مقالة منهجية

نموذج الأوناوجراف ة الدم المحيطي البشري (PBMC) غير المشروع لأبحاث الأورام المناعية المترجمة (I-O)

DOI:

10.3791/59679

⸱

أغسطس 15, 2019

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1BeiGene (Beijing) Co., Ltd.

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نحن نصف خلية الدم الطرفية البشرية أحادية النووية (PBMC) - على أساس أنسنة نموذج الماوس xenograft لبحوث الأورام المناعية الترجمة. ويمكن أن يكون هذا البروتوكول بمثابة مبدأ توجيهي عام لوضع نماذج مماثلة وتوصيفها لتقييم العلاج بالمعالجة I-O.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

اكتشاف وتطوير العلاج المناعي الأورام (I-O) في السنوات الأخيرة يمثل معلما في علاج السرطان. ومع ذلك، لا تزال تحديات العلاج قائمة. وتشكل النماذج الحيوانية القوية والمتصلة بالأمراض موارد حيوية لمواصلة البحث والتطوير قبل السريرية من أجل معالجة مجموعة من نقاط التفتيش المناعية الإضافية. هنا، نقوم بوصف خلية أحادية نوناأحادية للدم المحيطي البشري (PBMC) - نموذج xenograft ذو الطابع الإنساني. يستخدم BGB-A317 (Tislelizumab)، وهو جسم مضاد مضاد PD-1 في مرحلة متأخرة من التحقيق، كمثال لمناقشة إنشاء منصة، وتوصيف النموذج وتقييمات فعالية المخدرات. تدعم هذه الفئران الأنسنة نمو معظم الأورام البشرية التي تم اختبارها، مما يسمح بتقييم علاجات I-O في سياق كل من المناعة البشرية والسرطانات البشرية. وبمجرد إنشائها، يكون نموذجنا فعالاً من حيث الوقت والتكلفة نسبياً، وعادة ما يسفر عن نتائج قابلة للاستنساخ إلى حد كبير. نقترح أن البروتوكول المبين في هذه المادة يمكن أن تكون بمثابة مبدأ توجيهي عام لإنشاء نماذج الماوس المعاد تشكيلها مع PBMC الإنسان والأورام للبحوث I-O.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الأورام المناعية (I-O) هو مجال سريع التوسع لعلاج السرطان. وقد بدأ الباحثون مؤخرا لتقدير الإمكانات العلاجية لتعديل وظائف الجهاز المناعي لمهاجمة الأورام. وقد أظهرت حواجز المناعة الحصار أنشطة مشجعة في مجموعة متنوعة من أنواع السرطان، بما فيذلك سرطان الجلد، سرطان الخلايا الكلوية، الرأس والرقبة، الرئة، المثانة وسرطان البروستاتا 1،2. على عكس العلاجات المستهدفة التي تقتل الخلايا السرطانية مباشرة، تقوي علاجات I-O الجهاز المناعي في الجسم لمهاجمة الأورام3.

وحتى الآن، تم وضع العديد من النماذج الحيوانية ذات الصلة I-O. وتشمل هذه: 1) خطوط الخلايا ورم الماوس أو homograft الورم في الفئران syngeneic; 2) الأورام العفوية المستمدة من الماوس المهندسة وراثيا (GEM) أو الحث المسرطن؛ 3) GEMs chimeric مع ضرب في هدف (أهداف) المخدرات البشرية في جهاز المناعة murine وظيفية؛ و4) الفئران مع المناعة البشرية المعاد تشكيلها المزروعة مع الخلايا السرطانية البشرية أو xenografts المستمدة من المريض (PDXs). كل من هذه النماذج لها مزايا واضحة، فضلا عن القيود، والتي تم وصفها واستعراضها على نطاق واسع في أماكن أخرى4.

إعادة تشكيل المناعة البشرية في الفئران التي تعاني من نقص المناعة قد تم تقديرها بشكل متزايد كنهج ذات الصلة سريريا للبحوث I-O الترجمة. وعادة ما يتحقق ذلك إما من خلال 1) تطعيم الخلايا المناعية للبالغين (على سبيل المثال، الخلايا أحادية النووية أحادية اللانووية في الدم المحيطي (PMBC))5أو6أو 2) تطعيم الخلايا الجذعية المكونة للدم (HSC) من، على سبيل المثال، دم الحبل السري أو الجنين الكبد7,8. هذه الفئران أنسنة يمكن أن تدعم نمو الأورام البشرية، مما يسمح بتقييم العلاجات I-O في سياق كل من المناعة البشرية والسرطانات البشرية. وعلى الرغم من المزايا، فإن تطبيقات الفئران الأنسنة في أبحاث I-O عادة ما تعوقها عدة شواغل، مثل وقت تطوير النموذج الطويل والتكلفة المرتفعة إلى حد كبير.

هنا، نقوم بوصف نموذج الإنسان القائم على PBMC التي يمكن تطبيقها على نطاق واسع لدراسات I-O الترجمة. هذا النموذج هو نسبيا الوقت وفعالة من حيث التكلفة مع استنساخ عالية في دراسات الفعالية. وقد تم استخدامه في المنزل لتقييم العديد من العلاجات I-O حاليا تحت التنمية قبل السريرية والسريرية. BGB-A317 (Tislelizumab)، وهوجسم مضاد مضاد PD-1 9، يستخدم كمثال لمناقشة تطوير النموذج، والتوصيف، والتطبيقات الممكنة لتحليل فعالية مكافحة الورم.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وكانت جميع الإجراءات التي أجريت في الدراسات التي شملت مشاركين من البشر متفقة مع المعايير الأخلاقية لـ BeiGene و/أو لجنة البحوث الوطنية ومع إعلان هلسنكي لعام 1964 وتعديلاته اللاحقة أو المعايير الأخلاقية المماثلة. وتم الحصول على موافقة مستنيرة من جميع المشاركين المشاركين المشاركين في الدراسة. وقد وافق مجلس المراجعة الداخلية في بيجين على جميع الإجراءات التي أجريت في الدراسات المتعلقة بالحيوانات. وقد تم تعديل هذا البروتوكول على وجه التحديد لتقييم BGB-A317 (Tislelizumab) في الفئران NOD/SCID أنسنة.

1 - وضع نموذج قائم على برنامج الإيثر الثنائي الفينيل المتعدد البروم

  1. الاستئصال النخاعي للفئران NOD/SCID باستخدام سيكلوفوسفاميد: تحديد الجرعات المثلى
    1. شراء الإناث NOD / SCID الفئران (6-8 أسابيع).
      ملاحظة: جميع الفئران المشاركة في هذه الدراسة كانت أنثى.
    2. إعداد سيكلوفوسفاميد (CP) بجرعات مختلفة (50 و100 و150 ملغم/كغم) في المالحة. إعداد disulfiram (DS) في 0.8٪ توين-80 في المالحة في 125 ملغ / كغ.
      ملاحظة: تم إعداد تركيزات مختلفة من CP لتمكين إدارة كميات متساوية من محلول المخدرات للفئران الحصول على جرعات مختلفة من CP.
    3. علاج الحيوانات مع CP (i.p.) وDS (p.o.) مرة واحدة في اليوم لمدة 2 أيام. إعطاء DS (p.o.) 2 ساعة بعد كل جرعة من CP.
      ملاحظة: DS يقلل من السمية البولية من CP في الفئران، وقد اقترح CP جنبا إلى جنب مع DS أن يكون العدلات أطول أمدا من الحيوانات المعالجة مع CP وحدها10 نظام الجرعة من CP قد تحتاج إلى أن تكون محددة مسبقا قبل الدراسات الفعلية ووجد أن تختلف قليلا بين سلالات الماوس المناعية المختلفة.
    4. جمع عينات الدم من الجيوب الوريدية المدارية ونقلها إلى أنابيب EDTA-K المغلفة على الجليد في اليوم 0 (1 ح قبل الجرعة 1)، اليوم 2 (24 ساعة بعد الجرعةالثانية) واليوم 4 (72 ساعة بعد الجرعةالثانية).
    5. فحص تأثير الاستئصال النقوي بعد العلاج CP و DS من قبل FACS. استخدام الفئران المضادة للماوس CD11b (M1/70)، الفئران المضادة للماوس Ly6C (HK1.4، ) والفئران المضادة للماوس Ly6G (1A8) لgating CD11b+ Ly6Gعالية كما العدلات، CD11b+Ly6Cعالية كما monocytes11،12.
    6. تسجيل وزن الجسم والظروف الصحية للفئران يوميا لمدة أسبوع واحد. يتم تحديد الجرعة المثلى من CP و DS كنظام يؤدي إلى استنفاد أقصى قدر من العدلات والخلايا الأحادية دون التسبب في سمية شديدة للفئران.
  2. زرع PBMC البشري وتطعيم الورم: إعداد نموذج
    1. عزل مركبات ثنائي الفينيل متعدد البروم البشرية عن الجهات المانحة السليمة عن طريق تدرج الكثافة في الطرد المركزي وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة.
    2. علاج مسبق للفئران مع CP و DS كما هو مبين في الخطوة 1.1.2 و 1.1.3 لزيادة كفاءة زرع.
    3. 20 إلى 24 ساعة بعد الجرعة الثانية من CP و DS، حقن خط الخلايا السرطانية البشريةمثل خلايا A431 (ATCC، 2.5 × 10 6) و 5 × 106 مركبات ثنائي الفينيل متعدد البروم معزولة (مختلطة في ما مجموعه 200 ميكرولتر من ملح الفوسفات المخزنة (PBS) التي تحتوي على 50٪ Matrigel) ، أو شظايا الورم (3 × 3 × 3 مم3، في حجم إجمالي قدره 200 ميكرولتر PBS تحتوي على 50٪ Matrigel) و 200 ميكرولتر من 5 × 106 PBMCs (100 ميكرولتر لكل منهما إلى الجانب الأيسر والأيمن من جزء الورم غير المطعم) (s.c.) تحت الجلد في الجناح الأيمن للالحيوانات.
    4. قياس حجم الورم الأساسي وسجل مرتين في الأسبوع لمدة 4-6 أسابيع.
      ملاحظة: سيتم قتل الفئران بمجرد أن تفقد أوزان الجسم أكثر من 20٪ أو يصل حجم الورم إلى 2000 مم3 أو الورم تقرح.
    5. قتل الفئران في غرف الغاز مع ثاني أكسيد الكربون. جمع أنسجة الورم كله في الفئران ضحى مع مقص العيون ومعالجتها لتحليل الأنسجة والكيمياء المناعية (IHC). فحص تعبيرات CD8 و PD-1 و PD-L1 البشرية في هذه الأنسجة. راجع الخطوة البروتوكولية 4.

2. PBMC شاشة المانحين

  1. عرض فريق من الجهات المانحة للPBMC بسبب الاختلافات المتوقعة الناتجة عن مركبات ثنائي الفينيل متعدد البروم التي تم جمعها من الأفراد. استخدام خلايا A431 التي تحقن بصورة مشتركة مع مركبات ثنائي الفينيل متعدد البروم من مختلف الجهات المانحة وفقاً للإجراءات المبينة في الخطوة 1-2.
    ملاحظة: وقد تم فحص أكثر من 50 من المتبرعين الأصحاء في هذا البرنامج في الدراسة من أجل الحصول على عدد كاف من المانحين المناسبين. وقد يقرر الباحثون الذين يرغبون في اعتماد هذا البروتوكول بأنفسهم عدد المتبرعين الصحيين في برنامج PBMC الذين سيتم فحصهم، استناداً إلى تصميم الدراسات المخطط لها.
  2. مراقبة حجم الورم مرتين في الأسبوع عن طريق قياس مع الفرجار.
    ملاحظة: قد يختلف معدل نمو الورم مع PBMC من مختلف الجهات المانحة.
  3. جمع أنسجة الورم في حجم متوسط من 200-500 مم3 ومعالجتها لتحليل الأنسجة والكيمياء المناعية (IHC). فحص تعبيرات CD8 و PD-1 و PD-L1 البشرية. راجع الخطوة 4 للحصول على بروتوكول مفصل.
  4. حدد المتبرعين PBMC التي تؤدي إلى نمو الورم المعتدل (حجم الورم > 200 مم3 14 يوما بعد التلقيح) وعالية نسبيا PD-1، PD-L1 و CD8 التعبيرات (يعني درجات IHC > 2). راجع الخطوة 4 للحصول على بروتوكول تسجيل IHC مفصل.

3. خط الخلايا السرطانية البشرية وشاشة PDX

  1. خطوط الخلايا الشاشة وPDXs وفقا للإجراءات المذكورة في الخطوة 1.2، لتقييم معدل نمو الورم، والتعبير PD-L1 الإنسان من الأورام وتسلل الخلايا المناعية.
    ملاحظة: تم فحص أكثر من 30 خط خلايا سرطان الإنسان وأكثر من 20 PDXs من أنواع السرطان المختلفة من قبل المؤلفين. تم عرض بيانات نماذج الورم المختارة في قسم النتائج.

4. الكيمياء المناعية (IHC)

  1. الحصاد كما هو مبين في الخطوة 1.2.5 وإصلاح أنسجة الورم عن طريق غمر في formalin. تجفيف وتضمين الأنسجة الثابتة في البارافين. قسم الأنسجة الثابتة في 3 ميكرومتر ووضعها على الشرائح المغلفة بوليليسين.
  2. إزالة البارافينيز في الزيلين ثلاث مرات 7 دقائق لكل منهما. يرطب الأقسام من خلال الكحول المتدرج: 100٪ الإيثانول مرتين لمدة 3 دقائق لكل منهما، تليها 90٪، 80٪ و 70٪ الإيثانول في المقابل لمدة 3 دقائق لكل منهما. شطف بواسطة منزوع الأيونات H2O ثلاث مرات وإزالة السائل الزائد من الشرائح.
  3. إجراء استرداد مستضد عن طريق وضع الشرائح في حاوية وتغطية مع 10 مل الصوديوم سيترات العازلة (درجة الحموضة 6.0)، أو Tris-EDTA (درجة الحموضة 9.0). يُسخّن وعاء الشرائح بواسطة الميكروويف لمدّة 3 دقائق. شطف بواسطة منزوع الأيونات H2O ثلاث مرات واستنشاق السائل الزائد من الشرائح.
  4. منع المقاطع بنسبة 3٪ الزلال المصل البقري في PBS لمدة ساعة و 0.3٪ H2O2 الحل في PBS لمدة 10 دقيقة. وصمة عار من قبل الأجسام المضادة ضد CD8 الإنسان (EP334)، PD-1 (NAT105،) وPD-L1 (E1L3N) في 4 درجة مئوية بين عشية وضحاها، وHRP مترافق 2الأجسام المضادة في RT لمدة 1 ح. إسقاط الركيزة DAB (3,3'-diaminobenzidine) على الشرائح والسيطرة على وقت رد الفعل (ثانية إلى دقيقة) عن طريق رصد اللون البني من المجهر.
  5. تغطية الشرائح مع بلسم محايد بعد غمر الشرائح في 0.5٪ حمض الهيدروكلوريك الكحول و 0.5٪ مياه الأمونيا في المقابل لمدة 5 ثوان لكل منهما، ثم في 80٪، 90٪ و 100٪ الإيثانول في تسلسل لمدة 3 دقائق لكل منهما، وأخيرا في xylenes باستخدام ثلاثة تغييرات لمدة 5 دقائق لكل منهما. الكشف عن الأجسام المضادة عن طريق مراقبة اللون البني من DAB باستخدام المجهر.
    ملاحظة: تم تقييم تعبير CD8 وPD-1 البشري على الخلايا اللوسية التي تتسرب إلى الأورام (TIL) عن طريق تعيين درجة تعبير على مقياس من 5 نقاط (درجة IHC، نطاق 0-4) في التكبير الموضوعي العالي (20x، 40x). 0, غائبة; 1، وضعف كثافة / أقل من 20٪ الخلايا؛ 2، ضعيفة إلى معتدلة كثافة / 20٪ -50٪ الخلايا؛ 3، معتدلة إلى قوية كثافة / 50٪ -80٪ الخلايا؛ 4، كثافة قوية / أكثر من 80٪ الخلايا. تم تسجيل تلطيخ PD-L1 البشرية داخل الخلايا السرطانية باستخدام نظام تسجيل معدل على مقياس 5 نقاط (درجة IHC، مجموعة 0-4) بسبب إشارة منتشرة نسبيا. 0, غائبة; 1، وضعف كثافة / أقل من 10٪ الخلايا؛ 2، ضعيفة إلى معتدلة كثافة / 10٪ -30٪ الخلايا؛ 3، معتدلة / 30٪ -50٪ الخلايا؛ 4، كثافة قوية / أكثر من 50٪ من الخلايا.

5. في فيفو فعالية ودراسات الدوائية في نماذج أنسنة PBMC-NOD/ SCID Xenograft

  1. علاج الفئران NOD/SCID مسبقاً كما هو مبين في الخطوة 1-1-3. وباختصار، عالج الفئران بـ 100 ملغم/كغم من الإنتاج الأنظف (i.p.) و125 ملغم/كغم من الـ DS (p.o.) مرة واحدة في اليوم لمدة يومين.
  2. 20 إلى 24 ساعة بعد الجرعة الثانية، حقن تحت الجلد (s.c.) مع عدد المشار إليه من الخلايا السرطانية البشرية و 2.5-5 × 106 PBMCs (ما مجموعه 200 خليط الخلايا اللتر في 50٪ Matrigel) في الجناح الأمامي الأيمن من الحيوانات.
    ملاحظة: وينبغي أن يكون عدد PBMC المستخدم لأي فأر فردي في دراسة واحدة هو نفسه. ومع ذلك، ونظراً للاختلافات في توافر مجموع مركبات متعددة البروم ثنائية الفينيل المعزولة وقت إجراء كل دراسة، اختار المؤلفون استخدام 2.5 x 106أو 4 x 106أو 5 x 106 PBMC في دراسات مختلفة. على الرغم من أن هذا الفرق 2 أضعاف في الكمية التي تدار من PBMCs قد تؤثر على درجة الأنسنة، والمؤلفين لا تلاحظ اختلافات كبيرة في تقييم فعالية المضادة للورم من العلاجات المناعية اختبارها.
  3. لـ PDXs engraftment، حقن شظايا الورم تحت الجلد (3× 3 × 3 مم 3) في الجناح الأمامي الأيمن من الحيوانات. حقن تحت الجلد 200 درجة مئوية من 5 × 106 PBMCs (100 درجة مئوية لكل جانب) إلى اليسار واليمين من جزء الورم engrafted.
    ملاحظة: تم إعطاء أنسجة الورم PDX في محلول Matrigel، نفس ما هو موضح لنماذج خط الخلية.
  4. في يوم تلقيح الخلايا، تجمع الحيوانات بشكل عشوائي وتعامل كبروتوكول الدراسة المخطط له.  تقييم النشاط المضاد للورم من الأدوية المرشحة, BGB-A317 (QW, i.p.) في هذه الحالة, في الجرعات المشار إليها في نماذج الورم المختلفة.
    ملاحظة: تعتبر خطوط الخلايا السرطانية البشرية الثلاثة (أي A431 (سرطان الاستئصال) وSKOV3 (سرطان المبيض) وSK-MES-1 (سرطان الرئة))، بالإضافة إلى نموذجين من PDX (أي BCLU-054 (سرطان الرئة) وBCCO-028 (سرطان القولون))، نماذج أورام جيدة للعلاج I-O التقييم في هذا النموذج الماوس أنسنة.
  5. قياس حجم الورم الأساسي مرتين كل أسبوع، وذلك باستخدام الفرجار.
    ملاحظة: وقد لوحظ فقدان أوزان الجسم Gand حوالي 4-6 أسابيع بعد الطعوم PBMC في دراساتنا, السماح ل1-2 أشهر نافذة لتقييمات الفعالية العلاجية.
  6. لتحليل الدوائية للخلايا المناعية التسلل الورم، وقطع أنسجة الورم إلى قطع صغيرة وهضمها مع الكولاجين النوع الأول (1 ملغ / مل) وDNase الأول (100 ميكروغرام / مل) في RPMI1640 بالإضافة إلى 5٪ مصل البقر الجنيني (FBS) لمدة 30 دقيقة في 37 درجة مئوية. تمرير الأنسجة المهضومة من خلال 40 ميكرومتر مصفاة الخلية للحصول على تعليق خلية واحدة.
  7. غسل الخلايا وضبط رقم الخلية إلى تركيز 1 × 107 خلايا / مل في الجليد الباردFACS العازلة (PBS، 1٪ FBS) في 96 جيدا لوحات أسفل جولة. غسل الخلايا عن طريق الطرد المركزي ومنعها عن طريق إضافة 20 ميكروغرام / مل IgG الإنسان لمدة 30 دقيقة، تليها تلطيخ مع CD3 المضادة للإنسان (HIT3a)، CD8 (OKT8) وPD-1 (MIH4) الأجسام المضادة في 4 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. ثم تخضع العينات الملونة لتدفق قياس الخلايا وتحليل باستخدام guavaSoft 3.1.1.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بعد الإجراءات المعروضة هنا، تم بنجاح إنشاء نموذج xenograft أنسنة المستندة إلى PBMC. وباختصار، تم تحديد آثار الاستئصال النخاعي CP في الفئران NOD / SCID عن طريق تحليل قياس التدفق الخلوي من العدلات والسكان monocyte بعد CP وDS العلاج (الشكل 1). تم تحديد 100 ملغم/كغم من الكل CP بالإضافة إلى 125 ملغم/كغم من DS كجرعة مثلى واستخدم في دراسات لاحقة حيث أن النظام يؤدي إلى استنفاد أقصى قدر من العدلات والخلايا الأحادية دون التسبب في سمية شديدة للفئران. بعد ذلك، تم إجراء PBMC البشرية وزرع الورم. تم التحقق...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد تقدمت معرفتنا بتطور السرطان وتطوره بشكل كبير في السنوات الأخيرة، مع التركيز على فهم شامل لكل من الخلايا السرطانية وستروما المرتبطة بها. ويمكن أن يؤدي تسخير آليات المناعة المضيفة إلى إحداث أثر أكبر على الخلايا السرطانية، مما يمثل استراتيجية علاج واعدة. وقد استخدمت على نطاق واسع نماذج Murine مع أجهزة المناعة الماوس سليمة، مثل نماذج الجرمانية وGEM، لدراسة الحصانة التي تتوسط فيها نقاط التفتيش. تقييمات فعالية باستخدام هذه النماذج تعتمد إلى حد كبير على الأجسام المضادة للماوس البديلة الهدف13،

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

جميع المؤلفين لديهم مصلحة في الملكية في BeiGene. تونغ تشانغ وكانغ لي مخترعان على براءة اختراع تغطي BGB-A317 الموصوفة في هذه الدراسة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ونشكر أعضاء مختبراتنا على المناقشات المفيدة. وقد تم دعم هذا العمل جزئيا من قبل برنامج بحوث الابتكار والزراعة في مجال علوم الطب الحيوي والحياة التابع للجنة العلوم والتكنولوجيا لبلدية بكين بموجب اتفاق المنحرقم . Z151100003915070 (مشروع "دراسة ما قبل السريرية على رواية الأورام المناعية المضادة للورم المخدرات BGB-A317")، وكان أيضا بدعم جزئي من قبل تمويل الشركة الداخلية للبحوث ما قبل السريرية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
< قوي > PBMC فصل / ثقافة الخلايا < / قوي >
Histopaque-1077Sigma10771عزل الخلايا
DMEMCorning10-013-CVRثقافة الخلايا
DPBSCorning21-031-CVRثقافة الخلايا
FBSCorning35-076-CVثقافة الخلايا
البنسلين الستربتومايسين ، سائلجيبكو15140-163ثقافة الخلايا
التربسين-EDTA (0.25٪) ، الفينول الأحمرجيبكو25200-114زراعة الخلايا
MatrigelCorning356237تلقيح
CDX<تحليل قوي >FACS< / قوي>
Deoxyribonuclease I من بنكرياس البقرعينة SigmaDN25 تحضير
الكولاجيناز من النوع الأولSigmaC0130إعداد
العينة الأجسام المضادة للفأر / البشرية CD11b (M1 / 70) BioLegend101206FACS
المضادة للفأر Ly-6C (HK1.4) الجسم المضادBioLegend128008FACS
المضاد للفأر Ly-6G (1A8) الجسم المضادBioLegend127614FACS
المضاد للإنسان CD8 (OKT8) الجسم المضادSungene التكنولوجيا الحيويةH10082-11HFACS
الأجسام المضادة للإنسان CD279 (MIH4)eBioscience12-9969-42FACS
الأجسام المضادة للإنسان CD3 (HIT3a)4A التكنولوجيا الحيوية-FACS
Guava easyCyte 8HT Benchtop Flow CellularMillipore0500-4008FACS
زرع الورم / PDX / الجرعات / القياس< / قوي>
سيكلوفوسفاميدJ& KCat # 419656 ، CAS # 6055-19-2في الجسم الحي فعالية
DisulfiramJ& KCat # 591123 ، CAS # 97-77-8فعالية في الجسم الحي
حقنةBD300841CDX التلقيح
الإبر تحت الجلد (14 جم)شنغهاي SA Mediciall & شركة الأدوات البلاستيكية المحدودة0.7 * 32 TW SBPDX التلقيح
الفرجار الورني (MarCal)Mahr16ERقياس الورم
IVC أقفاص التهويةالفردية Lingyunboji Ltd.IVC-128منشأة
حيوانية <قوية >IHC< / قوية >
Leica ASP200 معالج المناديل الفراغيةLeicaASP200IHC
Leica RM2235 ميكروتوم دوار يدوي للقسم الروتينيLeicaRM2235IHC
Leica EG1150 H وحدة تضمين البارافين الساخنLeicaEG1150 HIHC
Ariol-Clinical IHC وماسح ضوئي FISHLeicaAriolIHC
المضاد للإنسان CD8 (EP334) الجسم المضادZSGB-BioZA-0508IHC
المضاد للإنسان PD1 [NAT105] الجسم المضادAbcamab52587IHC
المضاد للإنسان PD-L1 (E1L3N)إشارات الخلايا13684SIHC
Polink-2 بالإضافة إلى نظام الكشف عن البوليمر HRPZSGB-BioPV-9001/9002IHC
تقنية

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Pardoll, D. M. The blockade of immune checkpoints in cancer immunotherapy. Nature Reviews Cancer. 12 (4), 252-264 (2012).
  2. Postow, M. A., Callahan, M. K., Wolchok, J. D. Immune Checkpoint Blockade in Cancer Therapy. Journal of Clinical Oncology. 33 (17), 1974-1982 (2015).
  3. Li, Z., Kang, Y. Emerging therapeutic targets in metastatic progression: A focus on breast cancer. Pharmacology & Therapeutics. 161, 79-96 (2016).
  4. Li, Q. X., Feuer, G., Ouyang, X., An, X. Experimental animal modeling for immuno-oncology. Pharmacology & Therapeutics. 173, 34-46 (2017).
  5. Fisher, T. S., et al. Targeting of 4-1BB by monoclonal antibody PF-05082566 enhances T-cell function and promotes anti-tumor activity. Cancer Immunology, Immunotherapy. 61 (10), 1721-1733 (2012).
  6. McCormack, E., et al. Bi-specific TCR-anti CD3 redirected T-cell targeting of NY-ESO-1- and LAGE-1-positive tumors. Cancer Immunology, Immunotherapy. 62 (4), 773-785 (2013).
  7. Rongvaux, A., et al. Human hemato-lymphoid system mice: current use and future potential for medicine. Annual Review of Immunology. 31, 635-674 (2013).
  8. Matsumura, T., et al. Functional CD5+ B cells develop predominantly in the spleen of NOD/SCID/gammac(null) (NOG) mice transplanted either with human umbilical cord blood, bone marrow, or mobilized peripheral blood CD34+ cells. Experimental Hematology. 31 (9), 789-797 (2003).
  9. Zhang, T., et al. The binding of an anti-PD-1 antibody to FcgammaRIota has a profound impact on its biological functions. Cancer Immunology, Immunotherapy. 67 (7), 1079-1090 (2018).
  10. Gamelli, R. L., Ershler, W. B., Hacker, M. P., Foster, R. S. The effect of disulfiram on cyclophosphamide-mediated myeloid toxicity. Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 16 (2), 153-155 (1986).
  11. Dunay, I. R., Fuchs, A., Sibley, L. D. Inflammatory monocytes but not neutrophils are necessary to control infection with Toxoplasma gondii in mice. Infection and Immunity. 78 (4), 1564-1570 (2010).
  12. Ghasemlou, N., Chiu, I. M., Julien, J. P., Woolf, C. J. CD11b+Ly6G- myeloid cells mediate mechanical inflammatory pain hypersensitivity. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (49), 6808-6817 (2015).
  13. Takao, K., Miyakawa, T. Genomic responses in mouse models greatly mimic human inflammatory diseases. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (4), 1167-1172 (2015).
  14. Payne, K. J., Crooks, G. M. Immune-cell lineage commitment: translation from mice to humans. Immunity. 26 (6), 674-677 (2007).
  15. Mestas, J., Hughes, C. C. Of mice and not men: differences between mouse and human immunology. Journal of Immunology. 172 (5), 2731-2738 (2004).
  16. von Herrath, M. G., Nepom, G. T. Lost in translation: barriers to implementing clinical immunotherapeutics for autoimmunity. Journal of Experimental Medicine. 202 (9), 1159-1162 (2005).
  17. Mahdi, B. M. A glow of HLA typing in organ transplantation. Clinical and Translational Medicine. 2 (1), 6(2013).
  18. Shultz, L. D., Brehm, M. A., Garcia-Martinez, J. V., Greiner, D. L. Humanized mice for immune system investigation: progress, promise and challenges. Nature Reviews Immunolog. 12 (11), 786-798 (2012).
  19. Brehm, M. A., Shultz, L. D., Luban, J., Greiner, D. L. Overcoming current limitations in humanized mouse research. Journal of Infectious Diseases. 208, Suppl 2 125-130 (2013).
  20. Walsh, N. C., et al. Humanized Mouse Models of Clinical Disease. Annual Review of Pathology. 12, 187-215 (2017).
  21. Shultz, L. D., Ishikawa, F., Greiner, D. L. Humanized mice in translational biomedical research. Nature Reviews Immunolog. 7 (2), 118-130 (2007).
  22. Brehm, M. A., et al. NOD-scid IL2rgnull (NSG) mice deficient in murine MHC Class I and Class II expression support engraftment of functional human T cells in the absence of acute xenogeneic GVHD following injection of PBMC. The Journal of Immunology. 200, 1 Supplement 57(2018).
  23. King, M., et al. A new Hu-PBL model for the study of human islet alloreactivity based on NOD-scid mice bearing a targeted mutation in the IL-2 receptor gamma chain gene. Clinical Immunology. 126 (3), 303-314 (2008).
  24. Ito, M., et al. NOD/SCID/gamma(c)(null) mouse: an excellent recipient mouse model for engraftment of human cells. Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).
  25. Shultz, L. D., et al. Human lymphoid and myeloid cell development in NOD/LtSz-scid IL2R gamma null mice engrafted with mobilized human hemopoietic stem cells. Journal of Immunology. 174 (10), 6477-6489 (2005).
  26. Sasaki, E., et al. Development of a preclinical humanized mouse model to evaluate acute toxicity of an influenza vaccine. Oncotarget. 9 (40), 25751-25763 (2018).
  27. Tobin, L. M., Healy, M. E., English, K., Mahon, B. P. Human mesenchymal stem cells suppress donor CD4(+) T cell proliferation and reduce pathology in a humanized mouse model of acute graft-versus-host disease. Clinical and Experimental Immunology. 172 (2), 333-348 (2013).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Cyclophosphamide Disulfiram PD 1

مقالات ذات صلة