مقالة منهجية

استئصال المعدة في الفئران باستخدام مقاطع جراحية

DOI:

10.3791/60719

⸱

نوفمبر 14, 2020

 ,  ,  ,  , 
1Cardiovascular Division, Internal Medicine Department, Min-Sheng General Hospital, 2Department of Nutrition and Health Sciences, School of Healthcare Management, Kai-Nan University, 3Institute of Clinical Medicine, National Yang-Ming University, 4Food Science and Biotechnology, College of Biotechnology and Bioresources, University of Da-Yeh, 5Department of Surgery, Min-Sheng General Hospital, 6Department of Critical Care Medicine, Taipei Veterans General Hospital, 7Division of Cardiology, Department of Internal Medicine, Taipei Veterans General Hospital, 8Division of Cardiology, Heart Center, Cheng-Hsin General Hospital, 9Taipei Medical University

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويتزايد انتشار مرض السكري والسمنة باستمرار في جميع أنحاء العالم. وينبغي مواصلة دراسة الآليات بين مرض السكري والسمنة وما يرتبط بها من وفيات والأمراض المشتركة. هنا، نقدم بروتوكولاً لاستئصال المعدة كم (SG) في الحيوانات كنموذج قبل الظهر غير معقدة من جراحة البدانة.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يتزايد باستمرار عدد الأشخاص الذين يعانون من زيادة الوزن والسمنة في كل من السكان البالغين والمراهقين. وهذا يتزامن مع زيادة ظاهرة عالمية من مرض السكري من النوع 2 (T2D) وغيرها من المشاكل الأيضية. جراحة السمنة، مثل SG، هي حاليا واحدة من العلاج الأكثر فعالية والأكثر استخداما على المدى الطويل للسمنة و T2D، ولكن لم يتم استكشاف العلاقة بينهما تماما حتى الآن. يمكن التحقيق في الآليات التي تستند إليها النتائج التي شوهدت بعد جراحة السمنة في البشر استنادًا إلى دراسات حيوانية قبل الكلينيكية. وSG يقلل من وزن الجسم, مستويات الجلوكوز والعديد من المعلمات الأيضية, وسهلة لأداء مع انخفاض حدوث مضاعفات. الهدف من هذا العمل هو توفير طريقة بسيطة ونموذج preclinical غير معقدة من جراحة البدانة في الحيوانات للباحثين.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد زاد انتشار السمنة ثلاث مرات تقريبا في جميع أنحاء العالم منذ عام 1975. في عام 2016، كان أكثر من 1.9 مليار شخص بالغ أكبر من 18 عامًا يعانون من زيادة الوزن وأكثر من 650 مليون شخص بالغ يعانون من السمنة المفرطة. كما تضاعف انتشار T2D بين السكان البالغين من 4.7٪ إلى 8.5٪ مع ارتفاع العدد من 108 مليون إلى 422 مليون بالغ بين عامي 1980 و 2014 على مستوى العالم1. معظم جراحات البدانة تؤدي إلى فقدان الوزن بشكل كبير، وانخفاض في الدهون في الجسم، وتحسين في تحمل الجلوكوز، ومقاومة الأنسولين والسيطرة على مرض السكري2. بالإضافة إلى فقدان الوزن ومغفرة T2D، جراحة البدانة تنتج المزيد من المزايا الصحية الإضافية مثل التحكم في ارتفاع ضغط الدم وانخفاض معدل الإصابة بأنواع معينة من السمنة المرتبطة تطور السرطان والتقدم3. جراحة البدانة أيضا يحفز دائم كاملة, مغفرة جزئية من T2D, ويقلل من خطر الإصابة بأمراض القلب التاجية لمدة عشر سنوات الرئيسية (CHD) ودرجة معينة من خطر الدماغ. ومع ذلك، فإن الآليات الأساسية ليست مفهومة تماما4.

هناك العديد من الإجراءات لجراحة البدانة /الأيضية. كلا جراحات المجازة التقييدية والأمعاءية توفر تأثيرات إيجابية على عملية التمثيل الغذائي5. من النماذج الجراحية لعلاج البدانة، SG وتعديلها Roux-en-Y المجازة المعدة لديها أعلى نجاحا وانخفاض معدلات الوفيات وإظهار موثوق بها نماذج جراحة المجازة المعدية المعوية التقييدية في الفئران6. على الرغم من أن جراحة المجازة المعدية المعوية توفر المزيد من فقدان الوزن وتحسن كبير في تحمل الجلوكوز وsatosis الكبد من الإجراء التقييدي على المدى الطويل، وSG لا تزال تنتج سيطرة جيدة على وزن الجسم ومستويات الجلوكوز وسهلة الأداء مع انخفاض حدوث المضاعفات6. زادت نسبة SG من 30٪ إلى 54٪ وانخفضت جراحة Roux-en-Y من 52٪ إلى 32٪ من 2008 إلى 20147. حاليا, SG بالمنظار هو الإجراء الأكثر شيوعا لعلاج البدانة على المستوى الوطني داخل المراكز الأكاديمية في الولايات المتحدة8. على الرغم من أن هناك العديد من التقارير المنشورة بشأن العمليات الفسيولوجية بين جراحة السمنة والسكري والسمنة ، ونحن بحاجة إلى المزيد من التجارب الحيوانية لمزيد من استكشاف آليات غير معروفة.

يهدف هذا البروتوكول إلى إنتاج طريقة حيوانية للتحقيق في الآليات التي تقوم عليها النتائج التي شوهدت بعد جراحة السمنة في البشر. قد توفر الدراسة الحالية الترجمية رؤى حول آلية علاج السمنة و T2D من SG.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد وافقت على جميع الإجراءات المتعلقة باستخدام الحيوانات من قبل اللجنة الوطنية لرعاية الحيوانات واستخدامها في جامعة يانغ مينغ، وامتثلت "دليل رعاية الحيوانات المختبرية واستخدامها". الطبعةالثامنة، 2011". تم إجراء إجراء التخدير وفقًا للمبدأ التوجيهي للتحكم في الألم والتخدير والرعاية قبل الجراحة وما بعد الجراحة للحيوانات التجريبية من جامعة يانغ مينغ الوطنية ، ICAUC-016 ، 2015 ، طبعة1 st.

1. إعداد الحيوان

  1. الحصول على 20 8 أسابيع من نوع البرية C57BL/6 الفئران الذكور من المركز الوطني للحيوانات المختبر (NLAC) التي تزن حوالي 16-18 غراما. تعيين هذه الفئران عشوائيا في SG أو مجموعة عملية صورية مع 10 الفئران لكل من.
  2. بدء تشغيل الفئران على تشاو أو نظام غذائي عالي الدهون (انظر ملف تكميلية)قبل جراحات البدانة أو صور9. تنتج السمنة الناجمة عن النظام الغذائي مع ما لا يقل عن 2 أسابيع قبل الجراحة من HFD.
  3. منزل الفئران في جامعة يانغ مينغ الوطنية مختبر مركز الحيوان تحت دورة خفيفة داكنة من 12:12 مع ضوء بداية في 07:00 A.M والسماح للتغذية مجانا لطعام القوارض القياسية والماء.
  4. تقييد جميع الحيوانات من الطعام ولكن السماح بالوصول إلى المياه مجانا في الليلة التي تسبق الجراحة.

2- الإعداد العام قبل العملية الجراحية

  1. سرع الفئران لمدة 6 ساعات على الأقل قبل الجراحة. حث التخدير في غرفة التعريفي مع 5٪ isoflurane والأكسجين (سواء 3-4 لتر / دقيقة).
    1. تحقق من عمق التخدير التأكد من أن التحفيز قرصة (حادة منحني مسنن مسنن على نحو سلس الملهاد الصغرى) من مخلب الخلفي، forepaw، والأذن لا تثير أي رد فعل المحرك. إعطاء المضادات الحيوية (25 ملغم / كغ سيفازولين) عن طريق الحقن تحت الجلد قبل العملية.
  2. تعيين منطقة عمل معينة للعمليات الجراحية. تنظيف منطقة جراحية ورش الطاولة الجراحية مع 75٪ حل الكحول قبل العملية.
  3. ضع الفأر في مخروط الأنف وحافظ على التخدير مع 2٪ من الـisoflurane (2 لتر/دقيقة) والأكسجين (4 لتر/دقيقة).
  4. بالنسبة لاستئصال المعدة والزُم، وبعد التأكد من العمق المناسب للتخدير عن طريق تحفيز أخمض البيب، قم بتطبيق جل العين Carbomer بنسبة 0.2% على عين الماوس لمنع جفاف العين.
  5. استخدم شفرة حلاقة كهربائية لحلاقة الشعر من البطن إلى القص. إزالة وتنظيف الشعر المتبقي مع كريم إزالة الشعر. وضع وإصلاح الماوس على طاولة الجراحية في وضعية supine.
  6. تطهير جدار البطن من الماوس مع حلول بودينيوني اليود بالتناوب مع الكحول 75٪ ل3 تطبيقات.

3. الأكمام استئصال المعدة والإجراءات صور

  1. متوسط البطن
    1. استخدم مقصًا صغيرًا لإجراء شق خط وسط بطول 1-1.5 سم في الجزء العلوي من البطن.
  2. اتّظّر المعدة والأمعاء
    1. تنفيذ الإجراء SG بمساعدة مجهر مكبر تشريح أو المكبر حسب الضرورة لمنع النزيف لا يمكن التنبؤ بها وصدمة نقص الدم.
    2. استخدام اثنين من منحنية على نحو سلس مسننة صغيرة ملقط لنقل بلطف المعدة واستكمال خارجي.
    3. تقسيم بعناية الرباط المعدي المعوي يربط المعدة اليسرى إلى الطحال باستخدام مسبار القطن يميل والكهرباء حسب الحاجة، وبالتالي تشريح صندوق المعدة من الطحال المحيطة والأعضاء الداخلية الأخرى.

4. المعدة العزل ومقطع

ملاحظة: تم تنفيذ SG ماوس باستخدام تقنية تطبيق مقطع جديد كما تم نشرها سابقا10.

  1. تمتد على القاع والبواد من المعدة بلطف و لاحق مع ملقط، وتحديد خط الوسط (الشكل 1 والشكل 2)، وتطبيق مقاطع جراحية بعناية إلى نصف الجانب الأوسط من منتصف خط المعدة من تقاطع المعدة والمريء أدنى والقطب السفلي متفوقة. المشبك واستبعاد حوالي 75-80٪ من المعدة، وبالتالي خلق الأكمام الجانبي بأكملها من المعدة (الشكل 1 والشكل 2).
  2. نقل الأمعاء إلى الجلد العاري على الجانب وتغطية ذلك مع الشاش الرطب الحار المالحة وأداء الترطيب داخل الصفاق حسب الحاجة لمنع الجفاف وانخفاض حرارة الجسم.
  3. قم بإعادة استئصال المعدة الجانبي، وإزالة الأكمام المستبعدة من المعدة مع microscisors ثم تعقيم حافة قطع من المعدة مع محلول بوديوني اليود.
  4. Oversew خط مقطع مع خياطة أحادية 5-0 غير قابل للتسرب لضمان عدم وجود تسرب. عقدة نهايات خياطة ومرساة إلى لقطات على أي من الطرفين.
  5. إعادة المعدة والأمعاء إلى الوضع المناسب في تجويف البطن وإغلاق البطن مع تشغيل 5-0 أحادية غير مُسَبَنّة ومستمرة وخياطة متقطعة إلى اللفافة وجدار البطن.
  6. إدارة المسكنات مع كيتوبروفين (2-5 ملغ / كغ) والمضادات الحيوية مع سيفازولين (25 ملغ / كجم) intraperitoneally بعد العملية برمتها.

5. إجراء صوري من SG

  1. إجراء إجراء مماثل كما هو موضح سابقا مع استئصال البطن خط الوسط، و الخارجية الأمعاء والمعدة باستخدام 37 °C الرطب تغطية الشاش الملحية الدافئة لمدة 5 دقائق.
  2. إعادة المعدة والأمعاء إلى المواقع المناسبة لهذه الأعضاء الداخلية.
  3. إغلاق جدار البطن بعناية كما هو موضح سابقا مع 2 طبقات من الإغلاق المستمر وغير مستمر للفافية والجلد باستخدام خياطة أحادية بطيئة أو غير قابلة للامتصاص. إدارة المسكنات مع كيتوبروفين (2-5 ملغ / كغ) والمضادات الحيوية مع سيفازولين (25 ملغ / كجم) intraperitoneally بعد العملية برمتها.

6- الرعاية العامة بعد الجراحة

  1. وقف ايزوفلوران والاستمرار في تدفق الهواء غرفة من 3-5 لتر / دقيقة حتى الماوس مستيقظا تماما.
  2. استمر في مشاهدة الماوس بينما يستعيد القدرة على الحركة ويبدأ في التجول في القفص.
  3. ضع الفأرة في حاضنة مستقلة 30 درجة مئوية لمدة 5 أيام. تأكد من وجود ماوس واحد فقط في القفص لمنع الفئران من إصابة بعضهم البعض.
  4. عودة حرية الوصول إلى الغذاء الغذائي هلام (النظام الغذائي هلام عالية الدهون: 10٪ شحم الخنزير، 10٪ السكر السائل، 57٪ ماء) لمدة 3 أيام بعد الجراحة وإعادة إدخال النظام الغذائي السابق المعين 3 أيام بعد الجراحة.
  5. حقن الكيتوبروفين تحت الجلد أو داخل الصفاق (2-5 ملغم/كغ)، وسيفازولين (25 ملغم/كغ) لمدة يوم واحد بعد العملية.
  6. تقييم وزن جسم الماوس أسبوعيا خلال فترة الدراسة بأكملها. توفير الكيتوبروفين (2-5 ملغ/كغ) عن طريق الحقن داخل الصفاق للسيطرة على الألم مرة واحدة يومياً حسب الحاجة إذا كان الحيوان في محنة بعد العملية.
    ملاحظة: هنا، كان معدل البقاء على قيد الحياة من SG 90٪ بعد فترة التعلم.

7. تقييم المعلمة الأيضية

  1. الفئران سريع لمدة 6 ساعة، وأخذ عينات الدم الأساسية (0 دقيقة). الحصول على جميع عينات الدم من طرف الوريد الذيل من الفئران تتحرك بحرية11،12.
  2. تسليم 1 ملغ / غرام من 50٪ دكستروز عن طريق الحقن داخل الصفاق لاختبار تحمل الجلوكوز.
  3. قياس جلوكوز الدم من نصائح من الأوردة الذيل من الفئران تتحرك بحرية في 0, 5, 15, 30, 60, و 120 دقيقة بعد إدارة الجلوكوز على عينات مكررة باستخدام غلوكمترات وشرائط الاختبار.
  4. احتفظ بعينة الدم بأكملها (n = 10 لكل مجموعة) في درجة حرارة الغرفة مع التخثر لمدة 30 دقيقة.
  5. جهاز طرد مركزي عينة الدم في 3000 س ز لمدة 10 دقائق في 4 درجة مئوية.
  6. نقل البلازما إلى أنابيب منفصلة دون الجلطات الدموية المزعجة وتخزينها في -80 درجة مئوية.
  7. دراسة عينات البلازما في نهاية الدراسة باستخدام أطقم ELISA الفئران التجارية للهيموجلوبين A1c (HBA1c), الجلوكوز, الكوليسترول, ومستويات الأنسولين وفقا لإرشادات الشركة المصنعة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وتظهر نتائج العملية في الشكل 3 والشكل 4. وكان معدل البقاء على قيد الحياة من الدراسة 90٪. مات فأر واحد في المجموعة الصورية بسبب الضعف وتوفي فأر آخر في مجموعة SG في اليوم الثالث بعد العملية لأسباب غير معروفة. وكانت النتائج التي تم الحصول عليها على فقدان الوزن (الشكل 3A) بعد العملية (في الأسبوع 3) على الفئران التي تتغذى HFD مشابهة تماما لتلك التي لوحظت في البشر، مع فقدان الوزن النهائي للجسم من حوالي 15-20٪13. كم...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد أكدت معظم الدراسات الأترابية المحتملة أن زيادة مؤشر كتلة الجسم يرتبط بزيادة معدل الوفيات. ترتبط السمنة بارتفاع خطر الإصابة بمرض السكري وأمراض القلب والأوعية الدموية والوفاة بين الجنسين. وقد أنشأت العمليات المرضية محددة وجود صلة بين مرض السكري والسمنة والوفيات14. تشير المراجعات المنهجية إلى فوائد جراحة السمنة في تقليل عوامل الخطر للإصابة بالأوعية الدموية مع وجود أدلة على تراجع تضخم البطين وتحسين وظيفة الانبساطي بالإضافة إلى15. يمكن أن تحسن جراحة علاج البدانة / الأيضية عو...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويعلن أصحاب البلاغ عدم وجود تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ونشكر الآنسة إيزابيل لو على السرد الإنكليزي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
0.9٪ محلول ملحي عاديالصين للكيماويات & شركة الأدوية المحدودة
5-0 خياطة أحادية الشعيراتShineteh Inc. تايوانEthicon
AlmShineteh Inc. تايوانST-A072PKUNIK
تقنية خطوة التخدير الحيواني0712VAP11076ملقط Matrx
Barraqer-TroutmanShineteh Inc. تايوانST-N309 (H-4410)UNIK
cefazolinشركة صيدلية مخضرمة تايوان
نظام تشاوالغذائي البحثي الحميات
شرائط الجلوكوز ومقياس السكرBeneCheckBKM13-1BeneCheck
HbA1cمجموعة المستوىOKEH00661
نظام أمراض الدمفوجي FUJIDRI-CHEM 4000iأوروبا
نظام غذائي عاليحمية بحثية1810724ملقط القزحية LabDiet
شركة Shineteh Inc. تايوانST-1210UNIK
مقص القزحيةShineteh Inc. تايوانST-S011UNIK
IsofluranePanion & BF التكنولوجيا الحيوية INC8547بانيون & BF
KetoprofenSigma22071154Sigma-Aldrich
مجهر ستيريوMicroTechSZ-5T
مشبك جراحي (M)Echicon Inc. ، Somerville ، NJSize M ، 5mm
Vidisicgel Dr. Gerhard Mann Chem.-pharm. شركة Fabrik GmbH
الدهون

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. WHO. Obesity and overweight. WHO. , (2018).
  2. Buchwald, H., et al. Bariatric surgery: a systematic review and meta-analysis. Journal of the American Medical Association. 292 (14), 1724-1737 (2004).
  3. Schauer, D. P., et al. Bariatric Surgery and the Risk of Cancer in a Large Multisite Cohort. Annals of Surgery. 269 (1), 95-101 (2019).
  4. Wei, J. H., et al. Metabolic surgery ameliorates cardiovascular risk in obese diabetic patients: Influence of different surgical procedures. Surgery for Obesity and Related Diseases. 14 (12), 1832-1840 (2018).
  5. Lee, W. J., Aung, L. Metabolic Surgery for Type 2 Diabetes Mellitus: Experience from Asia. Diabetes & Metabolism. 40 (6), 433-443 (2016).
  6. Yin, D. P., et al. Assessment of different bariatric surgeries in the treatment of obesity and insulin resistance in mice. Annals of Surgery. 254 (1), 73-82 (2011).
  7. Abraham, A., et al. Trends in Bariatric Surgery: Procedure Selection, Revisional Surgeries, and Readmissions. Obesity Surgery. 26 (7), 1371-1377 (2016).
  8. Varela, J. E., Nguyen, N. T. Laparoscopic sleeve gastrectomy leads the U.S. utilization of bariatric surgery at academic medical centers. Surgery for Obesity and Related Diseases. 11 (5), 987-990 (2015).
  9. Surwit, R. S., Kuhn, C. M., Cochrane, C., McCubbin, J. A., Feinglos, M. N. Diet-induced type II diabetes in C57BL/6J mice. Diabetes. 37 (9), 1163-1167 (1988).
  10. Schlager, A., et al. A mouse model for sleeve gastrectomy: applications for diabetes research. Microsurgery. 31 (1), 66-71 (2011).
  11. Pressler, J. W., et al. Vertical sleeve gastrectomy restores glucose homeostasis in apolipoprotein A-IV KO mice. Diabetes. 64 (2), 498-507 (2015).
  12. Williams, L. M., et al. The development of diet-induced obesity and glucose intolerance in C57BL/6 mice on a high-fat diet consists of distinct phases. PLoS One. 9 (8), 106159(2014).
  13. Huang, R., Ding, X., Fu, H., Cai, Q. Potential mechanisms of sleeve gastrectomy for reducing weight and improving metabolism in patients with obesity. Surgery for Obesity and Related Diseases. 15 (10), 1861-1871 (2019).
  14. Bender, R., Zeeb, H., Schwarz, M., Jockel, K. H., Berger, M. Causes of death in obesity: relevant increase in cardiovascular but not in all-cancer mortality. Journal of Clinical Epidemiology. 59 (10), 1064-1071 (2006).
  15. Vest, A. R., Heneghan, H. M., Agarwal, S., Schauer, P. R., Young, J. B. Bariatric surgery and cardiovascular outcomes: a systematic review. Heart. 98 (24), 1763-1777 (2012).
  16. Ionut, V., Burch, M., Youdim, A., Bergman, R. N. Gastrointestinal hormones and bariatric surgery-induced weight loss. Obesity (Silver Spring). 21 (6), 1093-1103 (2013).
  17. Arble, D. M., Sandoval, D. A., Seeley, R. J. Mechanisms underlying weight loss and metabolic improvements in rodent models of bariatric surgery. Diabetologia. 58 (2), 211-220 (2015).
  18. Schneck, A. S., et al. Effects of sleeve gastrectomy in high fat diet-induced obese mice: respective role of reduced caloric intake, white adipose tissue inflammation and changes in adipose tissue and ectopic fat depots. Surgical Endoscopy. 28 (2), 592-602 (2014).
  19. Rubino, F., R'Bibo, S. L., del Genio, F., Mazumdar, M., McGraw, T. E. Metabolic surgery: the role of the gastrointestinal tract in diabetes mellitus. Nature Reviews Endocrinology. 6 (2), 102-109 (2010).
  20. Wilson-Perez, H. E., et al. Vertical sleeve gastrectomy is effective in two genetic mouse models of glucagon-like Peptide 1 receptor deficiency. Diabetes. 62 (7), 2380-2385 (2013).
  21. Lopez, P. P., Nicholson, S. E., Burkhardt, G. E., Johnson, R. A., Johnson, F. K. Development of a sleeve gastrectomy weight loss model in obese Zucker rats. Journal of Surgical Research. 157 (2), 243-250 (2009).
  22. Koch, T. R., Shope, T. R. Laparoscopic Vertical Sleeve Gastrectomy as a Treatment Option for Adults with Diabetes Mellitus. Advances in Experimental Medicine and Biology. , (2020).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

2

مقالات ذات صلة