مقالة منهجية

التحقيقات الكهرولوجية من وظائف المشبك وCorticogeniculate

5.9K مشاهدات

DOI:

10.3791/59680

أغسطس 7, 2019

في هذه المقالة

ملخص

هنا، نقدم بروتوكولات لإعداد شرائح الدماغ الحادة التي تحتوي على النواة الجينوسيلات الجانبية والتحقيق الكهرولوجيولوجي لوظيفة نقاط الاشتباك العصبي وcortinogeniculate. يوفر هذا البروتوكول طريقة فعالة لدراسة نقاط الاشتباك العصبي مع احتمال الإفراج العالي والإفراج المنخفض في نفس شرائح الدماغ الحادة.

الملخص

النواة الجانبية هي أول محطة ترحيل للمعلومات البصرية. الخلايا العصبية ترحيل هذه النواة الثلاميك دمج المدخلات من خلايا العقدة الشبكية والمشروع إلى القشرة البصرية. وبالإضافة إلى ذلك، تتلقى الخلايا العصبية التتابع الإثارة من أعلى إلى أسفل من القشرة. يختلف المدخلات المحفزة الرئيسية اثنين إلى الخلايا العصبية التتابع في عدة جوانب. تتلقى كل خلية عصبية ترحيل المدخلات من عدد قليل فقط من نقاط الاشتباك العصبي retinogeniculate، والتي هي محطات كبيرة مع العديد من مواقع الافراج. وينعكس هذا من الإثارة قوية نسبيا، والخلايا العصبية التتابع تلقي، من خلايا العقدة الشبكية. وعلى النقيض من ذلك، فإن نقاط الاشتباك العصبي الكورسية المثلى هي أبسط مع عدد قليل من مواقع الإطلاق وقوة متشابكة أضعف. كما يختلف الاشتباك ان اثنين من المشابك في اللدونة على المدى القصير متشابك. المشابك retinogeniculate لديها احتمال الإفراج عالية وبالتالي عرض الاكتئاب على المدى القصير. وعلى النقيض من ذلك، فإن نقاط الاشتباك العصبي الكورتيكولوكية لها احتمال إطلاق منخفض. تجتاز الألياف الكورتيكجينية الشبكية النوى الثالية الشبكية قبل دخول النواة الميكنولية الجانبية. تسمح المواقع المختلفة لنواة الثالاني الشبكية (الرترالي من النواة الجينوسيلات الجانبية) والمسالك البصرية (فينترو-أفقياً من النواة الميكنيوليت الجانبية) بتحفيز نقاط الاشتباك العصبي الكورتيكانوجينية أو الشبكية على حدة مع أقطاب التحفيز خارج الخلية. وهذا يجعل النواة الجينية الجانبية منطقة الدماغ مثالية حيث اثنين من نقاط الاشتباك العصبي المحفزة مع خصائص مختلفة جدا ً التي تُسطّل على نفس نوع الخلية، يمكن دراستها في وقت واحد. هنا، ونحن نصف طريقة للتحقيق في تسجيل من الخلايا العصبية التتابع وإجراء تحليل مفصل لوظيفة متشابك retinogeniculate وcorticogeniculate في شرائح الدماغ الحادة. تحتوي هذه المقالة على بروتوكول خطوة بخطوة لتوليد شرائح الدماغ الحادة من النواة جينيولات الجانبية وخطوات لتسجيل النشاط من الخلايا العصبية التتابع عن طريق تحفيز الجهاز البصري والألياف corticogeniculate بشكل منفصل.

المقدمة

الخلايا العصبية ترحيل من النواة جينيولات الجانبية دمج ونقل المعلومات البصرية إلى القشرة البصرية. تتلقى هذه الخلايا العصبية مدخلات محفزة من الخلايا العقدية عن طريق نقاط الاشتباك العصبي retinogeniculate، والتي توفر محرك الأقراص المحفزالرئيسي للخلايا العصبية التتابع. وبالإضافة إلى ذلك، تتلقى الخلايا العصبية التتابع المدخلات المحفزة من الخلايا العصبية القشرية عن طريق نقاط الاشتباك العصبي corticogeniculate. وعلاوة على ذلك، تتلقى الخلايا العصبية التتابع المدخلات المثبطة من الخلايا العصبية المحلية والخلايا العصبية GABAergic من النواة reticularis thalami1. النواة reticularis الثالامي موجود ة مثل درع بين المهاد والقشرة بحيث الألياف إسقاط من القشرة إلى ا....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

وقد وافق الفريق الإشرافي الحكومي المعني بالتجارب الحيوانية في راينلاند بالاتينات على جميع التجارب.

1- الحلول

  1. حل التشريح
    1. للحد من السمية المنفعلة، وإعداد حل يستند إلى الكولين لاستخدامها أثناء تشريح كما هو معروض هنا (في MM): 87 كلوريد كلوريدكلوريد الضوضة، 2.5 كيلو كل، 37.5 كلوريد الكولين، 25 ناهكو 3، 1.25 NaH2PO0.5 CaCl 2، 7 MgCl و 25 جلوكوز. قم بإعداد حل التشريح قبل أقل من أسبوع واحد من التجربة.
  2. حل التسجيل
    1. إعداد السائل الشوكي الدماغي الاصطناعي (ACSF) الحل الذي يحتوي على (في MM): 125 NaCl، 25 NaHCO1.25 NaH2

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

يظهر إعداد شريحة dLGN التي تحتوي على مسارات retinogeniculate وcorticogeniculateتحت هدف 4X (الشكل 2). Axons من خلايا العقدة الشبكية حزمةمعا في الجهاز البصري (الشكل 2). تم وضع الماصة المحفزة على الجهاز البصري للحث على إعادة المشبك بوساطة التيار (الشكل2A)وعلى النواة reticularis thalami للحث على الكُرَكة المتشابكة بوساطة الحالية (الشكل2B)،على التوالي. وتجدر الإشارة إلى أن ال.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

نحن نصف بروتوكول محسن ة استنادا ً إلى الطريقة3المنشورة سابقاً ، والذي يسمح بالتحقيق في احتمال كبير لإطلاق نقاط الاشتباك العصبي retinogeniculate وانخفاض احتمال إطلاق نقاط الاشتباك العصبي corticogeniculate من نفس الشريحة. هذا هو ذو أهمية كبيرة لأن هذه المدخلات اثنين تتفاعل مع بعضها البعض لتعديل انتقال الإشارات البصرية: المدخلات retinogeniculate هي الدافع الرئيسي للإثارة من الخلايا العصبية التتابع، في حين أن المدخلات القشرية تعمل كمغير، والتي يؤثر على كسب انتقال retinogeniculate من خلال التأثير على ح.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

وقد تم تمويل هذا العمل من قبل مؤسسة البحوث الألمانية (DFG) في مركز البحوث التعاونية (SFB) 1134 "الفرق الوظيفية" (J.v.E. و X.C.) ومنحة البحوث EN948/1-2 (J.v.E.).

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
مكبر للصوت HEKA ElektronikEPC 10 USB مزدوج التصحيح المشبك مكبر للصوت
BiocytinSigma-AldrichB4261-250MG
CaCl2< / sub>EMSURE1.02382.1000
كلوريد الكولينسيجما-ألدريتشC1879-1KG
مجهر المسح الضوئي بالليزر متحد البؤرLeica MicrosystemsTCS SP5
CsClEMSURE1.02038.0100
Cs-gluconateذاتي الإعدادنظرا لعدم وجود Cs-gluconate تجاري ، قمنا بإعداده بأنفسنا   ؛
D-600 سيجما ألدريتشM5644-50 ملغميثوكسيفيراباميل هيدروكلوريد
D-APV   ؛بيوتريند BN0085-100مضاد مستقبلات NMDA
كاميرا رقمية للمجهرأوليمبوسXM10
EGTASERVA11290.02
فورينأبفي2594.00.00إيزوفلوران
جلوكوزسيجما ألدريتش49159-1 كجم
هيبسروث9105.2
عازل تحفيز التيار العاليأدوات الدقة العالميةA385
KClEMSURE1.04936.1000
MgCl2< / sub>EMSURE1.05833.0250
MicromanipulatorsLuigs & amp نيومانSM7
MiroscopeأوليمبوسBX51
تصاعد متوسط ThermoFisher ScientificP36930إطالة الذهب Invitrogen
كلوريد الصوديومROTH3957.1
NaH2< / sub>PO4EMSURE1.06346.1000
NaHCO3EMSURE1.06329.1000
ماصةهيلجنبرغ1807502
مجتذبسوتر P-1000
 Personna 60-0138
الاهتزاز شبه الأوتوماتيكيLeica  النظم الحيويةVT1200S
95531 ريال سعودي هيدروبروميد بيوتريند AOB5680-10مضاد مستقبلات GABAA 
شفرة الحلاقة

المراجع

  1. Guido, W. Development, form, and function of the mouse visual thalamus. Journal of Neurophysiology. 120, 211-225 (2018).
  2. Guillery, R. W., Feig, S. L., Lozsadi, D. A. Paying attention to the thalamic reticular nucleus. Trends in Neurosciences. 21, 2....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة