نموذج تعبير كيميائي خارج الرحم لاختبار توظيف الضامة في فيفو

Yunyun Jiang; Jiahao Chen; Jin Xu

doi:10.3791/60161

مقالة منهجية

نموذج تعبير كيميائي خارج الرحم لاختبار توظيف الضامة في فيفو

DOI:

10.3791/60161

⸱

سبتمبر 25, 2019

Yunyun Jiang¹ , Jiahao Chen¹ , Jin Xu²

¹Department of Developmental Biology, School of Basic Medical Sciences, Southern Medical University, ²Division of Cell, Developmental and Integrative Biology, School of Medicine, South China University of Technology

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لاختبار تأثير chemokine على تجنيد الضامة في الجسم الحي، تم استخدام جبل كامل في الموقع التهجين للكشف عن التعبير خارج الرحم من chemokine، واستخدمت تلطيخ المناعة لتسمية الضامة. تم استخدام التصوير الحي للمراقبة في الوقت الحقيقي لهجرة الضامة.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وتستخدم على نطاق واسع حمار وحشي في البحوث الأساسية والطبية الحيوية. العديد من خطوط حمار وحشي المعدلة وراثيا متاحة حاليا لتسمية أنواع مختلفة من الخلايا. بسبب الجسم الجنيني الشفاف من سمك الحمار الوحشي ، فمن المناسب بالنسبة لنا لدراسة تأثير واحد chemokine على سلوك نوع معين من الخلايا في الجسم الحي. هنا قدمنا سير العمل للتحقيق في وظيفة chemokine على هجرة الضامة في الجسم الحي. قمنا ببناء بلازميد الإفراط في التعبير الأنسجة الخاصة لالإفراط في التعبير IL-34 وحقن بلازميد في مرحلة خلية واحدة أجنة الأسماك المعدلة وراثيا التي وصفت الضامة على وجه التحديد من قبل بروتين الفلورسنت. ثم استخدمنا جبل كامل الفلورسنت في الموقع التهجين والمناعية للكشف عن نمط التعبير chemokine وعدد أو موقع الضامة. تم رفع الأجنة WT حقن لتوليد خط مستقر المعدلة وراثيا. وأخيرا، استخدمنا التصوير الحي البؤري لمراقبة سلوك الضامة مباشرة في الأسماك المعدلة وراثيا مستقرة لدراسة وظيفة IL-34 على الضامة في الجسم الحي.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

سمك الحمار الوحشي هو صغير الاستوائية الصلبة العظام أسماك المياه العذبة نشأت في الهند. وفيما يتعلق بحفظ الجينات، حمار وحشي لديها تشابه من 87٪ إلى الإنسان¹. يمكن أن توفر لنا رؤى حول المواضيع ذات الصلة من الإنسان من خلال دراسة تنظيم الجينات، وظيفة البروتين وسلوك الخلية مثل الهجرة، et.al الانتشار في حمار وحشي. يمكن استخدام جنين سمك الحمار الوحشي لمراقبة تطور الأجنة المبكرة في مراحل مختلفة بعد تثبيط الصباغ. وفي الوقت نفسه، فإنه يأخذ ثلاثة أشهر فقط لحمار وحشي لتطوير إلى النضج الجنسي، ثم حمار وحشي يمكن أن تنتج مئات من البيض كل 4 أيام. صغيرة الحجم، وتربية بسيطة، والقدرة الإنجابية القوية، وهذه المزايا تجعل ثقافة حمار وحشي جدا توفير الفضاء، مما يؤدي إلى ثقافة واسعة النطاق. الماوس نموذج الثدييات التقليدية لديها تكاليف صيانة أعلى من حمار وحشي، وبالتالي الحد من حجم رفع الماوس. في جانب نمو الجنين المبكر ، من الصعب ملاحظة جنين الفأر في حالة حية بسبب خصائص نمو جنين الفئران في رحم الأم. على العكس من ذلك، تتطور أجنة حمار وحشي خارجيا ً وتتسم بالشفافية، وبالتالي يسهل ملاحظتها تحت المجهر. وعلاوة على ذلك، من السهل جدا بناء مجموعة متنوعة من الخطوط المعدلة وراثيا للبحوث ذات الصلة وظيفة الجينات. حاليا، تتوفر خطوط مختلفة من أسماك الحمار الوحشي المعدلة وراثيا لتسمية أنواع مختلفة من الخلايا. فمن المريح جدا الآن لبناء خطوط المعدلة وراثيا لالإفراط في التعبير عن العلاج الكيميائي في مواقع محددة ودراسة وظيفة chemokines على سلوك الخلية في حمار وحشي.

هنا، قدمنا سير العمل لاستخدام حمار وحشي خط المعدلة وراثيا للتحقيق في وظيفة IL-34 على سلوك الضامة في الجسم الحي²^،³^،⁴^،⁵^،⁶^،⁷. أولا، قمنا ببناء بلازميد الإفراط في التعبير عن الكبد محددة من الجينات il34 وحقن بلازميد في مرحلة خلية واحدة TG (mpeg1: GFP) أجنة الأسماك التي وصفت على وجه التحديد الضامة من قبل GFP البروتين الفلورسنت. ثم، استخدمنا جبل كامل الفلورسنت في الموقع التهجين وتلطيخ المناعة للكشف عن نمط التعبير il34 وعدد أو موقع الضامة. تم رفع الأجنة WT حقن لتوليد خط مستقر المعدلة وراثيا. في هذه الخطوات، أنشأنا والتحقق من صحة خط إنتاج السيتوكين وتقييم بصريا الآثار التي يمكن رؤيتها على توزيع الضامة. وأخيرا، للتحقيق في سلوك الضامة ردا على السيتوكين، استخدمنا التصوير الحي البؤري لمراقبة مباشرة هجرة الضامة لتأكيد وظيفة il34 على هجرة الضامة في الجسم الحي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ملاحظة: تم علاج جميع العينات بواسطة فينيلثيويوريا (PTU) ماء البيض لمنع الصباغ.

1. توليد TG (fabp10a: il34)المنشآت المعدلة وراثيا وحقن الأسماك

استنساخ 2.8 كيلو بايت fabp10a المروج⁸ ومناطق الترميز IL-34 (ENSDART00000126460.3) من حمار وحشي في ناقلات pTol2 لتوليد بناء fabp10a-il34. حقن المنشآت في مرحلة خلية واحدة TG (mpeg1: GFP)وWT أجنة الأسماك جنبا إلى جنب مع mRNA transposase. رفع fabp10a-il34 حقن الأجنة WT إلى الكبار⁹ وتحديد مؤسس المعدلة وراثيا عن طريق التهجين في الموقع.
ملاحظة: حقن بناء Tol2 مباشرة في آخر المعدلة وراثيا يمكن أن تكون إشكالية إذا تم إجراء خط المعدلة وراثيا الأخرى مع نفس نظام transposon. وتتوّه الممارسة العامة هي وضع خط مستقل وراثياً ثم تجاوز الخط الجديد بسطر مراسل آخر. وهذا يضمن أنه لن تكون هناك آثار للجينات الجديدة على ترانسجين تم إدراجه سابقاً.

2. الفلورسنت جبل كامل في الموقع التهجين (WISH) الجمع بين مع تلطيخ المناعة

تثبيت العينة
1. جمع الأجنة من الحقن العابر أو مستقرة IL-34 خط المعدلة وراثيا التي عبرت مع TG (mpeg1: GFP) في المراحل المطلوبة.
  ملاحظة: لهذه الحالة، تم جمع الأجنة في 4 د بعد الإخصاب (dpf). (إذا لزم الأمر) إزالة الشيوريون عن طريق الحقنة.
2. إصلاح الأجنة مع 4٪ بارافورمالدهايد (PFA) بين عشية وضحاها في 4 درجة مئوية أو 2 ساعة في درجة حرارة الغرفة (RT) (حوالي 25 درجة مئوية).
3. غسل الأجنة مع الفوسفات المخزنة المالحة بالإضافة إلى توين 20 (PBST) 3X 5 دقيقة.
4. تجفيف الأجنة بشكل منفصل مع 50٪ الميثانول في PBST (50٪ الميثانول / PBST) و 100٪ الميثانول، 1X 5 دقيقة لكل منهما. ثم، تغيير إلى الميثانول الطازجة 100٪ وتخزينها في -20 درجة مئوية (على الأقل 2 ح).
  ملاحظة: يمكن إيقاف البروتوكول مؤقتاً هنا.
التهجين التحقيق (اليوم الأول)
1. إعادة ترطيب الأجنة في الخطوات السابقة مع الميثانول 50٪ في PBST (50٪ الميثانول / PBST)، ثم يغسل مع PBST 3X 5 دقيقة.
2. هضم الأجنة مع proteinase K في PBST في RT (التركيز النهائي: 10 ميكروغرام / مل؛ 1:2000 في PBST).
  ملاحظة: وقت الهضم يعتمد على مرحلة الأجنة: أقل من 36 ساعة بعد الإخصاب (hpf)، لا حاجة. 36 هبف-2 dpf الجنين، 3-5 دقيقة؛ 2-3 dpf الجنين، 10 دقيقة؛ 3-4 dpf الجنين، 15 دقيقة؛ 4-5 dpf الجنين، 15-20 دقيقة؛ 5-6 dpf الجنين، 20-27 دقيقة؛ > 6 ديسيبل الجنين، 25-30 دقيقة في RT (حوالي 25 درجة مئوية).
3. تجاهل محلول الهضم وتنفيذ التثبيت مرة أخرى مع 4٪ PFA، لمدة 20 دقيقة في RT.
4. غسل الأجنة مع PBST 2X 10 دقيقة.
5. تجاهل PBST، تنفيذ التهجين المسبق مع المخزن المؤقت التهجين ساخنة (HB المخزن المؤقت) في 65 درجة مئوية لمدة 5 دقائق، إعادة تدوير المخزن المؤقت HB في الأنبوب الأصلي.
6. قم بإجراء التهجين قبل التهجين باستخدام المخزن المؤقت الجديد للHB الساخن عند 65 درجة مئوية على الأقل 1 ساعة.
7. قبل تسخين التحقيق⁹ (لهذه الحالة كان التحقيق il34، 1 نانوغرام / مل) في 65 درجة مئوية على الأقل 10 دقيقة. ثم إعادة تدوير المخزن المؤقت HB في الأنبوب الأصلي. قم بإجراء التهجين مع المسبار المدفأ مسبقًا عند 65 درجة مئوية بين عشية وضحاها.
علاج الأجسام المضادة (اليوم الثاني)
1. قبل تسخين 50٪ formamide / 2X سيترات الصوديوم المالحة بالإضافة إلى توين 20 (SSCT)، 2X SSCT، 0.2X SSCT في 65 درجة مئوية.
2. إعادة تدوير التحقيق في الأنبوب الأصلي وتخزين التحقيق في -20 درجة مئوية.
3. غسل الأجنة بشكل منفصل مع 50٪ فورماميد / 2X SSCT. 2x SSCT؛ 0.2x SSCT، 3X 20 دقيقة أو 2X 30 دقيقة لكل منهما عند 65 درجة مئوية.
4. غسل الأجنة مع PBST 3X 5 دقيقة.
5. منع العينات مع 600 درجة مئوية من العازلة حجب (5٪ تصفية مصل البقر الجنيني (FBS) في PBST) لمدة 1 ساعة في RT.
6. إضافة 400 درجة مئوية من المضادة للديجوكجينين-HRP حل الأجسام المضادة (1:1,000-1:2,000 في حظر العازلة) واحتضان الأجنة في 4 درجة مئوية بين عشية وضحاها. إذا كانت الإشارات ضعيفة، استخدم 1:500 تخفيف الأجسام المضادة.
تلوين واحتضان الأجسام المضادة الأولية (اليوم الثالث)
1. إزالة الجسم المضاد. غسل الأجنة مع PBST، 6X 20 دقيقة في RT.
2. شطف العينة مع 30 درجة مئوية من 1X زائد تضخيم مخفف لمدة 5 دقائق في RT.
3. تجاهل تخفيف عن طريق الأنابيب خارج; تمييع Fluorophore Tyramide الأوراق المالية الحل (سيانين 3 زائد التضخيم كاشف (Cy3) أو السيانين 5 زائد تضخيم كاشف (Cy5)، لهذه الحالة تم استخدام Cy3) 1:50 في 1X زائد تضخيم مخفف لجعل الفلوروفور التيرامي حل العمل. إعداد 50-100 درجة مئوية من حل العمل لكل عينة.
4. احتضان العينة في حل العمل الفلوروفور ييراميد لمدة 5-15 دقيقة في الظلام في RT. إذا كانت الإشارات ضعيفة، قم بتمديد وقت الحضانة إلى 30 دقيقة.
5. وقف رد الفعل عن طريق تغيير حل العمل مع PBST وفحص الإشارات.
6. غسل الأجنة مع PBST 3X 10 دقيقة في RT.
7. احتضان العينة مع الأجسام المضادة الأولية في 4 درجة مئوية بين عشية وضحاها. لهذه الحالة، استخدم الجسم المضاد لمكافحة الماعز-GFP كجسم مضاد أساسي.
تلطيخ الأجسام المضادة الثانوية (اليوم الرابع)
1. اغسل الأجنة بـ PBST لمدة 4×30 دقيقة.
2. احتضان الأجنة مع الأجسام المضادة الثانوية في 4 درجة مئوية بين عشية وضحاها. لهذه الحالة، استخدم أليكسا 488-المضادة للماعز الأجسام المضادة كجسم مضاد الثانوية.
التقاط الصور (اليوم الخامس)
1. غسل الأجنة مع PBST 3X 10 دقيقة في RT.
2. تخزين الأجنة في 70٪ الجلسرين في الظلام في 4 درجة مئوية بين عشية وضحاها أو -20 درجة مئوية لفترة أطول.

3. التصوير الحي

تحديد العينة
ملاحظة: استخدام الصورة الحية لمراقبة مباشرة ما إذا كان الضامة من Tg (fabp10a: il34؛ fabp10a: DsRed؛ mpeg1: GFP)الأسماك سوف تهاجر إلى الكبد تحت IL-34 التعريفي خلال 3-3.5 ديسيبل. هنا يتم استخدام خط Tg (fabp10a-DsRed)المعدلة وراثيا لتسمية منطقة الكبد وجعلها مرئية، لتسهيل توطين الكبد وتحديد ما إذا كانت الضامة تهاجر إلى الكبد. قبل التصوير، استخدم مجهر الفلورة لتحديد الأجنة الإيجابية المزدوجة DsRed وGFP.
الأسماك تصاعد
1. استخدام حمام معدني لتسخين 1 مل من 1٪ منخفضة ذوبان أغاروز إلى أعلى من 90 درجة مئوية لإذابة تماما.
2. بعد تبريد الأجاروز ذوبان منخفضة إلى درجة حرارة الجسم، إضافة 50 درجة مئوية من 0.2٪ ثلاثي الكوكايين، ومزيج موحد tricaine مع أغاروز.
3. نقل الأجنة التخدير إلى طبق صغير شنت مع شريحة غطاء على الجزء السفلي، وإزالة المياه المحيطة بها، وإسقاط ببطء الأجاروز ذوبان منخفضة على الأجنة، تعيين بعناية موقف الأسماك قبل أن توطد أغاروز، والحفاظ على منطقة الكبد قريبة من الشريحة غطاء على الجزء السفلي من الطبق.
4. بعد أن يتعزز الأجاروز الذوبان المنخفض، قم بتغطيتها بعناية بطبقة أخرى من الأجاروز لتعزيزها.
5. وضع الطبق على طاولة الناقل المجهر البؤري، وتغطية الأسماك مع الحل E2¹⁰ مع tricaine والبدء في التصوير.
تشغيل البرمجيات من المجهر البؤري
1. فتح برنامج ZEN الأسود 2.3، تثبيت منضدة الخلية الحية على طاولة الناقل المجهر.
2. انقر فوق تحديد الموقع | الحضانة | درجة الحرارة لتعيين درجة الحرارة إلى 29 درجة مئوية.
3. وضع الطبق في وسط منضدة الخلية الحية، وتغطي الأسماك مع الحل E2¹⁰ مع tricaine.
4. انقر فوق القائمة اكتساب ، حدد وضع المسح الضوئي المطلوب والليزر في القائمة إعداد الذكية ، ثم حدد Z-المكدس والموضع.
5. انقر فوق القائمة مصمم التجربة، حدد تمكين تجربة كتلة متعددة، في الكتلة الأولى، للعثور على العينة تحت التكبير المنخفض، ثم التبديل إلى التكبير عالية، والسماح للمنطقة التي لوحظت في وسط الحقل المرئي.
6. قم بتعيين الموضع ومعلومات Z-Stack، وحدد كثافة الليزر المناسبة، وطبقات المسح الضوئي، وسرعة التصوير.
7. إنشاء كتلة جديدة وكرر الخطوات المذكورة أعلاه. بعد إعداد جميع الكتل، تعيين العدد المناسب من الحلقات وبدء التسجيل(الشكل 1).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويبين الشكل 2الخطوات التي ينطوي عليها بروتوكول سمك الحمار الوحشي. أولا، قمنا بإنشاء pBLK-fabp10a-il34-sv40 الذي كان يقودها il34 من قبل المروج fabp10a (الشكل 2). تم حقن البناء ميكروين في مرحلة خلية واحدة Tg (mpeg1: GFP)أجنة حمار وحشي التي يمكن تسمية الضامة مع جنين GFP وWT التي أثيرت للبالغين لتوليد خط مستقر المعدلة وراثيا(الشكل 2). تم تحليل التعبير عن il34 ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

البروتوكول الموضح هنا يسمح لنا للتحقيق في وظيفة chemokine على سلوك الجسم الحي الضامة والإجراء يتطلب بعض الخبرة التقنية. وباختصار، هناك عدة خطوات حاسمة لتجنب المضاعفات في البروتوكول: 1) اختيار خط مناسب وراثيا الذي يظهر إشارة محددة وقوية المعدلة وراثيا لتسمية الخلية ذات الأهمية؛ (2) اختيار خط مناسب وراثيا يبين إشارة محددة وقوية من الجينات إلى تسمية الخلية ذات الأهمية؛ (2) اختيار خط مناسب وراثيا يبين إشارة محددة وقوية من الجينات المعدلة وراثيا لتسمية الخلية ذات الأهمية؛ (2) اختيار خط مناسب وراثيا يبين إشارة محددة وقوية من ا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نشكر الدكتور جينغرونغ بنغ لتقاسم Tg (fabp10a: DsRed) خط المعدلة وراثيا; الدكتور زيلونغ ون لتقاسم TG (mpeg1: GFP) خطوط المعدلة وراثيا؛ د. كويتشي كاواكامي لتوفير متجه pTol2. وقد تم دعم هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (31771594)، ومشاريع خطة قوانغدونغ للعلوم والتكنولوجيا (2019A030317001) وصناديق البحوث الأساسية للجامعات المركزية (D2191450).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
<قوي > جسم مضاد < / قوي > Alexa
488-الأجسام المضادة للماعز	Invitrogen	A11055
Anti-Digoxigenin-HRP & nbsp ؛	perkinelmer	NEF832001EA
الماعز المضاد للجسم المضاد للجثة المضادة	Abcam	ab6658
Reagent < / strong>
CaCl _{2 < / sub > & middot ؛ 2H _{2 < / sub >O}}	Sigma	21097
السيانين 3 بالإضافة إلى كاشف التضخيم	perkinelmer	NEL745001KT
E2 الحل			15 mM & nbsp ؛ كلوريد الصوديوم +0.5 ملي كلوريد كلوريد + 1.0 ملي مللي MgSO_{4< / sub> + 150 & micro ؛ M KH₂PO₄ + 50 & micro; M Na₂HPO₄ +1.0 mM CaCl₂ + 0.7 mM NaHCO₃}
مصل الأبقار الجنيني (FBS)	Life	10099-133
فورماميد	الماس	A100314
الجلسرين	سيجما	V900860
الهيبارين الصوديوم	سيجما	H3149
المخزن المؤقت للتهجين (HB) 50			٪ فورماميد + 5 مرات ؛ SSC + 9 ملي سترات الصوديوم + 50 مو ؛ جم / مل هيبارين الصوديوم + 500 مو ؛ جم / مل tRNA + 0.1٪ Tween20
KCl	Sigma	P5405
KH_{2< / sub>PO_{4< / sub>}}	Sigma	P5655
منخفض الذوبان agarose	Sigma	A9414
الميثانول	GHTECH	1.17112.023
الميثيلين الأزرق ؛	سيجما	M9140
MgSO₄	Sigma	M2643
Na₂HPO₄	Sigma	S5136
NaCl	Sigma	S5886
NaHCO₃	Sigma	S5761
Paraformaldehyde (PFA)	Sigma	158127	تعليق 16 جم من PFA في 400 مل من 1x PBS ، تسخين عند 60 درجة ؛ ج ليذوب حوالي 30 دقيقة. يمكن تحضير هذا المحلول مسبقا وتخزينه في درجة حرارة -4 درجة مئوية. التلاعب بالقناع.
10 وأقات. PBS			14.2 جم Na₂HPO₄+80 g NaCl + 2 g KCl + 2.4 g KH₂PO₄ في 1L ddH₂
O Phenylthiourea (PTU)	Sigma	P7629
1& times; بالإضافة إلى تضخيم	المخفف perkinelmer	NEL745001KT
Proteinase K & nbsp ؛	Fermentas	E00492
20 & سترات الصوديوم المالحة (SSC)			175.3 جم كلوريد الصوديوم + 88.2 جم سترات الصوديوم في 1 لتر DDH _{2< / sub>O ، PH 7.0}
سترات الصوديوم	Sigma	A5040
Tricaine	Sigma	E10521
tRNA ؛	سيجما	R6625
Tween20	Sigma	P2287
Plasmid< / strong>
pBLK-fabp10a-il34-sv40			ل Tg (fab10a: il34) < / em> توليد الخط المعدل وراثيا
pBSK-il34			ل il34< em>
المسبار<قوي>سمك< / قوي>
Tg (mpeg1: GFP) < / em>			تسمية البلاعم باستخدام GFP
em>Tg (fabp10a: DsRed)< / em>			تسمية خلايا الكبد ب DsRed
Tg (fab10a: il34)< / em>			الإفراط في التعبير IL-34 في خلايا الكبد

تحضير <

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Howe, K., et al. The zebrafish reference genome sequence and its relationship to the human genome. Nature. 496 (7446), 498-503 (2013).
Wang, Y., et al. IL-34 is a tissue-restricted ligand of CSF1R required for the development of Langerhans cells and microglia. Nature Immunology. 13 (8), 753-760 (2012).
Lin, H., et al. Discovery of a cytokine and its receptor by functional screening of the extracellular proteome. Science. 320 (5877), 807-811 (2008).
Wei, S., et al. Functional overlap but differential expression of CSF-1 and IL-34 in their CSF-1 receptor-mediated regulation of myeloid cells. Journal of leukocyte biology. 88 (3), 495-505 (2010).
Etienne, D., Foucher, S. B. L. P., Norbert Ifrah, P. G. Y. D. IL-34 Induces the Differentiation of Human Monocytes into Immunosuppressive Macrophages. Antagonistic Effects of GM-CSF and IFNc. PLoS One. 8 (2), e56045(2013).
Segaliny, A. I., et al. Syndecan-1 regulates the biological activities of interleukin-34. Biochimica et Biophysica Acta. 1853 (5), 1010-1021 (2015).
Zhou, S. L., et al. miR-28-5p-IL-34-macrophage feedback loop modulates hepatocellular carcinoma metastasis. Hepatology. 63 (5), 1560-1575 (2016).
Gordon, J. I., et al. Tissue specific expression and developmental regulation of two genes coding for rat fatty acid binding proteins. Journal of Biological Chemistry. 260 (4), 1995-1998 (1985).
Westerfield, M. The Zebrafish Book: A Guide for the Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio). , University of Oregon. Eugene, OR. (2000).
Nüsslein-Volhard, C., Dahm, R. Zebrafish: a practical approach. , Oxford University Press. New York. (2002).
Jiang, Y., Chen, J., Yen, K., Xu, J. Ectopically Expressed IL-34 Can Efficiently Induce Macrophage Migration to the Liver in Zebrafish. Zebrafish. 16 (2), 165-170 (2019).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

IL 34 GFP

نموذج تعبير كيميائي خارج الرحم لاختبار توظيف الضامة في فيفو

في هذه المقالة

ملخص

الملخص

المقدمة

البروتوكول

النتائج

المناقشة

الإفصاحات

شكر وتقدير

المواد

المراجع

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

مقالات ذات صلة