هنا، نقدم بروتوكولات زراعة رباط اللثة البشري (PDL) كرويرويدالخلية من قبل أفلام شيتوسان. توفر ثقافة الكرويات الخلوية ثلاثية الأبعاد (3D) بديلاً عن نظام ثقافة البوليسترين التقليدي للأنسجة (TCPS).
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تشكيل الخلايا الخلايا المعتمية الإنسان على أفلام الشيتوسان
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الرباط اللثة (PDL) الخلايا تحمل وعدا كبيرا لتجديد الأنسجة اللثة. تقليديا، يتم زرع خلايا PDL على ركائز ثنائية الأبعاد (2D) مثل الأنسجة المستزرعة البوليستيرين (TCPS). ومع ذلك، لوحظت تغييرات مميزة من خلايا PDL أثناء الثقافة في المختبر. هذه الظاهرة ربما لأن TCPS 2D يختلف عن البيئة الدقيقة ثلاثية الأبعاد (3D) في الجسم الحي. بالمقارنة مع الخلايا المستزرعة على ركائز 2D، والخلايا المزروعة في بيئة صغيرة 3D تظهر المزيد من أوجه التشابه مع الخلايا الحية. ولذلك، توفر نماذج ثقافة الخلايا ثلاثية الأبعاد بديلاً واعداً لثقافة الخلايا الأحادية الطبقة ذات الـ 2D التقليدية. لتحسين نماذج ثقافة الخلايا PDL التقليدية، قمنا مؤخرا بتطوير طريقة ثقافة الخلايا ثلاثية الأبعاد، والتي تقوم على تشكيل كروي لخلايا PDL على أفلام الشيتوسان. هنا، نقدم بروتوكولات مفصلة ثقافة كروية الخلية على أساس أفلام شيتوسان. نظام الثقافة ثلاثية الأبعاد من الكرويات الخلوية PDL التغلب على بعض القيود المتعلقة التقليدية 2D وحيد الطبقة خلية الثقافة، وبالتالي قد تكون مناسبة لإنتاج خلايا PDL مع فعالية علاجية معززة لتجديد الأنسجة اللثة في المستقبل.
المقدمة
يتميز داء اللثة، الذي تهيئته بشكلرئيسي لوحة الأسنان 1، بتلف الأنسجة اللثة بما في ذلك الرباط اللثةي (PDL)، وعظم السنخية، والأسمنت. العلاجات الحالية لداء اللثة عادة ما تكون ناجحة في منع تقدم المرض النشط، ولكن تجديد الأنسجة اللثة المفقودة لا يزال تحديا سريريا. في الآونة الأخيرة، تم إحراز تقدم هام في النهج القائمة على الخلايا لتجديد الأنسجة اللثة للتغلب على عيوب العلاجات الحالية2،3،4.
كشفت مراجعتنا المنهجية السابقة أن خلايا PDL أظهرت إمكانات كبيرة لتجديد اللثة5. تقليديا، يتم زرع خلايا PDL على ركائز ثنائية....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وقد تمت الموافقة على بروتوكول الدراسة من قبل لجنة الأخلاقيات في المدرسة ومستشفى الطب، جامعة تونغجي. وقدم جميع المرضى موافقة خطية مستنيرة.
1. عزل الخلية PDL
- جعل الانتشار وسيلة لثقافة خلايا PDL: α-MEM المتوسطة تكمل هاف 10٪ FCS و 100 U / مل القلم / العقدية.
- إعداد حاوية مع الثلج لنقل الأضراس الثالثة معزولة.
- تعقيم الأدوات الجراحية باستخدام الأوتوكلاف.
- استخراج الإنسان الطبيعي أثرت الأضراس الثالثة من البالغين (18-28 سنة من العمر) في عيادة طب الأسنان من المدرسة ومستشفى الطب، جامعة تونغجي.
- ضع الأضراس الثالثة في وسط الانتشار ونقلها إلى المختبر عند 4 درجة مئوية.
- ضع السن المستخرج في طبق بتري م....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
باستخدام البروتوكول الحالي، تم تشكيل كرويات خلايا PDL القابلة للحياة بنجاح. ويبين الشكل 1 أن الخلايا المعلقة أو الكروية بدلا ً من الخلايا المرفقة لوحظت أساسا ً في أفلام الشيتوسان. لكثافة البذر من 0.5 X 104 خلايا / سم2، تم العثور على خلايا PDL المرفقة في بعض الأحيان في اليوم 1 و 3 ، ونادرا ما لوحظت الكرويات الخلية PDL. على العكس من ذلك، لكثافة البذر من 3 X 104 و 6 X 104 خلايا / سم2، تم العثور على أحجام مخت.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
وقد أدخلت هذه الدراسة نظام ثقافة الخلايا ثلاثية الأبعاد للتغلب على بعض القيود المتعلقة بثقافة الخلايا الأحادية الطبقة ذات الطبقة 2D التقليدية. وفقا للبروتوكول، تم تشكيل spheroids PDL الخلوية بنجاح من قبل الخلايا زراعة على أفلام الشيتوسان. وأفادت دراستنا السابقة أن تشكيل كروي زاد من قدرات التجديد الذاتي والتمايز العظمي لخلايا PDL14. بدلا من استخدام إنزيم لحصاد الخلايا من TCPS، يمكن حصاد كرويات الخلية PDL من أفلام شيتوسان ببساطة عن طريق الأنابيب المتوسطة بضع مرات14. وهكذا، يم.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
وقد رعت هذه الدراسة المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (NSFC 81700978)، وصناديق البحوث الأساسية للجامعات المركزية (1504219050)، ومؤسسة العلوم الطبيعية في شنغهاي (17ZR1432800)، ومشروع شنغهاي للاستكشاف الطبي ( 17411972600).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| α-MEM | Gibco | 11900-073 | |
| حمض الخليك | Sigma-Aldrich | 64197 | |
| قارورة زراعة الخلايا 25 سم 2 | الخلايا 430639 | Corning | |
| 75 سم 2 | Corning | 430641 | |
| Chitosan | Heppe Medical ؛ Chitosan GmbH | / | الوزن الجزيئي 500 كيلو دالتون ، درجة إزالة الأسيتيل 85٪ |
| FCS | Gibco | 26140-079 | |
| البقاء / السمية الخلوية الحية / الميتة | الجزيئي ؛ مجسات | L3224 | |
| هيدروكسيد الصوديوم | سيجما ألدريتش | 1310732 | |
| PBS | KeyGen Biotech | KGB5001 | |
| القلم / البكتيريا العقدية | Gibco | 15140-122 | |
| Trypsin / EDTA | KeyGen Biotech | KGM25200 | |
| 15 مل أنبوب طرد مركزي مخروطي | الشكل Corning | 430790 | |
| لوحة 24 بئر | Corning | 3524 |
المراجع
- Albandar, J. M. Epidemiology and risk factors of periodontal diseases. Dental Clinics of North America. 49 (3), 517-532 (2005).
- Bartold, P. M., McCulloch, C. A., Narayanan, A. S., Pitaru, S. Tissue engineering: a new paradigm for periodo....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
