال الساعة الأولى، قم بتوثيق سلوكيات الماوس وتدوين ملاحظات مفصلة، بما في ذلك قيم محددة للتدفق في/خارج الغرفة.
- بعد 60 دقيقة من اعتياد الغرفة، ومشاهدة لشرائح من التنفس الهادئ لل60 دقيقة التالية. قائمة أي شرائح. تستمر ما لا يقل عن 15 سنة في الطول دون شم والاستمالة. اتخاذ تدابير درجة حرارة الجسم كل 10 دقيقة عند استخدام جهاز قابل للزرع.
- في نهاية التجربة، قم بإزالة الماوس من الغرفة ووضعه مرة أخرى في قفصه. وينبغي تنظيف جميع المعدات ومسحها تماما. إذا بقيت قطرات الماء، فاستخدم الهواء المضغوط لإزالتها.
5. تحليل نمط التنفس والتمثيل الغذائي
- افتح ملف مراجعة البُثومتر البُنى وراجع الملاحظات المسجلة للرفقب الذي يهم.
- فتح لوحة التمثيل الغذائي في البرنامج واتخاذ متوسط أول 10 دقيقة من O2 و CO2، عندما كانت الغرفة فارغة. سجل هذه القيم كـ FiO2 و FiCO2.
- عرض لوحة التدفق لبرنامج التصوير البُنى البارومتري. انقر بزر الماوس الأيمن تحليل السمات وتعيين المعلمات المناسبة. تحت علامة التبويب ميتا 1، أدخل FiO2 و FiCO2 من الخطوة 5.2، فضلا عن تدفق إلى الغرفة تحت ميتا 2،لحساب VO2 و VCO2.
- لنمط من تحليل التنفس، تأكد من الأوقات لمدة 15 ثانية من التنفس الهادئ باستخدام ملاحظات حول سلوك الحيوان، فضلا عن تتبع لوحة التدفق. أدخل الأوقات لفترات 15 s من التنفس الهادئ تحت حوار محلل البيانات المفتوح من علامة التبويب محلل البيانات. انقر فوق وضع عرض بارزر لإظهار شرائح 15 s المحددة ذات الاهتمام فقط.
- انقر فوق حفظ البيانات المشتقة المنقّبة. افتح ملف البيانات في جدول بيانات للحصول على البيانات المنقّبة.
6. تحليل ابينياس والأنفاس المعززة
- في ملف المراجعة المفتوحة، إنهاء وضع عرض محلل. انتقل إلى خيار إعداد الرسم البياني ضمن الإعداد > إعداد P3 وحدد عرض الصفحة تحت النوع. حدد 5 لعدد الأجزاء. أدخل -2 في المربع المسمى منخفض و 2 في المربع المسمى عالية لتدابير التدفق في ملليلتر / الثانية. تطبيق التغييرات.
- انتقل إلى علامة 30 دقيقة على لوحة تتبع التدفق.
- عد انقطاع النفس والأنفاس المعززة لمدة 30-60 دقيقة بعد وضع الماوس في الغرفة. تحديد فترات التنفس المعلق ة التي تدوم لفترة أطول من أو تساوي 0.5 سنة، مما يدل على انقطاع النفس. ويشار إلى الأنفاس المعززة من خلال ارتفاع حاد في تتبع التنفس فوق 1.25 مل / سنة يليه انخفاض حاد أقل من -0.75 مل / سنة.