يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

تحليل الغلوبولين المناعي G-Glycan بواسطة اللوني السائل فائق الأداء

8K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/60104

⸱

يناير 18, 2020

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Beijing Key Laboratory of Clinical Epidemiology, School of Public Health, Capital Medical University, 2School of Public Health, Shandong First Medical University & Shandong Academy of Medical Sciences, 3School of Medical and Health Sciences, Edith Cowan University

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

ويتميز الغلوبولين المناعي G (مفتش) N-glycan باستخدام التفاعل هيدروفيلييك اللوني uplc. الاضافه إلى ذلك ، يتم فصل هيكل مفتش N-glycan بشكل واضح. يقدم هنا مقدمه لهذه الطريقة التجريبية بحيث يمكن استخدامها علي نطاق واسع في إعدادات البحث.

الملخص

غليكوميكس هو تخصص فرعي جديد في البحوث نظام اوميكس التي توفر إمكانات كبيره في اكتشاف الجيل التالي من المؤشرات الحيوية للاصابه بالمرض ، واكتشاف هدف المخدرات ، والطب الدقيق. وقد تم الإبلاغ عن البديلة مفتش ن-غليكانز في العديد من الامراض المزمنة الشائعة ، واقترح ان يكون لها إمكانات كبيره في التطبيقات السريرية (اي ، المؤشرات الحيوية للتشخيص والتنبؤ بالامراض). وتتميز علي نطاق واسع مفتش ن-غليكانز باستخدام طريقه التفاعل هيدروفيلي اللوني (hilic) اللوني السائل فائقه الأداء (uplc). UPLC هو تكنولوجيا الكشف مستقره مع استنساخ جيده وعاليه الدقة الكمية النسبية. الاضافه إلى ذلك ، يتم فصل هيكل مفتش ن-glycan بشكل واضح ، وتتميز تكوين glycan ووفره نسبيه في البلازما.

المقدمة

N-glycosylation من البروتينات البشرية هو تعديل المشتركة والاساسيه بعد الانتقالية1 وقد تساعد علي التنبؤ بحدوث وتطور الامراض بشكل دقيق نسبيا. نظرا لتعقيد هيكلها ، فمن المتوقع ان هناك أكثر من 5,000 glycan الهياكل ، وتوفير إمكانات كبيره كما التشخيص والمؤشرات الحيوية التنبؤيه للامراض2. N-غليكانز تعلق علي الغلوبولين المناعي G (مفتش) وقد ثبت ان تكون ضرورية لوظيفة مفتش ، ومفتش ن-glycosylation يشارك في التوازن بين الموالية للانظمه والمضادة للالتهابات3. وتشارك التفاضلية مفتش ن-glycosylation في تطوير الامراض والتقدم ، والتي تمثل كل من الاستعداد واليه الوظيفية المشاركة في امراض المرض. وقد ارتبط الدور التهابي من مفتش ن-glycosylation مع الشيخوخة, الامراض التهابيه, امراض المناعة الذاتية, والسرطان4.

مع تطوير تكنولوجيا الكشف ، وتستخدم الطرق التالية علي نطاق واسع في غليكوميكس عاليه الانتاجيه: اللوني تفاعل هيدروفيلي (HILIC) اللوني السائل فائقه الأداء مع الكشف عن الفلورية (UPLC-FLR) ، متعدد الشعرية هلام الكهربائي مع الليزر التي يسببها الكشف عن الفلورية (Xgggg-ليف) ، مصفوفة بمساعده الليزر/تاين الوقت من الطيران الطيف الكتلي (MALDI-تسوف-MS) ، واللوني السائل الحراري الطيف الكتلي (LC-ESI-MS) . وقد تغلبت هذه الأساليب علي أوجه القصور السابقة للتدفق المنخفض ، والنتائج غير المستقرة ، وخصوصية الحساسية الضعيفة5،6.

ويستخدم علي نطاق واسع UPLC لاستكشاف العلاقة بين مفتش ن-glycosylation وبعض الامراض (اي ، الشيخوخة7، السمنة8، ديسسليبيدميا9، النوع الثاني السكري10، ارتفاع ضغط الدم11، السكتة الدماغية12، ومرض باركنسون13). بالمقارنة مع الطرق الثلاثة المذكورة أعلاه ، uplc لديه المزايا التالية5،14. أولا ، فانه يوفر طريقه التحليل الكمي النسبي ، وتحليل البيانات التي تنطوي علي تطبيع المنطقة الاجماليه يحسن قابليه للمقارنة لكل عينه. ثانيا ، تكلفه المعدات والخبرات المطلوبة منخفضه نسبيا ، مما يجعل من الأسهل لتنفيذ وتحويل العلامات الحيوية الغليكويليشن في التطبيقات السريرية. يقدم هنا مقدمه إلى UPLC بحيث يمكن استخدامها علي نطاق أوسع.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

وقد تمت الموافقة علي جميع المواضيع المدرجة في البروتوكول من قبل لجنه الأخلاق في جامعه العاصمة الطبية ، بكين ، الصين12. وتم الحصول علي موافقه خطيه مستنيرة من كل موضوع في بداية الدراسة.

1. مفتش العزلة

  1. اعداد المواد الكيميائية بما في ذلك ملزمه العازلة (الفوسفات مخزنه المالحة ، والتلفزيونية): 1x تلفزيوني (pH = 7.4) ، تحييد العازلة: 10x تلفزيوني (pH = 6.6-6.8) ، والeluent: 0.1 M حمض فورميك (pH = 2.5) ، حل تحييد للونت: 1 متر الايثانول + 20 مم تريس + 0.1 M NaCl (pH = 7.4) ، وتنظيف الحل للبروتين ز: 0.1 M NaOH + 30 ٪ propan-2-ol.
    ملاحظه: مستوي الحموضة حرج في هذا البروتوكول. والتملص من مفتش يتطلب درجه الحموضة منخفضه جدا ، وهناك خطر فقدان الأحماض السياليك بسبب التحلل الحمضي. ولذلك ، يحدث التملص في غضون ثوان ، ويتم استعاده الأس الهيدروجيني بسرعة إلى الحياد ، والحفاظ علي سلامه مفتش والأحماض السياليك.
  2. اعداد العينات: ذوبان الجليد عينه البلازما المجمدة ثم الطرد المركزي في 80 x g لمده 10 دقيقه ، وترك لوحه البروتين ز متجانسة والمواد الكيميائية المذكورة أعلاه لمده 30 دقيقه في درجه حرارة الغرفة (RT).
  3. نقل عينه 100 μL (والتي يمكن استخدامها للكشف عن 2x لمنع الفشل الأول) في لوحه جمع 2 مل (هنا ، ما مجموعه سته عينات قياسيه ، عينه تحكم واحده [الترا-المياه النقية] ، و 89 عينات البلازما تم تصميمها ل 96 لوحات جيدا وتعيينها عشوائيا إلى لوحه).
  4. تمييع العينات مع 1x تلفزيوني بواسطة 1:7 (v/v).
  5. تنظيف 0.45 μm البولي بروبيلين هيدروفيلييك (GHP) لوحه فلتر مع 200 μL من المياه النقية جدا (تكرار 2x).
  6. نقل العينات المخففة في لوحه فلتر وتصفيه العينات في لوحه جمع باستخدام مضخة فراغ (السيطرة ضغط فراغ في 266.6-399.9 Pa).
  7. اعداد لوحات البروتين G متجانسة
    1. تجاهل مخزن التخزين المؤقت.
    2. تنظيف لوحات متجانسة مع 2 مل من المياه فائقه نقيه ، 2 مل من برامج تلفزيونيه 1x ، 1 مل من حمض 0.1 M الفورميك ، 2 مل من برامج تلفزيونيه 10x ، 2 مل من برامج تلفزيونيه 1x (بالتعاقب) ، وأزاله السائل المتدفقة باستخدام مضخة فراغ.
  8. نقل العينات المصفاة إلى لوحه البروتين ز متجانسة ل مفتش ملزمه والتنظيف ، ثم تنظيف لوحات متجانسة مع 2 مل من برامج تلفزيونيه 1x (تكرار التنظيف 2x).
  9. Elute مفتش مع 1 مل من 0.1 M حمض الفورميك وتصفيه العينات في لوحه جمع بواسطة مضخة فراغ ، ثم أضافه 170 μl من بيكربونات الأمونيوم 1 M في لوحه جمع.
  10. الكشف عن تركيز مفتش باستخدام مقياس طيفي امتصاص (الطول الموجي الأمثل = 280 نانومتر).
    1. افتح البرنامج وحدد وضع CY3 البروتين.
    2. رسم 2 μL من المياه النقية جدا وتحميله في الشاشة ، ثم انقر فوق فارغه في البرنامج لمسح الشاشة (تكرار 1x).
    3. رسم 2 μL من المياه النقية جدا وتحميله في الشاشة ، ثم انقر فوق نموذج في البرنامج للكشف عن المياه النقية جدا.
    4. رسم 2 μL من عينه مفتش وتحميله في الشاشة ، ثم انقر فوق نموذج في البرنامج للكشف عن العينة.
    5. رسم 2 μL من المياه النقية جدا وتحميله في الشاشة ، ثم انقر فوق فارغه في البرنامج لمسح الشاشة.
    6. اغلق البرنامج.
      ملاحظه: الصيغة لحساب تركيز مفتش علي النحو التالي:

      Cمفتش = امتصاص x معامل الانقراض (13.7) × 1,000 ميكروغرام/مل
  11. وضع مفتش المستخرجة لتجف في فرن في 60 درجه مئوية والحفاظ علي مفتش المستخرجة (300 μL استخراج مفتش ل 4 ح).
    1. أزاله 300 μL من المستخرجة مفتش إذا كان التركيز أكبر من 1,000 ميكروغرام/مل.
    2. أزاله 350 μL من المستخرجة مفتش إذا كان التركيز بين 500-1000 ميكروغرام/مل.
    3. أزاله 400 μL من المستخرجة مفتش إذا كان التركيز بين 200-500 ميكروغرام/مل.
    4. أزاله 600 μL من المستخرجة مفتش إذا كان التركيز أصغر من 200 ميكروغرام/مل.
      ملاحظه: تركيز مفتش يجب ان يكون من الأفضل > 200 ميكروغرام/مل للكشف اللاحقة. وينبغي ان يكون متوسط كميه من مفتش ويفضل > 1200 ميكروغرام ، والتي يمكن اختبارها 2x في حاله فشل الاختبار الأول.
  12. تنظيف لوحه البروتين G متجانسة لأعاده استخدامها
    1. غسل لوحه مع 2 مل من المياه النقية جدا ، 1 مل من 0.1 M NaOH (لأزاله البروتينات عجلت) ، 4 مل من المياه النقية جدا ، و 4 مل من 1x تلفزيوني (بالتعاقب) ، ثم أزاله السائل المتدفقة باستخدام مضخة فراغ.
    2. غسل لوحه مع 2 مل من الماء النقي جدا ، 2 مل من 30 ٪ propan-2-ol (لأزاله البروتينات مسعور المرتبطة) ، 2 مل من المياه النقية جدا ، و 4 مل من 1x تلفزيوني (بالتعاقب) ، ثم أزاله السائل المتدفقة باستخدام مضخة فراغ.
    3. غسل لوحه مع 1 مل من العازلة (20 ٪ الايثانول + 20 مم تريس + 0.1 M NaCl) وأضافه 1 مل من العازلة (20 ٪ الايثانول + 20 ملم تريس + 0.1 M NaCl) إلى لوحه ، ثم ترك اللوحة في 4 درجه مئوية.

2. الإفراج عن غليكان

  1. اعداد مفتش المجففة وتخزين المواد الكيميائية بما في ذلك 1.33 ٪ SDS ، 4 ٪ Igepal (مخزن بعيدا عن الضوء) ، و 5x تلفزيوني في RT.
  2. اعداد PNGase F انزيم عن طريق تمييع 250 U انزيم مع 250 μL من المياه النقية جدا.
  3. التشبع من مفتش
    1. أضافه 30 μL من 1.33 ٪ SDS ومزيج من vortexing ، نقل العينة إلى فرن 65 درجه مئوية لمده 10 دقيقه ، ثم ازالته من الفرن والسماح للراحة لمده 15 دقيقه.
    2. أضافه 10 μL من 4 ٪ Igepal ووضعه علي الحاضنة تهتز لمده 5 دقائق.
  4. أزاله والإفراج عن غليكانز
    1. أضافه 20 μL من 5x تلفزيوني و 30-35 μL من 0.1 mol/L NaOH لتنظيم درجه الحموضة من 8.0 ، ومزيج من vortexing. أضف 4 ميكرولتر من انزيم PNGase F واخلطه بواسطة vortexing. ثم ، احتضان ل 18-20 h في 37 درجه مئوية حمام المياه.
    2. وضع غليكانز المفرج عنهم لتجف في فرن في 60 درجه مئوية ل 2.5-3.0 h.
    3. حفظ غليكانز الإفراج في-80 درجه مئوية حتى مزيد من القياس.
      ملاحظه: هذه الخطوة حرجه. مفتاح الإفراج عن glycan هو تحسين نشاط انزيم PNGase F لتعظيم كفاءتها.

3. غليكان وسم وتنقيه

  1. اعداد 2-أمينوبينزاميدي (2-AB) الوسم كاشف مع 0.70 ملغ من 2-AB ، 10.50 μL من حمض الخليك ، 6 ملغ من سيانوكوبالامين الصوديوم (نابه3CN) ، و 24.50 μl من ثنائي ميثيل سولفوكسيد (dmso) (الحجم الإجمالي = 35 μl). ثم ، أضافه حمض الخليك ، 2-AB ، و نابه3CN في dmso في النظام.
  2. تسميه غليكانز باستخدام 35 μL من 2-AB الوسم كاشف ، ونقل غليكانز المسمي إلى مذبذب لمده 5 دقائق ، ونقل إلى الفرن لمده 3 ح في 65 درجه مئوية ، ثم نقل إلى RT لمده 30 دقيقه.
    ملاحظه: يجب ان يتم تنفيذ الخطوة وضع العلامات glycan بأكمله اثناء الحماية من الضوء.
  3. Pretreat 0.2 ميكرومتر GHP لوحه فلتر مع 200 μL من الايثانول 70 ٪ ، 200 μL من المياه النقية جدا ، و 200 μL من 96 ٪ اسيتلونيتريل (4 درجه مئوية) ، ثم أزاله النفايات باستخدام مضخة فراغ.
  4. تنقيه من 2-AB المسمي glycan
    1. أضافه 700 μL من 100 ٪ اسيتلونيتريل إلى 2-AB المسمي غليكان ونقل إلى حاضنه تهتز لمده 5 دقائق.
    2. الطرد المركزي في 134 x g لمده 5 دقائق (4 درجه مئوية).
    3. نقل العينة إلى لوحه فلتر GHP 0.2 μm لمده 2 دقيقه وأزاله الترشيح (السائل المتدفق) باستخدام مضخة فراغ.
  5. غسل 2-AB المسمي غليكان مع 200 μL من 96 ٪ اسيتلونيتريل (4 °C) وأزاله الترشيح (تدفق السائل) باستخدام مضخة فراغ 5x-6x.
  6. Elute 2-AB المسمي غليكان مع 100 μL من المياه فائقه نقيه 3x.
  7. نقل 2-AB المسمي glycan في فرن لتجف في 60 درجه مئوية ل 3.5 h.
  8. حفظ المسمي N-غليكانز في-80 درجه مئوية حتى مزيد من القياس.

4. اللوني التفاعل هيدروفيلييك وتحليل غليكانز

  1. تكييف أدوات UPLC واعداد المراحل المتنقلة
    1. اعداد مراحل المحمول بما في ذلك المذيبات A: 100 mM فورمات الأمونيوم (pH = 4.4) ، المذيب ب: 100 ٪ اسيتلونيتريل ، المذيبات ج: 90 ٪ المياه النقية جدا (10 ٪ الميثانول) ، والمذيبات د: 50 ٪ الميثانول (المياه النقية جدا).
    2. فتح البرنامج للسيطرة علي مراحل المحمول.
    3. غسل الصكوك UPLC في معدل تدفق 0.2 mL/min (50 ٪ المذيبات B و 50 ٪ المذيبات C) موازنة لمده 30 دقيقه ، ثم في معدل تدفق 0.2 mL/min (25 ٪ المذيبات A و 75 ٪ المذيبات ب) موازنة لمده 20 دقيقه ، ثم معدل تدفق 0.4 mL/min موازنة.
  2. حل المسمي N-غليكانز مع 25 μl من خليط من 100 ٪ اسيتلونيتريل والمياه فائقه النقاء في 2:1 نسبه (v/v). ثم ، جهاز الطرد المركزي في 134 × g لمده 5 دقائق (4 درجه مئوية) وتحميل 10 μl من المسمي ن-غليكانز في الصكوك uplc.
  3. فصل N-غليكانز المسمي في معدل التدفق من 0.4 مل/دقيقه مع التدرج الخطي من 75 ٪ إلى 62 ٪ اسيتلونيتريل لمده 25 دقيقه. ثم ، تنفيذ التحليلية التي تديرها ديدكشان سلم المعايرة/glycopeptide العمود علي UPLC في 60 درجه مئوية (هنا ، تم الاحتفاظ عينات في 4 درجه مئوية قبل الحقن).
  4. كشف N-glycan مضان في أطوال موجه الاثاره والانبعاثات من 330 nm و 420 nm ، علي التوالي.
  5. دمج غليكانز علي أساس موقف الذروة والاحتفاظ بالوقت.
  6. حساب القيمة النسبية لكل غليكان الذروة (GP)/جميع قمم غليكان (GPs) (النسبة المئوية ، ٪) علي النحو التالي: GP1: GP1/GPs * 100 ، GP2: GP2/GPs * 100 ، GP3: GP3/GPs * 100 ، الخ.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

كما هو مبين في الشكل 1، تم تحليلها مفتش N-غليكانز إلى 24 الاوليه مفتش القمم غليكان (GPs) علي أساس موقف الذروة والاحتفاظ بالوقت. وتتوفر هياكل N-glycan من خلال الكشف عن الطيف الكتلي وفقا لدراسة سابقه (الجدول 1)15. ولضمان ان تكون النتائج قابله للمقارنة ، تم تطبيق التطبيع الإجمالي للمناطق ، حيث تم التعبير عن كميه الغلجان في كل ذروه كنسبه مئوية من إجمالي المساحة المتكاملة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

Uplc بمثابه التحليل الكمي النسبي طريقه5،15. وتشير النتائج إلى ان UPLC هو تكنولوجيا الكشف مستقره مع استنساخ جيده والدقة الكمية النسبية. يتم التعبير عن كميه غليكانز في كل ذروه كنسبه مئوية من إجمالي المنطقة المتكاملة باستخدام UPLC ، وهي القيمة النسبية. ويؤدي القياس الكمي النسبي إلى تحسين قابليه عينات الاختبار للمقارنة. الاضافه إلى ذلك ، 96 البروتين جيدا وتستخدم لوحات G لتنقيه مفتش مع 96 عينات في وقت واحد للكشف عن الانتاجيه العالية. قدره البروتين ز لربط مفتش أكبر من ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

وليس لدي المؤلفين ما يفصحون عنه.

شكر وتقدير

وقد دعم هذا العمل بمنح مقدمه من المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (81673247 & 81872682) والمنحة التعاونية الاستراليه الصينية (NH & APP1112767-NSFC 81561128020).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
2-أمينوبنزاميد ، 2-ABسيجما ، الصين
96 بئر لوحةAXYGEN
96 جيدا بول0.45 um GHP
96 جيدا لوحة متجانسةBIA Separations
96 بئر لوحة الدوارةEppendorf Co.، Ltd ، ألمانياT_1087461900
حمض الخليكSigma، الصين
أسيتونيتريلHuihai Keyi التكنولوجيا المحدودة ، الصين
بيكربونات الأمونيومShenggong البيولوجية الهندسة المحدودة ، الصين
الأمونيوم فورماتبكين مينرويدا التكنولوجيا المحدودة
حاضنة الاهتزاز المستمر / الروكZhicheng أداة التحليل التصنيع المحدودة ، الصينZWY-10313
سلم معايرة ديكستران / عمود جليكوببتيدواط التكنولوجيا المحدودة ، الصينBEH عمود
ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO)سيجما ، الصين
ثنائي فوسفات الصوديومShenggong الهندسة البيولوجية المحدودة ، الصين
أفران كهربائيةاختبار الأدوات المحدودة202-2AB
Empower 3.0Waters technology Co.، Ltd ، أمريكا
EthanolHuihai Keyi Technology Co.، Ltd ، الصين
حمض الفورميكسيجما ، الصين
GlycoProfile 2-AB مجموعة وضع العلاماتسيجما ، الصين
حمض الهيدروكلوريكJunrui Biotechnology Co.، Ltd ، الصين
أجهزة الطرد المركزي عالية السرعةEppendorf Co.، Ltd ، ألمانيا5430
IgepalSigma ، الصين
أجهزة الطرد المركزي ذات درجة الحرارة المنخفضةEppendorf Co.، Ltd ، ألمانيا
ثلاجة درجة حرارة منخفضةQingdao Haier Co.، Ltd
المنوع 96 بئر لوحةواط التكنولوجيا المحدودة ، الصين186001831
الميثانولHuihai Keyi التكنولوجيا المحدودة ، الصين
Milli-Q عداد المياه النقيةMillipore المحدودة ، أمريكاميزة A10
NaOHShenggong الهندسة البيولوجية المحدودة ، الصين
اختبار PHSartorius Co.، Ltd ، ألمانياPB-10
محلول ملحي مخزن الفوسفات ، PBSShenggong الهندسة البيولوجية المحدودة ، الصين
PipetteEppendorf المحدودة ، ألمانيا4672100 ، 0.5-10 & mu ؛ ل & أمبير 10-100 مو ؛ ل & أمبير 20-200 مو ؛ ل & أمبير 1000 مو ؛ ل
PNGase F إنزيمسيجما ، الصين
فوسفات ثنائي هيدروجين البوتاسيومShenggong Biological Engineering Co.، Ltd ، الصين
Propan-2-olHuihai Keyi Technology Co.، Ltd ، الصين
SDSSigma ، الصين
كلوريد الصوديومShenggong البيولوجية الهندسة المحدودة ، الصين
سيانوبوروهيدريد الصوديوم (NaBH3CN)سيجما ، الصين
مقياس الطيفالضوئي شنغهاي Yuanxi أداة المحدودةB-500
نقل بندقية السائلSmer Fell Science and Technology Co.، Ltd ، الصين4672100
تريسأمريسكو ، ثلاجة
أمريكا ذات درجة حرارة منخفضةThermo Co.، Ltd ، أمريكاMLT-1386-3-V ؛ MDF-382E
فائقة الأداء الكروماتوغرافيا السائلةواتس التكنولوجيا المحدودة ، الصينAcquity MLtraPerformance LC
مضخة فراغواتس التكنولوجيا المحدودة ، الصين725000604
آلة التطاير / مجففEppendorf Co.، Ltd ، ألمانياT_1087461900
VortexChangzhou Enpei أداة المحدودة ، الصينNP-30S
حمام الماءالمحدودةDK-98-IIA
ميزانوزن شنغهاي Jingke الصك العلمي المحدودةMP200B
الترشيح للغاية أدوات اختبار

المراجع

  1. Kolarich, D., Lepenies, B., Seeberger, P. H. Glycomics, glycoproteomics and the immune system. Current Opinion in Chemical Biology. 16, 214(2012).
  2. Cummings, R., Pierce, J. M. The Challenge and Promise of Glycomics. Chemistry Biology. 21 (1), (2014).
  3. Shade, K. T. C., Anthony, R. M. Antibody Glycosylation and Inflammation. Antibodies. 2, 392(2013).
  4. Gudelj, I., Lauc, G., Pezer, M. Immunoglobulin G glycosylation in aging and diseases. Cellular Immunology. 333, 65(2018).
  5. Huffman, J. E., et al. Comparative performance of four methods for high-throughput glycosylation analysis of immunoglobulin G in genetic and epidemiological research. Molecular Cellular Proteomics. 13, 1598(2014).
  6. Stockmann, H., Adamczyk, B., Hayes, J., Rudd, P. M. Automated, high-throughput IgG-antibody glycoprofiling platform. Analytical Chemistry. 85, 8841(2013).
  7. Kristic, J., et al. Glycans are a novel biomarker of chronological and biological ages. Journals of Gerontology. Series A, Biological Sciences Medical Sciences. 69, 779(2014).
  8. Nikolac, P. M., et al. The association between galactosylation of immunoglobulin G and body mass index. Progress in Neuropsychopharmacology Biological Psychiatry. 48, 20(2014).
  9. Liu, D., et al. The changes of immunoglobulin G N-glycosylation in blood lipids and dyslipidaemia. Journal of Translational Medicine. 16, 235(2018).
  10. Lemmers, R., et al. IgG glycan patterns are associated with type 2 diabetes in independent European populations. Biochimica Biophysica Acta General Subjects. 1861, 2240(2017).
  11. Wang, Y., et al. The Association Between Glycosylation of Immunoglobulin G and Hypertension: A Multiple Ethnic Cross-Sectional Study. Medicine (Baltimore). 95, e3379(2016).
  12. Liu, D., et al. Ischemic stroke is associated with the pro-inflammatory potential of N-glycosylated immunoglobulin G. Journal of Neuroinflammation. 15, 123(2018).
  13. Russell, A. C., et al. The N-glycosylation of immunoglobulin G as a novel biomarker of Parkinson's disease. GLYCOBIOLOGY. 27, 501(2017).
  14. Bones, J., Mittermayr, S., O'Donoghue, N., Guttman, A., Rudd, P. M. Ultra performance liquid chromatographic profiling of serum N-glycans for fast and efficient identification of cancer associated alterations in glycosylation. Analytical Chemistry. 82, 10208(2010).
  15. Pucic, M., et al. High throughput isolation and glycosylation analysis of IgG-variability and heritability of the IgG glycome in three isolated human populations. Molecular Cellular Proteomics. 10, M111(2011).
  16. Berruex, L. G., Freitag, R., Tennikova, T. B. Comparison of antibody binding to immobilized group specific affinity ligands in high performance monolith affinity chromatography. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 24, 95(2000).
  17. Ren, S., et al. Distribution of IgG galactosylation as a promising biomarker for cancer screening in multiple cancer types. Cell Research. 26, 963(2016).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

IgG G F UPLC
تحليل الغلوبولين المناعي G-Glycan بواسطة اللوني السائل فائق الأداء
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.