هنا ، ونحن نقدم بروتوكول للحث علي ارتفاع ضغط الدم العين والضمور العصبي الزرق في عيون الفار عن طريق حقن انتراكاميرال من زيت السيليكون والاجراء لأزاله زيت السيليكون من الغرفة الاماميه للعودة ضغط العين مرتفعه العاديه.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
والسيليكون عكسها الناجمة عن النفط العين ارتفاع ضغط الدم النموذج في الفئران
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
ارتفاع ضغط العين (IOP) هو عامل خطر موثقه جيدا لزرق. هنا نحن وصف رواية ، طريقه فعاله للحث باستمرار مستقره IOP الارتفاع في الفئران التي تحاكي مضاعفات ما بعد الجراحة من استخدام زيت السيليكون (SO) كعامل تاموناد في جراحه شبكيه الإنسان. في هذا البروتوكول ، يتم حقن SO في الغرفة الاماميه للعين الماوس لمنع التلميذ والحيلولة دون تدفق الفكاهة المائية. الغرفة الخلفية تتراكم الفكاهة المائية وهذا بدوره يزيد من IOP من الجزء الخلفي. وتنتج حقنه واحده SO الارتفاع الموثوق بها ، وكافيه ، ومستقره IOP ، والتي تؤدي إلى الضمور العصبي جلوكوكاتوس كبيره. هذا النموذج هو تكرار حقيقي من الزرق الثانوي في عيادة العين. لمزيد من تقليد الاعداد السريرية ، SO يمكن ازالتها من الغرفة الاماميه لأعاده فتح مسار الصرف الصحي والسماح تدفق الفكاهة المائية ، والتي يتم تصريفها من خلال العمل المشصي (TM) في زاوية الغرفة الاماميه. لان IOP يعود بسرعة إلى طبيعتها ، ويمكن استخدام النموذج لاختبار تاثير خفض IOP علي الخلايا العقديه الشبكية جلوكوكاتوس. هذا الأسلوب هو واضح ، لا يتطلب معدات خاصه أو تكرار الإجراءات ، يحاكي عن كثب الحالات السريرية ، ويمكن ان تكون قابله للتطبيق علي الأنواع الحيوانية المتنوعة. ومع ذلك ، قد يلزم اجراء تعديلات طفيفه.
المقدمة
الفقدان التدريجي للخلايا العقدة الشبكية (RGCs) والمحاور الخاصة بهم هو السمة المميزة للجلوكوما ، وهو مرض عصبي شائع في شبكيه العين1. وسوف تؤثر علي أكثر من 100,000,000 الافراد 40 − 80 سنه من قبل 20402. ولا يزال البرنامج هو عامل الخطر الوحيد القابل للتعديل في تطور الزرق وتطوره. من أجل استكشاف المرض ، والتقدم ، والعلاجات المحتملة من الجلوكوما ، ويمكن الاعتماد عليها ، واستنساخها ، ومحفز العين التجريبية ارتفاع ضغط الدم/الزرق النموذج الذي يتطابق مع السمات الرئيسية للمرضي البشر أمر حتمي.
يعتمد IOP علي تدفق الفكاهة المائية إلى الغرفة الاماميه من الجسم الهالهاري في الغرفة الخلفية والتدفق من خلال العمل ال....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وقد تمت الموافقة علي جميع الإجراءات من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام الحيوانية (IACUC) من جامعه ستانفورد.
1. العين ارتفاع ضغط الدم التعريفي عن طريق حقن انتراكاميرال من SO
- جهزي الماصة الزجاجية لانتراكاميرال بالحقن بواسطة سحب الشعرية الزجاجية مع ساحبه ماصه لتوليد الماصات المجهرية. اقطع فتحه عند طرف الماصة الصغيرة وقم بزيادة شحذ الطرف باستخدام اله المطحنة الصغيرة لجعل مجسم مشطوف الحواف 35 ° − 40 °.
- صقل حواف المجسم وأزاله جميع الأنقاض عن طريق الغسل بالماء. الاوتوكلاف ميكروماص قبل الاستخدام.
- اعداد ابره البزل لدخول القرنية. للقيام بذلك ، نعلق ابره 32 G إلى حقنه 5 مل علي قفل Luer ، وكذلك تامينه مع الشريط. ثني ال....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
بعد فتره وجيزة من الحقن يمكننا بسهوله تحديد الفئران التي لا تنتج ارتفاع ضغط الدم العين مستقره بسبب قطرات SO كونها صغيره جدا (≤ 1.5 mm)13. وتستبعد هذه الكائنات من التجارب اللاحقة. بعد إجراءات الحقن ، أكثر من 80 ٪ من الفئران حقن حتى في نهاية المطاف مع قطرات أكبر من 1.6 مم. قمنا بقياس IOP من هذه العيون الماوس مره واحده في الأسبوع لمده 8 أسابيع بعد حقنه واحده حتى. و IOP من العين تلقي SO ظلت عاليه ، وعموما ضعف IOP من العين السيطرة المعاكس ، مشيرا إلى منع التلميذ فعاله (الشكل 1
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هنا نظهر اجراء بسيطه ولكنها فعاله للحث علي ارتفاع IOP المستدامة في العين الماوس عن طريق حقن انتراكاميرال من SO. ويمكن تعلم هذا الاجراء بسرعة من قبل اي شخص لديه خبره في التشريح المجهري تحت المجهر. الخطر المحتمل الرئيسي للفشل هو تسرب SO من شق القرنية. ومع ذلك ، واحده من مزايا استخدام SO هو ان لان قطره النفط مرئية وقابله للقياس ، يمكننا بسهوله تحديد الفئران التي تلقت قطرات صغيره جدا للحث علي ارتفاع ضغط الدم العين مستقره قريبا بعد الحقن واستبعادها من التجارب اللاحقة. لقد حققنا بشكل روتيني معدل النجاح 80 ٪ واستبعد حوالي 20 ٪ .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدي المؤلفين ما يفصحون عنه.
شكر وتقدير
ويدعم هذا العمل من قبل المعاهد القومية للصحة منح EY024932, EY023295, و EY028106 إلى YH.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 0.5٪ بروباراكائين هيدروكلوريد | أكورن ، سومرست | ||
| 10 مل سينج | BD | Luer-Lok Tip | |
| 18G إبرة | BD | مع شطبة عادية ، طول الإبرة: 25.4 مم | |
| 2،2،2-Tribromoethanol (Avertin) فيشر | Scientific | CAS # 75-80-9 | 50 جم |
| 32G نانو | BD | 320122 | BD Nano Ultra Fine Pen Needle-32G 4mm |
| 33G إبرة طب العيون | TSK / VWR | TSK3313 / 10147-200 | |
| 5 مل syinge | BD | Luer-Lok Tip | |
| AnaSed Injection (xylazine) | Butler Schein | 100 مجم / مل ، 50 مل | |
| دموع اصطناعية | مختبرات Alcon | 300651431414 | Systane Ultra Lubricant Eye Drops |
| BSS PLUS محلول الري | Alcon Laboratories | 65080050 | |
| مجتذب ماصة زجاجية مزدوجة | المرحلة NARISHIGE | PC-10 | |
| EZ-7000 نظام كلاسيكي | EZ | ||
| نظام Isoflurane | VetOne | 502017 | isoflurane ، USP ، 250 مل / زجاجة |
| IV مجموعات الإدارة | EXELint / Fisher | 29081 | |
| حقن هيدروكلوريد الكيتامين | VEDCO | 50989-996-06 | كيتافيد 100 مجم / مل * 10 مل |
| آلة شطف الطحن | الصغيرة NARISHIGE | EG-401 | |
| أنابيب مصغرة EVA | McMaster-Carr | 1883T4 | 0.05 "ID, 0.09" OD, 10 أقدام طول |
| زيت السيليكون (SILIKON) | مختبرات Alcon | 8065601185 | 1,000 mPa.s |
| الشعيرات الدموية الزجاجية القياسية | WPI / Fisher | 1B150-4 | 4 بوصة. (100 مم) OD 1.5 مم معرف 0.84 مم |
| TonoLab مقياس توتر | العين الإمداد الطبي الاستعماري ، مرهم المضادات الحيوية البيطرية الفنلندية | ||
| Dechra البيطري | 1223RX | BNP مرهم للعيون ، Vetropolycin |
المراجع
- Chang, E. E., Goldberg, J. L. Glaucoma 2.0: neuroprotection, neuroregeneration, neuroenhancement. Ophthalmology. 119 (5), 979-986 (2012).
- Tham, Y. C., et al. Global prevalence of glaucoma and projections of glaucoma ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
