تم تطوير نموذج فأر Goldblatt معدل 2 كليب الكلى 1 (2K1C) باستخدام أنابيب البولي يوريثين لبدء تضيق الشريان الكلوي ، مما يؤدي إلى زيادة في التعبير عن الرينين وإصابة الكلى. هنا ، نصف إجراء مفصلا لإعداد ووضع الكفة على الشريان الكلوي لإنشاء نموذج ماوس 2K1C قابل للتكرار ومتسق.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نموذج فأر مصاب واحد من الكلى المعدل لتنظيم الرينين في تضيق الشريان الكلوي
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
تضيق الشريان الكلوي هو حالة شائعة في المرضى الذين يعانون من أمراض الأوعية الدموية التاجية أو الطرفية حيث يتم تنشيط نظام الألدوستيرون أنجيوتنسين الرينين (RAAS). في هذا السياق ، هناك تضييق في الشرايين الكلوية التي تحفز زيادة في التعبير عن الرينين وإطلاقه ، وهو البروتياز الذي يحد من المعدل في RAAS. الارتفاع الناتج في تعبير الرينين هو محرك معروف لارتفاع ضغط الدم الوعائي ، وغالبا ما يرتبط بإصابة الكلى وتلف الأعضاء النهائية. وبالتالي ، هناك اهتمام كبير بتطوير علاجات جديدة لهذه الحالة. الآلية الجزيئية والخلوية للسيطرة على الرينين في تضيق الشريان الكلوي ليست مفهومة تماما وتستدعي المزيد من التحقيق. للحث على تضيق الشريان الكلوي في الفئران ، تم تطوير نموذج فأر Goldblatt معدل 2 كليب الكلى 1 (2K1C). تم تضيق الكلى اليمنى في الفئران من النوع البري وتم استخدام الفئران التي تعمل بشكل صوري كسيطرة. بعد تضيق الشريان الكلوي ، حددنا تعبير الرينين وإصابة الكلى. تم حصاد الكلى ، وتم استخدام القشرة الطازجة لتحديد تعبير البروتين والحمض النووي الريبوزي المرسال عن الرينين. هذا النموذج الحيواني قابل للتكرار ويمكن استخدامه لدراسة الاستجابات الفسيولوجية المرضية والمسارات الجزيئية والخلوية المشاركة في ارتفاع ضغط الدم الوعائي وإصابة الكلى.
المقدمة
تضيق الشريان الكلوي (RAStenosis) هو مشكلة مستعصية تؤثر على حوالي 6٪ من الأشخاص الذين تزيد أعمارهم عن 65 عاما وفي ما يصل إلى 40٪ من الأشخاص المصابين بأمراض الأوعية الدموية التاجية أو الطرفية 1,2. العلاجات الحالية للمرض محدودة. لذلك ، هناك حاجة ماسة لتطوير علاجات جديدة لعلاج ارتفاع ضغط الدم الوعائي أو ارتفاع ضغط الدم المقاوم الناجم عن RAStenosis. نظام الألدوستيرون أنجيوتنسين الرينين (RAAS) هو المسار الرئيسي المشارك في التسبب في ارتفاع ضغط الدم الناجم عن RAStenosis أو ارتفاع ضغط الدم الوعائي 3,4. العلاجات المعروفة التي تستهدف RAAS ، مثل مثبطات الإنزيم الم....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تم إيواء الفئران ورعايتها في قسم رعاية الحيوان في المركز الطبي بجامعة فاندربيلت (VUMC) باتباع إرشادات المعاهد الوطنية للصحة (NIH) ودليل رعاية واستخدام المختبر ، وزارة الصحة والخدمات الإنسانية الأمريكية. تمت الموافقة على جميع الإجراءات الحيوانية من قبل لجنة VUMC المؤسسية لرعاية واستخدام الحيوانات قبل بدء التجارب.
1. إعداد الحيوان وتشريحه
- قم بتشغيل عامل النبت ومضخة المياه في وسادة التدفئة قبل حوالي 30 دقيقة من بدء الجراحة.
- قطع أنابيب البولي يوريثين بطول 0.5 مم باستخدام مشرط حاد. قم بإزالة 0.2 مم من المحيط عن طريق إجراء قطع بالطول لإنشاء كفة.
ملاحظة: هذا جزء مهم من إجراء تضيق الشريان الكلوي الذي يتطلب دقة فائقة واهتماما ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يزيد انقباض الشريان الكلوي من تعبير الرينين في الكلى الضيقة، بينما يقمع التعبير في الكلى المقابلة. الكلى اثنين من مقطع واحد (2K1C) أو نموذج Goldblatt من تضيق يحفز زيادة التعبير عن الرينين وإصابة الكلى. ومن المسلم به أن هذا هو أفضل نموذج تمثيلي لتضيق الشريان الكلوي من جانب واحد في البشر.
تم قياس التعبير عن الرينين والبرورينين (سلائف الرينين) باستخدام النشاف المناعي. تظهر البيانات أن تعبير الرينين والبرورينين زاد في الكلى الضيقة، مقارنة بالكلى المتعارضة والوهمية، مما يشير إلى أن الكفة كانت تضيق .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
تضيق الشريان الكلوي هو سبب مهم لارتفاع ضغط الدم الثانوي أو المقاوم ، وإصابة الكلى 1,29. تم استخدام نموذج Goldblatt ثنائي الكلى مقطع واحد (2K1C) لدراسة ارتفاع ضغط الدم الوعائي الناجم عن RAStenosis 1،17،18،19. وقد أظهر عدد من الدراسات السابقة باستخدام نماذج الحيوانات المختلفة أن تضيق الشريان الكلوي هو محفز قوي للإفراط في التعبير عن الريني.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ولا يعلن المؤلفون عن أي تضارب في المصالح، سواء كانت مالية أو غير مالية.
شكر وتقدير
تم دعم البحث من قبل منحة تطوير علماء أبحاث NHLBI (1K01HL135461-01) إلى JAG. شكرا لديفيد كارمونا - بيريو وإيزابيل أدارفي - رينجيفو على مساعدتهما التقنية.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| جل دايت | شفاف H2< / sub>O | Diet-Gel 76A | نظام غذائي للتعافي من الجراحة |
| EMC وسادة صلبة ساخنة | Hallowell | 000A2788B | تم استخدام وسادات التدفئة للحفاظ على دفء الفئران |
| خياطة النايلون | Ethilon Ethicon | 662G | 4-0 (1.5 متري) ، تم استخدام هذه الخيط لإغلاق الصفاق والجلد |
| خياطة نايلون | Ethilon Ethicon | 2815 G | 8-0 (0.4 متري) ، تم استخدام هذه الخيط لإغلاق الكفة لربط وتضييق الشريان |
| Germinator 500 | Braintree Scientific Inc. | GER 5287 | تعقيم الأدوات الجراحية بين العمليات الجراحية |
| Ketoprofen | Zoetis | Ketofen | Painkiller |
| Polyurethane | Braintree Scientific Inc. | MRE-025 | تم استخدام هذا الأنبوب لبدء التضيق |
| بوفيدون اليود مطهر مدلين | MDS093901 | تم تطبيقه بعد إزالة الشعر والجراحة على الجلد | |
| Reflex 7 Clip Applier | Roboz Surgical Instrument Co | 204-1000 | استخدام أداة التثبيت هذه لتطبيق المشبك في حالة خروج واحدة أو أكثر |
| من الغرز ستائر منشفة معقمة | Dynarex | 4410 | تم استخدامه كمغطية سرير للفئران أثناء الجراحة |
| مرهم مضاد حيوي ثلاثي | Medi-First | 22312 | |
| مضخة مياه | Stryker | T / مضخة المتخصصين | تستخدم لتسخين وتدوير الماء في وسادة التسخين الصلبة للحفاظ على دفء الفئران أثناء الجراحة وبعدها |
المراجع
- Kashyap, S., et al. Blockade of CCR2 reduces macrophage influx and development of chronic renal damage in murine renovascular hypertension. American Journal of Physiology-Renal Physiology. 310 (5), 372-384 (2016).
- Wang, W., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
