يصف هذا المقال بروتوكولا سريعا لوصف الاوعيه الدموية في الأسماك تيليست عن طريق التروية القلبية من المخفف في المثبت ، وذلك باستخدام الميداكا (اوريزيز لا تيبس) كنموذج والتركيز علي الدماغ والانسجه النخامية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
وضع العلامات علي الاوعيه الدموية في الدماغ والغدة النخامية باستخدام Perfusion القلب مع المثبت
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الاوعيه الدموية العصبية جميع الانسجه في الفقاريات ، مما يتيح البقاء علي قيد الحياة من خلال توفير المواد الغذائية اللازمة ، والأكسجين ، والإشارات الهرمونية. وهي واحده من الاجهزه الاولي التي تبدا العمل اثناء التنمية. أصبحت أليات تكوين الاوعيه الدموية موضوعا للاهتمام العلمي والسريري العالي. في البالغين ومع ذلك ، فانه من الصعب تصور الاوعيه الدموية في معظم الكائنات الحية بسبب توطينهم عميقا داخل الانسجه الأخرى. ومع ذلك ، لا يزال التصور من الاوعيه الدموية الهامه لعده دراسات مثل الغدد الصماء والبيولوجيا العصبية. في حين تم تطوير عده خطوط المحورة وراثيا في zebrafish ، مع الاوعيه الدموية تصور مباشره من خلال التعبير عن البروتينات الفلورية ، لا توجد مثل هذه الاداات للأنواع الأخرى تيليوست. باستخدام الميداكا (اوريزيراس لا تيبس) كنموذج ، والبروتوكول الحالي يقدم تقنيه سريعة ومباشره لتسميه الاوعيه الدموية في الدماغ والغدة النخامية من خلال الأداء المثالي عن طريق القلب مع المثبتة التي تحتوي علي الصورة. يسمح هذا البروتوكول بتحسين فهمنا لكيفيه تفاعل المخ والخلايا النخامية مع الاوعيه الدموية في الانسجه الكاملة أو شرائح الانسجه السميكة.
المقدمة
تلعب الاوعيه الدموية جزءا أساسيا من الجسم الفقاري لأنها توفر العناصر الغذائية الضرورية والأكسجين والإشارات الهرمونية لجميع الأعضاء. أيضا ، منذ اكتشاف مشاركتهم في تطوير السرطان1، وقد تلقوا الكثير من الاهتمام في البحوث السريرية. وعلي الرغم من ان عددا من المنشورات قد حققت في أليات التي تسمح بنمو الاوعيه الدموية والمستنقعات ، وتم تحديد عدد كبير من الجينات الهامه لتشكيلها2، لا يزال هناك الكثير مما ينبغي فهمه فيما يتعلق بالتفاعل بين الخلايا أو الانسجه والدم المتداول.
التصور من الاوعيه الدموية في الدماغ والغدة النخامية مهم. الخلايا العصبية في الدماغ تتطلب إمدادات عاليه من الأكسجين والجلوكوز
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تم تنفيذ جميع التعامل مع الماشية وفقا لتوصيات لرعاية ورعاية البحوث الحيوانية في الجامعة النرويجية لعلوم الحياة ، وتحت اشراف المحققين المخولين.
1. اعداد الاداات والحلول
- اعداد الحل الأسهم ديي تذويب 5 ملغ من الكريستال اردي في 1.5 mL أنبوب من البلاستيك مع 1 مل من 96 ٪ EtOH. دوامه لمده 30 ثانيه والحفاظ علي تغطيتها باستخدام رقائق ألومنيوم.
ملاحظه: ويمكن الحفاظ علي حل الأسهم في الظلام في-20 درجه مئوية لعده أشهر. - اعداد حامل السمك (الشكل 1ا) عن طريق قطع قطعه من البوليسترين إلى طول 5 سم ، عرض 3 سم ، وسماكه 2 سم ، والتصاق به لطبق من البلاستيك قطرها 9 سم. جعل حفره عل....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
هذا البروتوكول يوضح اجراء خطوه بخطوه لتسميه الاوعيه الدموية في الدماغ الميداكا والغدة النخامية ، وفي الوقت نفسه إصلاح الانسجه. بعد الوسم عن طريق الحقن القلبي لمحلول مثبت يحتوي علي الصورة الضوئية في القلب ، يمكن ملاحظه الاوعيه الدموية علي الشرائح باستخدام المجسم الفراغي الفلوري (الشكل 4) أو علي الانسجه الكاملة باستخدام مجهر كونبؤري (الشكل 5). اما علي شريحة الانسجه السميكة أو علي النسيج كله ، يمكن ملاحظه الهندسة المعمارية للدم الاوعيه الدموية في ثلاثه ابعاد. يمكن .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
وقد استخدمت ترويه القلب مع الشركة سابقا لتسميه الاوعيه الدموية في العديد من الأنواع النموذجية24، بما في ذلك الأسماك تيليوست13.
كما يتم تسليمها مباشره إلى غشاء الخلية البطانية من قبل ترويه في الاوعيه الدموية ، فمن الممكن لزيادة نسبه الاشاره إلى الضوضاء عن طريق زيادة تركيز الندية في الحل مثبت. الاضافه إلى ذلك ، فان فلوكوفيري يوفر تلطيخ شديد عندما متحمس مع الحد الأدنى من التبييض مما يسمح للانبعاثات طويلة الأمد نسبيا18
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه
شكر وتقدير
نشكر الدكتور شينجي كاندا لإظهار التروية القلبية مع الحل المثبت في ميداكا ، السيدة لورديس كارو G تان للمساعدة في تربيه ميداكا ، والسيد أنتوني بلتيير للرسوم التوضيحية. تم تمويل هذا العمل من قبل NMBU ومجلس البحوث في النرويج ، ومنح عدد 248828 (برنامج الحياة الرقمية النرويج).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 16٪ بارافورمالدهايد | علوم المجهر الإلكتروني | RT 15711 | |
| 5 مل حقنة PP / PE بدون إبرة | محاقن سيجما | Z116866-100EA | |
| BD إبر حقنة Precisionglide | إبر Sigma | Z118044-100EA | 18G (1.20 * 40) |
| زجاج البورسليكات 10 سم OD 1.2 مم | sutter | BF120-94-10 | ماصة |
| زجاجيةDiI (1،1 & prime;-Dioctadecyl-3،3،3′,3&-tetramethylindocarbocyanine perchlorate) | Invitrogen | D-282 | |
| LDPE أنبوب OD 1.7 مم ومعرف 1.1 مم | Portex | 800/110/340/100 | عازلة للفوسفات |
| (PBS) | الكانولا Sigma | D8537-6X500ML | |
| مجتذب الماصة | Narishige | PC-10 | |
| أطباق بتري بلاستيكية | VWR | 391-0442 | |
| سوبر الغراء هلام | لوكتايت | c4356 | |
| التريكايين (ms-222) | سيجما | E10521-50G |
المراجع
- Nishida, N., Yano, H., Nishida, T., Kamura, T., Kojiro, M. Angiogenesis in cancer. Vascular Health and Risk Management. 2 (3), 213-219 (2006).
- Simon, M. C. Vascular morphogenesis and the formation of vascular networks. Developmental Cell. 6 (4), 479-482 (2004).
- Magi....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
