تعرض هذه المخطوطة البروتوكولات الخاصة بإلحاق إصابات النخاع الشوكي الحاده والحاده المتحكم بها جراحيا إلى قنفذ التجديدي (المكسيكوما المكسيكية).
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تعرض هذه المخطوطة البروتوكولات الخاصة بإلحاق إصابات النخاع الشوكي الحاده والحاده المتحكم بها جراحيا إلى قنفذ التجديدي (المكسيكوما المكسيكية).
والغرض من هذه الدراسة هو إنشاء نموذج موحده وقابله للتكرار التجدد أصابه الحبل الشوكي حاده في قنفذ (امستوما المكسيكي). معظم إصابات النخاع الشوكي السريرية تحدث كصدمات حاده الطاقة العالية ، ويحفز إصابات كدمه. ومع ذلك ، أجريت معظم الدراسات في الحبل الشوكي قنفذ مع صدمات حاده. التالي ، تهدف هذه الدراسة إلى إنتاج نموذج تجديدي أكثر ملاءمة سريريا. نظرا لقدرتها الرائعة علي تجديد اي نسيج تقريبا ، يتم استخدام axolotls علي نطاق واسع كنماذج في الدراسات التجديدية وقد استخدمت علي نطاق واسع في الدراسات أصابه الحبل الشوكي (SCI). في هذا البروتوكول ، يتم تخدير الaxolotls بالغمر في محلول بنزوكايين. تحت المجهر ، يتم اجراء شق الزاوي ثنائيا علي مستوي الذيليه فقط إلى الأطراف الخلفية. من هذا الشق ، فمن الممكن لتشريح وفضح العمليات الشائكة. باستخدام ملقط ومقص ، يتم اجراء استئصال الصفيحة علي مستويين ، مما يعرض الحبل الشوكي. يتم إنشاء جهاز الصدمات المخصصة التي تتكون من قضيب السقوط في اسطوانه ، ويستخدم هذا الجهاز للحث علي أصابه كدمه في الحبل الشوكي. ثم يتم خياطه الشقوق ، ويتعافى الحيواني من التخدير. النهج الجراحي ناجح في تعريض الحبل الشوكي. يمكن ان تنتج اليه الصدمات إصابات كدمه في النخاع الشوكي ، كما تؤكد ذلك الانسجه ، والتصوير بالرنين المغناطيسي ، والفحص العصبي. وأخيرا ، يجدد الحبل الشوكي من الاصابه. الخطوة الحاسمة في البروتوكول هي أزاله العمليات الشائكة دون إلحاق الضرر بالحبل الشوكي. وتتطلب هذه الخطوة التدريب لضمان اجراء أمن. وعلاوة علي ذلك ، إغلاق الجرح يعتمد إلى حد كبير علي عدم إلحاق اضرار لا لزوم لها علي الجلد اثناء الشق. تم تنفيذ البروتوكول في دراسة معشاه من 12 الحيوانية.
وكان الهدف العام لهذه الدراسة لإنشاء طريقه الجراحية الدقيقة التي تسيطر عليها واستنساخها للحاق الخيال العلمي الحاد والحاد إلى قنفذ (امستوما المكسيكي) ، وإنتاج نموذج التجدد أصابه الحبل الشوكي.
الخيال العلمي هو حاله خطيره ان, اعتمادا علي مستوي ومدي, يلحق الاعاقه العصبية إلى الأطراف جنبا إلى جنب مع ضعف المثانة والأمعاء السيطرة1,2,3. معظم الخيال العلمي هي نتيجة لصدمات حاده الطاقة العالية مثل حوادث المرور ويسقط4,5. الإصابات الحاده نادره جدا. ولذلك ، فان النوع الأكثر شيوعا أصابه المجهري هو كدمات.
الجهاز العصبي المركزي الثدييات (CNS) هو نسيج غير التجديدية ، التالي لا استعاده الانسجه العصبية بعد الخيال العلمي وينظر6،7،8. من ناحية أخرى ، بعض الماشية لديها قدره مثيره للاهتمام لتجديد الانسجه ، بما في ذلك الانسجه العصبية. واحده من هذه الكائنات هي axolotl. ويستخدم علي نطاق واسع في دراسات البيولوجيا التجديدية وهو من الفائدة في تجديد الحبل الشوكي ، لأنه هو فقاري9،10،11،12.
يتم اجراء معظم الدراسات العلمية في قنفذ اما بتر الذيل بأكمله أو الاجتثاث من جزء أكبر من الحبل الشوكي9,10,11,12. في الاونه الاخيره ، تم نشر دراسة جديده علي إصابات حاده13 ان يحاكي الحالات السريرية أفضل. في حين ان البتر الزائد الكامل في قنفذ يؤدي إلى التجديد الكامل ، فان بعض الظواهر التجديدية غير القائمة علي البتر تعتمد علي عيب الحجم الحرج (المصلحة العامة)14،15. وهذا يعني ان الإصابات التي تتجاوز عتبه حرجه لا تجدد. لتطوير نموذج التجدد مع القيمة السريرية اعلي الانتقالية ، والتحقيق في هذه الدراسة ما إذا كان 2 مم صدمه حاده تتجاوز الحد الأقصى للجنة التنمية المستدامة.
هذا الأسلوب هو ذات الصلة للباحثين العاملين علي تجديد الحبل الشوكي في نماذج الحيوانية الصغيرة ، وخاصه في axolotl. وعلاوة علي ذلك ، قد يكون من المصلحة العامة ، لأنه يسلك وسيله لاستخدام المعدات المختبرية القياسية لتطوير اليه الصدمات الحاده التي هي مناسبه للاستخدام في الماشية الصغيرة بشكل عام.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
وقد اتبعت خلال هذه الدراسة جميع الانظمه المؤسسية والحكومية المعمول بها فيما يتعلق بالاستخدام الأخلاقي للحيوانات. وأجريت الدراسة ببموجب رقم الموافقة: 2015-15-0201-0061 من جانب المفتشيه الدانمركية لتجربه الماشية. وكانت الكائنات المكسيكية axolotls (أمبولي المكسيكوما، ويعني كتله الجسم ± STD: 12.12 غرام ± 1.25 g).
1-الاعداد
2-التخدير
3. استئصال الصفيحة الجراحية المجهرية
ملاحظه: يتم اجراء استئصال الصفيحة تحت مجسم فراغي.
4. إدخال أصابه نوع الكدمة (الشكل 2)
5. إدخال أصابه حاده
ملاحظه: تنفيذ هذه الخطوات بعد 3.5.4.
6. إغلاق الجرح الجراحي
7. أعاده الحيوانية إلى الحل الخالي من المخدرات
8. الموجات فوق الصوتية بعد الجراحة
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
والغرض من البروتوكول هو إنتاج الخيال العلمي الذي سيشل السيارات والوظائف الحسية الذيليه إلى الاصابه. لان قنفذ هو تجديد-المختصة فانه يستعيد وظيفة في غضون أسابيع ، مما يسمح للباحثين لدراسة التجدد CNS خلال فتره زمنيه قصيرة.
تم توفير التخدير لمده 45 دقيقه لجميع الكائنات ، ولم تشهد اي نوبات من الشفاء قبل الأوان. جميع الحيوانية تعافي في غضون ساعة وأظهرت اي علامات الضرر من التخدير في الأسابيع التالية13,16.
وكان استئ...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
لان خطر الاصابه بالحبل الشوكي مهم ، فان الخطوات الحاسمة للبروتوكول هي أزاله العمليات الحاده وتوسيع الوصول العظمي إلى القناة الشوكية إذا لزم الأمر. وكما ذكر في البروتوكول ، ينصح بشده بازاله معظم عمليه الجمجمة أولا. وهذا يعني ان العمليات أكثر الذيليه حماية الحبل الشوكي من التعرض للضرب من قبل المقص. فمن المستحسن لضمان الوصول الجراحي بما فيه الكفاية ، وهذا يعني ان لا تجعل صغيره جدا شق الاوليه. أيضا ، عند استيعاب اي شيء مع ملقط ، يجب ان ينظر دائما اتجاه السحب تطبيقها. وتطبيق سحب لطيف بعيدا عن الحبل الشوكي حمايته في حاله فشل ف...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
وليس لدي المؤلفين ما يفصحون عنه.
مايكل بيدرسن ، جامعه ارهوس لخبرته ووقته في تطوير بروتوكولات التصوير بالرنين المغناطيسي واعداد المشروع بأكمله. بيتر اغغر ، جامعه ارهوس لخبرته والوقت في تطوير بروتوكولات التصوير بالرنين المغناطيسي. ستيفن رينغغارد ، جامعه ارهوس لخبرته والوقت في تطوير بروتوكولات التصوير بالرنين المغناطيسي. تم دعم تطوير نموذج الخيال العلمي في قنفذ من قبل مؤسسه A.P. مولر ميرسك ، ومؤسسه رييسفورت ، ومؤسسه linex ، ومؤسسه elro.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 25 جرام قضيب سقوط مخصص | مخصص للمنزل 30 | ||
| مم أنابيب PVC | مخصصة منزلية | ||
| الصنع Acetone | Sigma-Aldrich | 67-64-1 | Propanone |
| Axolotl (Ambystoma mexicanum) | Exoterra GmbH | N / A | 12-22 سم و 10 جم - 80 جم ، جميع السلالات (البرية ، الميلانويد ، الأبيض ، الأبيض ، الأبيض المعدل وراثيا مع GFP) |
| البنزوكاين | Sigma-Aldrich | 94-09-7 | إيثيل 4-أمينوبنزوات |
| Electromaget | مخصص محلي الصنع | ||
| Excel 2010 | Microsoft | N / A | Excel 2010 أو أحدث |
| من ImageJ | National Institutes of Health | ImageJ 1.5e أو أحدث. راسباند ، دبليو إس ، إيمجج جيه ، المعاهد الوطنية الأمريكية للصحة ، بيثيسدا ، ماريلاند ، الولايات المتحدة الأمريكية ، https://imagej.nih.gov/ij/ ، 1997-2016. | |
| Kimwipes | |||
| أدوات الجراحة المجهرية | N / A | N / A | ملقط ومقص |
| MS550s | Fujifilm ، Visualsonics | MS550s | تردد مركزي 40 ميجاهرتز ، محول الطاقة |
| MS700 | Fujifilm ، Visualsonics | MS700 | مركزي 50 ميجاهرتز ، طبق |
| بتري | الطاقة أي صانع | ||
| قماش | ناعمN / A | N / A | أي قطعة قماش ناعمة بقياس حوالي 70 × 55 سم < سوب > 2 < / سوب > على سبيل المثال منشفة أطباق |
| مجهر | |||
| Vevo 2100 | فوجي فيلم ، | نظام الموجات فوق الصوتية عالي التردد | Vevo 2100 |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.