يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

تحضير البلازما الغنية بالصفائح الدموية المنشطة لزراعة الخلايا الجذعية البشرية المشتقة من الدهون

1.5K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/60480

⸱

مايو 4, 2020

 ,  ,  ,  , 
1Department of Plastic and Reconstructive Surgery, Kansai Medical University, 2Department of Plastic Surgery, Zhejiang Provincial People's Hospital

في هذه المقالة

ملخص

في هذا التقرير ، نصف طريقة الدوران المزدوج لإعداد البلازما الغنية بالصفائح الدموية المنشطة (PRP). باستخدام الثرومبين الذاتي ، تم زراعة الخلايا الجذعية البشرية المشتقة من الدهون (hASCs). تبين أن البلازما الغنية بالصفائح الدموية المنشطة تعزز انتشار hASCs.

الملخص

أظهرت البلازما المنشطة الغنية بالصفائح الدموية (PRP) المحضرة من الدم الكامل عن طريق الطرد المركزي تأثيرا محفزا للتكاثر في عدة أنواع من الخلايا المستنبتة ، مما يعني إمكانية الاستخدام في الطب التجديدي. هنا ، تم استخدام طريقة الدوران المزدوج لتحضير البلازما الغنية بالصفائح الدموية من الدم الكامل. تم تنشيط البلازما الغنية بالصفائح الدموية عن طريق الثرومبين الذاتي. تم قياس عدد الصفائح الدموية في البلازما الغنية بالصفائح الدموية المنشطة وتم فحص التأثير المحفز للتكاثر في الخلايا الجذعية المشتقة من الدهون البشرية (hASCs). كان عدد الصفائح الدموية الناتج أعلى ب 11.5 مرة في البلازما الغنية بالصفائح الدموية مقارنة ببلازما الدم الكامل. تم تعزيز انتشار hASCs بشكل ملحوظ عن طريق الحضانة بنسبة 1٪ PRP. يمكن استخدام الطريقة الموصوفة لتحضير البلازما الغنية بالصفائح الدموية بشكل متكرر بتركيز عال من الصفائح الدموية. يعزز البلازما الغنية بالصفائح الدموية المحضرة بهذه الطريقة بشكل ملحوظ انتشار hASCs.

المقدمة

يتم تحضير البلازما الغنية بالصفائح الدموية المنشطة (PRP) عن طريق الطرد المركزي للدم الكامل ويظهر أنها تحتوي على صفائح دموية أعلى بكثير من مستويات خط الأساس1. تم استخدام RPP الذاتي على نطاق واسع في العلاج الجراحي ، بما في ذلك التئام الجروح2 ، وإصابة العظام3 ، والعمليات الجراحية التجميلية4،5. بعد تنشيط الصفائح الدموية في البلازما الغنية بالصفائح الدموية ، تطلق α الحبيبات الموجودة في الصفائح الدموية العديد من عوامل النمو ، مثل عامل النمو المشتق من الصفائح الدموية (PDGF) ، وعامل نمو البشرة (EGF) ، وعوامل النمو الشبيهة بالأنسولين (IGFs) ، وتحويل عامل النمو بيتا (TGF-β) ، وعامل النمو البطاني الوعائي (VEGF) ، وغيرها1،6،7. تلعب عوامل النمو هذه دورا مهما في تكاثر الخلايا8 ، والهجرة9 ، والتمايز9.

حتى الآن ، أبلغت العديد من الدراسات عن التأثير المحفز للانتشار للبلازما الغنية بالصفائح الدموية في أنواع مختلفة من الخلايا10،11،12،13،14،15،16. أحد هذه الأنواع من الخلايا هو الخلايا الجذعية المشتقة من الدهون البشرية (hASCs). توجد hASCs في الأنسجة الدهنية البشرية ويمكن جمعها بسهولة بأعداد كبيرة. يشير التأثير التجديدي ل hASCs أيضا إلى استخدام محتمل في التطبيقاتالسريرية 8. أفادت دراساتنا السابقة أنه بالمقارنة مع البلازما الغنية بالصفائح الدموية غير المنشطة ، كان للبلازما الغنية بالصفائح الدموية المنشطة تأثير تكاثري ملحوظ على الخلايا الجذعية الجذعية المزمنة والخلايا الليفية الجلدية البشرية (hDFs)8. بالإضافة إلى ذلك ، أبلغنا أن PRP يعزز انتشار hDFs من خلال مسار إشارات ERK1 / 217. في الآونة الأخيرة ، أبلغنا أيضا أن PRP يعزز انتشار hASCs من خلال مسارات إشارات ERK1 / 2 و JNK و Akt18. في hASCs ، يلعب البلازما الغنية بالصفائح الدموية دورا مهما كمكمل يعزز الانتشار. ستساعد المعرفة حول تأثير البلازما الغنية بالصفائح الدموية على hASCs على تطوير طرق الاستزراع واسعة النطاق وتمكين إجراء مزيد من الدراسات حول آلية الانتشار في hASCs.

في هذا التقرير ، نقدم ونصف طريقة لتحضير البلازما الغنية بالصفائح الدموية من الدم الكامل باستخدام الطرد المركزي. تستخدم هذه الطريقة طريقة الدوران المزدوج لإعداد عينة مستقرة من البلازما الغنية بالصفائح الدموية بسهولة. لتقييم الوظيفة البيولوجية للبلازما الغنية بالصفائح الدموية ، قمنا بقياس عدد الصفائح الدموية المركزة وتركيز العديد من عوامل الانتشار. أكدنا أيضا التأثير المحفز للنمو باستخدام البلازما الغنية بالصفائح الدموية المحضرة لزراعة hASCs.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة على الدراسة من قبل مجلس مراجعة الأخلاقيات بجامعة كانساي الطبية وفقا للمبادئ التوجيهية الأخلاقية لإعلان هلسنكي لعام 1975. تم جمع جميع العينات واستخدامها بموافقة مستنيرة من المتبرعين.

1. التحضير

  1. بعد الحصول على موافقة مستنيرة، خذ الدم من متبرعين بالغين أصحاء. هنا ، تم جمع الدم من أربعة متبرعين بالدم من الذكور الذين تتراوح أعمارهم بين 28 و 38 عاما.
    1. يوصي المتبرعين بشرب 500 مل من الماء قبل 6 ساعات من جمع الدم.
      ملاحظة: تم وصف النطاقات المرجعية للهيموجلوبين (Hb) وعدد خلايا الدم الحمراء (RBC) وتركيز الصفائح الدموية (PL) لدى البالغين الأصحاء بواسطة Vajpayee19. لكي تكون مناسبة للتبرع بالدم ، يجب أن يكون تحليل دم المتبرع ضمن هذه النطاقات.

2. جمع الدم

  1. اطلب من المتبرعين بالدم الجلوس أثناء العملية.
  2. ارتد القفازات. اربط عاصبة على الجزء العلوي من ذراع المتبرع بينما يقوم المتبرع بقبضة اليد.
  3. بمجرد العثور على الوريد المناسب ، قم بتعقيم الجلد مرتين باستخدام 70٪ كحول وأدخل الإبرة.
  4. استخدم حقنة 21 جم لجمع الدم. لا ترخي العاصبة أثناء سحب الدم.
    1. استخدم أنبوب جمع الدم سعة 8.5 مل لجمع الدم. راقب حالة الدم في الأنبوب وقم بالتغيير إلى أنبوب جديد بمجرد أن يتباطأ تدفق الدم.
    2. اجمع كمية كافية من الدم لعمل البلازما الغنية بالصفائح الدموية. اجمع أربعة أنابيب من الدم المضاد للتخثر بحجم إجمالي 34 مل. اقلب الأنابيب 10 مرات لخلط الدم مع مضاد التخثر.
    3. استخدم أنبوب جمع الدم في الدم سعة 10 مل (انظر جدول المواد) بدون مضاد للتخثر لجمع الدم لصنع المنشط (انظر الخطوة 4). اجمع 10 مل من الدم غير المضاد للتخثر.

3. طريقة الدوران المزدوج لعمل البلازما الغنية بالصفائح الدموية

  1. خذ 40 ميكرولتر من الدم الكامل المضاد للتخثر لعدد الصفائح الدموية. استخدم أطراف الماصة المفلترة لحماية الماصة من تلوث الدم.
  2. جهاز الطرد المركزي للدم الكامل المضاد للتخثر لمدة 7 دقائق عند 450 × جم ودرجة حرارة الغرفة. هذه هي الجولة الأولى للحصول على عينات دم ذات طبقات. الطبقة العليا هي جزء البلازما ، والطبقة الوسطى هي القارب الرقيق ، وتتكون الطبقة السفلية من خلايا الدم الحمراء.
  3. استخدم قلم تحديد لعمل خط عند 2 مم أسفل الطبقة المصفرية.
  4. استخدم حقنة سعة 20 مل مع قنية طويلة لجمع البلازما فقط إلى علامة 2 مم أسفل الطبقة المصفرية. تحتوي البلازما الصفراء ذات الطبقة المصفرة على الصفائح الدموية والكريات البيض وبعض كريات الدم الحمراء. اجمع البلازما من أنبوبين في أنبوب تجميع الدم في المصل. اجمع محتويات 4 أنابيب في أنبوبين لحجم إجمالي يبلغ 16 مل من البلازما التي تم جمعها.
  5. قم بالطرد المركزي للبلازما بطبقة مصفرة لمدة 5 دقائق عند 1,600 × جم ودرجة حرارة الغرفة. هذه هي الجولة الثانية. المادة الطافية لعينات الدم ذات الطبقات هي البلازما الفقيرة بالصفائح الدموية (PPP).
  6. استخدم حقنة سعة 20 مل مع قنية طويلة لنقل PPP إلى أنبوب جمع الدم في الدم بسعة 50 مل يحتوي على 1 مل من السائل كتدبير. تم استخدام الصفائح الدموية التي تراكمت في حبيبات الصفيحات الخثارية في البلازما المتبقية 1 مل كبلازما البلازما الغنية بالصفائح الدموية. كان الحجم الإجمالي للبلازما الغنية بالصفائح الدموية التي تم جمعها 2 مل.
  7. دوامة البلازما الغنية بالصفائح الدموية في كل أنبوب ثم تجمع في أنبوب واحد (إجمالي 2 مل).
  8. خذ 400 ميكرولتر من البلازما الغنية بالصفائح الدموية لعدد الصفائح الدموية.
  9. قم بتقسيم البلازما الغنية بالصفائح الدموية إلى عدة أنابيب سعة 1.5 مل ، تحتوي على ما يقرب من 400 ميكرولتر في كل أنبوب. هناك ما مجموعه أربعة أنابيب. يوصى باستخدام ما يقرب من 500 ميكرولتر من البلازما الغنية بالصفائح الدموية لكل أنبوب.

4. تحضير المنشط

  1. اسمح ل 10 مل من الدم بدون مضادات التخثر في أنبوب جمع الدم المصلي (الخطوة 2.3.3) بالجلوس لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
  2. الطرد المركزي عينة الدم بدون مضادات التخثر لمدة 8 دقائق عند 2,015 × جم ودرجة حرارة الغرفة في جهاز طرد مركزي مختبر.
  3. اجمع المادة الطافية على شكل ثرومبين ذاتي المنشأ.
  4. امزج 0.5 M CaCl2 والثرومبين الذاتي بنسبة 1: 1 (v / v) كمنشط. على سبيل المثال ، تم خلط 500 ميكرولتر من CaCl2 مع 500 ميكرولتر من الثرومبين الذاتي. اصنع حجما إجماليا قدره 1 مل من المنشط.

5. تنشيط البلازما الغنية بالصفائح الدموية

  1. امزج PRP والمنشط بنسبة 10: 1 (حجم / حجم). امزج 400 ميكرولتر من البلازما الغنية بالصفائح الدموية مع 40 ميكرولتر من المنشط في كل أنبوب سعة 1.5 مل ، ثم احتضنه لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. يتم تنشيط هذا البلازما الغنية بالصفائح الدموية في شكل متخثر.

6. تخزين البلازما الغنية بالصفائح الدموية

  1. تعمل أجهزة الطرد المركزي على تنشيط PRP عند 9,000 × جم لمدة 10 دقائق في جهاز طرد مركزي مختبري 4 درجات مئوية.
  2. اجمع المادة الطافية عبر الماصة في حقنة ذات حجم مناسب.
  3. قم بتصفية المادة الطافية من خلال غشاء 0.22 ميكرومتر.
  4. قم بتخزين البلازما الغنية بالصفائح الدموية النهائية عند -80 درجة مئوية حتى الاستخدام.

7. قياس تركيزات الصفائح الدموية ومستويات عامل النمو

  1. احسب عدد الصفائح الدموية في البلازما الكاملة والبلازما الغنية بالصفائح الدموية باستخدام نظام أمراض الدم الآلي (انظر جدول المواد).
  2. تحليل تركيزات مستويات PDGF-BB و IGF و EGF في البلازما الكاملة والبلازما الغنية بالصفائح الدموية المنشطة باستخدام مجموعات ELISA المتاحة تجاريا (انظر جدول المواد).

8. فحص تكاثر الخلايا

  1. عزل hASCs باستخدام طريقة موصوفةسابقا 18.
    1. بذور hASCs بكثافة 1.0 × 104 خلايا / بئر في ألواح استزراع 24 بئرا وتحتضن في DMEM تحتوي على 10٪ FBS والمضادات الحيوية طوال الليل عند 37 درجة مئوية. استخدم hASCs من المقاطع 7-9 في التجارب.
  2. استبدل الوسائط الخلوية ب DMEM الخالي من المصل. بعد 6 ساعات ، أضف البلازما الغنية بالصفائح الدموية بالتركيزات المحددة واحتضانها لمدة 48 ساعة عند 37 درجة مئوية.
  3. احتضان بمحلول WST-8 (انظر جدول المواد) لمدة 1 ساعة عند 37 درجة مئوية. اقرأ الامتصاص عند 450 نانومتر باستخدام قارئ الألواح متعدد الآبار.
  4. بناء منحنى قياسي: بذور hASCs بكثافة 0 و 6,250 و 12,500 و 25,000 و 50,000 و 100,000 خلية / بئر في ألواح 24 بئرا في DMEM مع 10٪ FBS لمدة 3 ساعات. اقرأ الامتصاص عند 450 نانومتر بعد الحضانة بمحلول WST-8 لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية
    1. ارسم المنحنى القياسي عن طريق رسم عدد الخلايا مقابل A450 نانومتر.
  5. تقدير عدد hASCs من الامتصاص بناء على المنحنى القياسي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تركيزات غنية من الصفائح الدموية و PDGF-BB في PRP
زادت تركيزات الصفائح الدموية و PDGF-BB في البلازما الغنية بالصفائح الدموية بمقدار 11.5 ضعفا و 25.9 ضعفا ، على التوالي ، مثل تلك الموجودة في البلازما الكاملة. ومع ذلك ، لم يتم تغيير تركيزات EGF في PRP وكان IGF 70٪ فقط من تركيزات البلازما الكاملة (الجدول 1). تم تكرار التجارب أربع مرات بطريقة الدوران المزدوج.

تعزيز انتشار hASCs عن طريق تحفيز البلازما الغنية بالصفائح الدموية
زاد تكاثر الخلايا ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

بعد تنشيط البلازما الغنية بالصفائح الدموية ، تقوم العديد من عوامل النمو ، مثل PDGF و EGF و IGF و TGF-β و VEGF1،6،7 "بتنشيط" خلايا وأنسجة الجروح التي تعزز التئام الجروح20،21. في حالة جراحة إعادة البناء التجميلية ، ثبت أن الخلايا المنشطة تحفز الشفاء وتحسن الجماليات22،23. بدلا من ذل...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ويعلن أصحاب البلاغ أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
20 مل حقنة ، نوع قفل حقنة TerumoTerumo ، طوكيو ، اليابان.SS-20LZP
50 مل أنبوب ، أنبوب مخروطي من مادة البولي بروبلينكورنينج ، نيويورك ، الولايات المتحدة الأمريكية.352070
نظام أمراض الدم الآليSysmex Corp. ، طوكيو ، اليابانإبرة جمع الدم XE-2100
، مجموعة SafeTouch PSV مع محول لور ، 21 جم × 3/4 بوصةنيبرو ، أوساكا ، اليابان.32-384
أنبوب جمع الدم ، محلول ACD أنبوب جمع الدم ، 8.5 ملBD Vacutainer ، نيوجيرسي ، الولايات المتحدة الأمريكية.364606
أنبوب جمع الدم ، أنبوب جمع الدم في الدم / monovette ، 10 ملBD Vacutainer ، نيوجيرسي ، الولايات المتحدة الأمريكية.366430
كلوريد الكالسيوم ، 1 مكافئ / مل ،مصنع أوتسوكا للأدوية ، توكوشيما ، اليابان.3215400A1061
قنية ، إبرة غير مائلة BS ، 18 جم (1.2 مم) × 75 ممBS Medical ، طوكيو ، اليابان.BS-81007غير معروض للبيع
مجموعة عد الخلايا -8Dojindo Molecular Technologies ، كوماموتو ، اليابانCK04
جهاز طرد مركزيكوكوسان ، طوكيو ، اليابان.H-19F
Eppendorf ، هامبورغ ، ألمانيا.5415R
EnSpire 2300 قارئ متعدد التسمياتPerkinElmer، Inc. ، Waltham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية
وحدة التصفيةMerck Millipore ، شركة Cork ، أيرلندا.SLGP033RS
مجموعة EGF Quantikine ELISA البشريةR & D Systems ، مينيابوليس ، مينيسوتا ، الولايات المتحدة الأمريكيةDEG00
Human IGF-I Quantikine ELISA KitR & D Systems ، مينيابوليس ، مينيسوتا ، الولايات المتحدة الأمريكيةDG100
Human PDGF-BB Quantikine ELISA KitR & D Systems ، مينيابوليس ، مينيسوتا ، الولايات المتحدة الأمريكيةDBB00
طرف ماصة ، ART 1000 Reach Barrier TipThermo Scientific ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية.2079-05-HR
ماصة ، Nichipet EXII 100-1000 & LNichiryo ، Saitama ، اليابان.00-NPX2-1000
قفازات فحص خالية من الطاقة من النتريل الاسترلينيكيمبرلي كلارك50707
كحول يامازن للتطهيريامازن للأدوية ، أوساكا ، اليابان.أ7L07
جهاز طرد مركزي

المراجع

  1. Eppley, B. L., Woodell, J. E., Higgins, J. Platelet quantification and growth factor analysis from platelet-rich plasma: implications for wound healing. Plastic and Reconstructive Surgery. 114 (6), 1502-1508 (2004).
  2. Salcido, R. S. Autologous platelet-rich plasma in chronic wounds. Advances in Skin & Wound. 26 (6), 248(2013).
  3. Marx, R. E., et al. Platelet-rich plasma: Growth factor enhancement for bone grafts. Oral Surgery, Oral Medicine, Oral Pathology, Oral Radiology, and Endodontology. 85 (6), 638-646 (1998).
  4. Bhanot, S., Alex, J. C. Current applications of platelet gels in facial plastic surgery. Facial Plastic Surgery. 18 (1), 27-33 (2002).
  5. Man, D., Plosker, H., Winland-Brown, J. E. The use of autologous platelet-rich plasma (platelet gel) and autologous platelet-poor plasma (fibrin glue) in cosmetic surgery. Plastic and Reconstructive Surgery. 107 (1), 238(2001).
  6. Eppley, B. L., Pietrzak, W. S., Blanton, M. Platelet-rich plasma: a review of biology and applications in plastic surgery. Plastic and Reconstructive Surgery. 118 (6), 147-159 (2006).
  7. Lubkowska, A., Dolegowska, B., Banfi, G. Growth factor content in PRP and their applicability in medicine. Journal of biological regulators and homeostatic agents. 26, 2 Suppl 1 3-22 (2012).
  8. Kakudo, N., et al. Proliferation-promoting effect of platelet-rich plasma on human adipose-derived stem cells and human dermal fibroblasts. Plastic and Reconstructive Surgery. 122 (5), 1352-1360 (2008).
  9. Kakudo, N., Morimoto, N., Kushida, S., Ogawa, T., Kusumoto, K. Platelet-rich plasma releasate promotes angiogenesis in vitro and in vivo. Medical Molecular Morphology. 47 (2), 83-89 (2014).
  10. Liu, Y., Kalen, A., Risto, O., Wahlstrom, O. Fibroblast proliferation due to exposure to a platelet concentrate in vitro is pH dependent. Wound Repair and Regeneration. 10 (5), 336-340 (2002).
  11. Lucarelli, E., et al. Platelet-derived growth factors enhance proliferation of human stromal stem cells. Biomaterials. 24 (18), 3095-3100 (2003).
  12. Kilian, O., et al. Effects of platelet growth factors on human mesenchymal stem cells and human endothelial cells in vitro. European Journal of Medical Research. 9 (7), 337-344 (2004).
  13. Kanno, T., Takahashi, T., Tsujisawa, T., Ariyoshi, W., Nishihara, T. Platelet-rich plasma enhances human osteoblast-like cell proliferation and differentiation. Journal of Oral and Maxillofacial Surgery. 63 (3), 362-369 (2005).
  14. Gruber, R., et al. Platelet-released supernatants increase migration and proliferation, and decrease osteogenic differentiation of bone marrow-derived mesenchymal progenitor cells under in vitro conditions. Platelets. 15 (1), 29-35 (2004).
  15. Koellensperger, E., von Heimburg, D., Markowicz, M., Pallua, N. Human serum from platelet-poor plasma for the culture of primary human preadipocytes. Stem Cells. 24 (5), 1218-1225 (2006).
  16. Kocaoemer, A., Kern, S., Kluter, H., Bieback, K. Human AB serum and thrombin-activated platelet-rich plasma are suitable alternatives to fetal calf serum for the expansion of mesenchymal stem cells from adipose tissue. Stem Cells. 25 (5), 1270-1278 (2007).
  17. Hara, T., et al. Platelet-rich plasma stimulates human dermal fibroblast proliferation via a Ras-dependent extracellular signal-regulated kinase 1/2 pathway. Journal of Artificial Organs. 19 (4), 372-377 (2016).
  18. Lai, F., et al. Platelet-rich plasma enhances the proliferation of human adipose stem cells through multiple signaling pathways. Stem Cell Research and Therapy. 9 (1), 107(2018).
  19. Vajpayee, N., Graham, S. S., Bem, S. Basic examination of blood and bone marrow. Henry's Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods. 22, 509-535 (2011).
  20. Cervelli, V., et al. Use of platelet-rich plasma and hyaluronic acid in the loss of substance with bone exposure. Advances in Skin & Wound. 24 (4), 176-181 (2011).
  21. Nicoli, F., et al. Severe hidradenitis suppurativa treatment using platelet-rich plasma gel and Hyalomatrix. International Wound Journal. 12 (3), 338-343 (2015).
  22. Cervelli, V., et al. platelet rich lipotransfert: our experience and current state of art in the combined use of fat and PRP. BioMed Research International. 2013, 434191(2013).
  23. Gentile, P., et al. Platelet-Rich Plasma and Micrografts Enriched with Autologous Human Follicle Mesenchymal Stem Cells Improve Hair Re-Growth in Androgenetic Alopecia. Biomolecular Pathway Analysis and Clinical Evaluation. Biomedicines. 7 (2), (2019).
  24. Gentile, P., Scioli, M. G., Orlandi, A., Cervelli, V. Breast Reconstruction with Enhanced Stromal Vascular Fraction Fat Grafting: What Is the Best Method. Plastic and Reconstructive Surgery. Global Open. 3 (6), 406(2015).
  25. Gentile, P., Casella, D., Palma, E., Calabrese, C. Engineered Fat Graft Enhanced with Adipose-Derived Stromal Vascular Fraction Cells for Regenerative Medicine: Clinical, Histological and Instrumental Evaluation in Breast Reconstruction. Journal of Clinical Medicine. 8 (4), (2019).
  26. Gentile, P., Piccinno, M. S., Calabrese, C. Characteristics and Potentiality of Human Adipose-Derived Stem Cells (hASCs) Obtained from Enzymatic Digestion of Fat Graft. Cells. 8 (3), (2019).
  27. Scioli, M. G., Bielli, A., Gentile, P., Cervelli, V., Orlandi, A. Combined treatment with platelet-rich plasma and insulin favours chondrogenic and osteogenic differentiation of human adipose-derived stem cells in three-dimensional collagen scaffolds. Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 11 (8), 2398-2410 (2017).
  28. Marx, R. E., Garg, A. K. Dental and craniofacial applications of platelet-rich plasma. , Quintessence Publishing Company. (2005).
  29. Kakudo, N., Kushida, S., Kusumoto, K. Platelet-rich plasma: the importance of platelet separation and concentration. Plastic and Reconstructive Surgery. 123 (3), author reply 1136-1137 1135-1136 (2009).
  30. Kakudo, N., Kushida, S., Minakata, T., Suzuki, K., Kusumoto, K. Platelet-rich plasma promotes epithelialization and angiogenesis in a splitthickness skin graft donor site. Medical Molecular Morphology. 44 (4), 233-236 (2011).
  31. Kushida, S., et al. Platelet and growth factor concentrations in activated platelet-rich plasma: a comparison of seven commercial separation systems. Journal of Artificial Organs. 17 (2), 186-192 (2014).
  32. Morimoto, N., et al. Exploratory clinical trial of combination wound therapy with a gelatin sheet and platelet-rich plasma in patients with chronic skin ulcers: study protocol. British Medical Journal Open. 5 (5), 007733(2015).
  33. Kushida, S., Kakudo, N., Morimoto, N., Mori, Y., Kusumoto, K. Utilization of Platelet-Rich Plasma for a Fistula With Subcutaneous Cavity Following Septic Bursitis: A Case Report. Eplasty. 15, 31(2015).
  34. Eby, B. W. Platelet-rich plasma: harvesting with a single-spin centrifuge. Journal of Oral Implantology. 28 (6), 297-301 (2002).
  35. Castillo, T. N., Pouliot, M. A., Kim, H. J., Dragoo, J. L. Comparison of growth factor and platelet concentration from commercial platelet-rich plasma separation systems. The American Journal of Sports Medicine. 39 (2), 266-271 (2011).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

الفيديو قريباً
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.