هنا، يتم وصف نموذجين التئام الجروح المورين، واحد يهدف إلى تقييم الاستجابات التئام الجروح الخلوية والسيتوكين والآخر لتحديد معدل إغلاق الجروح. ويمكن استخدام هذه الأساليب مع نماذج الأمراض المعقدة مثل مرض السكري لتحديد آليات جوانب مختلفة من الشفاء الجروح الفقراء.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تقييم التئام الجروح الحادة باستخدام دورسال تحت الجلد بوليفينيل الكحول الإسفنج زرع واستئصال الذيل نماذج الجرح الجلد.
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
التئام الجروح هي عملية معقدة تتطلب التقدم المنظم للالتهاب ، وتشكيل أنسجة التحبيب ، والتليف ، والقرار. نماذج المورين توفر قيمة المكنانية البصيرة في هذه العمليات; ومع ذلك، لا يوجد نموذج واحد يعالج تماما جميع جوانب استجابة التئام الجروح. بدلا من ذلك، فمن المثالي لاستخدام نماذج متعددة لمعالجة الجوانب المختلفة للتئام الجروح. هنا، يتم وصف طريقتين مختلفتين التي تعالج جوانب متنوعة من استجابة التئام الجروح. في النموذج الأول ، يتم زرع الإسفنج الكحولي اتّلادي الفينيل تحت الجلد على طول دورسوم الماوس. بعد استرجاع الإسفنج ، يمكن عزل الخلايا عن طريق التعطيل الميكانيكي ، ويمكن استخراج السوائل عن طريق الطرد المركزي ، مما يسمح بتوصيف مفصل للاستجابات الخلوية والسيتوكين في بيئة الجرح الحاد. ومن القيود المفروضة على هذا النموذج عدم القدرة على تقييم معدل إغلاق الجروح. لهذا, يتم استخدام نموذج الختان الجلد الذيل. في هذا النموذج، يتم استئصال قطعة مستطيلة من جلد الذيل مقاس 10 مم × 3 مم على طول السطح الظهري، بالقرب من قاعدة الذيل. يمكن تصوير هذا النموذج بسهولة لتحليل المخطط لتحديد معدلات الشفاء ويمكن استئصاله للتحليل النسيجي. يمكن استخدام كلتا الطريقتين الموصوفتين في سلالات الفئران المعدلة وراثياً، أو بالتزامن مع نماذج من الظروف المرضية، مثل مرض السكري أو الشيخوخة أو العدوى الثانوية، من أجل توضيح آليات التئام الجروح.
المقدمة
هناك العديد من أنظمة نموذج المورين المتاحة لفحص عمليات التئام الجروح، كل تمتلك مزايا محددة وقيود1،,2. الأساليب التالية تقدم نموذجين للجرح المورين ، كل منهما يتناول جانبًا معينًا من استجابة التئام الجروح ، والتي يمكن استخدامها لتحديد سبب وتأثير الاضطرابات في الاستجابة للإصابة. تحدث عملية التئام الجروح في مراحل متميزة. المرحلة الأولى هي التهابية ، تتميز بالتدفق السريع للصفائح الدموية ، العدلات ، والخلايا الأحادية / الضامة ، وكذلك إنتاج السيتوكينات والكيموكينيات البرولية. بعد حل الالتهاب ، تنتقل البيئة إلى حالة أكثر دقة مع تحريض السيتوكينات الليفية وproangiogenic وعوامل النمو. يتم إيداع أنسجة الحبيبات وتشكيل الأو....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وقد وافقت لجنة الرعاية والاستخدام المؤسسية للرعاية والاستخدام على الحيوانات بجامعة براون على جميع الدراسات الحيوانية الموصوفة هنا، وأجريت وفقا ً لدليل رعاية واستخدام الحيوانات التابع للمعاهد الوطنية للصحة. ملاحظة: في الفيديو، تم حذف الستائر الجراحية لأغراض العرض التوضيحي.
1. زرع تحت الجلد من الإسفنج PVA
- استخدم المقص لقطع صفائح الإسفنج PVA إلى 8 مم × 8 مم × 4 مم. Rehydrate قطع من الإسفنج PVA عن طريق غمرها في 1x PBS العقيمة في كوب.
- الأوتوكلاف الإسفنج في 1x PBS لتعقيم، وتبرد تماما. تخزين الإسفنج الأوتوكلاف في 1x PBS العقيمة في 4 درجة مئوية.
- قبل إجراء عملية زرع جراحية، aliquots العدد اللازم من الإسفنج في طبق الثقا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
استجابة التهابية الجهازية بعد زرع الإسفنج PVA
ولدت جراحة زرع الإسفنج PVA استجابة التهابية الجهازية ، كما يتضح من تحريض IL-6 في البلازما بعد يوم واحد من الإصابة(الشكل 2A). السايتوكينات البرولية الأخرى بما في ذلك TNF-α و IL-1α، فضلا عن مجموعة من chemokines بما في ذلك CCL2 و CXCL1 تم تحريضها بشكل منهجي في الأيام ال7 الأولى بعد PVA زرع الإسفنج، وقد وصفت في مكان آخر26،,30.
عزل الخلاي.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
تصف هذه المقالة نموذجين للجرح المورين قابل للمسار يسمحان بتقييم استجابة التئام الجروح الحادة. تتضمن الطريقة الأولى الزرع الجراحي لإسفنج PVA في الفضاء تحت الجلد الظهري. هذا النهج يوفر ميزة متميزة على نماذج الجروح القائمة على خزعة لدراسة استجابة التئام الجروح الخلوية بسبب العدد الكبير من الخلايا وكمية سوائل الجرح التي تم الحصول عليها من الإسفنج المعزول. من أجل التنفيذ الناجح لهذا الإجراء ، فإن الحفاظ على حقل جراحي معقم عن طريق تنظيف الجلد حول الشق بشكل شامل أمر حتمي ، لأن نقل البكتيريا إلى الجرح سيغير بشكل كبير مسار الشفاء.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
يود المؤلفان أن يشكرا كيفن كارلسون من مرفق قياس وفرز التدفق في جامعة براون للتشاور والمساعدة في تجارب قياس الخلايا المتدفقة. تم إنشاء الصور في الشكل 1B و C مع BioRender. وشكر كايلا لي وغريغوري سيربا على مساعدتهما في التصوير الفوتوغرافي. تم دعم هذا العمل من خلال منح من التالي: وكالة مشاريع البحوث المتقدمة الدفاعية (DARPA) YFAA15 D15AP00100، عميد مجالات جائزة العلوم الجديدة الناشئة (جامعة براون)، المعهد الوطني لرئة القلب والدم (NHLBI) 1R01HL126887-01A1، المعهد الوطني للعلوم البيئية T32-ES7272 (التدريب في علم الأمراض البيئية)، وجائزة بذور البحوث في جامعة براون.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 10x الفوسفات المخزن الملحي | فيشر Scientific | BP3991 | |
| 15 مل أنابيب الطرد المركزي ، أوليمبوس | جينيسي | 28-103 | |
| 1x HBSS (+ الكالسيوم ، + المغنيسيوم ، & ndash ؛ فينول أحمر) | ثيرموفيشر ساینتفيك | 14025076 | |
| 5 مل حقنة | BD | 309646 | |
| مضادة للفأر CD45.2-APC Fire750 | BioLegend | 109852 | Clone 104 |
| مضاد للفأر F4 / 80-eFluor660 | ThermoFisher Scientific | 50-4801-82 | استنساخ BM8 |
| مضاد للفأر Ly6C-FITC | BD Biosciences | 553104 | استنساخ AL-21 |
| مضاد للفأر Ly6G-PerCP-eFluor710 | ThermoFisher Scientific | 46-9668-82 | استنساخ 1A8-Ly6g |
| مضاد للفأر Siglec-F-APC-R700 | BD Biosciences | 565183 | استنساخ E50-2440 |
| أوتوكليب الفولاذ المقاوم للصدأ الجرح كليب | برينتري العلمية | NC9021392 | |
| أوتوكليب مقاطع الجرح المصنوعة من الفولاذ المقاوم للصدأ ، 9 مم | برينتري NC9334081 | ||
| العلميحقيبة خلاط ، 80 مل | 14258201 | علمي فيشر | |
| ، 16 مل ، 17 × 100 | Genesee Scientific | 21-130 | |
| مصل بقري للجنين - صبغة | القياسية ThermoFisher Scientific | 10437028 | |
| eFluor506 | ThermoFisher Scientific | 65-0866-14 | |
| محلول هيبس ، 1M | Genesee Scientific | 25-534 | |
| برنامج ImageJ | NIH | ||
| Penicillin-Streptomycin (5000 U / mL) | ThermoFisher Scientific | 15070-063 | |
| إسفنجة كحول بولي فينيل - حجم مسام كبير | Ivalon / PVA Unlimited | www.sponge-pva.com | |
| محلول بوفيدون اليود ، 10٪ | Fisher Scientific | 3955-16 | |
| فيلم حاجز الرش ، Cavilon | 3M | 3346E | |
| Stomacher 80 Biomaster ، 110V | Seward | 0080/000 / AJ |
المراجع
- Gottrup, F., Agren, M. S., Karlsmark, T. Models for use in wound healing research: a survey focusing on in vitro and in vivo adult soft tissue. Wound Repair and Regeneration: Official Publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 8 (2), 83-96 (2000).
- Elliot, S., Wikramanayake, T.....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
