الغرض من هذه الدراسة هو إنشاء والتحقق من صحة نموذج الحيوانية للبحوث في مراحل الانتعاش والعواقب من نقص التروية في الدماغ عن طريق اختبار احتشاء الدماغ والوظيفة الحسية الحركية بعد انسداد الشريان الدماغي الأوسط/ضخ (MCAO/R) بعد 1-90 أيام في الفئران.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
* These authors contributed equally
الغرض من هذه الدراسة هو إنشاء والتحقق من صحة نموذج الحيوانية للبحوث في مراحل الانتعاش والعواقب من نقص التروية في الدماغ عن طريق اختبار احتشاء الدماغ والوظيفة الحسية الحركية بعد انسداد الشريان الدماغي الأوسط/ضخ (MCAO/R) بعد 1-90 أيام في الفئران.
وكان الغرض من هذه الدراسة لإنشاء والتحقق من صحة نموذج نقص ترويه الدماغ الحيوانية في مراحل الانتعاش والعواقب. تم اختيار نموذج انسداد الشريان الدماغي الأوسط/الضخ (MCAO/R) في الفئران الذكور سبرايج-داولي. عن طريق تغيير وزن الفئران (260 − 330 ز) ، ونوع الخيط الترباس (2636/2838/3040/3043) والدماغ احتشاء الوقت (2-3 ح) ، وارتفاع درجه لونغا ، وحجم احتشاء أكبر ونسبه نجاح أكبر نموذج تم فرزها باستخدام النتيجة لونغا وتلطيخ عقاري. تم الحصول علي حاله النموذج الأمثل (300 g ، 3040 الترباس الموضوع ، 3 ح الدماغ احتشاء الوقت) واستخدامها في فتره المراقبة اليوم 1-90 بعد ضخ عن طريق تقييم وظائف حسي وحجم احتشاء. وفي ظل هذه الظروف ، كان لاختبار عدم التماثل الثنائي فارق كبير من 1 إلى 90 يوما ، وكان لاختبار الشبكة والمشي فارق كبير من 1 إلى 60 يوما ؛ يمكن ان يكون كل من الاختلافات اختبار الوظيفية حسي مناسبه. وهكذا ، تم العثور علي الشرط الأكثر ملاءمة لنموذج الفئران رواية في مراحل الانتعاش والعواقب من نقص التروية في الدماغ: 300 g الفئران التي خضعت MCAO مع الترباس 3040 الموضوع ل 3 ح احتشاء الدماغ ومن ثم reperfused مستخدمه. وكانت الاختبارات الوظيفية الحسية المناسبة اختبارا ثنائيا لعدم التماثل واختبارا لشبكه المشي.
وينقسم نقص التروية الدماغية إلى ثلاث مراحل مع مؤشرات مختلفه بعد السكتة الدماغية: المرحلة الحاده (في غضون أسبوع واحد) ، ومرحله الانتعاش (1 أسبوع إلى 6 أشهر) ، ومرحله العواقب (أكثر من 6 أشهر). في الوقت الحاضر ، تركز معظم الدراسات علي المرحلة الحاده من نقص التروية الدماغية بسبب تاثيره الكبير والنماذج البحثية متعددة النسبية1،2،3. ومع ذلك ، لا يمكن تجاهل مراحل الانتعاش والعواقب من نقص التروية الدماغية بسبب مضاعفاتها طويلة الأجل من الإعاقات. ولذلك ، فان الغرض من هذه الدراسة هو استكشاف نموذج الحيوانية مستقره وموثوق بها وبسيطه نسبيا للبحث في الانتعاش ومراحل عواقب نقص التروية في الدماغ.
من بين العديد من نماذج نقص ترويه الدماغ التجريبية ، ونحن نستخدم انسداد الشريان الدماغي الأوسط (MCAO) عن طريق الادراج الترباس الموضوع في الشريان الدماغي الأوسط الأيمن (MCA). هذا النموذج يشبه السكتة الدماغية البشرية ، والتي يمكن ان تنتج كميات أكبر احتشاء ، والنتيجة في العديد من الاضطرابات السلوكية المتعلقة السكتة الدماغية ، ويمكن ان تسمح ضخ الدم (ص) عن طريق أزاله الترباس الموضوع4،5،6. ويعتبر MCAO/R أيضا نموذج الذهب معيار الحيوانية من نقص التروية الدماغ7. وعلاوة علي ذلك ، فان شده أصابه الدماغ يعتمد علي القطر وطول الادراج من الترباس الموضوع ، ومده نقص التروية في الدماغ ، ووزن الحيوانية (أكبر الفئران لديها أدمغه أكبر والاوعيه الدماغية أكثر سمكا)8. ولذلك ، عن طريق تغيير نوع الترباس الموضوع ، والوقت احتشاء ، ووزن الفئران ، ويمكن الاطلاع علي نموذج مناسب للانتعاش ومراحل عواقب نقص التروية الدماغية في الفئران MCAO/R. للتحقق من صحة نموذج الفئران ، قمنا باجراء دراسة لمده يوم واحد ، 35 يوم ، و 60 يوم ، و 90 يوما لنموذج MCAO/R باستخدام الاختبارات الخاصة بالوظائف الحسية والحركية (اختبار التباين الثنائي ، وفحص شبكه المشي ، واختبار الروتارود ، واختبار حبل الرفع).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
وقد وافق المعهد الوطني للصحة علي إجراءات واستخدام المواد الحيوانية لرعاية واستخدام الماشية المختبرية. يتم تعديل هذا البروتوكول علي وجه التحديد لاختبارات انسداد الشريان الدماغي الأوسط/ضخ (MCAO/R) والوظيفة الحسية الحركية.
1-التصميم التجريبي والتجميع
2-إنشاء نموذج أحادي الجانب من طراز MCAO/R في الجرذان9
ملاحظه: اثناء العملية ، استخدم الملقط المجهري برفق لمنع كسر الاوعيه الدموية. تجنب الاضرار التي لحقت الأعصاب والاوعيه الدموية الأخرى في عنق الجرذ عندما يتم عزل السفينة. يجب توخي الحذر لتقديم تقنيه العقيم المناسبة لجميع العمليات الجراحية البقاء علي قيد الحياة. التقنية الموضحة لاحقا في الفيديو يجب ان تمارس من خلال الاجراء بأكمله.
3. الصبغ العقاري
ملاحظه: يجب ان يكون العفن شريحة الدماغ الفئران وشفره قبل تبريده في-20 درجه مئوية الثلاجة قبل استخدامها لمنع التصاق الناجمة عن اختلاف درجه الحرارة الكبيرة. اثناء تلطيخ ، ومنع التصاق بين شرائح الدماغ ولوحه الثقافة ، والتي يمكن ان تؤدي إلى تلطيخ غير كافيه.
4. تقييم الوظيفة الحسية الحركية
ملاحظه: تم اختيار الفئران (300 g ، 3040 الترباس الموضوع ، 3 ح الدماغ احتشاء الوقت) مع درجه لونغا من 2 − 3 لأداء التجارب الدالة حسي من 1-90 يوما. الحفاظ علي الهدوء وعدم إزعاج الماشية خلال هذه الفترة من الدراسة. تم تحليل البيانات بواسطة ANOVA ثنائيه الاتجاه. القيم المعروضة تمثل يعني ± ذاكره P < 0.05 تشير إلى الفرق.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
باستخدام الاجراء المذكور أعلاه لنموذج MCAO/R مع نقاط لونغا وتلطيخ عقاري, علاجات مختلفه من متوسط الوزن (275/300/320 ز), أنواع الترباس (2636/2838/3040/3043; الجدول 1) والأوقات الدماغية (2-3 h) واستخدمت ضخ يوم 1 لشاشه لنموذج نقص التروية الدماغ الأمثل في الفئران. وكانت المعلمات نموذج من 300 g الوزن ، 3040 الموضوع الترباس ، و 3 ساعة الدماغ احتشاء الوقت الأكثر ملاءمة لأكبر احتشاء دماغي ، اعلي درجه لونغا ونسبه نجاح أكبر نموذج. وقد تحسن هذا بشكل ملحوظ علي العلاج التقليدي من 275 g...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
العديد من النماذج وضع الأساليب والمؤشرات السلوكية التي تستخدم بشكل جيد في نقص التروية الدماغية الحاده قد لا يكون لها تغييرات كبيره في مراحل الانتعاش والعواقب من نقص التروية الدماغية16,17. ومع ذلك ، فان عدد المرضي الذين يعانون من نقص ترويه الدماغ في مراحل الانتعاش والعواقب هو أعظم. من الضروري اختيار نموذج الحيوانية مناسبه للتعافي ومراحل السكتة الدماغية من نقص التروية.
نحن نستخدم نموذج MCAO/R في الفئران لفحص الوزن المناسب من الفئران (260...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
وليس لدي المؤلفين ما يفصحون عنه.
وقد حظي هذا العمل بدعم المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (81603315 ، 81603316) ، وخطه مفتاح R & D لمقاطعه جيانغشي في الصين (20171ACH80001) ، ومشاريع التعاون الصناعي والأكاديمي في كليات وجامعات مقاطعه فوجيان في الصين (2018Y41010011).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| المجهر التشريحي | Leica (ألمانيا) | S8 | أداة التشغيل المجهرية |
| Blade | Gellette | / | قطع أقسام الدماغ |
| درجة حرارة ثابتة سرير اهتزاز | Taicang مصنع المعدات التجريبية | THZ-C | للحفاظ على أقسام الدماغ ملطخة بالتساوي وعند درجة حرارة ثابتة |
| كاميرا رقمية | Canon | 700D | لأخذ صور TTC تلطيخ |
| ماكينة حلاقة كهربائية | شنغهاي Yuyan Scientific Instruments Co.، Ltd. | 3000 # | إزالة الشعر من عنق الفئران |
| ملقط المنبع | شنغهاي للأجهزة الطبية المحدودة | 14 سم | استخدام لإزالة الدماغ |
| Image Pro Plus Software | Media Cybernetics Inc. | 6.0 | تحليل حجم الاحتشاء |
| Isoflurane | RWD Life Science | 217170702 | غاز التخدير |
| Microlegps | Shanghai Jinzhong Medical Devices Co.، Ltd. | 10 سم | التلاعب الدقيق بالأوعية |
| Microshear | Shanghai Jinzhong Medical Devices Co.، Ltd. | 10 سم | التلاعب الدقيق للأوعية |
| الدموية ملقط | العيون شنغهاي Jinzhong الأجهزة الطبية المحدودة | 10 سم | الجلد والعضلات المساعد |
| مقص Pphthalmic | Shanghai Jinzhong Medical Devices Co.، Ltd. | 10 سم | استخدام لقطع جلد العنق |
| الفئران شريحة الدماغ العفن | شنغهاي Yuyan Scientific Instruments Co.، Ltd. | 400 غرام | للقطع القياسي الموحد لأنسجة المخ |
| جهاز التعب الدوري للفئران | Anhui Zhenghua Biological Instrument and Equipment Co.، Ltd. | ZH-300B | لاختبار الوظيفة الحسية الحركية |
| آلة تخدير الصغيرة | شنغهاي Yuyan Scientific Instruments Co.، Ltd. | ABM3000 | آلة تخدير الغاز |
| ترموستات الصغيرة | بكين داميدا التكنولوجيا المحدودة. | DM.7-YLS-20A | للحفاظ على درجة حرارة جسم ثابتة أثناء العملية |
| مقص جراحي | شنغهاي للأجهزة الطبية المحدودة | 16 سم | استخدام لقطع الرأس وإزالة الدماغ |
| خياطة | شنغهاي Jinhuan Medical Devices Co.، Ltd. | 4-0 / 5-0 | استخدام خيوط الجلد والعضلات / استخدام لربط الأوعية |
| الدموية ، Thread Bolt | Beijing Cinontech Co.، Ltd. | 2636/2838/3040/3043-A4 | انسداد الشريان الدماغي الأوسط في الفئران |
| 5-ثلاثي فينيل-2H-كلوريد تيترازوليوم (TTC) | Sigma | LOT #BCBP3272V | كاشف تلطيخ قسم الدماغ |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.