يصف هذا البروتوكول المنهجي نموذجًا جديدًا للصرع ما بعد الصدمة بعد إصابات الدماغ الخفيفة المتكررة. الجزء الأول تفاصيل خطوات لتحريض إصابات الدماغ الرضية باستخدام نموذج انخفاض الوزن المعدلة. ويقدم الجزء الثاني تعليمات بشأن النهج الجراحي لنظم الحصول على البيانات الكهروالدماغة أحادية ومتعددة القنوات.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تحريض الصرع ما بعد الصدمة في نموذج الماوس من إصابات الدماغ المتكررة منتشر الصدمة
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
إصابة الدماغ الرضية (TBI) هي السبب الرئيسي للصرع المكتسب. يمكن أن يؤدي TBI إلى إصابة الدماغ البؤري أو المنتشر. الإصابة البؤرية هي نتيجة للقوى الميكانيكية المباشرة ، التي تخترق أحيانًا من خلال الجمجمة ، مما يخلق آفة مباشرة في أنسجة الدماغ. هذه مرئية أثناء تصوير الدماغ كمناطق مع كدمة, تمزق, ونزيف. الآفات البؤرية تحفز موت الخلايا العصبية وتشكيل ندبة الدبقية وهي موجودة في 20%-25% من جميع الأشخاص الذين يعانون من TBI. ومع ذلك ، في معظم حالات TBI ، تحدث الإصابة بسبب قوى التسارع وتسارع الأنسجة اللاحقة ، مما يؤدي إلى تلف غير بؤري ومنتشر. يستمر مرضى TBI في الإصابة بالصرع اللاحق للصدمة (PTE) بعد فترة الكمون من الأشهر أو السنوات. حاليا، فإنه من المستحيل التنبؤ المرضى الذين سوف تتطور PTE، والنوبات في المرضى PTE تشكل تحديا للسيطرة، مما يتطلب المزيد من البحوث. حتى وقت قريب، كان الحقل يقتصر على نموذجين فقط للحيوانات / القوارض مع نوبات ما بعد الصدمة التلقائية التي تم التحقق من صحتها ، وكلاهما يقدم آفات بؤرية كبيرة مع فقدان الأنسجة الهائل في القشرة وفي بعض الأحيان الهياكل تحت القشرية. وعلى النقيض من هذه النهج، تقرر أن الـ TBI المنتشر الناجم عن استخدام نموذج معدل لإسقاط الوزن يكفي للشروع في تطوير نوبات تشنجية عفوية وغير متشنجة، حتى في حالة عدم وجود آفات بؤرية أو فقدان الأنسجة. على غرار المرضى الذين يعانون من الصرع بعد الصدمة المكتسبة، يقدم هذا النموذج مع فترة الكمون بعد الإصابة قبل بداية النوبة. في هذا البروتوكول ، سيتم تزويد المجتمع بنموذج جديد للصرع ما بعد الصدمة ، وتفاصيل كيفية الحث على TBI غير الآفات المنتشر يليه مراقبة مستمرة طويلة الأجل للحيوانات الفيديوية الكهربية على مدار عدة أشهر. هذا البروتوكول سوف تفاصيل التعامل مع الحيوانات، وإجراءات انخفاض الوزن، ووضع القطب الكهربائي لاثنين من أنظمة الاستحواذ، والتحديات المتكررة التي تواجهها خلال كل من خطوات الجراحة، والرصد بعد الجراحة، والحصول على البيانات.
المقدمة
كل عام يؤثر TBI ما يقدر بنحو 60 مليون شخص في جميع أنحاء العالم. الأفراد المتضررون هم أكثر عرضة للإصابة بالصرع، الذي يمكن أن يظهر بعد سنوات من الإصابة الأولية. على الرغم من أن TBIs شديدة ترتبط مع ارتفاع خطر الإصابة بالصرع، حتىTBI خفيفة يزيد من فرصة الفرد لتطوير الصرع1،2،3،4. ويمكن تصنيف جميع مركبات ثلاثي بوتيل القصدير على أنها بؤرية أو منتشرأو مزيج من الاثنين معاً. إصابة الدماغ المنتشرة، الموجودة في العديد من TBIs إن لم يكن جميعها، هي نتيجة لأنسجة الدماغ ذات الكثافات المختلفة التي تقص ضد بعضها البعض بسبب تباطؤ التسارع وقوى الدوران. بحكم التعر....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تم تنفيذ جميع الإجراءات الحيوانية الموصوفة في هذا البروتوكول وفقًا للجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها (IACUC) التابعة لفرجينيا تك ووفقًا لـ "دليل رعاية واستخدام الحيوانات المختبرية" للمعاهد الوطنية للصحة .
1- بروتوكول مناولة الحيوانات
ملاحظة: يهدف هذا البروتوكول إلى التعود على الحيوانات التي يتم طلبها من بائع إلى المرفق بعد الوصول وإلى تكييفها للتعامل معها من قبل المجرب. وهذا يحسن رفاهية الحيوان من خلال الحد من التوتر والقلق ويبسط بعض الإجراءات التي تتطلب التعامل مع الحيوانات، بما في ذلك حث TBI، والرصد بعد الجراحة، وربط الحيوان بنظام الاستحواذ.
- عندما يتم تلقي العديد من الحيوانات من البائع، علامة....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يصف البروتوكول المبين هنا طريقة تحريض الإصابة المنتشرة في العزل (على سبيل المثال ، في حالة عدم وجود آفة بؤرية) باستخدام نموذج الماوس من TBI المنتشر المتكرر(الشكل 1). يصور الشكل 1A جهاز إسقاط الوزن ومكوناته(الشكل 1A, a1−a5)المستخدم لتحريض TBI في هذا النموذج والخطوات الحاسمة أثناء الإجراء(الشكل 1B, b1−b5).
وتشمل خصائص هذا النمو.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
وعلى النقيض من نماذج CCI وFPI التي تحفز إما البؤري أو الجمع بين الإصابة البؤرية والمنتشرة ، فإن نموذج TBI المنتشر المتكرر الموصوف في هذا البروتوكول يسمح بتحريض الإصابة المنتشرة في غياب إصابة الدماغ البؤرية ولا يتطلب فتحات فروة الرأس أو الجمجمة والالتهاب المرتبط بها. فائدة إضافية من عدم وجود جحف في هذا النموذج هو أنه يسمح ليس فقط لزرع الأقطاب الكهربائية لتسجيل EEG المستمر المزمن، ولكن أيضا إنشاء نافذة الجمجمة القحفية رقيقة لالمزمن في vivo 2-فوتون تصوير الحيوانات قبل، مباشرة بعد، ومرارا وتكرارا لأيام وأسابيع، وحتى أشهر بعد.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.
شكر وتقدير
تم دعم هذا العمل من قبل R01 NS105807/NS/NINDS NIH HHS/الولايات المتحدة وCURE على أساس منحة CURE وردت من قيادة البحوث الطبية والعتاد في جيش الولايات المتحدة، وزارة الدفاع (وزارة الدفاع)، من خلال برنامج أبحاث الصحة النفسية وإصابات الدماغ الرضية تحت الجائزة رقم. W81XWH-15-2-0069. إيفان زويدهوك يحظى بتقدير كبير لتدقيق المخطوطة.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 0.10 "برغي | Pinnacle Technology Inc. ، KS ، الولايات المتحدة الأمريكية | 8209 | 0.10 بوصة بطول الفولاذ المقاوم للصدأ |
| 0.10 "برغي | Pinnacle Technology Inc. ، KS ، الولايات المتحدة الأمريكية | 8403 | 0.10 بوصة بطول 0.10 بوصة مع سلك |
| 0.12 "برغي | Pinnacle Technology Inc. ، KS ، الولايات المتحدة الأمريكية | 8212 | 0.12 بوصة من الفولاذ المقاوم للصدأ بطول |
| 1EEG headmount | Invitro1 (شركة تابعة لشركة Plastics One) ، VA ، الولايات المتحدة الأمريكية | MS333 / 8-A / SPC | 3 أقطاب كهربائية من سلك الإيريديوم البلاتيني المعزول بالتفلون بشكل فردي (ملتوية أو غير ملتوية ، قطر 0.005 بوصة) تمتد أسفل قاعدة بلاستيكية ملولبة |
| 2EEG / 1EMG | Pinnacle Technology Inc. ، كانساس ، الولايات المتحدة الأمريكية | 8201 | قنوات 2EEG / 1EMG |
| 3٪ بيروكسيد | صيدلية | ||
| 3EEG headmount | Pinnacle Technology Inc. ، كانساس ، الولايات المتحدة الأمريكية | 8235-SM-C | موصل مخصص من 6 دبوس لقنوات 3EEG |
| Buprenorphine | Par Pharmaceuticals، Cos. Inc. ، Spring Valley ، نيويورك ، الولايات المتحدة الأمريكية | 060969 | |
| Buprenorphine | Par Pharmaceuticals ، Cos. Inc. ، Spring Valley ، نيويورك ، الولايات المتحدة الأمريكية | 060969 | |
| C57BL / 6 فئران | Harlan / Envigo Laboratories Inc | ذكر ، 12-16 أسبوعا | |
| C57BL / 6 فئران | مختبر | ذكر ، 12-16 أسبوعا قديم | |
| Carprofen | Zoetis Services LLC ، بارسيباني ، نيوجيرسي ، الولايات المتحدة الأمريكية | 026357 | ملاحظة: يضاف هذا الدواء أثناء انخفاض الوزن فقط إذا تم إجراء زرع القطب التجسيمي في نفس اليوم |
| Chlorhexidine مطهر | |||
| صيدلية أسمنت الأسنان ومجموعة المذيبات | Stoelting Co. ، الولايات المتحدة الأمريكية | 51459 | |
| Drill | Foredom | HP4-917 | |
| مثقاب | Meisinger USA ، LLC ، USA | HM1-005-HP | 0.5 مم ، دائري ، 1/4 ، |
| معقم فولاذي جاف | Cellpoint Scientific ، الولايات المتحدة الأمريكية | Germinator 500 | |
| نظام EEG 1 | أنظمة Biopac ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية | ||
| نظام EEG 2 | Pinnacle Technology Inc. ، KS ، الولايات المتحدة الأمريكية | ||
| الإيثانول & GE ؛ 70٪ | VWR ، الولايات المتحدة الأمريكية | 71001-652 | KOPTEC USP ، درجة التكنولوجيا الحيوية (140 برهان) |
| مرهم العين | Pro Labs Ltd ، الولايات المتحدة الأمريكية | Puralube مرهم بيطري معقم زيوت تشحيم العين متوفرة في المتاجر العامة عبر الإنترنت والصيدليات | |
| سائل Fluriso للتخدير الاستنشاق | MWI Veterinary Supply Co. ، الولايات المتحدة الأمريكية | 502017 | |
| منتج إزالة الشعر | Church & amp دوايت المحدودة ، الولايات المتحدة | ناير كريم | |
| Isoflurane | MWI Veterinary Supply Co. ، الولايات المتحدة الأمريكية | 502017 | |
| بوفيدون اليود الحل الجراحي | Purdue Products ، الولايات المتحدة | الأمريكية 004677 | Betadine |
| Rimadyl / Carprofen | Zoetis Services LLC ، Parsippany ، نيوجيرسي ، الولايات المتحدة الأمريكية | 026357 | |
| Solder | Harware store | ||
| لحام الحديد | ويلر ، الولايات المتحدة الأمريكية | WP35 | ST7 طرف ، 0.8 مم |
| من الفولاذ المقاوم للصدأ | حسب الطلب | ||
| مسحات | |||
| وسادات شاش معقمة | فيشر ساينتفيك ، الولايات المتحدة الأمريكية | 22362178 | |
| وسادات مناشف ماصة معقمة مبطنة بالبولي كاردينال | هيلث ، الولايات المتحدة الأمريكية | 3520 | |
| لاصق الأنسجة | 3M منتجات العناية بالحيوان ، الولايات المتحدة الأمريكية | 1469 ساب |
المراجع
- Christensen, J., et al. Long-term risk of epilepsy after traumatic brain injury in children and young adults: a population-based cohort study. Lancet. 373 (9669), 1105-1110 (2009).
- Lowenstein, D. H. Epilepsy after head injury: an overview. Epilepsia....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
