نحن نصف حقن داخل الجمجمة التي تستخدم إبرة عازمة في الطرف التي يمكن تثبيتها في الجمجمة، وبالتالي القضاء على خطر تلف parenchyma الكامنة. ويمكن استخدام هذا النهج لرسم خرائط المصير الوراثي والتلاعب في الخلايا اللولبية وتتبع حركة السائل النخاعي.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تحريض الخلايا اللبتومينينالتي تعديل عن طريق الحقن داخل الجمجمة
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يصف البروتوكول المبين هنا كيفية حقن الحلول بأمان ويدويًا من خلال الصهريج ماجنا مع القضاء على خطر تلف parenchyma الأساسية. توصي البروتوكولات المنشورة سابقًا باستخدام إبر مستقيمة يجب خفضها إلى 1-2 مم كحد أقصى من سطح الدورة. إن الانخفاض المفاجئ في المقاومة بمجرد ثقب الغشاء الجافي يجعل من الصعب الحفاظ على الإبرة في وضع ثابت. بدلا ً من ذلك، تستخدم طريقتنا إبرة منحنية عند الطرف الذي يمكن تثبيته ضد العظم القذالي للجمجمة، وبالتالي منع الحقنة من اختراق الأنسجة بعد تعامس الغشاء الجاف. الإجراء بسيط وقابل للتكرار ولا يسبب إزعاجًا طويل الأمد في الحيوانات التي يتم تشغيلها. نحن نصف استراتيجية الحقن داخل الجمجمة في سياق رسم خرائط المصير الوراثي للخلايا اللبتومينينجية الوعائية. وعلاوة على ذلك، يمكن استخدام نفس التقنية لمعالجة مجموعة واسعة من الأسئلة البحثية، مثل التحقيق في دور اللبتومينينج في التنمية العصبية وانتشار التهاب السحايا البكتيري، من خلال الاستئصال الوراثي للجينات المتورطة بشكل مفترض في هذه الظواهر. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن دمج الإجراء مع نظام ضخ آلي للتسليم المستمر واستخدامه لتتبع حركة السائل النخاعي عن طريق حقن الجزيئات الموسومة بفلورية.
المقدمة
الخلايا الليبومينينجية هي مجموعة تشبه الخلايا الليفية من الخلايا المنظمة في طبقة رقيقة تتراكب في الدماغ وتعبر عن الجينات المتورطة في ربط الكولاجين (على سبيل المثال، Dcn و Lum)،وفي إنشاء حاجز في الدماغ بيننجيال (على سبيل المثال، Cldn11)1،2. الخلايا اللبتومينينجية متورطة في مجموعة واسعة من الوظائف الفسيولوجية، من الرقابة الصارمة على تصريف السائل النخاعي3 إلى توجيه السلف العصبي في الدماغالنامية 4,5. وقد اقترحت دراسة حديثة أيضا أن اللبتومينينجيات في حديثي الولادة قد تؤوي الخلايا شعاعية مثل غليا التي تهاجر ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت الموافقة على العمليات الجراحية المقدمة بموجب هذا القانون من قبل ستوكهولم نورا Djurförsöksetiska Nämnd ونفذت بالاتفاق مع المواصفات المقدمة من معهد البحوث (معهد كارولينسكا، السويد).
ملاحظة: يمكن تكييف الحقن داخل الجمجمة بمرونة لأغراض بحثية متعددة. نحن نقدم أدناه إجراء وضعت لتسمية بكفاءة الخلايا leptomeningeal لرسم خرائط مصير على أساس حقن endoxifen في خط الماوس المعدلة وراثيا تحمل R26R-tdTomatoe12 وCreER، وهذا الأخير تحت المروج Cx3013. ويمكن أن يتم وضع العلامات على هذه الخلايا من خلال حقن البنى الفيروسية باستخدام نفس الإجراء المبين أدناه. وأخيرا، يمكن استخدام هذا النهج لتتبع ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
حقن intracisternal من endoxifen في الفئران المعدلة وراثيا التعبير عن CreER تحت المروج Cx3013 ومراسل الفلورسنت لا يمكن اختزالها يسمح لإعادة تركيب محددة من الخلايا اللبتومينينغيال دون وضع علامة على السطح المجاورة Cx30 التعبير والخلايا الفلكية parenchymal في القشرة(الشكل 1). من أجل الوصول إلى الصهريج ماجنا ، يتم وضع الحيوان المُسَسَسَن بجسمه ورأسه بزاوية 120 درجة تقريبًا ، مما يسمح بتمديد الجزء الخلفي من رقبته(الشكل 1.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
البروتوكول المبين هنا يقدم إجراء مباشر واستنساخ لتسمية الخلايا اللولبية لرسم خرائط المصير. نحن نستخدم حقن intracisternal من endoxifen، المستقلب النشط من تاموكسيفين، للحث على التعبير عن مراسل tdTomato الفلورسنت في Cx30-CreER. R26R-tdTomato الفئران12,13.
بالمقارنة مع البروتوكولات الأخرى المستخدمة للوصول إلى السائل النخاعي من خلال الصهريج ماجنا9، يضمن نهجنا إدارة يدوية آمنة بفضل استخدام إبرة عازمة يمكن تثبيتها إلى .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ولا يعلن صاحبا البلاغ عن مصالح متنافسة.
شكر وتقدير
وقد دعمت هذه الدراسة منح من مجلس البحوث السويدي، والجمعية السويدية للسرطان، والمؤسسة السويدية للبحوث الاستراتيجية، وكنوت أوتش أليس والينبرغر ستفيلس، وبرنامج البحوث الاستراتيجية في الخلايا الجذعية والطب التجديدي في معهد كارولينسكا (ستراتريجين).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| وحدة التخدير | Univentor 410 | 8323102 | كاملة من المرذاذ والغرفة والأنابيب التي تتصل بالغرفة وحامل رأس الفأر |
| التخدير (Isoflurane) | باكستر ميديكال AB | 000890 | |
| Betadine | Sigma-Aldrich | PVP1 | |
| Carprofen | Orion Pharma AB | 014920 | الاسم التجاري Rymadil |
| Cyanoacrylate glue | Carl Roth | 0258.1 | استخدم خيوط حريرية 5-0 ، في |
| غراء الأنسجة Medbond | Stoelting | 50479 | |
| DMSO | Sigma-Aldrich | D2650 | |
| Endoxifen | Sigma-Aldrich | E8284 | |
| الإيثانول 70٪ | Histolab | 01370 | |
| حقنة هاميلتون (إبرة مشطوفة 30 جم) | هاميلتون | 80300 | |
| ليدوكائين | آسبن نورديك | 520455 | |
| حامل رأس فأر | Narishige International | SGM-4 | مع قطعة فم لعلاج التخبط الاستنشاقي. بدلا من ذلك ، استخدم إطارا تجسيميا |
| مقص | أدوات العلوم الدقيقة | 15009-08 | |
| ماكينة حلاقة | Aesculap | GT420 | |
| رماح امتصاص معقمة | أدوات العلوم الدقيقة | 18105-01 | مسحات القطن المعقمة هي أيضا خيار |
| جيد فاصل جراحي | الدقة العالمية | 501897 | |
| ملاقط | دومون | 11251-35 | |
| فيسكوتيرز | باوش & أمبير لوب نورديك AB | 541760 |
المراجع
- Vanlandewijck, M., et al. A molecular atlas of cell types and zonation in the brain vasculature. Nature. 554 (7693), 475-480 (2018).
- Whish, S., et al. The inner CSF-brain barrier: developmentally controlled access to t....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
