Method Article

تقييم متشابك تعدد استخدام المشبك تصحيح كامل الخلية الكهربية

DOI:

10.3791/59461

⸱

April 23rd, 2019

 , 
1Neuroscience Program, Schulich School of Medicine and Dentistry, University of Western Ontario, 2Robarts Research Institute, Schulich School of Medicine and Dentistry, University of Western Ontario, 3Department of Physiology and Pharmacology, Schulich School of Medicine and Dentistry, University of Western Ontario

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نقدم هنا، على بروتوكول لتقييم تعدد متشابك الوظيفية باستخدام التصحيح كامل الخلية الكهربية المشبك في شرائح الدماغ الحادة.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

غالباً ما تشكل زوج من الخلايا العصبية في الجهاز العصبي المركزي، متشابك الاتصالات متعددة و/أو مواقع إطلاق سراح العصبي الوظيفي (تعدد متشابك). تعدد متشابك من البلاستيك، والتغيرات في التنمية وفي مختلف الظروف الفسيولوجية، محدداً هاما لفعالية انتقال متشابك. هنا، فإننا مخطط تجارب لتقدير الدرجة تعدد الاشتباكات العصبية التي تنتهي إلى خلية بوستسينابتيك معين باستخدام التصحيح كامل الخلية الكهربية المشبك في شرائح الدماغ الحادة. على وجه التحديد، هو استخدام تسجيل الجهد-المشبك لمقارنة الفرق بين السعة للتيارات عفوية بوستسينابتيك ضادات (سيبسكس) والتيارات بوستسينابتيك ضادات مصغرة (ميبسكس). النظرية وراء هذا الأسلوب هو أن تظهر المدخلات الزبائ أن المعرض تعدد سيبسكس كبيرة، وتعتمد على إمكانات العمل بسبب الإفراج المتزامن الذي يحدث في كل جهة اتصال متشابك. وفي المقابل، سينشئ الإفراج عن إمكانيات العمل المستقل (وغير متزامنة) أصغر مطال ميبسكس. هذه الوثيقة الخطوط العريضة لمجموعة من التجارب والتحليلات تميز بوجود تعدد متشابك ويناقش شروط وقيود تقنية. يمكن تطبيق هذه التقنية للتحقيق كيف مختلف التدخلات السلوكية أو دوائية أو البيئية في فيفو تؤثر على تنظيم جهات الاتصال متشابك في مناطق مختلفة من الدماغ.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

انتقال متشابك هو إليه أساسية للتواصل بين الخلايا العصبية والمخ وبالتالي الدالة. أيضا انتقال متشابك مجا ويمكن تغيير فعاليته بطريقة تعتمد على النشاط، وكذلك كما هو الحال في استجابة لإشارات مودولاتوري1. وهكذا، تم دراسة الدالة متشابك نقطة تركيز رئيسية لأبحاث علم الأعصاب. تصحيح كامل الخلية الكهربية المشبك هو تقنية متعددة الاستخدامات التي تمكننا من فهم، بوضع تصاميم تجريبية وتحليلات البيانات، الآليات الفيزيائية-الحيوية والجزيئية متعمقة لانتقال متشابك. اتباع نهج استخداماً، ربما نظراً لبساطة الأسلوب والمفهوم، هو قياس التيارات بوستسينابتيك ضادات/المثبطة مصغرة (لي/إيبسكس) تحت الجهد المشبك التكوين2،3

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

جميع التجارب على الحيوانات تقرها "اللجنة العناية بالحيوان" لجامعة ويسترن أونتاريو وفقا "المجلس الكندي لإرشادات العناية بالحيوان" (سياسة الاستخدام المقبول #2014-031).

1-الحلول

  1. تشريح الحل
    1. الرجوع إلى الجدول 1 لتكوين الحل تشريح.
    2. إعداد حل أسهم 20 x مسبقاً وتخزينها عند 4 درجة مئوية لمدة تصل إلى شهر واحد.
    3. 1 x تشريح حل، حل3والجلوكوز السكروز في ddH2س ناكو، وإضافة الأسهم 20 x. التأكد من الاسموليه بين موسم 315-320 وتخزين الحل لمدة أسبوع واحد لا يزيد على 4 درجة مئوية.
    4. ملء قنينة اثنين مع 100 مل من تقطيع الحل وغطاء لهم مع بارافيلم. البرد الحل في ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

البروتوكول أعلاه توضح طريقة لاستخدام تصحيح كامل الخلية المشبك الكهربية لفحص درجة تعدد متشابك، استخدام الماوس طائي الخلايا العصبية كمثال. ينبغي أن يؤدي هذا الأسلوب إعداد شريحة الخلايا قابلة للحياة السليمة التي لم تقم تورم الغشاء أو نواة (الشكل 1). كل خطوة في البروتوكول المهم لصحة الأنسجة والنوعية من التسجيلات.

figure-results-1
رقم 1: شريحة.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

واحد شرط هام لتجربة الكهربية المشبك تصحيح ناجح هو الحصول على شرائح/الخلايا السليمة. لدينا بروتوكول وصف هو الأمثل لطائي الشرائح التي تحتوي على الخلايا العصبية التشفيير. الدماغ الأخرى مجالات قد تتطلب تعديل الحلول و تشريح أساليب21،،،من2223،24. للتسجيل، من الأهمية بمكان إلا قبول تسجيلات مستقرة باستمرار رصد خصائص الخلية مثل غشاء المقاومة، المقاومة السعة والوصول. يمكن تقليل السعة ابسك زيادة في المقاو.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب لا تمت بصلة إلى الكشف عن

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ج. س. تلقي "المنح الدراسية العليا في أونتاريو". W.I. تلقت "زمالة محقق جديد" من كندا "بحوث الصحة العقلية". ويدعم هذا العمل العاملة المنح إلى W.I من العلوم الطبيعية ومجلس البحوث الكندي الهندسية (06106-2015 رجبين) والمعهد الكندي "البحوث الصحية" (PJT 148707).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
1 مل حقنةBD309659
10 شفراتفيشر العلمية / أخرى35698
22 شفرةVWR / أخرى21909-626
22 & مرشحات المحقنة MMilipore09-719-000
Adson forecepsHarvard Instruments72-8547
مقص حاد بزاويةHarvard Instruments72-8437
ClampexMolecular DevicespClamp 10
شفرة مزدوجةالحواف VWR74-0002
ورق ترشيحSigma / others1001090
فرشاة الرسمالدقيقة فيشر / مختلف15-183-35 / مختلف
أنبوب تشتت الغازVWRLG-8680-120
IsofluraneFresenius Kabi / othersM60303
Krazy الغراءمختلف
تحليل مصغرSynaptosoftMiniAnalysis 6
OsmomoterWescor Incنموذج 5600
ParafilmSigmaPM-996
ماصة باستورVWR14672-200
درجة الحموضة مترMettler ToledoFE20-ATC
لمبة مطاطيةVWR82024-550
مقبض مشرط رقم 3هارفارد إنسترومنتس72-8350
مقبض مشرط رقم 4هارفارد إنسترومنتس72-8356
شفرة أحادية الحافةVWR55411-050
قطاعة الاهتزازLeicaVT1200S
نظام تنقية المياهMilliporeMilli-Q Academic A10
غطاء لوحة البئرفيشر / مختلف07-201-590 / مختلف
< قوي > مواد كيميائية / كواشف < / قوي>
4-APSigma275875
BAPTA المجسات الجزيئيةB1204
CaCl 2< / sub> * 2H 2 < / sub>OSigmaC7902
CdCl 2< / sub>sigma202908
DNQXTocris189
EGTASigmaE3889
الجلوكوزسيجماG5767
هيبسسيجماH3375
K2-ATPسيجماA8937
KClسيجماP9333
K-gluconateSigmaG4500
MgCl2< / sub> * 6H2< / sub>OSigmaM2670
درجة البيولوجيا الجزيئية المياهسيجماW4502-1L
Na3< / sub>GTPSigmaG8877
NaClBioshopSOD001.1
Na-gluconateSigmaS2054
NaH2< / sub>PO4< / sub>Sigma71504
NaHCO3< / sub>SigmaS6014
PicrotoxinsigmaP1675
SrClSigma255521
السكروزBioshopSUC507.1
TTXAlamone LabsT-550
yDGGTocris6729-55-1

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Abbott, L. F., Nelson, S. B. Synaptic plasticity: taming the beast. Nature Neuroscience. 3 (Supp), 1178-1183 (2000).
  2. Hsia, A. Y., Malenka, R. C., Nicoll, R. A. Development of Excitatory Circuitry in the Hippocampus. Journal of Neurophysiology. 79 (4), 2013-2024 (1998).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Synaptic MultiplicityWhole cell Patch clampSpontaneous EPSCsMiniature EPSCsAction Potential dependent ReleaseTTX Cadmium BlockadeStrontium ACSF ApplicationGamma DGG Antagonist TestAfferent Stimulation ProtocolAccess Resistance Monitoring

Related Articles