مقالة منهجية

تقنيات زراعة الكلب في الحيوانات الكبيرة والصغيرة

DOI:

10.3791/59574

⸱

يوليو 30, 2019

 ,  ,  ,  , 
1Rabies Laboratory, Wadsworth Center, New York State Department of Health

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

والهدف من هذا البروتوكول هو إظهار تقنيات المحاصيل المأمونة في الحيوانات الصغيرة والكبيرة للحصول على عينات مرضية من الأنسجة لاختبار داء الكلب.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يتلقى مختبر داء الكلب التابع لوزارة الصحة في ولاية نيويورك ما بين 6000 و9000 عينة سنوياً، ويجري اختبار داء الكلب في الولاية بأكملها، باستثناء مدينة نيويورك. مختبر داء الكلب necropsies مجموعة متنوعة من الحيوانات تتراوح في الحجم من الخفافيش إلى bovids. معظم هذه العينات هي الحيوانات التي تظهر علامات عصبية، ومع ذلك، أقل من 10٪ اختبار إيجابي فعلا لداء الكلب. مما يعني الصدمة، والآفات أو غيرها من العوامل المعدية كسبب لهذه الأعراض. بسبب خطر الهباء الجوي العوامل المعدية غير المشخصة، لا يستخدم مختبر داء الكلب أدوات الطاقة أو المناشير. وسيتم تقديم ثلاث تقنيات necropsy للالحيوانات التي لا يمكن اختراق جماجمها مع مقص. وقد نفذ المختبر هذه التقنيات للحد من التعرض المحتمل للعوامل المعدية، والقضاء على التلاعب غير الضروري في العينة وتقليل وقت المعالجة. مزايا تقنية مفضلة مقابل أخرى تخضع للفردي المدرب معالجة العينة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

إن العمل على أرضية مختبر داء الكلب أمر خطير بطبيعته. في بعض الأحيان، تصل العينات مع ريش porcupine جزءا لا يتجزأ، والأجسام الغريبة بما في ذلك الأسهم / الرصاص / الكريات أو شظايا العظام المكشوفة التي قد تخترق التفاف الشحن واقية. التعبئة والتغليف غير لائق يمكن أن يؤدي إلى تسرب، مما يعرض للخطر الأفراد الذين فك العينات. وبالإضافة إلى الإصابة البدنية، فإن فنيي المحاصيل النيكروبية يتعرضون لخطر التعرض لعوامل معدية حيوانية غير معروفة من الجهاز العصبي الوطني وسوائل الجسم في العينات. بالإضافة إلى ذلك ، قد تنقل الطفيليات الخارجية التي تحملها العينة أمراضًا حيوانية أخرى ، حيث يُنظر إلى البراغيث والقراد عادة ً على الحيوانات المقدمة. وحسب الموقع الجغرافي والأنواع التي تنطوي عليها الأمراض المعرضة تختلف. فيروسات الأربو، مثل فيروس التهاب الدماغ في الفروسية الشرقية (EEEV) أو فيروس غرب النيل (WNV)، والأمراض المنقولة بالقراد بما في ذلك مرض لايم أو التولاريميا، والبكتيريا المسببة لحم ضفية السل أو السل، وprions المعدية اسم عدد صغير من المخاطر المحتملة1 , 2 , 3.

والغرض من هذه الأساليب هو إظهار تقنيات المحاصيل الآمنة والفعالة باستخدام الأدوات التي تقلل إلى أدنى حد من إمكانية الهباء الجوي على عكس أدوات الطاقة أو المناشير4و5. عادة ، فإن المحاصيل من الحيوانات الصغيرة في مختبر داء الكلب يتطلب قطع العضلات القحفية واستخدام مطرقة وإزميل لفتح الجزء الظهري الكنوع من calvarium6. إزالة هذه المنطقة من calvarium يكشف الدماغ الخلفي، بما في ذلك المخيخ بأكمله وجذع الدماغ القحفي. يمكن إجراء تقنيات المحاصيل النازرة المعدلة على الجزء البطني من الجمجمة، وتجنب العضلات القحفية الكبيرة والمناطق الأكثر سمكا من الجمجمة. ومع ذلك، فإن هذه التقنيات النيوروبسية المعدلة لا يمكن إلا عندما تكون العينة بدون فقرات عنق الرحم.

وبالمثل ، يمكن إزالة أنسجة الدماغ في الحيوانات الكبيرة عن طريق فصل العضلات القحفية وفتح الجزء الظهري الصددي من الجمجمة7. ويلزم بذل جهد كبير لفضح المخيخ وجذع الدماغ حيث أن جماجم الحيوانات الأكبر حجما ً هي عموماً أكثر سمكاً. لتجنب اختراق الجمجمة ، يتم وضع رأس الحيوان الكبير بحيث يواجه الجزء الفينتو-كودال من الجمجمة الفني. باستخدام الأدوات المعدلة، تتم إزالة المخيخ وجذع الدماغ من خلال ماغنوم اللبو. وهذا يشبه طريقة اكتساب العينة التي أوصى بها مختبر الاتحاد الأوروبي المرجعي TSE لتحقيقات اعتلال الدماغ الاسفنجي (TSE) المنقولة8. يجب إزالة الفقرات القحفية مسبقاً لتوفير الوصول إلى ماغنوم اللبو.

وتطبيق هذه التقنيات مفيد للفنيين المدربين تدريبا مناسبا في مختبرات داء الكلب. كما يتلقى مختبر داء الكلب عينات من مختلف الأحجام، من الخفافيش الأحداث إلى الكبار مشروع الخيول9،والفني لديه عدة طرق للاختيار من بينها على أساس الظروف الفردية. كما أن الطريقة المثبتة لحيواني كبير مناسبة أيضاً للأطباء البيطريين الذين يقومون بزراعة النيبروفيات في الميدان، حيث أن شحن رأس حيواني كبير بالكامل لاختبار داء الكلب أمر مرهق ومكلف. ومن خلال تنفيذ أي من هذه التقنيات، سيؤدي ذلك إلى تحسين السلامة عن طريق تقليل إمكانات إنتاج الهباء الجوي، وتقليل مناولة العينة، وتوفير وقت المعالجة. ومع ذلك، وبما أن الحقل لا يتمتع بنفس المزايا التي يتمتع بها المختبر الذي أنشئ خصيصاً لاختبار داء الكلب، فمن الضروري أن تركز أي تعديلات تُدخلت على هذه الإجراءات على السلامة، ولا سيما استخدام معدات الحماية الشخصية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت الموافقة على جميع الطرق الموصوفة من قبل لجنة الرعاية والاستخدام المؤسسية للحيوانية التابعة لمركز وادسوورث (IACUC).

1- الإعداد

  1. دون PPE، في الحد الأدنى لحماية العين (النظارات أو درع الوجه)، وقناع الجراحية أو N-95، والقفازات غير اللاتكس.
  2. إعداد منطقة العمل، من الناحية المثالية مجلس الوزراء السلامة الحيوية (BSC)، مع سطح العمل المتاح تغطية(على سبيل المثال، ورق الكرافت أو منصات ماصة) والأدوات necropsy نظيفة (الشكل 1).
  3. وضع العينة على سطح العمل واستخدام الأدوات للتلاعب بها لتقييم حالة العينة بما في ذلك الأدلة على التحلل، والأضرار التي لحقت الجمجمة، والمخاطر المحتملة (على سبيل المثال، ريش porcupine، شفرات مشرط)، ونوعية قطع الرأس.

2. طريقة البطني

ملاحظة: عندما يتم قطع رأس العينة بشكل صحيح في خط الفك، سيتم الكشف عن ماغنوم الفورامن وcondyle القذالي. الطريقة البطنية أقل تعقيدا لاسترداد المخيخ وجذع الدماغ.

  1. وضع العينة مع الجانب البطني حتى والأنف توجيه غير محالة نحو الجزء الخلفي من BSC.
  2. عقد مطرقة العظام / مطرقة في اليد اليمنى (إذا اليد اليمنى) وفي الوقت نفسه عقد إزميل أعضاء المجلس في اليد اليسرى.
  3. ضع الإزميل في زاوية 45 درجة مع نقطة زاوية الإزميل توجيه بين الجانب الأيمن من العظام الزمنية والعظام القذالي مما يجعل فتح "V".
  4. ضرب الجزء العلوي من إزميل مع المطرقة حتى العظام اثنين منفصلة. جعل قطع إلى المتاخمة للعظام أساسالفيني.
  5. كرر على الجانب الأيسر من العظام الزمنية / العظام القذالي (الشكل2A).
  6. ثني منطقة "V" من الجمجمة إلى الأسفل مع إزميل. كشف كامل منطقة rhombencephalon من الدماغ (المخيخ وجذع الدماغ) (الشكل2B).
  7. استخرج جذع الدماغ والمخيخ بالمقص وملقط. إزالة أي قطع المتبقية من الجمجمة إذا لم الجذعية الدماغ والمخيخ لم يخرج في قطعة واحدة.

3. طريقة الظهر

ملاحظة: إذا كانت العينة لديها قطع رأس ضعيف (اللومانوم اللاظاهرة) ولا يمكن إزالة الرقبة بسهولة أثناء المحاصيل أو إذا كان يشتبه في تلف المخيخ، يجب استخدام الطريقة الظهرية.

  1. وضع dorsally العينة مع الأنف توجيه غير محتفى نحو الجزء الخلفي من BSC.
  2. باستخدام tenacula الورم، واستيعاب العضلات الزمنية اليسرى مع أسنان tenacula وقفل عن طريق الضغط على المقبض.
  3. قطع العضلات الزمنية وصولا الى العظام مع سكين نحت حاد.
  4. تدوير العينة 180 درجة مع tenacula وسكين (وليس اليد) وتكرار العملية على العضلات الزمنية المعاكسة. كشف الجمجمة.
  5. ضع إزميل في زاوية 45 درجة مع نقطة زاوية الإزميل في وسط الجمجمة عند منعطف العظم الجداري والباري.
  6. ضرب الجزء العلوي من إزميل مع مطرقة حتى يتم فتح أفقي على النصف العلوي من الجمجمة في العظام الجدارية.
  7. تدوير العينة 180 درجة وتكرار العملية على الجانب الآخر.
  8. إدراج نقطة من إزميل في نهاية قطع 1 (الشكل3A)وعلى 90 درجة من فتح أفقي. ضرب مع المطرقة حتى يصل فتحة العظام القذالي (حوالي 10 سم اعتمادا على حجم العينة).
  9. لفة العينة وكرر على الجانب الآخر في نهاية قطع 2.
    ملاحظة: مع عينة الظهرية والأنف المتمركزة نحو الجزء الخلفي من BSC، فتحات في الجمجمة تشبه رأسا على عقب "U".
  10. أدخل أسنان التيلاكولا في الجمجمة في الجزء السفلي من "U" ونقب نحو نفسه. فضح نهاية الكاودال من المخوّل والمخيخ (الشكل3B).
  11. استخدام مقص كما مغرفة ونقب من المخيخ بأكمله من داخل التجويف.
  12. استخدام ملقط الأنسجة لندف خارج الدماغ تنبع من.

4. طريقة حيوانية كبيرة

  1. وضع العينة بحيث الجزء الظهري من الجمجمة على اتصال مع سطح necropsy مع الجزء الكاوي ة من الجمجمة وforamen magnum التي تواجه الفني.
  2. أدخل السكين الخنجر المعدل في ماغنوم الفرجبين بين الحبل الشوكي والغضروف الشوكي قدر الإمكان.
  3. النتيجة حول الحبل الشوكي لفصل المخيخ والدماغ تنبع من السحايا العمود الفقري. بعد إدخال السكين من خلال ماغنوم اللطوام، زاوية بلطف السكين لمتابعة على طول الجمجمة قدر الإمكان.
  4. أدخل ملعقة كيمياء أو ملعقة رفيعة، طويلة التعامل معها في الفضاء بين الأنسجة العصبية والسحايا الشوكي.
  5. التحقيق حول الحبل الشوكي والمخيخ لضمان قطع الاتصال إلى السحايا العمود الفقري.
  6. عقد جذع الدماغ مع ملقط. من ناحية أخرى، تقدم ملعقة rostrally ثم dorsally لسكوب حتى المخيخ. في وقت واحد سحب مرة أخرى على جذع الدماغ مع ملقط ومغرفة من المخيخ باستخدام الملعقة.
    ملاحظة: قد يستغرق الأمر أكثر من محاولة واحدة لاستعادة المخيخ كافية لاختبار داء الكلب.

5. آخر necropsy

  1. التخلص من جميع المواد التي يمكن التخلص منها (القفازات، والوسادات، وأغطية منطقة العمل) والأنسجة غير المستخدمة في النفايات الخطرة بيولوجياً.
  2. تنظيف وتطهير جميع الأدوات مع طريقة المتاحة (على سبيل المثال، غسالة الصحون الصناعية، الأوتوكلاف، مطهر الكيميائية، يغلي).
  3. تنظيف وتطهير جميع أسطح العمل مع التبييض 20٪ و / أو 70٪ الإيثانول.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

جميع العينات الأرضية المقدمة مع الجماجم بين 31 يناير 2019 و28 فبراير 2019 كانت لديها معلومات عن وجود الرقبة وطريقة النيوروبسي التي تم جمعها. وخلال تلك الفترة، تم زرع 170 رأساً مع تمثيل 18 نوعاً. 52% (89/170) تم قطع رأسها بشكل صحيح. أما الفقرات المتبقية فكانت مرفقة بفقرة واحدة على الأقل، بما في ذلك ثلاث عينات من الجسم كله. استعملت الأسلوب بطنيّة كان 75% (128/170) من الوقت, من أنّ, أعناق كان حاضرة على 49. العينات المقدمة مع الرقبة سوف يكون إزالتها خلال necropsy للسماح للطريقة البطني كلما كا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

العينات المقدمة لداء الكلب necropsy غالبا ما يكون لها تاريخ من العلامات السريرية متوافقة مع مرض عصبي. قد يرتبط وجود المرض السريري بمجموعة متنوعة من الاضطرابات، بما في ذلك الأمراض الحيوانية، مما يزيد من خطر الإصابة بعدوى مكتسبة في المختبر على الموظفين. وللحد من هذه المخاطر، تم تنفيذ تقنيات تقلل من مناولة العينات ومعالجتها.

تمثل الأساليب التي تم عرضها حدثًا necropsy لإزالة الأنسجة المطلوبة من الحيوان الواحد فقط. تتم معالجة عينات متعددة أكثر شيوعًا في نوبة وهناك حاجة إلى الرعاية لضمان عدم وجود تل...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ونحن ممتنون لمركز وادسوورث التابع لوزارة الصحة في ولاية نيويورك لدعمه هذا المشروع. كما نود أن نعترف بالدعم المقدم من إيمي ويلسي وفرانك بليسديل من مركز ودسوورث التابع لوزارة الصحة، وLL Ranch، ألتامونت، نيويورك.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
ملعقة الكيمياءأي
مقص مايونيز منحني حادحاد Sklar14-2055Sklar مقص تشغيل 5-1 / 2 بوصة ممتاز أو من الدرجة الفولاذ المقاوم للصدأ مقبض خاتم الإصبع المنحني حاد / حاد
بجودة المطاعمDexterP948488 "سكين فائدة صدفي ، مقبض أبيض
قفل الورم tenaculaالماس العلمي و SurgicalsN / ACzerny Tenaculum Troopp
سكين خنجر معدل (سكين نحت بطول 6.5 بوصة بعرض 0.5 بوصة)DexterP94848معدل 8 بوصات سكين صدفي ، مقبض أبيض
مطرقة مطرقة تقويم العظامMortechN / Aمطرقة ما بعد الوفاة مع خطاف
عضو مجلس شارب إزميل عظمي لتقويم العظامشاندون60-5شفرة إزميل عضو المجلس: 2 بوصة × 2.25 في المعيار 7 في
ملعقة كبيرة حادة أو ملعقة أخرى ذات مقبض طويلأي
ملقط تضميد مناديل ناعم بدون أسنانشاندون63-03ملقط إبهام شاندون برودبوينت ضمادة ملقط إبهام
خالية من البودرة قفازات خالية من اللاتكسأي
نظارات أمان أو نظارات واقية أو واقي للوجهأي
الجراحة أو قناع N-95أي
ورق كرافت ، ورق جزار ، وسادة ماصة ، إلخ
كبير حاد

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Centers for Disease Control and Prevention (CDC). West Nile virus activity - United States, 2009. MMWR Morbidity and Mortality Weekly Report. 59 (25), 769-772 (2010).
  2. McDaniel, C. J., Cardwell, D. M., Moeller, R. B. Jr, Gray, G. C. Humans and cattle: A review of bovine zoonoses. Vector Borne and Zoonotic Diseases. 14 (1), 1-19 (2014).
  3. Spickler, A. R. Zoonotic diseases. Merck Veterinary Manual. , Available from: https://www.merckvetmanual.com/public-health/zoonoses/zoonotic-diseases (2019).
  4. Wenner, L., Pauli, U., Summermatter, K., Gantenbein, H., Vidondo, B., Posthaus, H. Aerosol generation during bone-sawing procedures in veterinary autopsies. Veterinary Pathology. 54 (3), 425-436 (2017).
  5. Green, F. H. Y., Yoshida, K. Characteristics of aerosols generated during autopsy procedures and their potential role as carriers of infectious agents. Applied Occupational and Environmental Hygiene. 5 (12), 853-858 (1990).
  6. Barrat, J. Simple technique for the collection and shipment of brain specimens for rabies diagnosis. Laboratory techniques in Rabies 4th Edition. Meslin, F. X., Kaplan, M. M., Koprowski, H. , World Health Organization. 425-427 (1996).
  7. Ness, S. L., Bain, F. T. How to perform an equine field necropsy. American Association of Equine Practitioners. 55, 313-316 (2009).
  8. Animal & Plant Health Agency. Sample requirements for TSE testing and confirmation – EURL guidance. , Available from: https://protect2.fireeye.com/url?k=09f00f8d-55d40ec4-09f2f6b8-0cc47aa8d394-3f805f032cc98df8&u=https://science.vla.gov.uk/tse-lab-net/documents/tse-oie-rl-samp.pdf (2019).
  9. New York State Department of Health, Wadsworth Center. Rabies reports. , Available from: https://www.wadsworth.org/programs/id/rabies/reports (2019).
  10. CDC. Protocol for postmortem diagnosis of rabies in animals by direct fluorescent antibody testing: A minimum standard for rabies diagnosis in the United States. , Available from: https://www.cdc.gov/rabies/pdf/rabiesdfaspv2.pdf (2019).
  11. Miller, L. D., Davis, A. J., Jenny, A. L., Fekadu, M., Whitfield, S. G. Surveillance for lesions of bovine spongiform encephalopathy in U.S. cattle. Developments in Biological Standardizations. 80, 119-121 (1993).
  12. Andrews, C., Gerdin, J., Patterson, J., Buckles, E. L., Fitzgerald, S. D. Eastern equine encephalitis in puppies in Michigan and New York states. Journal of Veterinary Diagnostic Investigation. 30 (4), 633-636 (2018).
  13. Appler, K., Brunt, S., Jarvis, J. A., Davis, A. D. Clarifying indeterminate results on the rabies direct fluorescent antibody test using real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction. Public Health Reports. 134 (1), 57-62 (2019).
  14. Chapter 7. Brain removal. Laboratory techniques in Rabies 5th Edition. Rupprecht, C. E., Fooks, A. R., Abela-Ridder, B. , World Health Organization. 67-72 (2018).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة