مقالة منهجية

تحديد الذات والعلاقات بين (في) التوافق في المشمش الجمع بين تلقيح اليد والمجهر والتحليلات الوراثية

DOI:

10.3791/60241

⸱

يونيو 16, 2020

 ,  ,  , 
1Unidad de Hortofruticultura, Centro de Investigación y Tecnología Agroalimentaria de Aragón (CITA), 2Instituto Agroalimentario de Aragón - IA2 (CITA-Universidad de Zaragoza), 3Instituto de Hortofruticultura Subtropical y Mediterránea La Mayora (IHSM La Mayora-UMA-CSIC)

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نحن نقدم منهجية لتحديد متطلبات التلقيح من المشمش(Prunus أرمينياكا L.) أصناف الجمع بين تحديد الذاتي (في) التوافق بواسطة المجهر fluorescence مع تحديد النمط الجيني S من قبل تحليل PCR.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يتم تحديد عدم التوافق الذاتي في الوردية من قبل نظام عدم التوافق الذاتي (GSI) الذي يتم التحكم فيه بشكل رئيسي من قبل loallelic S. في المشمش ، وتحديد الذات وفيما بين (في) علاقات التوافق هو على نحو متزايد أهمية ، منذ الإفراج عن عدد كبير من أصناف جديدة قد أدى إلى زيادة أصناف مع متطلبات التلقيح غير معروف. هنا، نحن وصف منهجية التي تجمع بين تحديد الذاتي (في) التوافق عن طريق التلقيح باليد والمجهر مع تحديد من S-نوع جيني من قبل تحليل PCR. لتحديد التوافق الذاتي (في) ، تم جمع الزهور في مرحلة البالون من كل أصناف في الحقل ، ملقحات يدوي في المختبر ، ثابتة ، وملطخة باللون الأزرق الأنيلين لمراقبة سلوك أنبوب حبوب اللقاح تحت المجهر الفلوري. 10- ولإقامة علاقات عدم التوافق بين الأصناف، استُخرج الحمض النووي من كل صنف من أوراق الشجر الصغيرة، وتم تحديد الـS-alleles بواسطة PCR. ويسمح هذا النهج بإنشاء مجموعات عدم التوافق وتوضيح علاقات عدم التوافق بين الأصناف، مما يوفر معلومات قيمة لاختيار الملقحات المناسبة في تصميم البساتين الجديدة واختيار الآباء المناسبين في برامج التربية.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

عدم التوافق الذاتي هو استراتيجية من النباتات المزهرة لمنع التلقيح الذاتي وتعزيز outcrossing1. في Rosaceae، يتم تحديد هذه الآلية من قبل نظام عدم التوافق الذاتي Gametophytic (GSI) Sالتي يتم التحكم فيها أساسا من قبل متعدد الأراضي2. في الاسلوب ، جين RNase ترميز S - stylar المحدد ، RNase3، في حين أن بروتين F - مربع ، الذي يحدد S -حبوب اللقاح المحدد ، هو مقنن من قبل SFB الجينات4. يحدث التفاعل الذاتي عدم التوافق من خلال تثبيط نمو أنبوب حبوب اللقاح على طول النمط منع الإخصاب من البويضة5،6.

في المشمش ، وقد حدث تجديد varietal في جميع أنحاء العالم في العقدين الماضيين7،8. هذا التقديم لعدد هام من أصناف جديدة، من مختلف برامج التربية العامة والخاصة، أدى إلى زيادة أصناف المشمش مع متطلبات التلقيح غير معروف8.

وقد استخدمت منهجيات مختلفة لتحديد متطلبات التلقيح في المشمش. في مجال، الذاتي (في) التوافق يمكن أن تنشأ عن طريق التلقيحات التي تسيطر عليها في الأشجار في قفص أو في الزهور emasculated وتسجيل نسبة الفاكهة في وقت لاحقمجموعة 9،10،11،12. وبالإضافة إلى ذلك، وقد أجريت التلقيحات التي تسيطر عليها في المختبر من قبل شبه في ثقافة الجسم الحي من الزهور وتحليل سلوك أنبوب حبوب اللقاح تحت المجهر الفلوريسنس8،13،14،15،16،17. في الآونة الأخيرة، سمحت التقنيات الجزيئية، مثل تحليل PCR وتسلسله، بتوصيف علاقات عدم التوافق على أساس دراسة جينات RNase و SFB 18،19. في المشمش، ثلاثة وثلاثين S-أليليس تم الإبلاغ عن (S1 إلى S20، S22 إلى S30، S52، S53، Sv، Sx) ، بما في ذلك أليل واحد ذات صلة بالتوافق الذاتي (Sc)12،18،,2121،22،23،24. حتى الآن، 26 مجموعات عدم التوافق قد تم stablished في هذا النوع وفقا ل S-genotype8،,9،,17،,25،,26،,27. أصناف مع نفس S-alleles هي inter-incompatible، في حين أن أصناف مع واحد على الأقل مختلفة S-أليل، وبالتالي، المخصصة في مجموعات مختلفة غير متوافقة، هي inter-compatible.

لتحديد متطلبات التلقيح من أصناف المشمش، ونحن وصف منهجية التي تجمع بين تحديد الذاتي (في) التوافق بواسطة المجهر الفلوريس مع تحديد من S-الجيلية من قبل تحليل PCR في أصناف المشمش. ويسمح هذا النهج بإنشاء مجموعات عدم التوافق وتوضيح علاقات عدم التوافق بين الأصناف.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. الذاتي (في) تحديد التوافق

  1. تذوق الزهور في الحقل. فمن الضروري لجمع الزهور في مرحلة البالون (الشكل 1A)، المقابلة للمرحلة 58 على مقياس BBCH لامشمش28، لتجنب التلقيح السابق غير المرغوب فيها.
  2. التلقيحات الذاتية والمتقاطعة في المختبر
    1. إزالة anthers من الزهور في مرحلة البالون ووضعها على قطعة من الورق لتجف في درجة حرارة المختبر.
    2. بعد 24 ساعة، غربال حبوب اللقاح باستخدام شبكة غرامة (0.26 مم) (الشكل 1B).
    3. Emasculate مجموعة من 30 الزهور في نفس مرحلة البالون لكل التلقيح الذاتي والتلقيح عبر ووضع pistils على رغوة بائع الزهور في الماء في درجة حرارة المختبر (الشكل 1ج).
    4. تلقيح اليد pistils بمساعدة فرشاة الطلاء مع حبوب اللقاح من الزهور من نفس أصناف 24 ساعة بعد emasculation. وبالإضافة إلى ذلك، تلقيح مجموعة أخرى من pistils من كل أصناف مع حبوب اللقاح من الزهور من ملقحات متوافق كتحكم(الشكل 1دال).
    5. بعد 72 ساعة، قم بإصلاح مسك هاته الزغر في محلول تثبيتي من حمض الإيثانول/الخليك (3:1) لمدة 24 ساعة على الأقل عند 4 °C29. ثم تجاهل المثبت وإضافة 75٪ الإيثانول ضمان أن العينات مغمورة تماما في الحل. ويمكن حفظ العينات في هذا الحل في 4 درجة مئوية حتى استخدام8،17،30،31،32.
  3. تقييم صلاحية حبوب اللقاح من خلال إنبات حبوب اللقاح في المختبر
    1. لإعداد متوسط الإنبات، الوزن 25 غرام من السكروز، 0.075 غرام من حمض البوريك (H3BO3)و 0.075 غرام من نترات الكالسيوم (Ca(NO3)33.33
    2. إضافة مكونات المتوسطة في 250 مل من الماء المقطر وتذوب تماما.
    3. ترسيخ المتوسطة مضيفا 2 غرام من agarose ومزيج من دوامة.
    4. تحقق من درجة ح H من المتوسطة باستخدام مقياس درجة ح/ و ضبط القيمة إلى 7.0 مع محلول NAة أو HCl.
    5. اتوملاف الخليط لتعقيم المتوسطة.
    6. بعد التكلاف التلقائي، يبرد المتوسط ويوزعه على أطباق بيتري في غطاء تدفق معقم.
    7. تشتت حبوب اللقاح من نفس الأصناف المستخدمة في التلقيحات التي تسيطر عليها في اوسط انبات حبوب اللقاح الصلبة ومراقبة لهم تحت المجهر بعد 24 ح6.
      ملاحظة: لتعقيم غطاء تدفق الفاتن، قم بتنظيف السطح بنسبة 70% الإيثانول والتبديل على مصباح الأشعة فوق البنفسجية خلال 10 دقيقة.
    8. يُخزن أطباق بيتري في ثلاجة عند 4 درجات مئوية حتى الاستخدام.
  4. ملاحظات الفحص المجهري
    1. اغسل البيستيل ثلاث مرات لمدة 1 ساعة بالماء المقطر واتركها في كبريتيت الصوديوم بنسبة 5٪ عند 4 درجات مئوية. بعد 24 ساعة، أوتلافها عند 1 كجم/سم2 خلال 10 دقائق في كبريتيت الصوديوم لتنعيم الأنسجة34.
    2. ضع pistils autoclaved على شريحة زجاجية ، وبمساعدة مشرط ، قم بإزالة trichomes حول المبيض للحصول على تصور أفضل لأنابيب حبوب اللقاح. ثم، الاسكواش pistils مع غطاء الزجاج.
    3. إعداد 0.1٪ (الخامس / الخامس) aniline وصمة عار الأزرق: مزيج 0.1 مل من الأزرق البيب في 100 مل من 0.1 ن البوتاسيوم الفوسفات ثلاثية الباب (K3PO4). تطبيق قطرة من aniline الأزرق على الاستعدادات لطخة ترسبات الكالوز أثناء نمو أنبوب حبوب اللقاح.
    4. مراقبة أنابيب حبوب اللقاح على طول النمط عن طريق المجهر مع epifluorescence الأشعة فوق البنفسجية باستخدام 340-380 bandpass و 425 مرشحات طول.

2. استخراج الحمض النووي

  1. عينة 2-3 يترك في هذا المجال في الربيع. فمن المستحسن أن عينة من الأوراق في مراحل الشباب منذ الحصول على الحمض النووي هو من أعلى جودة ومستويات أقل من المركبات الفينولية مقارنة مع الأوراق القديمة.
  2. استخراج الحمض النووي الجينومي بعد الخطوات الموضحة في مجموعة متاحة تجاريا (انظر جدول المواد).
  3. تحليل كمية ونوعية تركيزات الحمض النووي باستخدام مقياس الطيف فوق البنفسجي (260 نانومتر).

3. S-أليلي تحديد الهوية

  1. إعداد ردود فعل PCR
    1. إعداد تخفيف 50 نانوغرام/ميكرولتر في الماء المقطر لكل عينة استخراج الحمض النووي.
    2. ذوبان من الكواشف PCR ببطء والاحتفاظ بها على الجليد. اترك بوليميراز الحمض النووي في الثلاجة حتى الحاجة.
    3. إعداد تفاعلات التضخيم باستخدام مجموعات مختلفة من التمهيديات. إنشاء مزيج تفاعل PCR عن طريق الجمع بين المكونات في الجدول 1. دوامة تفاعل PCR مزيج جيد وتوزيع وحدة التخزين المشار إليها لمجموعات مختلفة من التمهيدي لكل بئر من لوحة PCR. ثم، إضافة 1 μL من تخفيف الحمض النووي في كل بئر.
    4. ضع لوحة PCR في الدراجات الحرارية وتشغيل برنامج PCR المقابلة الموضحة في الجدول 1.
  2. تحليل شظايا تضخيم. هناك طريقتان مختلفتان أساسا لتحليل شظايا تضخيم البوليميرازيين: الكهرباء الشعرية (CE) مع الإنارة الفلورية أو كما amplicons تصور من الغيلة الغيلة agarose مع التمهيديات غير الموسومة.
    1. الشعيرات الدموية الكهربائية
      1. لإعداد المخزن المؤقت للتحميل، اخلط 35 ميكرولتر من الفورماميد غير المتأين مع 0.45 ميكرولتر من معيار التحجيم المسمى. دوامة الكاشف لخلط جيدا، ومن ثم الاستغناء 35.5 μL في بئر لوحة القارئ.
      2. أضف 1 ميكرولتر من منتج PCR إلى البئر. وبالإضافة إلى ذلك، إضافة قطرة من الزيوت المعدنية لمنع تبخر المياه.
      3. إعداد لوحة الفصل مضيفا العازلة الفصل.
      4. استخدام البرامج التجارية المضمنة مع محلل الجينات (انظر جدول المواد). إنشاء لوحة عينة جديدة وحفظ أسماء العينات لجميع الآبار على لوحة.
      5. حدد طريقة التحليل. في هذه الحالة، تُسخ العينات عند 90 درجة مئوية لمدة 120 درجة مئوية، وحقن 2.0 كيلو فولت لمدة 30 درجة، ومنفصلة عند 6.0 كيلو فولت لمدة 35 دقيقة.
      6. أدخل اللوحتين في محلل الجينات. املأ صفيف الشعيرات الدموية بالماء المقطر.
      7. تحميل براءة اختراع البولي أكرريلاميد الخطية (LPA) هلام. وأخيراً، انقر فوق تشغيل.
    2. جل الكهربائية
      1. إعداد جل agarose 1٪ إضافة 1.5 غرام من الأحياء الجزيئية الصف agarose في 150 مل من 1x TAE (تريس-أسيتات-EDTA) الكهرباء تشغيل العازلة (40 mM تريس، 20 mM حمض الخليك، و 1 mM EDTA في درجة الحموضة 8.0). قم بحل الأاروز عن طريق تسخين الميكروويف لمدة 2-3 دقائق.
      2. لتصور الحمض النووي، أضف 4 ميكرولتر من بقعة حمض نووي (انظر جدول المواد) واخلط بلطف.
      3. إضافة مشط هلام، مع آبار كافية للسلالم والضوابط والعينات، في علبة هلام. ثم، صب ببطء مزيج في منتصف علبة هلام وتجنب فقاعات.
      4. السماح للجل يبرد لمدة 30-45 دقيقة في درجة حرارة الغرفة حتى هلام قد توطدت تماما. إدخال الجل في غرفة الكهرباء، وإزالة مشط هلام وملء الغرفة مع ما يكفي من 1x TAE العازلة لتغطية هلام.
        ملاحظة: تحقق من موضع الجل. وينبغي وضع الآبار بالقرب من القطب السلبي لأن الحمض النووي المشحون بشكل سلبي يهاجر نحو الكاثود.
      5. إضافة 5 ميكرولتر من العازلة التحميل (0.1٪ (الخامس / الخامس) الأزرق البروموفينول) لمنتجات PCR ومزيج جيد.
      6. لتقدير حجم النطاقات، قم بتحميل 5 ميكرولتر من سلم الوزن الجزيئي للحمض النووي (انظر جدول المواد).
      7. قم بتحميل العينات في الآبار الإضافية للجل.
      8. مرة واحدة يتم تحميل جميع العينات وسلالم الوزن الجزيئية DNA، تشغيل الجل في 90 الخامس ل1-1.5 ساعة، حتى خط الصبغة الزرقاء هو تقريبا في 75٪ طول الجل.
      9. تصور العصابات في الترانرلومينات للأحماض النووية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تتطلب دراسات التلقيح في المشمش استخدام الزهور في مرحلة البالون المتأخر قبل يوم واحد من التحلل(الشكل 1أ). وتعتبر هذه المرحلة الأكثر ملاءمة لكل من جمع حبوب اللقاح وpistil، منذ هياكل الأزهار هي ناضجة تقريبا، ولكن لم يحدث بعد anther dehiscence. وهذا يمنع تدخل حبوب اللقاح غير المرغوب فيها ، ليس فقط من حبوب اللقاح من نفس الزهرة ولكن أيضًا من الزهور الأخرى ، لأن البتلات المغلقة تعوق وصول الحشرات التي تحمل حبوب اللقاح الخارجية. الحبوب حبوب اللقاح هي منخل بسهولة من خلال شبكة غرامة (<...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تقليديا، معظم أصناف المشمش التجارية الأوروبية متوافقة مع36. ومع ذلك، فإن استخدام أصناف أمريكا الشمالية غير المتوافقة ذاتيا كوالدين في برامج التربية في العقود الماضية أدى إلى الإفراج عن عدد متزايد من أصناف جديدة غير متوافقة ذاتيا مع متطلبات التلقيح غير معروف7،8،37. وهكذا ، فإن تحديد الذات وبين (في) علاقات التوافق في أصناف المشمش هو على نحو متزايد أهمية. وتزداد حدة هذه في تلك المناطق حيث تقشعر لها الأبدان ف...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تمويل هذا البحث من قبل وزير دي سينسيا، Innovación y Universidades-Fund European Regional Development Fund، والاتحاد الأوروبي (AGL2016-77267-R، و AGL2015-74071-JIN)؛ المعهد الوطني للاستثمارات و تيكنولوجيا أغريا y أليمنتاريا (RFP2015-00015-00, RTA2017-00003-00)؛ Gobierno de Aragón -European Social Fund, European Union (Grupo Consolidado A12_17R), Fundación Biodiversidad and Agroseguro S.A.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
Agarose D1 Low EEOConda8010.22
BIOTAQ DNA Polymerase kitBiolineBIO-21060
مجهر المجال الساطعLeica MicrosystemsDM2500
CEQ System SoftwareBeckman Coulter
DNeasy Plant MiniQIAGEN69106
dNTP Set ، 4 × 25 & micro ؛ مولبيولينBIO-39025
GenomeLab حجم الحمض النووي القياسي - 400بيكمان كولتر608098
جينوم لاب نظام التحليل الجيني بيكمانكولتر
جينوم لاب الفصلبيكمان كولتر608012
جينوم مختبر جل الفصل LPA-1بيكمان كولتر391438
هايبر سلم 100bpBiolineBIO-33029
HyperLadder 1kbBiolineBIO-33025
نظام تحليل الصورLeica Microsystems
Molecular Imager VersaDoc MP 4000 system Bio-Rad170-8640
NanoDrop واحد مقياس الطيفالضوئي الحراري فيشر العلمي13-400-518
مقياس الرقم الهيدروجيني BASIC 20Crison
Phusion  طقم PCR عالي الدقةThermo Fisher ScientificF553S
Power Pack P 25 TBiometra
Primer ForwardIsogen Life Science
Primer ReverseIsogen Life Science
Quantity One SoftwareBio-Rad
المجهرالمجهري Leica MicrosystemsMZ-16
Sub-Cell GTBio-Rad
SYBR آمن DNA Gel StainThermo Fisher ScientificS33102
T100 Thermal CyclerBio-Rad1861096
Taq DNA PolymeraseQIAGEN201203
عمودي حامل الأوتوكلافJP Selecta
Kit المؤقت

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Silva, N. F., Goring, D. R. Mechanisms of self-incompatibility in flowering plants. Cellular and Molecular Life Sciences. 58, 1988-2007 (2001).
  2. Charlesworth, D., Vekemans, X., Castric, V., Glémin, S. Plant self-incompatibility systems: A molecular evolutionary perspective. New phytologist. 168, 61-69 (2005).
  3. Tao, R., et al. Identification of stylar RNases associated with gametophytic self-incompatibility in almond (Prunus dulcis). Plant and Cell Physiology. 38, 304-311 (1997).
  4. Ushijima, K., et al. Structural and transcriptional analysis of the self-incompatibility locus of almond: Identification of a pollen-expressed F-box gene with haplotype-specific polymorphism. The Plant cell. 15, 771-781 (2003).
  5. Bedinger, P. A., Broz, A. K., Tovar-Mendez, A., McClure, B. Pollen-Pistil Interactions and Their Role in Mate Selection. Plant Physiology. 173, 79-90 (2017).
  6. Guerra, M. E., Rodrigo, J. Japanese plum pollination: A review. Scientia Horticulturae. 197, 674-686 (2015).
  7. Zhebentyayeva, T., Ledbetter, C., Burgos, L., Llacer, G. Apricot. Fruit Breeding. Badenes, M. L., Byrne, D. , Springer. Boston, MA. 415-458 (2012).
  8. Herrera, S., Lora, J., Hormaza, J. I., Herrero, M., Rodrigo, J. Optimizing Production in the New Generation of Apricot Cultivars: Self-incompatibility, S-RNase Allele Identification, and Incompatibility Group Assignment. Frontiers in Plant Science. 9, 527(2018).
  9. Egea, J., Burgos, L. Detecting Cross-incompatibility of Three North American Apricot Cultivars and Establishing the First Incompatibility Group in Apricot. Journal of the American Society for Horticultural Science. 121, 1002-1005 (1996).
  10. Rodrigo, J., Herrero, M. Effects of pre-blossom temperatures on flower development and fruit set in apricot. Scientia Horticulturae. 92, 125-135 (2002).
  11. Julian, C., Herrero, M., Rodrigo, J. Flower bud differentiation and development in fruiting and non-fruiting shoots in relation to fruit set in apricot (Prunus armeniaca). Trees. 24, 833-841 (2010).
  12. Muñoz-Sanz, J. V., Zuriaga, E., López, I., Badenes, M. L., Romero, C. Self-(in)compatibility in apricot germplasm is controlled by two major loci, S and M. BMC Plant Biology. 17, 82(2017).
  13. Burgos, L., Berenguer, T., Egea, J. Self- and Cross-compatibility among Apricot Cultivars. HortScience. 28, 148-150 (1993).
  14. Rodrigo, J., Herrero, M. Evaluation of pollination as the cause of erratic fruit set in apricot "Moniqui". Journal of Horticultural Science. 71, 801-805 (1996).
  15. Milatović, D., Nikolić, D., Krška, B. Testing of self-(in)compatibility in apricot cultivars from European breeding programmes. Horticultural Science. 40 (2), 65-71 (2013).
  16. Milatović, D., Nikolić, D., Fotirić-Aksić, M., Radović, A. Testing of self-(in)compatibility in apricot cultivars using fluorescence microscopy. Acta Scientiarum Polonorum, Hortorum Cultus. 12 (6), 103-113 (2013).
  17. Herrera, S., Rodrigo, J., Hormaza, J. I., Lora, J. Identification of Self-Incompatibility Alleles by Specific PCR Analysis and S-RNase Sequencing in Apricot. Int J Mol Sci. 19, 3612(2018).
  18. Romero, C., et al. Analysis of the S-locus structure in Prunus armeniaca L. Identification of S-haplotype specific S-RNase and F-box genes. Plant Molecular Biology. 56, 145-157 (2004).
  19. Halász, J., Pedryc, A., Hegedus, A. Origin and dissemination of the pollen-part mutated SC haplotype which confers self-compatibility in apricot (Prunus armeniaca). New Phytologist. 176, 792-803 (2007).
  20. Halász, J., Hegedus, A., Hermán, R., Stefanovits-Bányai, É, Pedryc, A. New self-incompatibility alleles in apricot (Prunus armeniaca L.) revealed by stylar ribonuclease assay and S-PCR analysis. Euphytica. 145, 57-66 (2005).
  21. Vilanova, S., Romero, C., Llacer, G., Badenes, M. L., Burgos, L. Identification of Self-(in)compatibility Alleles in Apricot by PCR and Sequence Analysis. Journal of the American Society for Horticultural Science. 130, 893-898 (2005).
  22. Feng, J., et al. Detection and transcript expression of S-RNase gene associated with self-incompatibility in apricot (Prunus armeniaca L.). Molecular Biology Reports. 33, 215-221 (2006).
  23. Zhang, L., et al. Identification of self-incompatibility (S-) genotypes of Chinese apricot cultivars. Euphytica. 160, 241-248 (2008).
  24. Wu, J., et al. Identification of S-haplotype-specific S-RNase and SFB alleles in native Chinese apricot (Prunus armeniaca L). Journal of Horticultural Science and Biotechnology. 84, 645-652 (2009).
  25. Szabó, Z., Nyéki, J. Blossoming, fructification and combination of apricot varieties. Acta Horticulturae. 293, 295-302 (1991).
  26. Halász, J., Pedryc, A., Ercisli, S., Yilmaz, K. U., Hegedűs, A. S-genotyping supports the genetic relationships between Turkish and Hungarian apricot germplasm. Journal of the American Society for Horticultural Science. 135, 410-417 (2010).
  27. Lachkar, A., et al. Identification of self-(in)compatibility S-alleles and new cross-incompatibility groups in Tunisian apricot (Prunus armeniaca L.) cultivars. The Journal of Horticultural Science and Biotechnology. 88, 497-501 (2013).
  28. Pérez-Pastor, A., Ruiz-Sánchez, M. C., Domingo, R., Torrecillas, A. Growth and phenological stages of Búlida apricot trees in South-East. Agronomie. 24, 93-100 (2004).
  29. Williams, J. H., Friedman, W. E., Arnold, M. L. Developmental selection within the angiosperm style: using gamete DNA to visualize interspecific pollen competition. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 96, 9201-9206 (1999).
  30. Julian, C., Herrero, M., Rodrigo, J. Anther meiosis time is related to winter cold temperatures in apricot (Prunus armeniaca L.). Environmental and Experimental Botany. 100, 20-25 (2014).
  31. Guerra, M. E., López-Corrales, M., Wünsch, A., Rodrigo, J. Lack of Fruit Set Caused by Ovule Degeneration in Japanese Plum. Journal of the American Society for Horticultural Science. 136 (6), 375-381 (2011).
  32. Guerra, M. E., Wünsch, A., López-Corrales, M., Rodrigo, J. Flower Emasculation as the Cause for Lack of Fruit Set in Japanese Plum Crosses. Journal of the American Society for Horticultural Science. 135 (6), 556-562 (2010).
  33. Hormaza, J. I., Pinney, K., Polito, V. S. Correlation in the tolerance to ozone between sporophytes and male gametophytes of several fruit and nut tree species (Rosaceae). Sexual Plant Reproduction. 9, 44-48 (1996).
  34. Alcaraz, M. L., Hormaza, J. I., Rodrigo, J. Pistil Starch Reserves at Anthesis Correlate with Final Flower Fate in Avocado (Persea americana). PLOS ONE. 8 (10), 78467(2013).
  35. Tao, R., et al. Molecular typing of S-alleles through Identification, Characterization and cDNA cloning for S-RNases in Sweet Cherry. Journal of the American Society for Horticultural Science. 124, 224-233 (1999).
  36. Burgos, L., et al. The self-compatibility trait of the main apricot cultivars and new selections from breeding programmes. Journal of Horticultural Science. 72, 147-154 (1997).
  37. Hormaza, J. I., Yamane, H., Rodrigo, J. Apricot. Genome Mapping and Molecular Breeding in Plants, Volume 4 Fruits and Nuts. Kole, C. , Springer. New York, NY. 171-187 (2007).
  38. Benmoussa, H., Ghrab, M., Ben Mimoun, M., Luedeling, E. Chilling and heat requirements for local and foreign almond (Prunus dulcis Mill.) cultivars in a warm Mediterranean location based on 30 years of phenology records. Agricultural and Forest Meteorology. 239, 34-46 (2017).
  39. Rodrigo, J., Herrero, M., Hormaza, J. I. Pistil traits and flower fate in apricot (Prunus armeniaca). Annals of Applied Biology. 154, 365-375 (2009).
  40. Williams, R. R. Techniques used in fruit-set experiments. Towards Regulated Cropping. Williams, R. R., Wilson, D. , Grower Books. London. 57-61 (1970).
  41. Sutherland, B. G., Robbins, T. P., Tobutt, K. R. Primers amplifying a range of Prunus S-alleles. Plant Breeding. 123, 582-584 (2004).
  42. Murray, M. G., Thompson, W. F. Rapid isolation of high molecular weight plant DNA. Nucleic Acids Research. 8, 4321-4325 (1980).
  43. Porebski, S., Bailey, L. G., Baum, B. R. Modification of a CTAB DNA Extraction Protocol for Plants Containing High Polysaccharide and Polyphenol Components. Plant Molecular Biology Reporter. 15 (1), 8-15 (1997).
  44. Rogers, S. O., Bendich, A. J. Extraction of DNA from milligram amounts of fresh, herbarium and mummified plant tissues. Plant Molecular Biology. 5 (2), 69-76 (1985).
  45. Hormaza, J. I. Molecular characterization and similarity relationships among apricot (Prunus armeniaca L.) genotypes using simple sequence repeats. Theoretical and Applied Genetics. 104, 321-328 (2002).
  46. Sonneveld, T., Tobutt, K. R., Robbins, T. P. Allele-specific PCR detection of sweet cherry self-incompatibility (S) alleles S1 to S16 using consensus and allele-specific primers. Theoretical and Applied Genetics. 107, 1059-1070 (2003).
  47. Hegedus, A., Lénárt, J., Halász, J. Sexual incompatibility in Rosaceae fruit tree species: molecular interactions and evolutionary dynamics. Biologia Plantarum. 56 (2), 201-209 (2012).
  48. Fernández i Martí, A., Gradziel, T. M., Socias i Company, R. Methylation of the Sf locus in almond is associated with S-RNase loss of function. Plant Molecular Biology. 86, 681-689 (2014).
  49. Company, R. S. i, Kodad, O., Martí, A. F. i, Alonso, J. M. Mutations conferring self-compatibility in Prunus species: From deletions and insertions to epigenetic alterations. Scientia Horticulturae. 192, 125-131 (2015).
  50. Boskovic, R., Tobutt, K. R. Correlation of stylar ribonuclease zymograms with incompatibility alleles in sweet cherry. Euphytica. 90, 245-250 (1996).
  51. Cachi, A. M., Wünsch, A. S-genotyping of sweet cherry varieties from Spain and S-locus diversity in Europe. Euphytica. 197 (2), 229-236 (2014).
  52. Zuriaga, E., et al. An S-locus Independent Pollen Factor Confers Self-Compatibility in "Katy" Apricot. PLoS ONE. 8 (1), 53947(2013).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Self IncompatibilityFluorescence MicroscopyPCR AnalysisS Allele IdentificationCapillary ElectrophoresisAniline Blue StainingPollen Tube GrowthIncompatibility GroupsApricot Cultivars

مقالات ذات صلة