يقدم البروتوكول نموذج ًا كاملًا من المورين الناجم عن TNBS من مرض كرون وطرق تصور مستقبلات الإستروجين بواسطة الكيمياء المناعية باستخدام الفلورات المناعية لأقسام القولون الثابتة من formalin المضمنة في البارافين.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تصور مستقبلات هرمون الاستروجين في كولونات الفئران مع مرض كرون TNBS الناجم ة باستخدام الفلورسينالمناعي
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
مرض كرون هو النوع الأكثر تشخيصا من مرض التهاب الأمعاء. التهاب مزمن النامية في الأمعاء يؤدي إلى اضطراب التمعم وتلف الغشاء المخاطي المعوي ويبدو أن يرتبط مع زيادة خطر التحول النيوبلاستيك القولون. تشير الأدلة المتراكمة إلى أن هرمون الاستروجين ومستقبلات الإستروجين لا تؤثر فقط على الأنسجة الحساسة للهرمون ، ولكن أيضًا على الأنسجة الأخرى التي لا ترتبط مباشرة بهرمون الاستروجين ، مثل الرئتين أو القولون. هنا، ونحن نصف بروتوكول لتلطيخ الفلور المناعي الناجح لمستقبلات هرمون الاستروجين في القولون التي تم الحصول عليها من نموذج مورين من مرض كرون الناجم عن TNBS. يتم توفير بروتوكول مفصل لتحريض مرض كرون في إعداد الفئران والأمعاء بالإضافة إلى إجراء مناعي خطوة بخطوة باستخدام أقسام الأمعاء المضمنة بالبارافين الثابتة. الأساليب الموصوفة ليست مفيدة فقط للكشف عن مستقبلات هرمون الاستروجين والاستروجين إشارة التحقيق في الجسم الحي ولكن يمكن أيضا أن تطبق على للبروتينات الأخرى التي قد تشارك في تطوير التهاب القولون.
المقدمة
مرض كرون (CD) هو مرض التهاب الأمعاء (IBD) يتجلى التهاب الأمعاء المزمن. لا يفهم مسببات CD بشكل جيد ، ولكن هناك عدد قليل من العوامل الرئيسية التي يبدو أنها مسؤولة عن تطوير CD ، بما في ذلك ميكروبيوتا الأمعاء ، والعوامل الوراثية والبيئية ، مثل النظام الغذائي أو الإجهاد1. من أجل فهم أفضل لإمراض مرض كرون ، تم استخدام عدة نماذج من التهاب الأمعاء2،3،4،5،66،7., في هذه المقالة، نقدم النتائج التي تم الحصول عليها من 2,4,6-trinitrobenzene حمض السلفوين (TNBS) الن....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
أجريت الدراسات على الحيوانات بموافقة اللجنة الأخلاقية المحلية (28/ŁB29/2016) وفقًا للتوجيه 2010/63/EU الصادر عن البرلمان الأوروبي ومجلس 22 سبتمبر 2010 والتوصيات المؤسسية.
1. TNBS الناجمة عن نموذج مورين من مرض كرون
ملاحظة: يستخدم هذا البروتوكول ذكور BALB/ C الفئران وزنها 25-28 غرام. يتم إيواء الحيوانات في درجة حرارة ثابتة (22-24 درجة مئوية) والرطوبة النسبية 55 ± 5٪، والحفاظ عليها في دورة 12 ساعة ضوء / الظلام مع حرية الوصول إلى الكريات تشاو القياسية والصنبور الإعلانية libitum.
- ضع الماوس في غرفة الحث وأغلق الغطاء بإحكام. قم بتنويم الفأرة لفترة وجيزة مع الايزوفلوران (25% O2 مع معدل تدفق ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
خصائص تنظير القولون في الفئران مع مرض كرون الناجم عن TNBS
تظهر الصور التمثيلية للنقطتين المأخوذة من التحكم والفئران المعالجة من TNBS في الشكل 2. في الفئران التي لديها نموذج TNBS الناجم عن مرض كرون ، يتم تقليل طول القولون بينما يتم زيادة عرض القولون.
الشكل 2: القولون التمثيلي الذي تم الحصو.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هناك العديد من النماذج الحيوانية لفحص الفيزيولوجيا المرضية IBD ، بما في ذلك النماذج الوراثية أو المناعية أو العفوية ، وكذلك النماذج المستحثة كيميائيًا15. ومن بين عدة أنواع من النماذج الحيوانية من التهاب القولون، النماذج المستحثة كيميائيا مثل النموذج الناجم عن TNBS الموصوفة في هذا البروتوكول، غير مكلفة نسبيا وسهلة الحصول عليها. نموذج Murine الناجم عن TNBS من التهاب القولون لديه العديد من الأعراض السريرية المتعلقة بالأساس المرضي لمؤتمر نزع السلاح. تتميز الحيوانات التي بها التهاب القولون المستحث بتكو.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.
شكر وتقدير
وقد نُشر العمل بفضل الدعم المالي الذي تقدمه سلطات جامعة لودز: نائب رئيس الجامعة للبحث العلمي، ونائب رئيس الجامعة للتعاون الوطني والدولي، وعميد كلية البيولوجيا وحماية البيئة. تم دعم داميان جاسينك بمنح (2017/24/T/NZ5/00045 و 2015/17/N/NZ5/NZ5/00336) من المركز الوطني للعلوم، بولندا.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| <قوي> | |||
| BALB / C الفئران | جامعة لودز | NA | |
| strong>Equipment< / strong> | |||
| Caliper | VWR | 62379-531 | |
| كتلة من الورق المقوى | NA | مجهر | |
| متحد البؤر NA - TCS SP8 | Leica Biosystems | NA | |
| ميكروتوم دوار مؤتمت بالكامل - RM2255 | Leica Biosystems | NA | |
| شريحة زجاجية | حرارية علمية | J1800BMNT | |
| وحدة تضمين البارافين المسخن - EG1150 H | Leica Biosystems | NA | |
| صندوق الأنسجة | Marfour | LN.138747 | |
| قلم كاره للماء | Sigma-Aldrich | Z377821 | |
| ميزان المختبر | Radwag | WL-104-0048 | |
| LAS X software | Leica Biosystems | NA | |
| قالب معدني | Marfour | CP.5105 | |
| شاش معقم | NA | NA | |
| مقص معقم | NA | ||
| ملاقط معقمة | NA | معالج | |
| مناديل - TP1020 | Leica Biosystems | NA | |
| strong>Recodes< / strong> | |||
| 2 ، 4 ، 6-trinitrobenzene sulfonic acid | Sigma-Aldrich | 92822 | |
| ألبومين مصل الأبقار | Sigma-Aldrich | A3294 | |
| DiOC6 (3) | Sigma-Aldrich | 318426 | |
| DyLight 650 الجسم المضاد الثانوي | Abcam | ab96886 | |
| ER & ألفا الجسم المضاد الأساسي | Abcam | ab75635 | |
| ER & beta الجسم المضاد الأساسي | Abcam | ab3576 | |
| الإيثانول | أفانتور مواد الأداء بولندا | 396480111 | |
| الفورمالديهايد | أفانتور مواد الأداء بولندا | 432173111 | |
| GPER الجسم المضاد الأساسي | Abcam | ab39742 | |
| حمض الهيدروكلوريك | أفانتور مواد الأداء بولندا | 575283421 | |
| الهيدروجين بيروكسيداز | أفانتور مواد الأداء بولندا | 885193111 | |
| الأيزوفلوران (الفوران) | باكستر | 1001936040 | |
| مصل الماعز العادي | جيبكو | 16210064 | |
| بارافين | لايكا بيوأنظمة | حيوية 39602012 | |
| طبق بتري | عش 705001 | ||
| عازلة الفوسفات محلول ملحي | سيجما ألدريتش | P3813 | |
| محلول ملحي فسيولوجي | سيجما ألدريتش | 7982 | |
| بريموسين (مضاد حيوي) | Invitrogen | ant-pm-1 | |
| ProLong Diamond Antifage Mountant مع DAPI (سائل قائم على الجلسرين مع DAPI) | Invitrogen | P36971 | |
| كلوريد الصوديوم | Chempur | WE / 231-598-3 | |
| سترات الصوديوم | أفانتور مواد الأداء بولندا | 795780429 | |
| تريس | أفانتور مواد الأداء بولندا | 853470115 | |
| تريتون X-100 | سيجما ألدريتش | T8787 | |
| توين 20 | سيجما ألدريتش | P9416 | |
| زيلين | أفانتور الأداء المواد بولندا | BA0860119 |
المراجع
- Zhang, Y. Z., Li, Y. Y. Inflammatory bowel disease: pathogenesis. World Journal of Gastroenterology. 20 (1), 91-99 (2014).
- Morris, G. P., et al. Hapten-induced model of chronic inflammation and ulceration in the rat colon. Gastroenterology. 96<....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
