جيل من نموذج الفئران من فشل الكبد الحاد عن طريق الجمع بين 70 ٪ استئصال الكبد الجزئي و اسيتامينوفين

Preeti Sahay; Kshama Jain; Prakriti Sinha; Barun Das; Alaknanda Mishra; Ashwani Kesarwani; Parul Sahu; K.  Varsha Mohan; M.J.  Mahesh Kumar; Perumal Nagarajan; Pramod Upadhyay

doi:10.3791/60146

Method Article

جيل من نموذج الفئران من فشل الكبد الحاد عن طريق الجمع بين 70 ٪ استئصال الكبد الجزئي و اسيتامينوفين

DOI:

10.3791/60146

⸱

November 27th, 2019

Preeti Sahay¹ , Kshama Jain¹ , Prakriti Sinha¹ , Barun Das¹ , Alaknanda Mishra¹ , Ashwani Kesarwani¹ , Parul Sahu¹ , K. Varsha Mohan¹ , M.J. Mahesh Kumar² , Perumal Nagarajan¹ , Pramod Upadhyay¹

¹National Institute of Immunology, ²Center for Cellular and Molecular Biology

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نموذج الحيوانية فشل الكبد الحاد وضعت في الدراسة الحالية يقدم بديلا ممكنا لدراسة العلاجات المحتملة. يستخدم النموذج الحالي التاثير المشترك للإصابات الكبدية الناجمة عن المخدرات والفيزيائية ويوفر نافذه زمنيه مناسبه لدراسة إمكانات العلاجات الجديدة.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

فشل الكبد الحاد (الفا) هو حاله سريريه تسببها مسببات مختلفه مما ادي إلى فقدان وظائف الأيض ، البيوكيميائية ، توليف ، ومزيل السموم من الكبد. في معظم حالات تلف الكبد التي لا رجعه فيها ، تظل عمليه زرع الكبد التقويمية هي العلاج الوحيد المتاح. ولدراسة الإمكانيات العلاجية لعلاج المؤسسة ، فان الاختبار السابق لها في نموذج حيواني لمؤسسه الفا هو أمر أساسي. في الدراسة الحالية ، تم تطوير نموذج الفا في الفئران من خلال الجمع بين 70 ٪ استئصال الكبد الجزئي (PHx) وحقن اسيتامينوفين (APAP) التي توفر نافذه علاجيه من 48 h. تمت أزاله الفصوص الجانبية الوسطي واليسرى من الكبد إلى المكوس 70 ٪ من كتله الكبد وأعطيت APAP 24 ساعة بعد جراحيا لمده 2 أيام. تم العثور علي البقاء علي قيد الحياة في الحيوانية التي يسببها الف التي انخفضت بشده. وأكد تطوير الف من المستويات المصل المتغيرة من الانزيمات الأنين الامينيه المنقولة (ALT) ، اسبارتات الامينيه ترانسفيراز (AST) ، الفوسفاتيز القلوية (ALP) ؛ التغيرات في وقت البروز (PT); وتقييم المعدل الدولي الموحد (INR). كشفت دراسة عن التعبير الجيني من قبل qPCR زيادة في مستويات التعبير من الجينات المشاركة في موت الخلايا المبرمج, التهاب, وفي تطور أصابه الكبد. وقد لوحظ انحطاط منتشر من الخلايا الكبدية وتسلل للخلايا المناعية من قبل التقييم النسيجي. وقد تاكدت قابليه هذه المؤسسة للانعكاس من خلال استعاده مستويات البقاء والمصل لل ALT و AST و ALP بعد الزرع داخل الكلية لخلايا الكبد السليمة المتزامنة. ويقدم هذا النموذج بديلا موثوقا لنماذج الحيوانية المتاحة لدراسة الفيزيولوجيا المرضية لمؤسسه الفا وكذلك لتقييم إمكانات العلاج الجديد لمؤسسه الفا. كما ان استخدام نهجين مختلفين يجعل من الممكن دراسة الأثر المشترك للاصابه بالكبد الناجم عن الإصابات الجسدية والدوائية. استنساخ وجدوى الاجراء الحالي هو فائده اضافيه من النموذج.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يتم تعريف فشل الكبد الحاد (الف) من قبل الجمعية الامريكيه لدراسة امراض الكبد والتطور السريع للاصابه الكبدية الحاده دون اي علامات الضرر السابقة ويتميز بضعف شديد من الاصطناعية, الأيض, والوظائف المزيلة للسموم من الكبد¹. الف يختلف عن فشل الكبد المزمن حيث يحدث الفشل نتيجة لأصابه الكبد الناجمة علي مدي فتره طويلة من الزمن ومن فشل الكبد المزمن الحاد (aclf), حيث يحدث تلف مفاجئ في الكبد نتيجة لامراض الكبد المزمنة²^,³^,⁴. العلاج الوحيد المتاح لمؤسسه الفا هو زرع الكبد التقويمي ، أو قد يحدث الموت. ونظرا لنقص المتبرعين بالكبد ، فان معدل الوفاات في المرضي الذين يعانون م....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد تمت الموافقة علي الاجراء الموصوف أدناه من قبل لجنه الأخلاقيات الحيوانية المؤسسية للمعهد الوطني لعلم المناعة ، نيودلهي. الرقم المرجعي التسلسلي للموافقة هو IAEC # 355/14.

1-الاعداد

التحضير للإجراءات الجراحية كما هو موضح سابقا من قبل Das B وآخرون²⁶.
استخدام 6-8 أسابيع من العمر الفئران Wistar الفطرية مع وزن الجسم من 200-250 غرام.
منزل الماشية تحت شروط الرعاية الحيوانية القياسية وإطعامهم مع الفئران تشاو و حسب قبل وبعد الاجراء.
عند أداء 70% PHx ، استخدم مزيج كوكتيل قياسي من هيدروكلوريد الكيتامين (100 ملغم/كغ من وزن الجسم) و اكسيليازين (10 ملغم/كغم من وزن الجسم) ، والذي يتم حقنه د....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نسبه البقاء علي قيد الحياة في نماذج الحيوانية من الف
وقد تم توحيد الجرعة المثلي من APAP لتسبب الفا في تركيبه مع 70 ٪ PHx كما 750 مغ/كغ من وزن الجسم. بدا نظام العلاج 24 ساعة بعد 70 ٪ PHx ، عندما كانت الماشية قد تعافي تماما من الجراحة ، وتتكون من جرعتين APAP في فترات 24 ساعة. ولوحظت وفيات بمعدل 80 في المائة بعد أداره الجرعة الثانية من APAP ، 48 h بعد الجراحة. وقد حللت نسبه البقاء علي قيد الحياة ورسمت عن طريق كابلان-ماير (الشكل 1). استنساخ في وقت الوفاة والفترة الزمنيه التي .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تطوير نموذج الحيوانية المناسبة لمؤسسه الفا هو أمر بالغ الاهميه لفهم أفضل لتولد المرض وتطور الف. كما يوفر نموذج الحيوانية المميز لمؤسسه الفا فرصه لتطوير ومحاكمه النهج العلاجية الجديدة ضد مؤسسه المؤسسة. وقد بذلت محاولات كثيره لتطوير نموذج ذي صله سريريا من الف⁶^،¹²^،²¹^،²³^،⁴⁶^،⁴⁷^،⁴⁸. معظم هذه الدرا.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وليس لدي المؤلفين ما يفصحون عنه.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وكان هذا العمل مدعوما بالمنحة الاساسيه التي تلقتها من أداره التكنولوجيا الحيوية ، حكومة الهند ، إلى المعهد الوطني للمناعة في نيودلهي.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
Name	Company	Catalog Number	Comments
أسيتامينوفين (بيوسيتامول)	EG Pharmaceuticals		لا يوجد رقم كتالوج محدد (المشتريات المحلية)
مجموعة الفوسفاتيز القلوية (DEA) النظام	السريري المرجاني ، الهند		لا يوجد رقم كتالوج محدد (المشتريات المحلية)
محلل آلي	توليب ، ألتو سانتراكروز ، الهند	محلل	الكيمياء الحيوية للاختبار الوظيفي للكبد
البيتادين ( محلول بوفيدون اليود)	وين-ميديكير; الهند		لا يوجد رقم كتالوج محدد (المشتريات المحلية)
خزانة السلامة البيولوجية (الفئة الأولى)	كارتوس الدولية؛ الهند		لا يوجد رقم كتالوج محدد (المشتريات المحلية)
مجهر المجال الساطع	أوليمبوس ، اليابان	LX51
Cefotaxime (Taxim®)	الكيم. حقن الصوديوم سيفوتكشيم الهند		، لا يوجد رقم كتالوج محدد (المشتريات المحلية)
مصفاة الخلية	سيجما. الولايات المتحدة	CLS431752
كولاجيناز النوع الأول	Gibco من Life Technologies	17100-017
براعم القطن	Pure Swabs Pvt Ltd ؛ الهند		لا يوجد رقم كتالوج محدد (المشتريات المحلية)
ورقة الستارة	JSD Surgicals ، دلهي ، الهند		لا يوجد رقم كتالوج محدد (المشتريات المحلية)
DPX Mountant	Sigma ؛ الولايات المتحدة	6522
محلول Eosin Y ،	سيجما الكحولي ؛ الولايات	المتحدة HT110132
الملقط	الجراحي الكبرى; الهند		لا يوجد رقم كتالوج محدد (المشتريات المحلية)
نظام التخدير بالغاز	Ugo Basile ؛ إيطاليا	211000
جلوكوز	هيميديا ، الهند	GRM077
كريم إزالة الشعر (Veet & reg;)	ريكيت بينكيزر ، الهند		لا يوجد رقم كتالوج محدد (المشتريات المحلية) محلول
الهيماتوكسيلين ، سيجما	ماير. الولايات المتحدة	MHS16
ملح الصوديوم الهيبارين	هيميديا; الهند	RM554
هيالورونيداز من خصيتين الأغنام	سيجما. الولايات المتحدة	H6254
IV قنية (Plusflon)	Mediplus ، الهند	المرجع 1732411420
محاقن الأنسولين	BD ؛ الولايات المتحدة	REF 303060
Isoflurane (Forane ®)	Asecia Queenborough	No B506	استنشاق
الكيتامين المخدر (Ketamax & reg;)	ترويكا للمستحضرات الصيدلانية المحدودة		الكيتامين هيدروكلوريد IP ، لا يوجد رقم كتالوج محدد (المشتريات المحلية)
Meloxicam (Melonex®)	إنتاس للمستحضرات الصيدلانية المحدودة ؛ الهند		لا يوجد رقم كتالوج محدد (المشتريات المحلية)
حاملات الإبر الصغيرة مباشرة & منحني	Mercian. إنجلترا	BS-13-8
حاملات الإبرة الصغيرة على التوالي & منحني	Mercian. إنجلترا	BS-13-8
Microtome	Histo-Line Laboratories ، إيطاليا	MRS3500
خيط النايلون	العظيم ؛ الهند		لا يوجد رقم كتالوج محدد (المشتريات المحلية)
بارافورمالدهايد	هيميديا ؛ الهند	GRM 3660
Percoll & reg ؛	GE Healthcare	17-0891-01
Refresh Tears / Eyemist Gel	Allergan India Private Limited / Sun Pharma ، الهند	P3060	لا يوجد رقم كتالوج محدد
RPMI	Himedia ؛ الهند		لا يوجد رقم كتالوج محدد (المشتريات المحلية)
مشرط	الجراحات الكبرى; الهند		لا يوجد رقم كتالوج محدد (المشتريات المحلية)
مقص	العمليات الجراحية الرئيسية. الهند		لا يوجد رقم كتالوج محدد (المشتريات المحلية) SGOT
(ASAT) KIT	CORAL CLINICAL SYSTEM ، الهند		لا يوجد رقم كتالوج محدد (المشتريات المحلية)
SGPT (ALAT) KIT	CORAL CLINICAL SYSTEM ، الهند		لا يوجد رقم كتالوج محدد (المشتريات المحلية)
Shandon Cryotome E Cryostat	Thermo Electron Corporation ؛ الولايات المتحدة		لا يوجد رقم كتالوج محدد
السكروز	سيجما. الولايات المتحدة	S0389
الشفرة الجراحية رقم 22	La Medcare ، الهند		لا يوجد رقم كتالوج محدد (المشتريات المحلية)
اللوحة الجراحية	محليا		لا يوجد رقم كتالوج محدد (المشتريات المحلية)
الشريط الأبيض الجراحي	3M الهند ؛ الهند	1530-1	الشريط الجراحي Micropore
	Ethicon و Johnson & amp جونسون ، الهند	NW 5047
محاقن (1 مل ، 26 جم)	ديسبو فان ؛ الهند		لا يوجد رقم كتالوج محدد (المشتريات المحلية)
ماكينة التشذيب (Clipper)	Philips	NL9206AD-4 DRACHTEN QT9005
ماكينة الوزن	Braun		لا يوجد رقم كتالوج محدد (المشتريات المحلية)
William's E Media	Himedia; الهند	AT125
Xylazine (Xylaxin®)	الهندية المناعية المحدودة		مهدئة ، قبل التخدير ، مسكن ومرخي للعضلات

خيوط

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Polson, J., Lee, W. M. AASLD position paper: the management of acute liver failure. Hepatology. 41, 1179-1197 (2005).
Chung, R. T., et al. Pathogenesis of liver injury in acute liver failure. Gastroenterology. 143, 1-7 (2012).
Fyfe, B., Zaldana, F., Liu, ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

جيل من نموذج الفئران من فشل الكبد الحاد عن طريق الجمع بين 70 ٪ استئصال الكبد الجزئي و اسيتامينوفين

In This Article

Summary

Abstract

Introduction

Protocol

Results

Discussion

Disclosures

Acknowledgements

Materials

References

Reprints and Permissions

Tags

Related Articles