الهدف من هذه المقالة هو وصف طريقة مكررة من تنبيب فأرالمختبر. هذه الطريقة غير الغازية ، وبالتالي ، مثالية للدراسات التي تتطلب الرصد التسلسلي لوظيفة الجهاز التنفسي و / أو غرس العلاجات في الرئة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يصف الأدب عدة طرق لتنبيب الماوس التي تتطلب إما تصور الجلاوطي من خلال تجويف الفم أو شق في الرقبة البطنية لتأكيد مباشر لوضع قنية في القصبة الهوائية. ويمكن أن تشكل الصعوبة النسبية أو صدمة الأنسجة الناجمة عن هذه الإجراءات عائقاً أمام قدرة المحقق على إجراء دراسات طولية. توضح هذه المقالة تقنية يسمح فيها التلاعب الجسدي للفأرة بعد استخدام مزيل الشعر لإزالة الشعر من الرقبة البطنية بالتصور عبر الجلد للالقصبة الهوائية لتنبيب الأوروتراكفيل بغض النظر عن درجة الجلد تصبغ. هذه الطريقة غير ضارة بالموضوع وتتحقق بسهولة مع فهم محدود لتشريح المورين. يسهل هذا النهج المكرر التنبيب المتكرر ، والذي قد يكون ضروريًا لمراقبة تطور المرض أو غرس العلاجات. قد يؤدي استخدام هذه الطريقة إلى تقليل عدد الحيوانات والمهارة التقنية اللازمة لقياس وظائف الرئة في نماذج الماوس من أمراض الجهاز التنفسي.
المقدمة
فأر المختبر هو نموذج الحيوان المشترك لأمراض الجهاز التنفسي البشرية. وهكذا ، هناك العديد من الطرق المنشورة لتنبيب الماوس لغرض غرس العلاجات وقياس ميكانيكا الجهاز التنفسي. معظم الإجراءات الموصوفة تتطلب تصور الجلاوطي من خلال تجويف الفم مع معدات متخصصة مثل منظار الحنجرة أو مصدر ضوء الألياف البصرية1،2، 3،,4،5،6،7.3 ومع ذلك ، يمكن أن يكون هذا صعبًا عندما تكون هناك حاجة إلى قنية كبيرة نسبيًا ، لأنها يمكن أن تحجب وجهة نظر الباحث. وقد عالج ليمجونياوونغ وآخرون8 هذا القلق بطريقة التنبيب التي يتم فيها إجراء شق جلدي صغير على طول خط الوسط في الرقبة البطنية مما يسمح بتصور القصبة الهوائية. بعد الإجراء ، يتم إغلاق الشق بلاصق للأنسجة.
بالنسبة للدراسات التي تتطلب عمليات تنبيب متكررة ، يتطلب التقطيع والإغلاق المتتالي لهذا الموقع إزالة الهوامش الجلدية وصدمة الأنسجة إلى الرقبة البطنية. الغرض من نهج تصور التراشف التراجيدي عبر الجلد للتنبيب عن طريق الفم هو توفير تقنية مكررة وغير باضعة مناسبة خصيصًا لدراسات التنبيب المتكررة وكذلك أحداث تنبيب واحد في الفئران.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وقد وافقت اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها (IACUC) التابعة لجامعة ولاية أوهايو على جميع الأنشطة الحيوانية الموصوفة هنا، وأجريت في مرافق معتمدة من AAALAC.
1- إعداد الإجراءات
- بناء منصة التنبيب. لتحقيق المنحدر منصة مناسبة، استخدم ثلاثة بوصة (7.6 سم) الموثق 3-حلقة. أضعاف طول 15-20 سم من الحرير 3-0 أو غيرها من المواد الخيط في النصف والالتزام نهايات الخيط إلى أعلى المنصة يميل مع الشريط لإنشاء حلقة تعليق(الشكل 1).
- حدد قنية من الحجم المناسب والطول.
ملاحظة: بالنسبة للفأرة التي يبلغ طولها 20-30 جم، يمكن استخدام قسطرة طويلة من 1 إلى 1.5 بوصة (2.5-3.8 سم) تصل إلى 18 جم. لهذه الدراسة، تم استخدام 18 امرأة تبلغ من العمر أسبوعًا في BALB/c وفئران C57BL/6 البالغة من العمر 10 أسابيع (n = 3 من كل سلالة). يوفر غمد القسطرة الأبيض المبهم أفضل تصور عبر الجلد. - قطع شطبة في الطرف القاصي من القسطرة وتمهيد السطح قطع مع ورقة جلخ لخلق طرف شطبة مدورة. خلق بلطف منحنى طفيف في قنية حوالي 1 سم من شطبة(الشكل 2).
ملاحظة: يجب استخدام قسطرة جديدة لكل فأرة. - إجراء حقن للفأرة باستخدام الكيتامين (5.4 ملغم/غرام من وزن الجسم) وxylazine (16 ميكروغرام/غرام من وزن الجسم) التي تدار داخل البيريتين. تطبيق مرهم ophthalimic العقيمة على العينين.
ملاحظة: ويتحقق عمق التخدير السليم من خلال عدم استجابة الماوس لقرصة إصبع القدم شركة. - قم بتعليق الماوس في وضع ية على منصة التنبيب عن طريق ربط القواطع العلوية حول خيط الحرير في الجزء العلوي من السطح الزاوية(الشكل 3). مرة واحدة يتم وضع الماوس بشكل مباشر في recumbency الظهرية، فهم بلطف قاعدة الذيل والتراجع الذيل نحو الجدول. ضع قطعة من الشريط فوق قاعدة الذيل لتأمين الماوس.
- تطبيق كريم إزالة المزيل(جدول المواد)على منطقة عنق الرحم البطنية لمدة 30-45 ق ثم إزالة جميع كريم إزالة المزيل من منطقة عنق الرحم باستخدام شاش جاف. كرر عملية التطبيق إذا لزم الأمر. شطف الجلد جيدا بالماء المالح أو المقطر لإزالة أي بقايا ثم مسح الجافة.
2- إجراء التنبيب
- استخدام مستقيم، الملقط المسطحة في اليد غير المهيمنة لسحب اللسان بلطف بطريقة تفتح بما فيه الكفاية الفم لإدخال قنية.
ملاحظة: لا ينبغي استخدام ملقط الأسنان الفئران لأن هذا سوف يضر اللسان. - مع اليد المهيمنة ، تقدم في القنية إلى الفم بحيث تكون النهاية التي هي distal إلى الانحناء الطفيف ضد سقف فم الشخص.
- الافراج عن اللسان والانزلاق على الحافة المسطحة من الملقط مغلقة caudally على طول الرقبة البطنية حتى يتم التوصل إلى manubrium. هذا الاقتراح يُشرّد الغدد اللعابية ويُسّط العضلات التي تغطي القصبة الهوائية. يظهر القصبة الهوائية عبر الجلد كخط أبيض(الشكل 3A). إذا لزم الأمر، تدوير الملقط في اتجاه الجمجمة مع الحفاظ على التوتر على الجلد في اتجاه caudal للتسبب في الغدد اللعابية المشردة في وقت لاحق إلى الذروة. هذه المناورة يخلق المزيد من التباين حول القصبة الهوائية(الشكل 3B).
ملاحظة: تجنب القوة المفرطة على الرقبة البطنية لأنها يمكن أن تنهار القصبة الهوائية وتضعف التنفس. - تقدم في حين أن القُلة في وقت واحد الصيد الطرف المنفز من التهوية عن طريق التمويع من اليد المهيمنة مع مرونة في وقت واحد من المعصم.
- ويشار إلى الموضع الصحيح للقنية من خلال تصور قنية مبهمة في القصبة الهوائية(الشكل 4B, D). إذا كانت قد تقدمت قنية الماضي مستوى أصل العضلات المدلكة وتصور قنية في القصبة الهوائية لم يتم تأكيد، تراجع عن قنية وإعادة محاولة المناورة.
- تأكيد وضع القنية المناسبة عن طريق ربط لمبة تضخم الرئة إلى قنية ومراقبة التوسع الصدري مع الاكتئاب المتزامن للجهاز.
- دون إزاحة القنية ، فك بعناية القواطع من الماوس من منصة التنبيب. نقل الماوس إلى منصة أفقية(جدول المواد)وإدراج قنية إلى محول على جهاز التنفس الصناعي. بعد التضخم العميق، تهوية الماوس لمدة 60 ق ثم قياس مقاومة الجهاز التنفسي.
3- الاسترداد
- بمجرد اكتمال الإجراء، حرك الماوس إلى منصة دافئة. توفير التحفيز المستمر عن طريق إصبع القدم الخفيف أو قرصة الذيل لتشجيع التنفس التلقائي.
- يمكن أن يحدث استئصال عندما يبدأ الماوس فقط في المضغ. فهم قنية على مستوى المحور وسحب بلطف أنبوب قحوية وبعيدا عن الماوس حتى تتم إزالة قنية تماما من فم الموضوع.
ملاحظة: فمن الأفضل لتوفير دعم مجرى الهواء مع قنية جامدة لأطول فترة ممكنة خلال عملية الانتعاش. - مرة واحدة extubated، ونقل الماوس إلى قفص الانتعاش نظيفة مع دعم الحرارة. مراقبة الماوس باستمرار حتى يكون متنقلا تماما، واكتمال الاسترداد.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
الرصد التسلسلي لوظيفة الرئة الأساسية
تم تنبيب أنثى بالب/ج البالغة من العمر ثمانية عشر أسبوعًا وفئران C57BL/6 البالغة من العمر 10 أسابيع (n = 3 من كل سلالة) باستخدام الطريقة الموصوفة في اليوم 0 و3 و10 و17. بعد التنبيب في كل يوم ، تم توصيل هذا الموضوع بجهاز التنفس الصناعي الميكانيكي المزود بالأكسجين 100٪(جدول المواد). تم قياس مقاومة الجهاز التنفسي (Rrs) باستخدام تقنية التذبذب القسري لمدة 60 ق بعد تضخم عميق إلى 25 سم H2O عقد لمدة 5 s. لا توجد أخطاء برمجية مرتبطة بهذا التحمل ال...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
التنبيب باستخدام تقنية التصور تراكل عبر الجلد يقدم نهجا المكرر لطريقة شق الجلد القياسية. مع إيلاء اهتمام خاص لعدة خطوات رئيسية، يمكن أن يتحقق التنبيب بسهولة وبسرعة. يجب وضع الحيوان مباشرة في الردورة الظهرية على منصة التنبيب مع الماوس المضمون في تراجع لطيف. وهذا سوف تمتد الحيوان إلى محاذاة الرأسي وتحديد المواقع المناسبة للتنبيب. وبالإضافة إلى ذلك، لا ينبغي أن يبقى كريم إزالة البيلات على اتصال بجلد الحيوان لفترة أطول من 30-45 سنة، وينبغي شطفه جيداً لإزالة جميع المخلفات. تمديد اتصال الجلد مع كريم إزالة المزيل اتلاف يسبب الأ...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
يشكر المؤلفون لوسيا روساس ولورين دوليتل وليزا جوزيف وليندسي فيرغسون على مساعدتهم التقنية ومختبر الجامعة للموارد الحيوانية لدعمهم لرعاية الحيوانات. يتم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد القومية للصحة T35OD010977 وR01-HL102469.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 18 جم × 1 1/4 "قسطرة وريدية ، Safelet | Fisher Scientific | # 14-841-14 | قنية للتنبيب |
| 70٪ إيثانول ، 10 لتر | فيشر 25467025 | تنظيف القنية | |
| ورق جلخ (ورق صنفرة) بورتر | كابل | 74001201 | تحضير |
| AnaSed (محلول معقم زيلازين) حقن (100 مجم / مل) | Akorn Animal Health | NDC # 59399-111-50 | الأزرق للتخدير |
| (0.5 بوصة × 14 ياردة) | Fisher Scientific | 15966 | ضبط النفس على منصة التنبيب |
| خياطة حريرية مضفرة بدون إبرة ، غير معقمة ، (3-0) | Henry Schein | Item #1007842 | منصة التنبيب |
| Deltaphase Isothermal Pad | Braintree Scientific | 39DP | تنظيم حراري للماوس واستعادة |
| Deltaphase التشغيل Board | Braintree Scientific | 39OP | استعادة الفأر (قبل نزع الأنبوب) |
| الماء المقطر | ThermoFisher | 15230253 | تنظيف الماوس بعد إزالة الشعر |
| مقص العين ، بزاوية ، حادة / حادة | هارفارد جهاز | 72-8437 | تحضير القنية |
| FlexiVent (وحدة FX 2) | Scireq | N / A | تسجيل بيانات وظائف الرئة (غير مطلوب لإجراء الإجراء ، ويستخدم في هذه الدراسة للتحقق من صحة الإجراء) |
| إسفنج الشاش | فيشر العلمي | 13-761-52 | إزالة الشعر |
| شديد التحمل 3 "3 حلقات عرض المجلدات | دبابيس | 24690CT | منصة التنبيب |
| Instat Software | Graphpad | N / A | برنامج التحليل الإحصائي |
| حقنة الأنسولين (0.5 سم مكعب ، U100) | فيشر 329461 | التخدير العلمي | |
| حقن الكيتامين هيدروكلوريد ، USP (100 مجم / مل) | Llyod Laoratories | القائمة رقم 4871 | |
| لمبة تضخم الرئة | Harvard | Apparatus 72-9083 | تأكيد وضع القنية |
| ملقط دقيق ، منحني ، ناعم | جهاز هارفارد | 72-0445 | سحب اللسان وخلق توتر على الرقبة لتصور |
| القنيةناير (غسول لإزالة الشعر) ، زجاجة 9 أونصة | الكنيسة & دوايت | 42010440 | إزالة الشعر |
| محلول ملحي معقم (0.9٪) ، 10 مل | فيشر NC9054335 | التخدير ، تنظيف البشرة بعد إزالة الشعر |
المراجع
- Spoelstra, E. N., et al. A novel and simple method for endotracheal intubation of mice. Laboratory Animals. 41 (1), 128-135 (2007).
- Rivera, B., Miller, S. R., Brown, E. M., Price, R. E. A Novel Method for Endotracheal Intubation of Mice and Rats Used in Imaging Studies. Contemporary Topics in Laboratory Animal Science. 44 (2), 52-55 (2005).
- Sparrowe, J., Jimenez, M., Rullas, J., Martinez, A. E., Ferrer, S. Refined Intratracheal Intubation Technique in the Mouse, Complete Protocol Description for Lower Airway Models. Global Journal of Animal Scientific Research. 3 (2), 363-369 (2015).
- Deyo, D. J., Wei, J. A Novel Method of Intubation and Ventilation in Mice. Anesthesia & Analgesia. 88 (2), 179(1999).
- Vergari, A., et al. A new method of orotracheal intubation in mice. European Review for Medical and Pharmacological Sciences. 8 (3), 103-106 (2004).
- Brown, R. H., Walters, D. M., Greenberg, R. S., Mitzner, W. A method of endotracheal intubation and pulmonary functional assessment for repeated studies in mice. Journal of Applied Physiology. 87 (6), 2362-2365 (1999).
- Das, S., MacDonald, K., Chang, H. S., Mitzner, W. A Simple Method of Mouse Lung Intubation. Journal of Visualized Experiments. (73), e50318(2013).
- Limjunyawong, N., Mock, J., Mitzner, W. Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research. Journal of Visualized Experiments. (102), e52964(2015).
- Qin, W., Baran, U., Wang, W. Lymphatic response to depilation-induced inflammation assessed with label-free optical lymphangiography. Lasers in Surgery and Medicine. 47 (8), 669-676 (2015).
- McGovern, T. K., Robichaud, A., Fereydoonzad, L., Schuessler, T. F., Martin, J. G. Evaluation of Respiratory System Mechanics in Mice using the Forced Oscillation Technique. Journal of Visualized Experiments. (75), e50107(2013).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
