Method Article

تحليل عيوب القلب الخلقية في أجنة الفئران باستخدام أساليب النسيج النوعي والكمي

DOI:

10.3791/60926

⸱

March 10th, 2020

 ,  , 
1Department of Biomedical Engineering, Michigan State University, 2Institute for Quantitative Health Sciences and Engineering, Michigan State University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في هذا البروتوكول، نصف إجراءات التحليل النوعي والكمي للأنماط الظاهرية التنموية لدى الفئران المرتبطة بعيوب القلب الخلقية.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

عيوب القلب الخلقية (CHD) هي النوع الأكثر شيوعًا من العيوب الخلقية في البشر ، مما يؤثر على ما يصل إلى 1٪ من جميع المواليد الأحياء. ومع ذلك، لا تزال الأسباب الكامنة وراء CHD غير مفهومة بشكل جيد. الفأر النامية يشكل نموذجا قيما لدراسة CHD، وذلك لأن برامج النمو القلبي بين الفئران والبشر يتم الحفاظ عليها بدرجة عالية. يصف البروتوكول بالتفصيل كيفية إنتاج أجنة الفئران من مرحلة الحمل المطلوبة ، وأساليب لعزل والحفاظ على القلب للمعالجة النهائية ، والأساليب الكمية لتحديد الأنواع الشائعة من CHD حسب الأنسجة (على سبيل المثال ، الحاجز البطيني العيوب، وعيوب الحاجز الأذيني، وبراءة اختراع القناة الشريانية)، وطرق قياس الهيمتولوجيا الكمية لقياس الأنماط الظاهرية الشائعة للضغط العضلي. توضح هذه الأساليب جميع الخطوات التي ينطوي عليها إعداد العينات وجمعها وتحليلها ، مما يسمح للعلماء بقياس CHD بشكل صحيح ومستنسخ.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

CHDs هي النوع الأكثر شيوعا من العيوب الخلقية في البشر وهي السبب الرئيسي للوفيات المرتبطة بالعيوب الخلقية1،2،3،4، 5،6. على الرغم من أن حوالي 90٪ من الأطفال حديثي الولادة البقاء على قيد الحياة CHD، فإنه يرتبط في كثير من الأحيان مع المراضة كبيرة والتدخلات الطبية على مر السنين، وفرض عبء ثقيل على حياة المرضى ونظام الرعاية الصحية7،8،9،10. خارج العوامل ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم علاج جميع الحيوانات المستخدمة في التجارب المشار إليها في هذه الورقة باستخدام المبادئ التوجيهية لرعاية الحيوانات من جامعة ولاية ميشيغان لجنة الرعاية الحيوانية المؤسسية (IACUC).

1. التزاوج في الوقت المناسب من الفئران C57BL6/J لإنتاج الأجنة

  1. بمجرد أن تصل الفئران إلى سن التكاثر (6-8 أسابيع) ، وضعها معا في شكل تربية حرام (أي أنثى اثنين لكل ذكر واحد). إعدادها للتكاثر في وقت ما في فترة ما بعد الظهر أو المساء.
    ملاحظة: الفئران غالبا ما تتكاثر في غضون 1 ساعة بعد إطفاء الأنوار داخل مرفق السكن الخاصة بهم. يجب أن تتقاعد الإناث من التربية في حوالي 6-8 أشهر ويجب استخدام الذكور في موعد لا يتجاوز 12 شهرًا من العمر.
  2. إذا كان استخدام ط....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مقارنة مؤشر ضغط العضلات بين القلوب النامية تحت اثنين من بيئات مختلفة، والسيطرة ومجموعة تجريبية. وقد استخدمت هذه البروتوكولات لتحليل الضغط من الأنسجة العضلية كميا، مما سمح التحليل الإحصائي. وقد تبين أن ضغط العضلات قد انخفض بشكل كبير في القلوب التجريبية نسبة إلى الأجنة التي تطورت في ظروف غير تجريبية.

يتم التخلص من الأجنة إذا كان توقيت المراقبة يبدو غير دقيق. على الرغم من أن توقف نمو الأجنة يمكن أن يكون نتيجة لعلاج التجربة ، وه.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يستكشف هذا البروتوكول التقنيات التي ينطوي عليها تحليل تطور القلب في القلوب الجنينية. بعض القيود المفروضة على هذه الطريقة هي البراعة البدنية المطلوبة للتقنيات التحضيرية ، والتي قد تتطلب الممارسة ، والمهارة مع التصوير المجهر. إذا كانت الشرائح التي تم الحصول عليها في cryostat فوضوية ، فإن تلطيخ الهيماتوكسيلين وإيوسين لن يكون واضحًا ، أو إذا كانت الصور التي تم التقاطها في المجهر تحتوي على إضاءة ضعيفة ، فإن الطريقة المستخدمة مع ImageJ لن تعمل. أحد قيود ميزة العتبة لبرنامج ImageJ هو أنه يحدد وحدات البكسل الموجودة على أحد طرفي .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وليس لدى أصحاب البلاغ أي إفصاحات للإبلاغ عنها.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يتم دعم مختبر أغيري من قبل المعهد الوطني للقلب والرئة والدم في المعاهد الوطنية للصحة تحت رقم الجائزة K01HL135464 وجمعية القلب الأمريكية تحت رقم الجائزة 19IPLOI34660342.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
15 مل أنبوب (أنبوب) مخروطي الشكلفيشرالعلمي # 1495970C
C57BL / 6J MiceJackson LabsC57BL / 6J - مخزون 000664
برطمانات تلطيخ كوبلين (x6)VWR Scientific# 25457-006
أغطية 24X50MM # 1.5VWR علمي# 48393-241
Cryostat - Leica CM3050SLeicaN / A
تشريح (أطباق) فيشرالعلمي# 50930381
دومون # 5 - ملقط ناعم (x2)أدوات العلومالدقيقة # 11254-20
Eosin Y SolutionMillipore Sigma# HT110116-500ML
كحول إيثيلي (نقي ، 200 دليل) فيشرالعلمي# BP2818-500
حمض الإيثيلين ديامين تترا أسيتيك (EDTA)ميليبور سيجما# E9884-100G
EukittMillipore Sigma# 03989-100ML
أدوات العلوم الدقيقة المقصالدقيق # 14060-10
مجهر ستيريو الفلورسنت Leica M165 FCLeicaN / A
GlycineMillipore Sigma# 410225-250G
Graefe ملقطأدوات العلوم الدقيقة# 11052-10
برنامج Graphpad Prism 8برنامج Graphpad
ImageJ برنامجImageJ
KimwipesFisher Scientific# 06666A
محلول الهيماتوكسيلين من مايرMillipore Sigma# MHS16-500ML
طرف (أطراف) الماصة الدقيقة - p200فيشر العلمي# 02707448
برنامجMicrosoft Excelمايكروسوفت
OCT مركبVWR Scientific# 102094-106
Olympus CkX53 مجهرطلاء أوليمبوس
(على الأقل 2)
ParaformaldehydeVWR Scientific# 0215014601تحويلها إلى محلول 4٪ (مذاب في PBS)
ماصة باستور (ماصات)فيشر العلمي# 13-711-7M
البنسلين الستربتومايسينThermoFisher العلمي# 15140122
محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) ThermoFisherScientific# 70011044تمييع من 10x إلى 1x قبل استخدام
ScaleMettler Toledo# MS1602TS
ScaleMettler Toledo# مقبض مشرط MS105
# 3VWR Scientific# 10161-918
شفرات مشرطVWR علمي# 21909-612
قالب مربعVWR علمي# 100500-224لقوالب OCT
السكروزMillipore Sigma# S9378-500G
Superfrost Plus SlidesFisher Scientific# 1255015
العلوم الدقيقةالمقص الجراحي# 14002-14
Tissue-Tek Accu-Edge شفرات ميكروتوم يمكن التخلصVWR علمية# 25608-964
مقياس السفرAcculabVIC 5101
XyleneMillipore Sigma214736-1L
فرش أدوات منها

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kathiresan, S., Srivastava, D. Genetics of human cardiovascular disease. Cell. 148 (6), 1242-1257 (2012).
  2. Sun, R., Liu, M., Lu, L., Zheng, Y., Zhang, P. Congenital Heart Disease: Causes, Diagnosis, Symptoms, and Treatments. Cell Biochemistry and Biophysics. 72

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Congenital Heart DefectsMouse EmbryosHistological MethodsTissue AnalysisHeart IsolationCryosectioningMuscle CompactionParaformaldehyde FixationImage AnalysisQuantitative Histomorphometry

Related Articles