يستخدم هذا البروتوكول الببتيدات المختلطة G6PI لبناء نماذج التهاب المفاصل الروماتويدي التي هي أقرب إلى أن من التهاب المفاصل الروماتويدي الإنسان في CD4+ الخلايا التائية وسيتوكينات. تم الحصول على الخلايا التائية القاتلة الطبيعية عالية النقاء (iNKT2 بشكل رئيسي) مع أنماط ظاهرية ووظائف محددة عن طريق الاستقراء في الجسم الحي والتنقية المختبرية للعلاج المناعي بالتبني.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
العلاج المناعي بالتبني من خلايا iNKT في الجلوكوز-6-الفوسفات Isomerase (G6PI) الناجمة عن الفئران RA
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
التهاب المفاصل الروماتويدي (RA) هو مرض المناعة الذاتية الالتهابي المزمن المعقد. يرتبط الإمراض للمرض بخلايا T (iNKT) القاتلة الطبيعية الثابتة. المرضى الذين يعانون من RA النشطة تقديم عدد أقل من الخلايا iNKT, وظيفة الخلية المعيبة, والاستقطاب المفرط من Th1. في هذه الدراسة، تم إنشاء نموذج الحيوانات RA باستخدام خليط من hGPI325-339 وhGPI469-483 الببتيدات. تم الحصول على خلايا iNKT عن طريق الاستقراء في الجسم الحي وتنقية المختبر، تليها ضخ في الفئران RA للعلاج المناعي بالتبني. كشف نظام التصوير في الجسم الحي (IVIS) تتبع أن خلايا iNKT كانت موزعة بشكل رئيسي في الطحال والكبد. في اليوم 12 بعد العلاج بالخلايا ، تباطأ تطور المرض بشكل كبير ، وتم تخفيف الأعراض السريرية ، وزيادة وفرة خلايا iNKT في الغدة الصعترية ، وانخفضت نسبة iNKT1 في الغدة الصعترية ، وانخفضت مستويات TNF-α ، IFN-α ، وIL-6 في انخفض المصل. العلاج المناعي بالتبني من خلايا iNKT استعادة توازن الخلايا المناعية وتصحيح الالتهاب المفرط في الجسم.
المقدمة
التهاب المفاصل الروماتويدي (RA) هو مرض المناعة الذاتية التي تتميز المزمنة، الغازية التدريجيمع 0.5-1% الإصابة1،2. ويعزى الإمراض الكامنة إلى الانتشار غير الطبيعي للخلايا CD4+ و CD8+ T ، التي تتجلى في زيادة في نسبة CD4+IFN- ο + وCD4+IL - 17A+ الخلايا التائية ، وانخفاض عدد CD4+IL - 4+ وCD4+CD25+FoxP3+ الخلايا التائية. لذلك ، يتم زيادة إفراز السيتوكينات الالتهابية ، ويدمر التفاعل الالتهابي المفرط التوازن الأصلي ووظيفة التسامح في الجهاز المناعي في الجسم. وعلاوة على ذلك، فإن الخلايا اللمفاوية T الم....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
كانت جميع الفئران التجريبية (150 في المجموع) من الذكور الأصحاء DBA/1 الفئران، 6-8 أسابيع من العمر (20.0 ± 1.5 غرام)، تربى في بيئة محددة خالية من مسببات الأمراض (SPF). لا توجد معاملة خاصة قبل النمذجة. تم تقسيم التجربة إلى مجموعة تحكم صحية (15 فأرًا) ومجموعة تحكم نموذجية (15 فأرًا) ومجموعة علاج بالخلايا (55 فأرًا). تمت الموافقة على هذه الدراسة من قبل لجنة رعاية الحيوان والأخلاق في جامعة خبى.
1- بناء نموذج المرض
- تكرار نموذج الحيوانات RA
- تزن 1.75 ملغ من كل من hG6PI 325-339 وhG6PI 469-483 شظايا وتذوب لهم في 5.25 مل من 4 درجة مئوية الماء المقطر الثلاثي.
- حل الكامل Fdjuvant Freund (CFA) في حمام مائي 50 درجة مئوية، ورسم ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
درجة مؤشر التهاب المفاصل وسمك مخلب زاد بعد النمذجة. بالمقارنة مع مجموعة التحكم ، بدأت أقدام مجموعة نموذج RA تظهر تورمًا أحمر في 6 أيام بعد النمذجة ، مع تفاقم تدريجي. في 14 يوما، بلغ التورم الأحمر في مفصل الكاحل ذروته، يليه تخفيف تدريجي. سمك مخلب تغيرت بالمثل(P < 0.05)(الشكل 1).
زاد تسلل الخلايا الالتهابية بشكل كبير بعد النمذجة. أظهرت النتائج المرضية أن درجة تسلل الخلايا الالتهابية في الأنسجة الزليلية في الكاحل للفئران نموذج RA كانت مختلفة في مراحل مختل.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
خلايا iNKT هي خلايا T خاصة تسد المناعة الفطرية والتكيفية ويتم تطويرها بشكل رئيسي من CD4++/ CD8+ thymocytes. خلايا iNKT لديها وظائف متنوعة المناعة التنظيمية وتتفاعل مع الخلايا المناعية الأخرى عن طريق الاتصال المباشر وإفراز السيتوكينات المختلفة23، مما يؤثر على الخلايا التشجرات (DCs) ، الضامة ، العدلات ، الخلايا B ، الخلايا التائية ، وتمايز الخلايا NK والتنمية24. α-GalCer هو المنشط الكلاسيكي الخاص بخلايا iNK.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ولا يعلن أصحاب البلاغ عن أي تمويل أو تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
تم دعم دراستنا من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (NSFC) (81771755) ، والكليات والجامعة العلمية والتكنولوجية مشروع البحوث الرئيسية في مقاطعة خبى (ZD2017009) ومختبر الحيوان من مركز التجارب الطبية ، جامعة خبى. ونحن ممتنون لدعمهم.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| Alexa Fluor 647 Mouse Anti-PLZF | BD | 563490 | أمريكا |
| المضادة للPE MicroBeads | Miltenyi | 130-048-801 | ألمانيا |
| الأعمدة | Miltenyi | MS | ألمانيا |
| أجهزة الطرد المركزي المبردة | Beckman | Allegra & reg ؛ X-15R | أمريكا |
| DiR | ثيرمو فيشر العلمي | D12731 | أمريكا |
| مركز التضمين | تيانجين للطيران الكهروميكانيكية المحدودة | BMJ-1 | الصين |
| FITC الهامستر المضاد للفأر TCR & بيتا ؛ سلسلة | BD | 553170 | مقياس |
| التدفق | الأمريكي BD | Accuri C6 | America |
| Freund المساعد الكامل | Sigma | F5881 | America |
| hGPI325-339 (IWYINCFGCETHAML) | Karebay Biochem | 18062202 | الصين |
| hGPI469-483 (EGNRPTNSIVFTKLT) | Karebay Biochem | 18062203 | الصين |
| في نظام التصوير في الجسم الحي | بيركين إلمر | الفرجار IVIS lumina II | أمريكا |
| الأيونوميسين الكالسيوم | كايمان | 10004974 | أمريكا |
| KRN7000 | AdipoGen | AG-CN2-0013 | أمريكا |
| ماوس CD1d Tetramer-PE | MBL | TS-MCD-1 | اليابان |
| الماوس percoll | Solarbio | P8620 | الصين |
| المجهر | البصري أوليمبوس | أوليمبوس الثاني | اليابان |
| PerCP-CyTM5.5 ماوس مضاد ل ROR-& upsih; t | BD | 562683 | أمريكا |
| PerCP-CyTM5.5 ماوس مضاد للرهان | BD | 561316 | أمريكا |
| سم السعال الديكي | سيجما | P7208 | أمريكا |
| استرات فوربول | كايمان | 10008014 | أمريكا |
| عازلة تحلل خلايا الدم الحمراء | BD | 555899 | أمريكا |
| RPMI-1640 | الصناعات البيولوجية | 01-100-1ACS | إسرائيل |
| مجموعة السيتوكينات Th1 / Th2 / Th17 | BD | 560485 | أمريكا |
| Ultramicrotome | Leica | Leica EM UC6 | ألمانيا |
المراجع
- Tobón, G. J., Youinou, P., Saraux, A. The environment, geo-epidemiology, and autoimmune disease: Rheumatoid arthritis. Autoimmunity Reviews. 35 (1), 0-14 (2010).
- Cross, M., et al. The global burde....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
