في هذه الدراسة، نقدم بروتوكول لاستخراج الكورتيزول من الزفية وعظم الفك من أنواع سمك الحفش. تم فحص مستويات الكورتيزول الزعانف وعظم الفك مرة أخرى عن طريق مقارنة اثنين من المذيبات الغسيل تليها الاختبارات ELISA. وقد قامت هذه الدراسة بتجريب جدوى الكورتيزول في عظم الفك كمؤشر جديد للإجهاد.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
استخراج الكورتيزول من زعانف سمك الحفش ومصفوفات عظم الفك
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
وكانت أهداف هذه الدراسة تطوير تقنية لاستخراج الكورتيزول من زعانف سمك الحفش باستخدام اثنين من المذيبات الغسيل (الماء وisopropanol) وتحديد أي اختلافات في مستويات الكورتيزول الزفين بين ثلاثة أنواع رئيسية من سمك الحفش. تم حصاد زعانف من 19 الحفش التضحية بما في ذلك سبعة بيلوجا(هوسو هوسو)،سبعة سيبيريا(Acipenser baerii)،وخمسة سيفروغا(A. stellatus). وقد رُفع سمك الحفش في المزارع الإيرانية لمدة سنتين (2017-2018)، وأُجري تحليل لاستخراج الكورتيزول في كوريا الجنوبية (كانون الثاني/يناير - شباط/فبراير 2019). كما تم استخدام عظام الفك من خمسة H. huso لاستخراج الكورتيزول. تم تحليل البيانات باستخدام إجراء النموذج الخطي العام (GLM) في بيئة SAS. وكانت معاملات التباين داخل وبين التبَوَس14 و7.70 على التوالي. باختصار، وشملت تقنية استخراج الكورتيزول غسل العينات (300 ± 10 ملغ) مع 3 مل من المذيبات (المياه النقية جدا وisopropanol) مرتين، والتناوب في 80 دورة في الدقيقة لمدة 2.5 دقيقة، وتجفيف الهواء العينات غسلها في درجة حرارة الغرفة (22-28 درجة مئوية) لمدة 7 أيام، مزيد من التجفيف العينات باستخدام الخافق حبة في 50 هرتز لمدة 32 دقيقة وطحنلهم في مسحوق، وتطبيق 1.5 مل الميثانول على مسحوق المجففة (75 ± 5 ملغ)، ودوران بطيء (40 دورة في الدقيقة) لمدة 18 ساعة في درجة حرارة الغرفة مع خلط مستمر. وبعد الاستخراج، تم طرد العينات بالطرد المركزي (500 9 x غرام لمدة 10 دقائق)، ونُقل جهاز سوبرناتان تبقدر 1 مل إلى أنبوب جديد للطرد المركزي الصغير (1.5 مل)، واحتضن في درجة حرارة 38 درجة مئوية لتبخر الميثانول، وحلل عن طريق الفحص المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) . لم تلاحظ أي اختلافات في مستويات الكورتيزول الزفية بين الأنواع أو في مستويات الكورتيزول الزفية وعظم الفك بين غسل المذيبات. تظهر نتائج هذه الدراسة أن مصفوفة عظم الفك سمك الحفش هو مؤشر الإجهاد البديل واعدة إلى المصفوفات الصلبة.
المقدمة
الكورتيزول هو مؤشر موثوق به للإجهاد الحيواني. استخراج الكورتيزول يوفر إطارا صالحا للباحثين لرصد مستويات الإجهاد والأنماط العامة في الضغوط. على سبيل المثال، أجرت الدراسات السابقة التحقق المنهجي من قياسات الكورتيزول الشعر باستخدام أساليب مختلفة في البشر1،2،الالقردة3،4،الماشية5،الأغنام6،و ذهبية7،8. في أنواع الأسماك، وقد ثبت قياسات الكورتيزول في المصفوفات مثل المقاييس، والمخاط الجلد، والبراز، والدم9 لتوفير معلومات عن صحة الأسما....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
ووافقت هيئة رعاية الحيوان والأخلاق في جامعة كانغوون الوطنية، تشونتشون، جمهورية كوريا، على الإجراءات والأساليب التجريبية التالية.
1. جمع الزفية
- التقاط سمك الحفش بلطف باستخدام شبكة للحد من الإصابات والإجهاد.
- شطف الأسماك بعناية بالماء العذب ثم مسح سطح الجسم مع منشفة ماصة قبل القتل الرحيم.
- ضرب رأس السمكباستخدام مطرقة بلاستيكية بحيث يتم فاجأ الأسماك أو يفقد الوعي. إزالة الرأس باستخدام سكين.
- قياس وزن الجسم (ز) وطول (سم).
- بعد القتل الرحيم، وجمع عينات زمنة عن طريق قطع أقرب ما يمكن من الجسم باستخدام مقص الجراحية المعقمة.
ملاحظة: يجب استخدام المناشف الماصة الفردية غير المعاد تدويرها لكل سمكة. وكانت....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
وقد تم تطوير تقنية استخراج الكورتيزول الزفية المقدمة وتأكيدها في هذه الدراسة باستخدام ثلاثة أنواع من سمك الحفش. تم مقارنة مستويات الكورتيزول التي تم الحصول عليها باستخدام المياه النقية جدا وisopropanol كما تم مقارنة المذيبات الغسيل(الشكل 2). تم فحص الكورتيزول من H. huso jawbones لتحديد ما إذا كان يمكن استخدام عظام الفك سمك الحفش كمصفوفة بديلة للزعانف. وترد في الجدول 1آثار غسل المذيبات، وأنواع سمك الحفش، وتفاعلها. مستويات الكورتيزول ت.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
ويطلق على سمك الحفش في بعض الأحيان "أحفوري حي" لأنه أظهر القليل من التعديلات على مدى آلاف السنين الماضية. يحتوي جنس سمك الحفش Acipenser على 27 نوعاً تنتج الكافيار. ومع ذلك، ثلاثة أنواع (بيلوجا، بايري، وسيفوروغا) تنتج معظم إمدادات الكافيار العالمية. وسمك الحفش معرض للإفراط في صيد الأسماك والتدخل في موائلها الطبيعية، وبالتالي فهو أكثر عرضة للخطر من أي مجموعة أخرى من الأنواع. الحفش تنتمي إلى أقدم مجموعة من الفقاريات الحية، التي كانت موجودة لمدة 150 مليون سنة. الأنواع Acipenser تنضج وتنمو ببطء; بعض (على سبي.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدى أصحاب البلاغ أي تضارب في المصالح للكشف عنها.
شكر وتقدير
وقد أُجري هذا العمل بدعم من برنامج البحوث التعاونية لتطوير العلوم والتكنولوجيا في مجال الزراعة (عنوان المشروع: تحليل تغير إنتاجية الماشية مع تغير المناخ، المشروع رقم. PJ012771)، إدارة التنمية الريفية، جمهورية كوريا. كما أن هذه الدراسة كانت مدعومة بمنحة (رقم. PJ01344604) من فريق التغذية الحيوانية وعلم وظائف الأعضاء، المعهد الوطني لعلوم الحيوان، RDA، سيول، جمهورية كوريا. وينوه المؤلفون بامتنان بالمدير التنفيذي لللفتة الفارسية محمد حسن سلمان زاده وفريقه، الذين قدموا أسماكاً من أنواع سمك الحفش الثلاثة التي تم فحصها في هذه الدراسة.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| التخلص من قفازات اللاتكس الجراحية | Ansell | 63754090 | |
| Platform مقياس إلكتروني بوزن 100 كجم | ماصة مصلية Baskoolnikoo | 101 EM | |
| لتوصيل ما يصل إلى 24 مل | Becton Dickinson Falcon | 35-7550 | |
| قارئ الألواح الدقيقة مع 450 نانومتر و 490 إلى 492 نانومتر | BioTek | 8041000 | |
| BrandTech | 703459 | ||
| كيس بلاستيكي لتخزين سحاب | Cleanwrap | 30 سم × 100 م | |
| كحول الأيزوبروبيل | دايجونج للكيماويات & المعادن | 5035-4400 | |
| كحول الميثيل | دايجونج كيماويات & المعادن | 5558-4100 | |
| أنبوب دوار- MX-RL-Pro | DLAB Scientific | 824-222217777 | |
| ماصة دقيقة لتوصيل 1.5 و 10 مل | Eppendorf Research Plus | M21518D | |
| ماصة دقيقة لتوصيل 15 و 25 مو ؛ L | Eppendorf Research Plus | R25623C | |
| ورق الوزن (107 × 210 مم) | Fisherbrand | 09-898-12B | |
| مضرب حبة ، 50/60 هرتز 2A | GeneReach Biotechnology Corp | tp0088 | |
| دوار مع مدار قادر على 500 دورة في الدقيقة | Hangzhou Miu Instrument ؛ | MU-E30-1044 | |
| أنابيب البولي بروبلين التي يمكن التخلص منها لاستيعاب ما لا يقل عن 24 مل | من Hyundai Micro & nbsp ؛ | H20050 | |
| غطاء الدخان | كوانغ دونغ الصناعية | دينار كوانغ 901-22128175 | |
| طرد مركزي صغيرة قادرة على 1500 × جم | Labo Gene | ؛ 9.900.900.729 | |
| خلاط دوامة صغيرة | LMS | VTX-3000L | |
| لفة رقائق الألومنيوم Lotte | لوت الألومنيوم | B0722X5FK5 | |
| ميزان رقمي | Mettler Toledo | ME204 | |
| مياه فائقة النقاء | MDM | MDM-0110 | |
| نصائح ماصة | نبتون Scientific | REF 2100.N | |
| شبكة سمك كبيرة | بركة H2O | Hoz135 ؛ | |
| طقم الكورتيزول اللعابي | Salimetrics | 1-3002-4 | |
| ملقط قطع العظام | Sankyo | 26-188A | |
| ماصة دقيقة متعددة القنوات لتقديم 50 مو ؛ L و 200 & L | VITLAB | 18A68756 | |
| منشفة | يوهان كيمبرلي | 1707921546 | |
| مناديل ورقية (107 & 210) | يوهان كيمبرلي | 41117 |
المراجع
- Meyer, J. S., Novak, M. A. Hair cortisol: a novel biomarker of hypothalamic-pituitary- adrenocortical activity. Endocrinology. 153, 4120-4127 (2012).
- Ghassemi Nejad, J., et al. A cortisol study: facial hair and nails. Journal of Steroids Hormonal S....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
