يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

العزلة والثقافة وتحريض Adipogenic من الخلايا الجذعية المشتقة من الخلايا الدهنية المشتقة من الخلايا الدهنية العصبية من الأنسجة الدهنية

5.7K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/60691

⸱

مارس 2, 2020

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Cardiology, Shanghai Chest Hospital, Shanghai Jiao Tong University, 2Shanghai Institute of Nutrition and Health, Shanghai Institute for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences, 3Shanghai Key Laboratory of Hypertension, Shanghai Institute of Hypertension, Ruijin Hospital Affiliated to Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, 4Department of Cardiology, Shanghai General Hospital, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, 5Department of Cardiology, Shanghai Key Laboratory of Clinical Geriatric Medicine, Huadong Hospital Affiliated to Fudan University

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

نقدم بروتوكولا ً للعزل والثقافة والحث الإديفيوجيني للخلايا الجذعية المشتقة من الخلايا الدهنية المشتقة من الخلايا الدهنية المشتقة من الخلايا الدهنية المحيطية لـ Wnt-1 Cre+/-؛ Rosa26RFP/ + الفئران. يمكن أن تكون NCADSCs مصدرًا يمكن الوصول إليه بسهولة من ADSCs لنمذجة الأديبوجينيسيس أو تكوين الدهون في المختبر.

الملخص

ترتبط الكمية المفرطة من الأنسجة الدهنية المحيطة بالأوعية الدموية (الأنسجة الدهنية المحيطة بالأوعية الدموية، والمعروفة أيضًا باسم PVAT) بارتفاع خطر الإصابة بأمراض القلب والأوعية الدموية. تظهر ADSCs المشتقة من الأنسجة الدهنية المختلفة ميزات متميزة ، ولم يتم توصيف تلك الموجودة في PVAT بشكل جيد. في دراسة حديثة، أبلغنا أن بعض ADSCs في الأنسجة الدهنية القوس المحيطي (PAAT) تنحدر من خلايا القمة العصبية (NCCs)، وهي مجموعة عابرة من الخلايا المهاجرة الناشئة من الخلايا الجذعية.

في هذه الورقة، نصف بروتوكول لعزل البروتين الفلوري الأحمر (RFP) المسمى NCCs من PAAT من Wnt-1 Cre+/-; Rosa26RFP / + الفئران وحفز التمايز adipogenic في المختبر. باختصار ، يتم فصل كسر الأوعية الدموية المترفية (SVF) بشكل أنزيمي عن PAAT ، ويتم عزل RFP+ قمة العصبية المشتقة ADSCs (NCADSCs) عن طريق فرز الخلايا المنشطة الفلورية (FACS). وNCADSCs تفرق إلى كل من الخلايا الشحمية البني والأبيض، يمكن cryopreserved، والاحتفاظ إمكاناتها adipogenic ل ~ 3-5 الممرات. يمكن أن يولد بروتوكولنا ADSCs وفيرة من PVAT لنمذجة الخلايا الدهنية PVAT أو lipogenesis في المختبر. وهكذا، يمكن لهذه NCADSCs توفير نظام قيمة لدراسة مفاتيح الجزيئية المشاركة في التمايز PVAT.

المقدمة

انتشار السمنة في تزايد في جميع أنحاء العالم، مما يزيد من خطر الأمراض المزمنة ذات الصلة، بما في ذلك أمراض القلب والأوعية الدموية ومرض السكري1. PVAT تحيط الأوعية الدموية وهو مصدر رئيسي لعوامل الغدد الصماء والباراكرين المشاركة في وظيفة الأوعية الدموية. تظهر الدراسات السريرية أن نسبة PVAT العالية هي عامل خطر مستقل لأمراض القلب والأوعية الدموية2،3، وتعتمد وظيفتها المرضية على النمط الظاهري للخلايا الجذعية المشتقة من الدهنية المكونة (ADSCs)4.

على الرغم من أن خطوط الخلايا ADSC مثل murine 3T3-L1, 3T3-F442A, وOP9 هي نماذج خلوية مفيدة لدراسة adipogenesis أو lipogenesis5,الآليات التنظيمية لadipogenesis تختلف بين خطوط الخلية والخلايا الأولية. وADSCs في كسر الخلية الوعائية سترومال (SVF) معزولة مباشرة من الأنسجة الدهنية والناجمة عن التفريق في الخلايا الدهنية على الأرجح خلاصة في الجسم الحي adipogenesis وlipogenesis6. ومع ذلك ، فإن هشاشة وطفو هاوية واختلافات في الحجم والأنماط المناعية للأنظمة المحاسبية الدولية للأنظمة تجعل عزلتها المباشرة صعبة. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن أن تؤثر إجراءات العزل المختلفة أيضًا بشكل كبير على النمط الظاهري والقدرة المحتملة الأيديجينية لهذه الخلايا7، مما يؤكد على الحاجة إلى بروتوكول يحافظ على سلامة ADSC.

عادة ما تصنف الأنسجة الدهنية إما الأنسجة الدهنية البيضاء متميزة شكليا ووظيفيا (وات)، أو الأنسجة الدهنية البني (BAT)8، الذي يؤوي ADSCsمتميزة 9. في حين أن ADSCs معزولة عن perigonadal والغناء تحت الجلد WATs وقد تميزت في الدراسات السابقة9،10،11،12، أقل من المعروف فيما يتعلق ADSCs من PVAT التي تتألف أساسا من BAT13.

في دراسة حديثة ، وجدنا أن جزءًا من ADSCs المقيم في الأنسجة الدهنية للقوس المحيطي (PAAT) مشتقة من خلايا القمة العصبية (NCCs) ، وهي مجموعة سكانية عابرة من خلايا السلف المهاجرة التي تنشأ من ectoderm14،15. تم استخدام الفئران المعدلة وراثيا Wnt1-Cre لتتبع تطور الخلايا العصبية كريست16،17. عبرنا Wnt1-Cre+ الفئران مع روزا26RFP / + الفئران لتوليد Wnt-1 كري+/-؛ روزا26RFP / + الفئران، التي يتم تسمية NCCs وذريتها مع البروتين الفلوري الأحمر (RFP) ويتم تعقبها بسهولة في vivo وفي المختبر15. هنا، ونحن نصف طريقة لعزل قمة العصبية المستمدة ADSCs (NC المشتقة ADSCs، أو NCADSCs) من PAAT الماوس وحث NCADSCs للتمييز إلى الخلايا الشحمية البيضاء أو الخلايا الشحمية البني.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

وقد تمت مراجعة البروتوكول الحيوانى والموافقة عليه من قبل لجنة رعاية الحيوانات بجامعة جياو تونغ بشانغهاى .

1. جيل Wnt-1 كري+/-; Rosa26RFP/+ الفئران

  1. عبر Wnt-1 كري+/- الفئران16 مع روزا26RFP/+ الفئران18 لتوليد Wnt-1 كري+/-; Rosa26RFP/ + الفئران. الفئران المنزل تحت دورة 12 ساعة الضوء / الظلام في منشأة خالية من مسببات الأمراض في 25 درجة مئوية والرطوبة 45٪ حتى أنها 4-8 أسابيع من العمر.

2- تشريح البات

ملاحظة: انظر الشكل 1.

  1. تعقيم جميع الأدوات الجراحية (على سبيل المثال، المقص الجراحي، الملقط القياسية، ومقص الجراحة الدقيقة وملقط) عن طريق التعقيم في 121 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
  2. إعداد وسط الهضم (ارتفاع الجلوكوز دولبيكو تعديل النسر المتوسط [HDMEM] التي تحتوي على 2 ملغ / مل الكولاجين من النوع الأول). إعداد الوسط الثقافة (HDMEM تحتوي على 10٪ مصل الأبقار الجنين [FBS] و 1٪ v/v البنسلين-ستريبتومسين [PS]). قم بتعقيم باستخدام فلتر حقنة 0.22 ميكرومتر قبل الاستخدام.
  3. قم بتعقيم كواشف زراعة الخلايا باستخدام الأشعة فوق البنفسجية أو الإيثانول أو الترشيح أو البخار، حسب الاقتضاء.
  4. إعداد طبق بيتري مع الحل المالحة متوازنة هانكس (HBSS) وأنبوب مخروطي 15 مل مع 10 مل من HBSS تستكمل مع 1٪ v / v من محلول PS. أبقي كلاهما على الجليد.
  5. تهوّن الفئران15 بالإيزوغلوران والتضحية بخلع عنق الرحم. تزج الهيئات في كوب مليئة 75٪ الكحول (200 مل) لمدة 5 دقيقة لتعقيم سطح الجلد.
  6. قص وفصل الجلد على البطن وقطع على طول خط الوسط البطني من الحوض إلى الرقبة. فتح البطن وتحريك الكبد لفضح الحجاب الحاجز19.
  7. قطع الحجاب الحاجز والأضلاع على جانبي خط الوسط وفضح القلب والرئتين عن طريق تقشير الأضلاع مرة أخرى.
  8. إزالة الرئة والغدة الصعترية واستخراج PAAT جنبا إلى جنب مع الأورطان والقلب.
  9. قطع الأبهر في الجذر الأبهر لإزالة القلب. جعل قطع بين القوس الأبهر والشريان الأورطي تنازلي وفصل بعناية الأنسجة الدهنية المحيطة بكل من الهياكل والشرايين السباتي اليسرى واليمنى الشائعة من جدار الصدر الخلفي. نقل الأنسجة إلى العازلة HBSS الجليد الباردة في طبق بيتري.
  10. باستخدام ملقط معقمة, إزالة أكبر قدر من الأوعية الدموية (على سبيل المثال, الشريان الأورطي, الشرايين السباتية المشتركة, وغيرها من الأوعية الدموية الصغيرة) واللفافة قدر الإمكان, ونقل الأنسجة الدهنية في أنابيب Eppendorf 2 مل تحتوي على 0.5 مل الجليد الباردة HBSS العازلة على الجليد.

3. عزل SVF

جمع PAAT من 5-6 الفئران في واحد 2 مل أنبوب الطرد المركزي الدقيقة التي تحتوي على 1 مل أعدت حديثا الهضم المتوسطة والمفروم الأنسجة باستخدام مقص الجراحية في أنبوب Eppendorf في درجة حرارة الغرفة (RT).

  1. نقل المزيج إلى 50 مل أنابيب تحتوي على 9 مل من وسط الهضم. تجانس الأنسجة عن طريق الأنابيب صعودا وهبوطا مع 1 مل ماصة 10x.
  2. احتضان الأنابيب عند درجة حرارة 37 درجة مئوية مع اهتزاز مستمر عند 100 دورة في الدقيقة لمدة 30-45 دقيقة والتحقق من كل 5-10 دقيقة لمنع الإفراط في الهضم. وهذا أمر بالغ الأهمية لتحسين قدرة الخلية على البقاء والعائد.
    ملاحظة: سيؤدي هضم الأنسجة الجيدة إلى نسيج متجانس وأصفر فاتح للالدهنية يكون مرئيًا للعين المجردة على الدوران بلطف في الأنبوب.
  3. وقف الهضم عن طريق إضافة 5 مل من HDMEM تحتوي على 10٪ FBS و 1٪ v / v PS في RT وتخلط جيدا عن طريق الأنابيب.
  4. الطرد المركزي تعليق الخلية في 500 × ز لمدة 5 دقيقة في RT. وسوف تكون مرئية SVF كما بيليه البني. يستنشق بعناية الخلايا الشحمية العائمة وdecant supernatant المتبقية دون إزعاج SVF. حل بيليه SVF في 10 مل من الثقافة المتوسطة والتصفية من خلال مصفاة خلية 70 ميكرون.
  5. الطرد المركزي تعليق الخلية في 500 × ز لمدة 5 دقيقة، وإزالة supernatant، وبلطف إعادة تعليق بيليه في 5 مل من العازلة الكريات الحمراء في أنبوب مخروطي 15 مل لمدة 10 دقيقة في RT.
  6. وقف رد الفعل عن طريق إضافة 10 مل من 1x PBS التي تحتوي على 1٪ FBS. الطرد المركزي تعليق الخلية في 500 × ز لمدة 5 دقيقة في 4 درجة مئوية، وإزالة supernatant، وإعادة تعليق بيليه في 10 مل من 1x PBS التي تحتوي على FBS 1٪.
  7. الطرد المركزي الخلايا مرة أخرى في 500 × ز لمدة 5 دقيقة في 4 درجة مئوية. إزالة supernatant وإعادة تعليق بيليه في 5 مل من وسط الثقافة في أنبوب مخروطي 15 مل في 4 درجة مئوية.
  8. بعد الجولة النهائية من الطرد المركزي (500 × ز لمدة 5 دقيقة عند 4 درجة مئوية) ، أعد تعليق الخلايا الحبيبات في 5 مل من العازلة FACS (PBS التي تحتوي على 10٪ FBS ، 100 وحدة / مل الحمض النووي الأول ، و 1 ٪ v / v PS) على الجليد ، وعد الخلايا مع مقياس الهيموسيتومتر.

4 - عزل اللجنة الوطنية لمكافحة اللاجئين من قبل القوات المسلحة الكونغولية

  1. قم بإعداد أداة فرز الخلايا وتحسينها باتباع دليل التعليمات. حدد فوهة 100 ميكرومتر، وتعقيم أنابيب جمع، وتثبيت جهاز جمع المطلوبة، وإعداد تيارات الجانب20.
  2. يوصى بليزر أصفر/أخضر 561 نانومتر وفلتر بصري 579/16 لفرز RFP+ الخلايا. تنفيذ التعويض باستخدام عنصر التحكم السلبي وعناصر التحكم الإيجابية الملطخة واحدة. انظر الشكل 2A لنظام الجاتينغ.
  3. تصفية الخلايا من خلال مصفاة 40 ميكرومتر، والطرد المركزي في 500 × ز لمدة 5 دقيقة، وإعادة تعليق الخلايا في 2 مل من المخزن المؤقت FACS بكثافة 0.5-1 × 107/mL. نقل الخلايا إلى المسمى بوضوح 5 مل أنابيب البوليسترين القاع الجولة، وتحميل في الفرز.
  4. تشغيل أنبوب عينة تجريبية في 4 درجة مئوية، بدوره على لوحات انحراف، وفرز هافيل 15 مل أنبوب مخروطي المغلفة مع RPMI تحتوي على FBS 1٪ و 1٪ v/ v PS.
    ملاحظة: حماية العينات من الضوء القوي لتقليل إخماد RFP.

5- ثقافة NCADSCs

  1. لوحة الخلايا فرزها بكثافة 5000 خلية / سم2 في لوحة ثقافة بئر 12 في وسط الثقافة الكاملة واحتضان في 37 درجة مئوية في جو رطب مع 5٪ CO2 لمدة 20-24 ساعة.
  2. إزالة الوسط الثقافة، وغسل الخلايا مع PREWARMED (37 درجة مئوية) PBS لإزالة حطام الخلية وإضافة وسيطة ثقافة جديدة.
  3. مرة واحدة في الخلايا هي 80-90٪ confluent، هضم أحادية باستخدام حل 0.25٪ التربسين EDTA في 37 درجة مئوية في حاضنة لمدة 3-5 دقيقة، وتحييد مع 2 مل من وسط الثقافة.
  4. الطرد المركزي الخلايا التي تم حصادها لمدة 15 دقيقة في 250 × ز في RT، وإزالة supernatant، وإعادة تعليق الخلايا في 1 مل من وسط الثقافة. عد الخلايا مع مقياس الهيموكيتوم.
  5. البذور الخلايا في 12 لوحة ثقافة بئر بكثافة 5000 خلية / سم2.
  6. إعادة تعليق الخلايا المتبقية في الوسط الثقافة التي تحتوي على 10٪ DMSO، وتجميد، وتخزينها في النيتروجين السائل.

6- تحريض Adipogenic من NCADSCs

  1. حث التمايز المُخَّل للNCADSCs عند 80-90% من الالتقاء والظروف الثقافية القياسية21.
  2. لتحريض adipogenic البني, أول علاج الخلايا المستزرعة مع البني adipogenic التعريفي المتوسطة (HDMEM, 10% FBS, 1% v/v PS, 0.5 mM/L IBMX, 0.1μM/L dexamethasone, 1 μM/L rosiglitazone, 10 nmol/L triiodothyronine, و 1 ميكروغرام/مل الأنسولين) لمدة 2 أيام. غسل الخلايا مع PBS 2x واستبدالها متوسطة جديدة (HDMEM, 10% FBS, 1% v/v PS, 1 μM/L rosiglitazone, 10 nmol/L triiodothyronine, و 1 ميكروغرام/مل الأنسولين). تغيير هذا المتوسط كل يومين لما مجموعه 3-5x.
  3. لتحريض الأdipogenic الأبيض، أولا علاج الخلايا مع متوسط التعريفي adipogenic الأبيض (HDMEM، 10٪ FBS، 1٪ v/v PS، 0.5 mM/L IBMX، 0.1 μM/L ديكساميثازون، و 1 ميكروغرام/مل الأنسولين) لمدة يومين. غسل الخلايا مع PBS 2x واستبدالها متوسطة جديدة (HDMEM، 10٪ FBS، 1٪ v/v PS، و 1 ميكروغرام / مل الأنسولين). تغيير هذا المتوسط كل 2 أيام لما مجموعه 3-5x.
  4. تحليل الخلايا الأيبوجينية حسب الاقتضاء.
    ملاحظة: كن لطيفًا عند غسل الخلايا باستخدام برنامج تلفزيوني. يمكن أن تغسل الخلايا الشحمية المتمايزة بسهولة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

باستخدام البروتوكول المذكور أعلاه، حصلنا على ~ 0.5-1.0 × 106 ADSCs من 5-6 Wnt-1 Cre+/-; روزا26RFP/+ الفئران (48 أسابيع من العمر، ذكر اولا او أنثى).

يتم تقديم مخطط تدفق مجموعة PAAT من الفئران في الشكل 1. كان مورفولوجيا NCADSCs مشابهة لـ ADSC من الأنسجة الدهنية للفئران الأخرى. وصلت NCADSCs المثقف 80-90٪ التقاء بعد 7-8 أيام من الثقافة، وكان NCADSCs مورفولوجيا الليفية الموسعة مثل(الشكل 2B، C

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

في هذه الدراسة، نقدم طريقة موثوقة لعزل، والثقافة، والحث adipogenic من NCADSCs المستخرجة من PVAT من Wnt-1 كري+/-؛ روزا26RFP / + الفئران المعدلة وراثيا مصممة لإنتاج RFP+ ADSCs. تظهر التقارير السابقة أنه لا يوجد فرق كبير في التعبير عن الخلايا الجذعية المتوسطة المتعددة القدرات العامة (MSCs) في NCADSCs وغير NCADSCs22، وأن NCADSCs لديها إمكانات قوية للتمييز في الخلايا الشحمية في المختبر15،22،

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.

شكر وتقدير

قدم البرنامج الوطني للبحث والتطوير الرئيسي في الصين (2018YFC1312504)، والمؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (81970378، 81670360، 81870293)، ولجنة العلوم والتكنولوجيا في بلدية شنغهاي (17411971000، 17140902402) الأموال اللازمة لهذه الدراسة .

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
4٪ PFABBI علوم الحياةE672002-0500الكثير #: EC11FA0001
AgaroseABCONE (الصين)A479021٪ تركيز العمل
Anti-cebp/&alpha ؛أA09041: 1000
مكافحة الفأر IgG ، CST7076: 5000 مرتبط
المضاد للبيريلبAbcamAB616821 & mu ؛ جم / مل تركيز العمل ؛ الكثير #: GR66486-54
Anti-PPARyسانتا كروزSC-72730.2 & جم / مل تركيز العمل
مكافحة الأرانب IgG ،CST7074: 5000 مرتبط
مضاد بيتا ، توبولينCST21461: 1000 تركيز العمل
BSAVWR علوم الحياة0332-100G50 مجم / مل تركيز العمل ؛ الكثير #: 0536C008
كولاجيناز ، النوع الأولجيبكو17018029
ديكساميثازونسيجما ألدريتشD49020.1 & مايكرو; M تركيز العمل
تحلل كريات الدم الحمراء عازلةInvitrogen00-4333
FBSCorningR35-076-CV50 مجم / مل تركيز العمل. الكثير #: R2040212FBS
HBSSGibco14025092
HDMEMGelifesciencesSH30243.01الكثير #: AD20813268
IBMXSigma-AldrichI70180.5 mM العمل تركيز
الأنسولينسيجما ألدريتشI35361 & مو ؛ جم / مل تركيز العمل
ملقط الجراحة المجهريةسوتشو مينغرين المعدات الطبية المحدودة (الصين)MR-F201A-1
مقص الجراحة المجهريةسوتشو مينغرين المعدات الطبية المحدودة (الصين)MR-H121A
النفط الأحمر O الحلسيجما ألدريتشO15160.3 ٪ تركيز العمل
PBS (محلول ملحي مخزن الفوسفات)ABCONE (الصين)P41970
Penicillin-StreptomycinGibco15140122
PrimeScript RT Recode Recode KitTAKARARR047ALot #: AK4802
RNeasy kitTAKARA9767Lot #: AHF1991D
Rosa26RFP /+< / sup> الفئرانJAXNo.007909C57BL / 6 backgroud ؛ ذكر وإناث
RosiglitazoneSigma-AldrichR24081 & مو M تركيز العمل
الملقط القياسيسوتشو Mingren المعدات الطبية المحدودة (الصين)MR-F424
مقص جراحيسوتشو مينغرين المعدات الطبية المحدودة (الصين)MR-S231
SYBR بريمكس Ex TaqTAKARARR420Aالكثير #: AK9003
ثلاثي يودوثيرونينسيجما ألدريتشT287710 نانومتر تركيز العمل
Wnt1-Cre+; PPAR & gamma; flox / flox< / sup> الفئرانJAXNo.009107C57BL / 6 backgroud ؛ ذكر وإناث
تركيز العمل 1 ب HRP تركيز العمل 1ب HRP تركيز العمل

المراجع

  1. Afshin, A., et al. Health Effects of Overweight and Obesity in 195 Countries over 25 Years. New England Journal of Medicine. 377 (1), 13-27 (2017).
  2. Brown, N. K., et al. Perivascular adipose tissue in vascular function and disease: a review of current research and animal models. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 34 (8), 1621-1630 (2014).
  3. Britton, K. A., et al. Prevalence, distribution, and risk factor correlates of high thoracic periaortic fat in the Framingham Heart Study. Journal of the American Heart Association. 1 (6), 004200(2012).
  4. Police, S. B., Thatcher, S. E., Charnigo, R., Daugherty, A., Cassis, L. A. Obesity promotes inflammation in periaortic adipose tissue and angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysm formation. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 29 (10), 1458-1464 (2009).
  5. Farmer, S. R. Transcriptional control of adipocyte formation. Cell Metabolism. 4 (4), 263-273 (2006).
  6. Aune, U. L., Ruiz, L., Kajimura, S. Isolation and differentiation of stromal vascular cells to beige/brite cells. Journal of Visualized Experiments. (73), e50191(2013).
  7. Ruan, H., Zarnowski, M. J., Cushman, S. W., Lodish, H. F. Standard isolation of primary adipose cells from mouse epididymal fat pads induces inflammatory mediators and down-regulates adipocyte genes. Journal of Biological Chemistry. 278 (48), 47585-47593 (2003).
  8. Cinti, S. Between brown and white: novel aspects of adipocyte differentiation. Annals of Medicine. 43 (2), 104-115 (2011).
  9. Van Harmelen, V., Rohrig, K., Hauner, H. Comparison of proliferation and differentiation capacity of human adipocyte precursor cells from the omental and subcutaneous adipose tissue depot of obese subjects. Metabolism. 53 (5), 632-637 (2004).
  10. Rodeheffer, M. S., Birsoy, K., Friedman, J. M. Identification of white adipocyte progenitor cells in vivo. Cell. 135 (2), 240-249 (2008).
  11. Church, C. D., Berry, R., Rodeheffer, M. S. Isolation and study of adipocyte precursors. Methods in Enzymology. 537, 31-46 (2014).
  12. Chen, Y., et al. Isolation and Differentiation of Adipose-Derived Stem Cells from Porcine Subcutaneous Adipose Tissues. Journal of Visualized Experiments. (109), e53886(2016).
  13. Ye, M., et al. Developmental and functional characteristics of the thoracic aorta perivascular adipocyte. Cellular and Molecular Life Sciences. 76 (4), 777-789 (2019).
  14. Medeiros, D. M. The evolution of the neural crest: new perspectives from lamprey and invertebrate neural crest-like cells. Wiley Interdisciplinary Reviews. Developmental Biology. 2 (1), 1-15 (2013).
  15. Fu, M., et al. Neural Crest Cells Differentiate Into Brown Adipocytes and Contribute to Periaortic Arch Adipose Tissue Formation. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. , (2019).
  16. Danielian, P. S., Muccino, D., Rowitch, D. H., Michael, S. K., McMahon, A. P. Modification of gene activity in mouse embryos in utero by a tamoxifen-inducible form of Cre recombinase. Current Biology. 8 (24), 1323-1326 (1998).
  17. Tamura, Y., et al. Neural crest-derived stem cells migrate and differentiate into cardiomyocytes after myocardial infarction. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 31 (3), 582-589 (2011).
  18. Madisen, L., et al. A robust and high-throughput Cre reporting and characterization system for the whole mouse brain. Nature Neuroscience. 13 (1), 133-140 (2010).
  19. Tan, P., Pepin, É, Lavoie, J. L. Mouse Adipose Tissue Collection and Processing for RNA Analysis. Journal of Visualized Experiments. (131), e57026(2018).
  20. Basu, S., Campbell, H. M., Dittel, B. N., Ray, A. Purification of specific cell population by fluorescence activated cell sorting (FACS). Journal of Visualized Experiments. (41), e1546(2010).
  21. Gupta, R. K., et al. Zfp423 expression identifies committed preadipocytes and localizes to adipose endothelial and perivascular cells. Cell Metabolism. 15 (2), 230-239 (2012).
  22. Sowa, Y., et al. Adipose stromal cells contain phenotypically distinct adipogenic progenitors derived from neural crest. PLoS One. 8 (12), 84206(2013).
  23. Billo, N., et al. The generation of adipocytes by the neural crest. Development. 134 (12), 2283-2292 (2007).
  24. Thelen, K., Ayala-Lopez, N., Watts, S. W., Contreras, G. A. Expansion and Adipogenesis Induction of Adipocyte Progenitors from Perivascular Adipose Tissue Isolated by Magnetic Activated Cell Sorting. Journal of Visualized Experiments. (124), e55818(2017).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

الخلايا الجذعية المشتقة من الأنسجة الدهنية في العرف العصبيعزل الأنسجة الدهنية حول الأبهرالجزء الوعائي السدويفرز الخلايا المنشط بالفلورةالتمايز الشحميتحفيز الخلايا الدهنية البنيةتحفيز الخلايا الدهنية البيضاءالوسم بالبروتين الفلوريبروتوكول زراعة الخلاياتخزين الحفظ بالتجميد
العزلة والثقافة وتحريض Adipogenic من الخلايا الجذعية المشتقة من الخلايا الدهنية المشتقة من الخلايا الدهنية العصبية من الأنسجة الدهنية
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.