يقدم البروتوكول نموذج ًا كاملًا من المورين الناجم عن TNBS من مرض كرون وطرق تصور مستقبلات الإستروجين بواسطة الكيمياء المناعية باستخدام الفلورات المناعية لأقسام القولون الثابتة من formalin المضمنة في البارافين.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تصور مستقبلات هرمون الاستروجين في كولونات الفئران مع مرض كرون TNBS الناجم ة باستخدام الفلورسينالمناعي
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
مرض كرون هو النوع الأكثر تشخيصا من مرض التهاب الأمعاء. التهاب مزمن النامية في الأمعاء يؤدي إلى اضطراب التمعم وتلف الغشاء المخاطي المعوي ويبدو أن يرتبط مع زيادة خطر التحول النيوبلاستيك القولون. تشير الأدلة المتراكمة إلى أن هرمون الاستروجين ومستقبلات الإستروجين لا تؤثر فقط على الأنسجة الحساسة للهرمون ، ولكن أيضًا على الأنسجة الأخرى التي لا ترتبط مباشرة بهرمون الاستروجين ، مثل الرئتين أو القولون. هنا، ونحن نصف بروتوكول لتلطيخ الفلور المناعي الناجح لمستقبلات هرمون الاستروجين في القولون التي تم الحصول عليها من نموذج مورين من مرض كرون الناجم عن TNBS. يتم توفير بروتوكول مفصل لتحريض مرض كرون في إعداد الفئران والأمعاء بالإضافة إلى إجراء مناعي خطوة بخطوة باستخدام أقسام الأمعاء المضمنة بالبارافين الثابتة. الأساليب الموصوفة ليست مفيدة فقط للكشف عن مستقبلات هرمون الاستروجين والاستروجين إشارة التحقيق في الجسم الحي ولكن يمكن أيضا أن تطبق على للبروتينات الأخرى التي قد تشارك في تطوير التهاب القولون.
المقدمة
مرض كرون (CD) هو مرض التهاب الأمعاء (IBD) يتجلى التهاب الأمعاء المزمن. لا يفهم مسببات CD بشكل جيد ، ولكن هناك عدد قليل من العوامل الرئيسية التي يبدو أنها مسؤولة عن تطوير CD ، بما في ذلك ميكروبيوتا الأمعاء ، والعوامل الوراثية والبيئية ، مثل النظام الغذائي أو الإجهاد1. من أجل فهم أفضل لإمراض مرض كرون ، تم استخدام عدة نماذج من التهاب الأمعاء2،3،4،5،66،7., في هذه المقالة، نقدم النتائج التي تم الحصول عليها من 2,4,6-trinitrobenzene حمض السلفوين (TNBS) الناجمة عن نموذج المورين من CD.
وقد تم توثيق أن هرمون الاستروجين قادرة على تحوير التهاب الأمعاء المزمن8،9،10،11،12. النشاط البيولوجي لهرمون الاستروجين بوساطة مستقبلات الكونات ، من بينها مستقبلات الإستروجين النووية (ERs) ، أي ERα (جين ESR1)و ERα (جين ESR2)، وكذلك مستقبلات الإستروجين المقترنة بالبروتين G ، أي GPER (جين GPER1)، يشار إليها باسم ER13،14. هناك عدة طرق لتحديد مستوى مستقبلات هرمون الاستروجين، ولكن يمكن استخدام عدد قليل فقط لتصور لهم في الأمعاء.
الكيمياء المناعية (IHC) هي طريقة تستخدم على نطاق واسع في الدراسات السريرية والأساسية للكشف عن بعض المستضدات في الخلايا أو الأنسجة مع الأجسام المضادة المترافقة الفلوروكروم. يبدو أن الـ IHC طريقة مهمة في تصور بنية الأنسجة ، وكذلك في تحديد وتوطين بروتينات محددة ، والتي قد تكون حاسمة لفهم تطور التهاب القولون. هنا ، نقدم بروتوكولًا كاملًا ومصدقًا عليه للتصور المناعي الكيميائي لمستقبلات هرمون الاستروجين في الأمعاء باستخدام الفلورسينس المناعي.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
أجريت الدراسات على الحيوانات بموافقة اللجنة الأخلاقية المحلية (28/ŁB29/2016) وفقًا للتوجيه 2010/63/EU الصادر عن البرلمان الأوروبي ومجلس 22 سبتمبر 2010 والتوصيات المؤسسية.
1. TNBS الناجمة عن نموذج مورين من مرض كرون
ملاحظة: يستخدم هذا البروتوكول ذكور BALB/ C الفئران وزنها 25-28 غرام. يتم إيواء الحيوانات في درجة حرارة ثابتة (22-24 درجة مئوية) والرطوبة النسبية 55 ± 5٪، والحفاظ عليها في دورة 12 ساعة ضوء / الظلام مع حرية الوصول إلى الكريات تشاو القياسية والصنبور الإعلانية libitum.
- ضع الماوس في غرفة الحث وأغلق الغطاء بإحكام. قم بتنويم الفأرة لفترة وجيزة مع الايزوفلوران (25% O2 مع معدل تدفق O2 عند 1.5-2 لتر/دقيقة).
ملاحظة: يجب أن يبقى معدل التنفس إيقاعيًا وأبطأ من المعتاد ويجب ألا يتغير استجابة ً لتحفيز ضار. - غرس 4 ملغ من TNBS في 0.1 مل من الإيثانول بنسبة 30٪ في 0.9٪ NaCl أو 0.1 مل من الإيثانول بنسبة 30٪ في 0.9٪ NaCl كتحكم في السيارة في القولون القاصي من خلال القسطرة.
ملاحظة: يجب إدخال القسطرة بعناية حوالي 3 سم في داخل السّجس. - مراقبة الماوس يوميا من اليوم الثاني إلى الثامن للمعلمات السريرية بما في ذلك وزن الجسم، ونزيف المستقيم، واتساق البراز والوفيات.
- في اليوم الثامن، قتل الفأر عن طريق خلع عنق الرحم.
الشكل 1: الجدول الزمني لنموذج المورين الناجم عن TNBS لمرض كرون. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
2. فصل وتقييم ماصوسكوبي القولون
ملاحظة: يوم واحد قبل انفصال القولون، تمييع 100 ميكرولتر من المضادات الحيوية في 1 مل من الفوسفات المُلّع بالمالحة (PBS) واتركه عند 4 درجات مئوية بين عشية وضحاها.
- تنظيف الجلد فوق البطن باستخدام الإيثانول 75٪ والشاش المعقم.
- قطع جدار البطن من عظم الثدي إلى جُرج باستخدام مقص معقمة وملاقط.
- قطع القولون في أقرب وقت ممكن إلى بشرة والمخنس.
- ضع القولون على طبق بيتري. قطع القولون على طول من داخل الرّقان إلى نهاية الأوسيّة. تنظيف وغسل القولون 2-4 مرات في محلول المضادات الحيوية الباردة-PBS.
- إجراء تقييم العياني باستخدام الفرجار وفقا للجدول 1.
ملاحظة: التصاق الأنسجة* وإحيائم / نزيف#، دم البراز# والإسهال# تخضع للتقييم البصري. * تقييم التصاق الأنسجة باستخدام مقياس من ثلاث نقاط (0: القولون دون التصاق الأنسجة، 1: القولون مع التصاق الأنسجة المعتدلة، 2: القولون مع التصاق الأنسجة واسعة)؛ #على أساس غياب (0) أو وجود (1) من الدم / النزيف، والبراز والإسهال.
| التصاق* | اُلياما/نزيف | دم البراز# | الإسهال# | طول القرحة | سمك القولون | طول القولون |
| نقاط (0 - 2) | نقاط (0 - 1) | نقاط (0 - 1) | نقاط (0 - 1) | سم/نقاط | مم/نقطة | سم/نقاط |
| 0 – غائبة | 0 – غائبة | 0 – غائبة | 0 – غائبة | 0.5 سم = 0.5 نقطة | n مم = n نقاط | 0 – lt;10% أقصر من عنصر التحكم |
| 1 - معتدل | 1 - الحاضر | 1 - الحاضر | 0.5 – البراز طفيف / فضفاض | 1 - من 10 إلى 20٪ أقصر من عنصر التحكم | ||
| 2 - الحاضر | 1 - الحاضر | 2 - أكثر من 20٪ أقصر من عنصر التحكم |
الجدول 1: تسجيل المناظير للأمعاء من الفئران مع نموذج TNBS الناجم عن مرض كرون.
- تحويل طول القرحة بالسنتيمتر إلى مقياس نقطة ، أي أن كل 0.5 سم من القرحة تحسب ك0.5 نقطة. تحويل سمك القولون في ملليمترات إلى مقياس نقطة، أي كل ن ملم يتوافق مع n نقطة.
- تحويل طول القولون في سنتيمتر على مقياس من ثلاث نقاط. يتم تقييم طول القولون التي تم الحصول عليها من كل فأر مع مرض كرون الناجم عن TNBS فيما يتعلق بمتوسط طول القولون لمجموعة التحكم (0: <10٪ أقصر من التحكم، 1: من 10 إلى 20٪ أقصر من التحكم، 2: أكثر من 20٪ أقصر ثم السيطرة).
- حساب مجموع النتيجة العيانية وفقا للمعادلة: مجموع درجة العيانية = التصاق (نقاط) + حُمية / نزف (نقاط) + دم البراز (نقاط) + الإسهال (نقاط) + طول القرحة (نقاط) + سمك القولون (نقاط) + طول القولون (نقاط).
3. إعداد عينة القولون
- قطع القولون إلى شظايا 1-2 سم ووضع كل على الإسفنج في كاسيت النسيجية المسمى بشكل مناسب.
ملاحظة: الإسفنج للكاسيت اتليسيوم منع القولون للطي أثناء الجفاف وحضانة في البارافين السائل. - وضع جزء القولون في 4٪ الفورمالديهايد واحتضان لمدة 24 ساعة على الأقل في 4 درجة مئوية.
- إعداد وبرمجة معالج الأنسجة ل1 ساعة من الحضانة في 50٪، 70٪، 90٪، 95٪، 100٪ الإيثانول، الإيثانول xylene/100٪ (1:1؛ v/v)، والزيلين فقط، وكذلك لما لا يقل عن 3 ساعة من الحضانة في البارافين السائل.
ملاحظة: يجب أن يتم الجفاف في تركيزات متزايدة من الإيثانول والزيلين، ولكن يمكن تعديل تركيز الإيثانول. يوصى بخليط الزيلين/الإيثانول ولكن ليس مطلوباً. - نقل جزء القولون إلى مربع النسيج ية ووضعها في معالج الأنسجة المبرمجة مسبقا.
- تشغيل معالج الأنسجة.
- بعد خطوات الحضانة ، ضع جزء القولون في قالب معدني بحيث يكون طرفا القولون في وضع منتصب وملء ثلث القالب بالبارافين السائل.
- ضع القالب في منطقة التبريد (-5 درجة مئوية) لبضع ثوان، ثم حرك القالب إلى منطقة الاحترار (70 درجة مئوية). مكان في الجزء السفلي من مربع النسيجية وتغطي كامل جزء القولون مع البارافين السائل.
- اترك القالب المعدني مع جزء القولون في البارافين لبضع دقائق في منطقة التبريد. إزالة القالب المعدني من كتلة البارافين واحتضان لمدة 24 ساعة على الأقل في 4 درجة مئوية.
- إزالة البارافين الزائدة من كتلة وإدراجه في ميكروتومي دوارة مؤتمتة بالكامل.
ملاحظة: قد يتم تخزين كتلة البارافين في -20 درجة مئوية لبضع دقائق قبل هذه الخطوة. - قطع جزء القولون إلى 5 مقاطع ميكرون.
- نقل قسم القولون إلى حمام مائي محمى مسبقا إلى 40 درجة مئوية.
- استخدم الشريحة الزجاجية المسماة لإزالة قسم القولون من الحمام المائي.
ملاحظة: تطفو أقسام القولون على الماء. وضع الشريحة الزجاجية المسمى في الماء تحت قسم القولون وسحب الشريحة الزجاجية بعناية. - اترك الشريحة الزجاجية لمدة 24 ساعة في درجة حرارة الغرفة. للتخزين على المدى الطويل، حافظ على الشريحة الزجاجية عند 4 درجات مئوية بعد 24 ساعة من الحضانة في درجة حرارة الغرفة.
4. الكيمياء المناعية مع تلطيخ الفلورة المناعية
ملاحظة: لا تسمح المقطع القولون لتجف في أي خطوة أثناء الإجراء.
- إزالة البارافين عن طريق احتضان الشريحة الزجاجية في زيلين لمدة 5 دقيقة. كرر هذه الخطوة ثلاث مرات.
- ضع الشريحة الزجاجية في الإيثانول xylene/100٪ (1:1؛ v/v) لمدة 5 دقيقة. كرر هذه الخطوة ثلاث مرات.
- إعادة ترطيب قسم القولون في سلسلة من تركيزات الإيثانول المتناقصة ، أي 70 ٪ ، 50 ٪ ، 30 ٪ و 10 ٪ الإيثانول لمدة 5 دقيقة. كرر كل خطوة ثلاث مرات.
- شطف الشريحة الزجاجية تحت الماء الجاري لمدة 5 دقيقة.
- سخني محفظ استرجاع المستضد (10 مم من سيتر الصوديوم؛ 0.05% توين 20، درجة الحموضة 6.0) إلى 95-98 درجة مئوية وسخن الشريحة الزجاجية في محلول استرجاع مستضد الغليان لمدة 10 دقيقة.
ملاحظة: خطوة استرداد المستضد اختياري ولكن موصى به. يجب تحسين حل كشف القناع اعتمادًا على الأجسام المضادة المستخدمة في التجربة. - رسم دائرة حول قسم القولون باستخدام قلم كاره للماء.
ملاحظة: هذه الخطوة اختيارية ولكن موصى بها. القلم الكاره للماء يمنع النفايات من الكواشف عن طريق الحفاظ على السائل المجمعة في حجم صغير داخل ملحوظ الدائرة. - احتضان القسم في محلول الماء 3٪ من بيروكسيديز الهيدروجين لمدة 10 دقيقة.
- غسل في محلول الغسيل (50 mM Tris-HCl، درجة الحموضة 7.4؛ 150 mM NaCl؛ 0.05٪ Tween 20) لمدة 5 دقيقة.
- احتضان في محلول الحجب (5٪ مصل الماعز العادي؛ 50 mM Tris-HCl، درجة الحموضة 7.4؛ 150 mM NaCl؛ 0.05٪ تريتون X-100) لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة.
ملاحظة: في محلول الحجب، يجب أن يكون المصل العادي من نفس النوع مثل الجسم المضاد الثانوي. في المراحل التي تتطلب الحضانة، ضع الشريحة الزجاجية في غرفة رطوبة لمنع التبخر المفرط. - قم بإزالة محلول الحجب وإضافة 20-50 ميكرولتر من الأجسام المضادة الأولية ضد ERα أو ERα أو GPER المخفف في 1٪ من الزلفير المصلي البقري مع 50 mM Tris-HCl، درجة الحموضة 7.4، 150 mM NaCl، 0.05٪ تريتون X-100.
ملاحظة: يتم عرض المخففات الموصى بها للأجسام المضادة الأولية في الجدول 2.
| نوع الجسم المضاد | الأجسام المضادة ضد | الكلونية | الأنواع المضيفة | تفاعل الأنواع | التخفيف |
| الاساسي | ERα | بوليكلونال | الارنب | الانسان | 1:100 |
| الماوس | |||||
| السلحفاه | |||||
| كابيبارا | |||||
| ERа | بوليكلونال | الارنب | الانسان | ||
| القرد | |||||
| الفئران | |||||
| الماوس | |||||
| الاغنام | |||||
| خنزير | |||||
| GPER | بوليكلونال | الارنب | الانسان | ||
| الفئران | |||||
| الماوس | |||||
| الثانويه | DyLight 650 | بوليكلونال | الماعز | الارنب | 1:250 |
الجدول 2: خصائص الأجسام المضادة.
- احتضان مع الأجسام المضادة الأولية بين عشية وضحاها في 4 درجة مئوية في الظلام.
- إزالة محلول الأجسام المضادة وغسل في محلول الغسيل (50 mM Tris-HCl, pH 7.4; 150 mM NaCl; 0.05% Tween 20) لمدة 5 دقيقة. كرر هذه الخطوة ثلاث مرات.
- أضف 20-50 ميكرولتر من DyLight 650 جسممضاد ثانوي مخفف في 1٪ من الزلال المصل البقري (يحتوي على 50 mM Tris-HCl، درجة الحموضة 7.4، 150 mM NaCl، 0.05٪ تريتون X-100). احتضان مع الأجسام المضادة الثانوية مترافق مع صبغة لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة في الظلام.
ملاحظة: يظهر التخفيف الموصى به للجسم المضاد الثانوي في الجدول 2. - إزالة محلول الأجسام المضادة وغسل في محلول الغسيل (50 mM Tris-HCl، درجة الحموضة 7.4، 150 mM NaCl، 0.05٪ Tween 20) لمدة 5 دقيقة. كرر هذه الخطوة ثلاث مرات.
- إضافة 2٪ DiOC6 (3) المخفف في 50 mM تريس-HCl، ودرجة الحموضة 7.4، 150 mM NaCl واحتضان لمدة 10 دقيقة في درجة حرارة الغرفة في الظلام.
- إزالة الحل وغسل في محلول الغسيل (50 mM Tris-HCl، درجة الحموضة 7.4، 150 mM NaCl، 0.05٪ Tween 20) لمدة 5 دقيقة. كرر هذه الخطوة ثلاث مرات.
- إضافة بضع قطرات من السائل القائم على الجلسرين مع DAPI مباشرة على قسم القولون وتغطي بعناية مع شريحة غطاء. احتضان قسم القولون لمدة 24 ساعة على الأقل عند درجة حرارة 4 درجة مئوية.
ملاحظة: تجنب فقاعات الهواء عند تغطية الأنسجة مع شريحة الغطاء. - تحليل قسم القولون تحت المجهر البؤري يضم أهداف 20x أو 63x والغمر النفط باستخدام برامج مخصصة.
ملاحظة: يسرد الجدول 3 خصائص الفلوروكرومات المستخدمة في هذه الدراسة.
| نوع فلوروش | الطول الموجي (نانومتر) | صبغ | |
| الاثاره | الانبعاثات | ||
| DAPI | 405 | 460 – 480 | الازرق |
| DiOC6 (3) | 485 | 538 – 595 | الاخضر |
| DyLight 650 | 654 | 660 – 680 | الاحمر |
الجدول 3: خصائص الفلوروكرومات.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
خصائص تنظير القولون في الفئران مع مرض كرون الناجم عن TNBS
تظهر الصور التمثيلية للنقطتين المأخوذة من التحكم والفئران المعالجة من TNBS في الشكل 2. في الفئران التي لديها نموذج TNBS الناجم عن مرض كرون ، يتم تقليل طول القولون بينما يتم زيادة عرض القولون.
الشكل 2: القولون التمثيلي الذي تم الحصو...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هناك العديد من النماذج الحيوانية لفحص الفيزيولوجيا المرضية IBD ، بما في ذلك النماذج الوراثية أو المناعية أو العفوية ، وكذلك النماذج المستحثة كيميائيًا15. ومن بين عدة أنواع من النماذج الحيوانية من التهاب القولون، النماذج المستحثة كيميائيا مثل النموذج الناجم عن TNBS الموصوفة في هذا البروتوكول، غير مكلفة نسبيا وسهلة الحصول عليها. نموذج Murine الناجم عن TNBS من التهاب القولون لديه العديد من الأعراض السريرية المتعلقة بالأساس المرضي لمؤتمر نزع السلاح. تتميز الحيوانات التي بها التهاب القولون المستحث بتكو...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.
شكر وتقدير
وقد نُشر العمل بفضل الدعم المالي الذي تقدمه سلطات جامعة لودز: نائب رئيس الجامعة للبحث العلمي، ونائب رئيس الجامعة للتعاون الوطني والدولي، وعميد كلية البيولوجيا وحماية البيئة. تم دعم داميان جاسينك بمنح (2017/24/T/NZ5/00045 و 2015/17/N/NZ5/NZ5/00336) من المركز الوطني للعلوم، بولندا.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| <قوي> | |||
| BALB / C الفئران | جامعة لودز | NA | |
| strong>Equipment< / strong> | |||
| Caliper | VWR | 62379-531 | |
| كتلة من الورق المقوى | NA | مجهر | |
| متحد البؤر NA - TCS SP8 | Leica Biosystems | NA | |
| ميكروتوم دوار مؤتمت بالكامل - RM2255 | Leica Biosystems | NA | |
| شريحة زجاجية | حرارية علمية | J1800BMNT | |
| وحدة تضمين البارافين المسخن - EG1150 H | Leica Biosystems | NA | |
| صندوق الأنسجة | Marfour | LN.138747 | |
| قلم كاره للماء | Sigma-Aldrich | Z377821 | |
| ميزان المختبر | Radwag | WL-104-0048 | |
| LAS X software | Leica Biosystems | NA | |
| قالب معدني | Marfour | CP.5105 | |
| شاش معقم | NA | NA | |
| مقص معقم | NA | ||
| ملاقط معقمة | NA | معالج | |
| مناديل - TP1020 | Leica Biosystems | NA | |
| strong>Recodes< / strong> | |||
| 2 ، 4 ، 6-trinitrobenzene sulfonic acid | Sigma-Aldrich | 92822 | |
| ألبومين مصل الأبقار | Sigma-Aldrich | A3294 | |
| DiOC6 (3) | Sigma-Aldrich | 318426 | |
| DyLight 650 الجسم المضاد الثانوي | Abcam | ab96886 | |
| ER & ألفا الجسم المضاد الأساسي | Abcam | ab75635 | |
| ER & beta الجسم المضاد الأساسي | Abcam | ab3576 | |
| الإيثانول | أفانتور مواد الأداء بولندا | 396480111 | |
| الفورمالديهايد | أفانتور مواد الأداء بولندا | 432173111 | |
| GPER الجسم المضاد الأساسي | Abcam | ab39742 | |
| حمض الهيدروكلوريك | أفانتور مواد الأداء بولندا | 575283421 | |
| الهيدروجين بيروكسيداز | أفانتور مواد الأداء بولندا | 885193111 | |
| الأيزوفلوران (الفوران) | باكستر | 1001936040 | |
| مصل الماعز العادي | جيبكو | 16210064 | |
| بارافين | لايكا بيوأنظمة | حيوية 39602012 | |
| طبق بتري | عش 705001 | ||
| عازلة الفوسفات محلول ملحي | سيجما ألدريتش | P3813 | |
| محلول ملحي فسيولوجي | سيجما ألدريتش | 7982 | |
| بريموسين (مضاد حيوي) | Invitrogen | ant-pm-1 | |
| ProLong Diamond Antifage Mountant مع DAPI (سائل قائم على الجلسرين مع DAPI) | Invitrogen | P36971 | |
| كلوريد الصوديوم | Chempur | WE / 231-598-3 | |
| سترات الصوديوم | أفانتور مواد الأداء بولندا | 795780429 | |
| تريس | أفانتور مواد الأداء بولندا | 853470115 | |
| تريتون X-100 | سيجما ألدريتش | T8787 | |
| توين 20 | سيجما ألدريتش | P9416 | |
| زيلين | أفانتور الأداء المواد بولندا | BA0860119 |
المراجع
- Zhang, Y. Z., Li, Y. Y. Inflammatory bowel disease: pathogenesis. World Journal of Gastroenterology. 20 (1), 91-99 (2014).
- Morris, G. P., et al. Hapten-induced model of chronic inflammation and ulceration in the rat colon. Gastroenterology. 96 (3), 795-803 (1989).
- Okayasu, I., et al. A novel method in the induction of reliable experimental acute and chronic ulcerative colitis in mice. Gastroenterology. 98 (3), 694-702 (1990).
- Boirivant, M., Fuss, I. J., Chu, A., Strober, W. Oxazolone colitis: a murine model of T helper cell type 2 colitis treatable with antibodies to interleukin 4. Journal of Experimental Medicine. 188 (10), 1929-1939 (1998).
- Morrissey, P. J., Charrier, K., Braddy, S., Liggitt, D., Watson, J. D. CD4+ T cells that express high levels of CD45RB induce wasting disease when transferred into congenic severe combined immunodeficient mice. Disease development is prevented by cotransfer of purified CD4+ T cells. Journal of Experimental Medicine. 178 (1), 237-244 (1993).
- Kühn, R., Löhler, J., Rennick, D., Rajewsky, K., Müller, W. Interleukin-10-deficient mice develop chronic enterocolitis. Cell. 75 (2), 263-274 (1993).
- Sundberg, J. P., Elson, C. O., Bedigian, H., Birkenmeier, E. H. Spontaneous, heritable colitis in a new substrain of C3H/HeJ mice. Gastroenterology. 107 (6), 1726-1735 (1994).
- Harnish, D. C., et al. Beneficial effects of estrogen treatment in the HLA-B27 transgenic rat model of inflammatory bowel disease. American Journal of Physiology Gastrointestinal and Liver Physiology. 286 (1), 118-125 (2004).
- Pierdominici, M., et al. Linking estrogen receptor β expression with inflammatory bowel disease activity. Oncotarget. 6 (38), 40443-40451 (2015).
- Włodarczyk, M., et al. G protein-coupled receptor 30 (GPR30) expression pattern in inflammatory bowel disease patients suggests its key role in the inflammatory process. A preliminary study. Journal of Gastrointestinal and Liver Diseases. 26 (1), 29-35 (2017).
- Mohammad, I., et al. Estrogen receptor α contributes to T cell-mediated autoimmune inflammation by promoting T cell activation and proliferation. Science Signaling. 11 (526), eaap9415(2018).
- Jacenik, D., et al. G protein-coupled estrogen receptor mediates anti-inflammatory action in Crohn's disease. Scientific Reports. 9 (1), 6749(2019).
- Prossnitz, E. R., Barton, M. The G protein-coupled estrogen receptor GPER in health and disease. Nature Review Endocrinology. 7 (12), 715-726 (2011).
- Yaşar, P., Ayaz, G., User, S. D., Güpür, G., Muyan, M. Molecular mechanisms of estrogen-estrogen receptor signaling. Reproductive Medicine and Biology. 16 (1), 4-20 (2016).
- Pizarro, T. T., Arseneau, K. O., Bamias, G., Cominelli, F. Mouse models for the study of Crohn's disease. Trends in Molecular Medicine. 9 (5), 218-222 (2003).
- Neurath, M. F., Fuss, I., Kelsall, B. L., Stüber, E., Strober, W. Antibodies to interleukin 12 abrogate established experimental colitis in mice. Journal of Experimental Medicine. 182 (5), 1281-1290 (1995).
- Ikeda, M., et al. Simvastatin attenuates trinitrobenzene sulfonic acid-induced colitis, but not oxazalone-induced colitis. Digestive Diseases and Sciences. 53 (7), 1869-1875 (2007).
- Thavarajah, R., Mudimbaimannar, V. K., Elizabeth, J., Rao, U. K., Ranganathan, K. Chemical and physical basics of routine formaldehyde fixation. Journal of Oral Maxillofacial Pathology. 16 (3), 400-405 (2012).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
