يصف هذا البروتوكول عزل الخلايا الظهاريه من المناطق التشريحية المختلفة من الغشاء السلوى البشري لتحديد تغايرها وخصائصها الوظيفية للتطبيق المحتمل في النماذج السريرية والفسيولوجية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
في المختبر الثقافة من الخلايا الظهاريه من المناطق التشريحية المختلفة من الغشاء السلوى الإنسان
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
وقد تم الإبلاغ عن العديد من البروتوكولات في الأدبيات لعزله وثقافة الخلايا الظهاريه الإنسان السلوى (HAEC). ومع ذلك ، فان هذه تفترض ان ظهاره السلوى طبقه متجانسة. يمكن تقسيم الإنسان إلى ثلاث مناطق تشريحيه: منعكسة ، والمشيمة ، والسرة. كل منطقه لها ادوار فسيولوجية مختلفه ، كما هو الحال في الحالات المرضية. هنا ، ونحن وصف بروتوكول لتشريح الانسجه الإنسان امايون في ثلاثه أقسام والحفاظ عليه في المختبر. وفي الثقافة ، تظهر الخلايا المشتقة من الامايون المنعكس شكلا كوبويدالا ، في حين ان الخلايا الماخوذه من منطقتي المشيمة والسرة كانت حرشفية. ومع ذلك ، فان جميع الخلايا التي تم الحصول عليها لديها النمط الظاهري الظهاريه ، التي أظهرتها المناعة من البريد الكتروني. التالي ، لان المناطق المشيمة والمنعكسة في الموقع تختلف في المكونات الخلوية والوظائف الجزيئية ، قد يكون من الضروري للدراسات في المختبر للنظر في هذه الاختلافات ، لأنها يمكن ان يكون لها اثار فسيولوجية لاستخدام HAEC في البحوث الطبية الحيوية والتطبيق الواعد لهذه الخلايا في الطب التجديدي.
المقدمة
خلايا ظهاره الإنسان السلوى (HAEC) تنشا خلال المراحل المبكرة من النمو الجنيني ، في حوالي ثمانيه أيام بعد الإخصاب. انها تنشا من السكان من الخلايا الظهاريه الحرشفية من العدسة التي تستمد من الطبقة الأعمق من الغشاء السلوى1. وهكذا ، تعتبر HAEC بقايا الخلايا المستحثة من العدسة التي لديها القدرة علي التفريق في الطبقات الجرثومية الثلاث من الجنين2. في العقد الماضي ، قامت مجموعات بحثيه متنوعة بتطوير طرق لعزل هذه الخلايا عن الغشاء السلوى في فتره الحمل لتوصيف خصائصها الافتراضية ذات الصلة بالتعدد في نموذج الثقافة في المختبر3،4.
وبناء علي ذلك ، وجد ان HAEC سمات مميزه للخلايا الجذعية لمستحث البشرية (HPSC) ، مثل المستضدات السطحية SSEA-3 و SSEA-4 و TRA 1-60 و TRA 1-81 ؛ جوهر عوامل النسخ تعدد OCT4, SOX2, و NANOG; ومؤشر الانتشار KI67 ، مما يوحي بأنها ذاتية التجديد5،6،7. وعلاوة علي ذلك ، تم تحدي هذه الخلايا باستخدام بروتوكولات التمايز للحصول علي خلايا ايجابيه لعلامات النسب المحددة من الطبقات الجرثومية الثلاثة (اكوديرم ، الأديم المتوسط ، والأديم الباطن)4،5،8، وكذلك في النماذج الحيوانية من الامراض البشرية. أخيرا, [هتيك] مستعجله [ا-كهنرين], اي يبرهن ان هم يحتبسون [ظهاري] طبيعة كثير مثل ال [هبس]5,9.
بعيدا عن أصلهم الجنيني ، زرع13.
ومع ذلك ، فقد افترضت التقارير السابقة ان الإنسان البشري هو غشاء متجانس ، دون النظر إلى انه يمكن ان ينقسم تشريحيا وفيزيولوجيا إلى ثلاث مناطق: المشيمة (الذي يغطي السرة ساقط) ، السري (الجزء الذي يغلف الحبل السري) ، وينعكس (بقية الغشاء غير مرتبط بالمشيمة)14. وقد تبين ان المشيمة والمناطق المنعكسة من الخلافات عرض الاختلافات في المورفولوجية, نشاط الميتوكوندريا, الكشف عن أنواع الأكسجين التفاعلي15, التعبير ميرنا16, وتفعيل إشارات مسارات17. وتشير هذه النتائج إلى ان الإنسان البشري مندمج من قبل مجموعه غير متجانسة من السكان ذات الوظائف المختلفة التي ينبغي النظر فيها لاجراء المزيد من الدراسات في النماذج في الموقع أو في المختبر. في حين ان المختبرات الأخرى قد صممت بروتوكولات لعزل HAEC من الغشاء كله ، فقد إنشا مختبرنا بروتوكولا لعزل وثقافة وتوصيف الخلايا من مختلف المناطق التشريحية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت الموافقة علي هذا البروتوكول من قبل اللجنة الاخلاقيه للمعهد الوطني لperinatología في مكسيكو سيتي (السجل رقم 212250-21041). وكانت جميع الإجراءات التي أجريت في هذه الدراسات متفقه مع المعايير الاخلاقيه للمعهد الوطني لperinatología ، وإعلان هلسنكي ، والمبادئ التوجيهية المنصوص عليها في المعيار المكسيكي الرسمي لوزارة الصحة.
1-الاعداد
- اعداد حل ل 1x تلفزيوني مع أدتا. للقيام بذلك ، أضافه 500 μL من 0.5 M الأسهم أدتا إلى 500 mL من 1x تلفزيوني للتركيز النهائي من 0.5 mM أدتا.
- اعداد الثقافة المتوسطة ل HAEC. خذ 450 مل من ارتفاع الجلوكوز-dmem, تكمله مع 5 مل من بيروفات الصوديوم (100 mM), 50 ml من الدم البقري الجنين غير النشطة المؤهلين للخلايا الجذعية, 5 مل من الأحماض الامينيه غير الاساسيه (100x), 5 مل من المضادات الحيوية انتيكو200 تيك 500 μL من mercaptoethanol (1 ، 000x).
- تعقيم الحاويات لنقل ومعالجه الانسجه: وعاء من الفولاذ المقاوم للصدا مع غطاء لنقل المشيمة بأكملها من مسرح التشغيل إلى المختبر ، وصينية (20 سم × 30 سم × 8 سم) لغسل وأزاله الدم من المشيمة كلها قبل تشريح الغشاء السلوى ، ومجلس تقطيع البلاستيك لفصل الغشاء السلوى في المناطق الثلاث.
- تعقيم الاداات الجراحية (القشرية ، مقص ، ملقط ، والمشابك) ، 500 مل الأكواب ، القطن gauzes ، ومحلول ملحي.
2. الحصول علي انسجه المشيمة
ملاحظه: تم الحصول علي الاغشيه السلوى من النساء في الحمل علي المدى الكامل (37 − 40 أسبوعا) ، تحت اشاره الولادة القيصرية ، دون اي دليل علي العمل النشط ، وليس الخصائص الميكروبيولوجية للعدوى. ونفذت إجراءات العزل والثقافة الكاملة في اطار مجلس للأمن البيولوجي في ظل ظروف عقيمه.
- في غرفه العمليات ، المشبك الحبل السري لمنع تدفق الدم إلى بقية الانسجه. جمع المشيمة بأكملها مع الحبل السري فرضت في حاويه معقمه.
- أضف 500 مل من محلول ملحي إلى الحاوية لترطيب المشيمة.
- إغلاق الحاوية ونقل الانسجه إلى المختبر في درجه حرارة الغرفة.
- وضع الحاوية مع المشيمة داخل مجلس الوزراء البيولوجي.
ملاحظه: في حاله عدم اجراء تشريح في غضون 15 دقيقه من جمع المشيمة ، وتخزين الحاوية مع المشيمة علي الجليد حتى المعالجة. تجنب أكثر من 1 ساعة من الوقت المنقضي بين الحصول علي المشيمة وبداية التشريح.
3. الفصل الميكانيكي لكل منطقه من الغشاء السلوى
ملاحظه: يجب ان يتم الاجراء داخل مجلس الوزراء البيولوجي في ظل ظروف معقمه وفي درجه حرارة الغرفة.
- قم بازاله المشيمة بأكملها من الحاوية ووضعها علي الصينية مع الحبل السري الذي يواجه الأعلى.
- باستخدام شاش قطني معقم ، نظف الجلطات الدموية من سطح الغشاء الذي يغطي المشيمة.
- تحديد المناطق الثلاث من الغشاء: السرة السرية التي تغلف الحبل السري ، والمشيمة التي تغطي البسملة الحمراء ، والمنطقة المنعكسة ، والتي هي بقية الامايون التي لا تعلق علي المشيمة (الشكل 1).
- تشريح منطقه السرة السرية (الشكل 2 ا).
- باستخدام ملقط تشريح ، عقد جزء من الغشاء امايون الذي يغطي تقاطع المشيمة والحبل السري.
- مع مشرط ، تشريح المنطقة التي تحيط الحبل بينما تمتد لفصلها عن chorion.
- إيداع الانسجه المفصولة في الكاس المسمي مع 100 مل من محلول ملحي.
- تشريح منطقه اميون المشيمة (الشكل 2 ب).
- باستخدام شاش قطني معقم ، قم بازاله الجلطات الدموية من سطح المشيمة التي تغطيها.
- عقد الغشاء علي الحدود بين المشيمة والمنطقة المنعكسة مع تشريح ملقط.
- قطع علي طول محيط المشيمة مع مشرط.
- افصلي المشيمة عن المشيمة ، كوني حريصه علي عدم قطع اي من الاوعيه الدموية.
- وضع الانسجه المفصولة في كاس آخر المسمي مع 300 مل من محلول ملحي.
- افصل بقية الغشاء السلوى الذي لا يعلق علي المشيمة (اي الجزء المنعكس) من المشيميه (الشكل 2 ج).
- جمع المنطقة المنعكسة في كاس آخر المسمي مع 300 mL من محلول ملحي.
ملاحظه: أضافه محلول ملحي باستمرار خلال تشريح لمنع الانسجه من الجفاف.
- جمع المنطقة المنعكسة في كاس آخر المسمي مع 300 mL من محلول ملحي.
4. غسل الاغشيه
ملاحظه: يجب تنفيذ الاجراء داخل مجلس الوزراء البيولوجي تحت ظروف معقمه في درجه حرارة الغرفة.
- تخلص من المحلول الملحي لكل منطقه غشاء بشكل منفصل.
- أضف 100 مل من محلول ملحي طازج إلى منطقه السرة.
- أضف 300 مل من محلول ملحي طازج إلى المناطق المشيمة والمنعكسة علي التوالي.
- يحرك الاغشيه بمساعده تشريح الملقط لأزاله بقايا الدم.
- تجاهل المحلول الملحي.
- كرر غسل والانفعالات علي الأقل 3x حتى الاغشيه هي شفافة.
- وضع وتوسيع الاغشيه علي اللوحة لتنظيف مع الشاش العقيمة جلطات الدم التي لم يتم ازالتها مع يغسل.
ملاحظه: من المهم جدا لأزاله العديد من الكريات الحمراء قدر الإمكان ، ووجودها يؤثر علي وظيفة التريبسين وصلاحيه الثقافات الخلية اللاحقة.
5. الهضم الانزيمي لاغشيه من مناطق مختلفه
ملاحظه: يجب تنفيذ الاجراء داخل مجلس الوزراء البيولوجي في ظل ظروف معقمه.
- قطع المناطق المنعكسة والمشيمة إلى جزئين أو ثلاثه أجزاء.
- لا تقطع المنطقة السرية.
- ضع شظايا كل منطقه في أنابيب الطرد المركزي. أضافه 20 مل من 0.5 ٪ التريبسين/أدتا إلى المناطق المنعكسة والمشيمة و 5 مل من 0.5 ٪ التريبسين/أدتا إلى منطقه السرة ، علي التوالي.
ملاحظه: من المهم قطع المناطق المنعكسة والمشيمة إلى قطع أصغر لأنها تحتاج إلى ان تكون مغمورة تماما في حل التريبسين. - هز أنابيب الطرد المركزي بخفه لمده 30 ثانيه. تجاهل التريبسين.
- أضافه 30 مل من جديد 0.5 ٪ تريبسين/أدتا إلى المناطق المنعكسة والمشيمة و 15 مل من جديد 0.5 ٪ تريبسين/أدتا إلى منطقه السرة ، علي التوالي.
- وضع الأنابيب في المدورة داخل الحاضنة.
- احتضان مع دوران (20 دوره في الدقيقة) لمده 40 دقيقه في 37 درجه مئوية.
ملاحظه: إذا كان المدورة أنبوب غير متوفر ، يهز الأنابيب يدويا كل 10 دقيقه. - نقل الحلول التريبسين/الخلية من كل منطقه إلى أنابيب الطرد المركزي الجديدة.
- أضافه 2x حجم الوسائط HAEC مسبقا في 37 درجه مئوية لكل أنبوب لتنشيط الانزيم.
- تخزين أول الهضم علي الجليد.
- كرر الخطوات 5.6 − 5.8 لفتره هضم ثانيه.
- بالنسبة لكل منطقه ، امسك طرفا واحدا من جزء امايون باستخدام ملقط تشريح ، ومع ضغط زوج آخر علي طول الانسجه لأزاله صفوف من الخلايا الظهاريه التي لم تقشر تماما اثناء فترات الحضانة السابقة.
- جمع الهضم الثاني في مجموعه أخرى من أنابيب الطرد المركزي وإلغاء تنشيط مع 2x حجم وسائل الاعلام haec.
- تخلص من الاغشيه المهضومة في وعاء الخطر البيولوجي.
6-عزل الجماعة الاوروبيه
ملاحظه: يجب تنفيذ الاجراء داخل مجلس الوزراء البيولوجي في ظل ظروف معقمه.
- الطرد المركزي جميع أنابيب في 200 x g لمده 10 دقيقه في 4 ° c.
- تجاهل ماده طافي وأضافه 10 مل من وسائل الاعلام haec مسبقه التسخين (إلى 37 درجه مئوية) لكل أنبوب و ماصه pipet-x بلطف لتصنيف كل بيليه.
- الجمع بين المعلقات الخلوية لهضمين في أنبوب الفردية لكل منطقه الغشاء.
- تصفيه المعلقات الخلوية باستخدام 100 ميكرومتر خليه مصافي لأزاله الحطام مصفوفة خارج الخلية والحصول علي خلايا واحده.
- اعداد ثلاثه قسامات مع 90 μl من التريكان الأزرق في أنبوب الطرد المركزي.
- أضافه 10 μL من كل تعليق الخلية لكل منطقه الغشاء في أنابيب الطرد المركزي ومزيج.
- عد الخلايا مع مقياس اللزوجة تحت مجهر حقل الضوء.
7. ثقافة HAEC
- بذور HAEC من المناطق الثلاث علي حده في كثافة من 3 × 104 خلايا/سم2 مع وسائل الاعلام haec مسبقه التسخين ، تستكمل مع 10 نانوغرام/مل من عامل نمو البشرة البشرية (egf).
- بذور الخلايا في لوحات 100 مم للحفاظ عليها في المختبر أو في 24 لوحات جيدا للتحليل المناعي.
- احتضان الاطباق في 37 درجه مئوية تحت ظروف نورموكسيك (5 ٪ CO2) في حاضنه ترطيب.
- أضافه EGF يوميا وتغيير المتوسطة كل يوم ثالث.
ملاحظه: ستصبح الخلايا متموج بعد 4 − 6 أيام. - استخدام الخلايا لمناعي التقليدية ، تحليل الفرز الخلية ، بالتبريد ، الجيش النيبالي الريبي واستخراج البروتين ، أو لمواصله المرور.
8. مرور HAEC
- أزاله المتوسطة HAEC وغسل 2x مع الحل التلفزيوني/أدتا 0.01 M.
- احتضان مع الحل التلفزيوني/أدتا 0.01 M لمده 15 دقيقه في 37 درجه مئوية.
- أزاله تلفزيوني/أدتا وأضافه 1.5 mL من 0.5 ٪ التريبسين/أدتا.
- احتضان لمده 5 − 8 دقيقه في 37 درجه مئوية.
- Inactivate الانزيم مع اثنين من مجلدات من وسائل الاعلام HAEC.
- جمع الحل المختلط والطرد المركزي لمده 5 دقائق في 200 x g.
- عد الخلايا وتابع مع الممرات التالية أو استخدام الخلايا لمزيد من التحليل.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تم عزل HAEC من كل من المناطق التشريحية الثلاثة من الغشاء السلوى ومثقف بشكل فردي في المختبر. بعد 48 h من الثقافة ، والخلايا مع النمط الظاهري الظهاريه التمسك سطح لوحه ، علي الرغم من ان وسائل الاعلام أيضا تحتوي علي الحطام الخلوي والخلايا العائمة ، والتي أزيلت بمجرد تغيير المتوسطة (الشكل 3).
خلال معالجه الثقافة الاوليه (المرور صفر ، P0) ، يمكن ان تنشا بعض المضاعفات التي يمكن ان تتداخل مع تحليل البيانات التجريبية (الشكل 4): فمن المستحسن لل...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
نفذنا بروتوكولا جديدا لعزل HAEC من الاغشيه الاجله. وهو يختلف عن التقارير السابقة في ان كل غشاء كان ينقسم إلى المناطق التشريحية الثلاث قبل العزلة لتحليل الخلايا من كل واحد.
واحده من الخطوات الأكثر اهميه في البروتوكول هو غسل الغشاء لأزاله جميع جلطات الدم ، لأنها يمكن ان تتداخل مع نشاط التريبسين عند فصل الخلايا الظهاريه. الفشل في تنفيذ هذه الخطوة بشكل صحيح يمكن ان يؤدي إلى الحصول علي الثقافة الاساسيه مع كريات الدم الحمراء المفرطة وعدد قليل من الخلايا الظهاريه ملتصقة. إذا لم يلاحظ اي مرفق في أول 2...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدي المؤلفين ما يفصحون عنه.
شكر وتقدير
وقد دعمت أبحاثنا بمنح من المعهد الوطني لperinatología المكسيكية (21041 و 21081) و CONACYT (A1-S-8450 و 252756). نشكر جيسيكا غونزاليس نوريس وليديا يوريريا باريدس فيفاس علي الدعم الفني.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| <قوية > الكواشف المزروعة < / قوية > | |||
| 2-Mercaptoethanol | Thermo Fisher Scientific / Gibco | 21985023 | 55 ملي مولار |
| مؤتلف بشري خال من EGF | Peprotech | AF-100-15 | |
| مضاد حيوي مضاد للفطريات | الحرارية فيشر Scientific / Gibco | 15240062 | 100X |
| Dulbecco's Modified Eagle Medium | Thermo Fisher Scientific / Gibco | 12430054 | مكمل بارتفاع نسبة الجلوكوز و HEPES |
| EDTA | Thermo Fisher Scientific / Ambion | AM9260G | 0.5 M |
| الخلايا الجذعية الجنينية FBS ، مؤهل | Thermo Fisher Scientific / Gibco | 10439024 | |
| الأحماض الأمينية غير الأساسية | Thermo Fisher Scientific / Gibco | 11140050 | 100X |
| Paraformaldehyde | أي علامة تجارية | ||
| Phosphate-Buffered Saline | Thermo Fisher Scientific / Gibco | 10010023 | 1X |
| محلول ملحي (كلوريد الصوديوم 0.9٪) | أي علامة تجارية | ||
| Sodium Pyruvate | Thermo Fisher Scientific / Gibco | 11360070 | 100 mM |
| Trypsin / EDTA 0.05٪ | Thermo Fisher Scientific / Gibco | 25300054 | |
| المواد التي يمكن التخلص منها < / قوية > | |||
| 100 ومايكرو ؛ مصفاة الخلية | m Corning / Falcon | 352360 | |
| 100 مم طبق ثقافة معالج TC | Corning | 430167 | |
| 24 بئر شفاف TC معالج لوحات الآبار المتعددة | Corning / Costar | 3526 | |
| 6 آبار شفافة TC معالج لوحات الآبار المتعددة | Corning / Costar | 3516 | |
| أنبوب الطرد المركزي المعقم غير الناري | أي علامة تجارية | مع مخروطي أطراف معقمة قاضية | |
| غير حرارية من 1,000 & micro; لتر ، 200 وميكرو ؛ ل و 10 & micro ؛ l. | |||
| شاشات | |||
| ماصات مصلية معقمة من 5 و 10 و 25 مل | أي علامة تجارية | ||
| قفازات جراحية معقمة | أي علامة تجارية | ||
| <قوية>معدات< / قوية> | |||
| السلامة | |||
| الطرد | المركزي | ||
| الماصات | |||
| الدقيقة حشو / | |||
| أكواب معقمة من 500 مل | |||
| تقطيع بلاستيكي معقم | |||
| مشارط معقمة ، مقص ، ملقط ، مشابك | |||
| حاوية معقمة من الفولاذ | |||
| معقمة | |||
| أنبوب دوار | MaCSmix | ||
| <قوي > الأجسام المضادة وأطقم < قوي > | < قوي > معرف الجسم المضاد < / قوي > | ||
| مضاد للكاديرين | BD Biosciences | 610181 | RRID: AB_3975 |
| Anti-KI67 | سانتا كروز | 23900 | RRID: AB_627859) |
| مضاد للنانوج | Peprotech | 500-P236 | RRID: AB_1268274 |
| Anti-OCT4 | Abcam | ab19857 | RRID: AB_44517 |
| Anti-SOX2 | Millipore | AB5603 | RRID: AB_2286686 |
| إشارات الخلايا المضادة ل SSEA-4 | 4755 | RRID: AB_1264259 | |
| إشارات الخلية المضادة ل TRA-1-60 | 4746 | RRID: AB_2119059 | |
| الماعز المضادة للفأر Alexa Fluor 488 | ثيرمو فيشر Scientific | A-11029 | RRID: AB_2534088 |
| الماعز المضاد للأرانب Alexa Fluor 568 | Thermo Fisher Scientific | A-11036 | RRID: AB_10563566 |
| Tunel Assay Kit | Abcam | 66110 |
المراجع
- Shahbazi, M. N., et al. Self-organization of the human embryo in the absence of maternal tissues. Nature Cell Biology. 18 (6), 700-708 (2016).
- Garcia-Lopez, G., et al. Human amniotic epithelium (HAE) as a possible source of stem cells (SC). Gaceta Medica de Mexico. 151 (1), 66-74 (2015).
- Gramignoli, R., Srinivasan, R. C., Kannisto, K., Strom, S. C. Isolation of Human Amnion Epithelial Cells According to Current Good Manufacturing Procedures. Current Protocols in Stem Cell Biology. 37, (2016).
- Murphy, S., et al. Amnion epithelial cell isolation and characterization for clinical use. Current Protocols in Stem Cell Biology. , Chapter 1, Unit 1E 6 (2010).
- Garcia-Castro, I. L., et al. Markers of Pluripotency in Human Amniotic Epithelial Cells and Their Differentiation to Progenitor of Cortical Neurons. PLoS One. 10 (12), 0146082(2015).
- Garcia-Lopez, G., et al. Pluripotency markers in tissue and cultivated cells in vitro of different regions of human amniotic epithelium. Experimental Cell Research. 375 (1), 31-41 (2019).
- Yang, P. J., et al. Biological characterization of human amniotic epithelial cells in a serum-free system and their safety evaluation. Acta Pharmacological Sinica. 39 (8), 1305-1316 (2018).
- Zou, G., et al. MicroRNA32 silences WWP2 expression to maintain the pluripotency of human amniotic epithelial stem cells and beta isletlike cell differentiation. International Journal of Molecular Medicine. 41 (4), 1983-1991 (2018).
- Avila-Gonzalez, D., et al. Capturing the ephemeral human pluripotent state. Developmental Dynamics. 245 (7), 762-773 (2016).
- Niknejad, H., et al. Properties of the amniotic membrane for potential use in tissue engineering. European Cells & Materials. 15, 88-99 (2008).
- Miki, T. Stem cell characteristics and the therapeutic potential of amniotic epithelial cells. American Journal of Reproductive Immunology. 80 (4), 13003(2018).
- Wu, Q., et al. Comparison of the proliferation, migration and angiogenic properties of human amniotic epithelial and mesenchymal stem cells and their effects on endothelial cells. International Journal of Molecular Medicine. 39 (4), 918-926 (2017).
- Hammer, A., et al. Amnion epithelial cells, in contrast to trophoblast cells, express all classical HLA class I molecules together with HLA-G. American Journal of Reproductive Immunology. 37 (2), 161-171 (1997).
- Benirschke, K., et al. Anatomy and Pathology of the Placental Membranes. Pathology of the Human Placenta. , Springer. 268-318 (1995).
- Banerjee, A., et al. Different metabolic activity in placental and reflected regions of the human amniotic membrane. Placenta. 36 (11), 1329-1332 (2015).
- Kim, S. Y., et al. miR-143 regulation of prostaglandin-endoperoxidase synthase 2 in the amnion: implications for human parturition at term. PLoS One. 6 (9), 24131(2011).
- Han, Y. M., et al. Region-specific gene expression profiling: novel evidence for biological heterogeneity of the human amnion. Biology of Reproduction. 79 (5), 954-961 (2008).
- Alcaraz, A., et al. Autocrine TGF-beta induces epithelial to mesenchymal transition in human amniotic epithelial cells. Cell Transplantation. 22 (8), 1351-1367 (2013).
- Canciello, A., et al. Progesterone prevents epithelial-mesenchymal transition of ovine amniotic epithelial cells and enhances their immunomodulatory properties. Scientific Reports. 7 (1), 3761(2017).
- Canciello, A., Greco, L., Russo, V., Barboni, B. Amniotic Epithelial Cell Culture. Methods in Molecular Biology. 1817, 67-78 (2018).
- Singh, A. M., et al. Signaling network crosstalk in human pluripotent cells: a Smad2/3-regulated switch that controls the balance between self-renewal and differentiation. Cell Stem Cell. 10 (3), 312-326 (2012).
- Villa-Diaz, L. G., Kim, J. K., Laperle, A., Palecek, S. P., Krebsbach, P. H. Inhibition of Focal Adhesion Kinase Signaling by Integrin alpha6beta1 Supports Human Pluripotent Stem Cell Self-Renewal. Stem Cells. 34 (7), 1753-1764 (2016).
- Bednar, A. D., Beardall, M. K., Brace, R. A., Cheung, C. Y. Differential expression and regional distribution of aquaporins in amnion of normal and gestational diabetic pregnancies. Physiological Reports. 3 (3), 12320(2015).
- Avila-Gonzalez, D., et al. Human amniotic epithelial cells as feeder layer to derive and maintain human embryonic stem cells from poor-quality embryos. Stem Cell Research. 15 (2), 322-324 (2015).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
