نقدم نهج أنبوب داخلي لتقنية الكفة لزراعة القلب غير الرحمي الماوس لمساعدة إيفرت السفينة على الكفة. وجدنا أن التعاون بين اثنين من الجراحين ذوي الخبرة بشكل ملحوظ يقصر وقت العملية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
* These authors contributed equally
نقدم نهج أنبوب داخلي لتقنية الكفة لزراعة القلب غير الرحمي الماوس لمساعدة إيفرت السفينة على الكفة. وجدنا أن التعاون بين اثنين من الجراحين ذوي الخبرة بشكل ملحوظ يقصر وقت العملية.
تم إجراء عملية زرع القلب مورين لأكثر من 40 عاما. مع التقدم في الجراحة المجهرية ، تم استخدام تقنيات جديدة معينة لتحسين الكفاءة الجراحية. في مختبرنا، قمنا بتحسين تقنية الكفة مع خطوتين رئيسيتين. أولاً، استخدمنا تقنية الأنبوب الداخلي لإدخال أنبوب داخلي مؤقت في الوريد الوداجي الخارجي والأوعية الدموية الشريان السباتي لتسهيل تحويل الوعاء على الكفة. ثانيا، قمنا بزراعة القلب غير الرحمية بالكامل من خلال تعاون جراحين من ذوي الخبرة. وقد خفضت هذه التعديلات بشكل فعال وقت التشغيل إلى 25 دقيقة، مع نسبة نجاح 95٪. في هذا التقرير، نحن وصف هذه الإجراءات بالتفصيل وتقديم فيديو إضافي. ونحن نعتقد أن هذا التقرير عن تحسين تقنية الكفة سوف تقدم التوجيه العملي لزرع القلب غير الرحمي المورين، وسوف تعزز فائدة هذا النموذج الماوس للبحوث الأساسية.
وكان إنشاء زرع القلب الماوس غيريروتوبيك من خلال نهاية إلى نهاية anastomosis داخل البطن في عام 1973 معلما رئيسيا في البحوث الأساسية مناعة زرع1. قدم هذا النموذج أداة هامة وصالحة لتحليل آليات الإقفار إصابة2, رفض مناعي , و التسامح3,4. ومع ذلك، فإن الطبيعة المعقدة والمستهلكة للوقت للجراحة وكذلك احتمال الإصابة بالعدوى يمكن أن تؤدي إلى الالتصاقات البطنية الحادة حول العملية وردود الفعل الالتهابية، مما يؤدي إلى انخفاض كفاءة نموذج زرع القلب غيريروتوبيك.
وقد وصفت تقنية زرع القلب غير الرحمي عنق الرحم لأول مرة من قبل تشن في عام 19915. في هذا النموذج، يتم استنشاق الوريد الوداجي الخارجي للمتلقي إلى الشريان الرئوي للكسب غير المشروع ويتم استئصال الشريان السباتي إلى الشريان الأورطي الصاعد. المزايا الرئيسية لهذا الأسلوب هي الراحة للرصد والحد من الصدمة للمتلقي. في نفس العام، وصف ماتسورا تقنية محسنة، حيث تم ثني نهاية الوريد الوداجي الخارجي والشريان السباتي فوق كفة تفلون وثابتة بأربطة حريرية محيطية6. كما قام بعض الباحثين بسد الكفة إلى الشريان الرئوي الأيمن في قلب المتبرع قبل إدخال الكفة في الوريد الوداجي الخارجي للمتلقي7. حتى الآن، وقد تم تطبيق تقنية الكفة على نطاق واسع في مختلف نماذج زرع الرّاقي الوعائيّة، بما في ذلك تلك الخاصة بالرئتين8،الكبد9،والزرع الكلوي10.
حتى الآن، هناك العديد من الصعوبات المرتبطة تقنية الكفة. على سبيل المثال، من الصعب على الشريان السباتي إلى إيفرت على الكفة بسبب مرونة إضافية، مما أدى إلى الأنسجة التقليب إلى الوراء. وبالتالي، قد تكون هناك حاجة إلى ممارسة إضافية ومتوسعة مجهرية لإكمال هذه الخطوة. بالإضافة إلى ذلك، يمكن أن يستغرق إعداد الأوعية العنقية ما يصل إلى 25 دقيقة.
لحل هذه القضايا، نقدم تقنية الأنبوب الداخلي، والتي تعتمد على تقنية الكفة وتشمل تثبيت الكفة على الوريد الوداجي الخارجي والشريان السباتي باستخدام أنبوب داخلي للمساعدة في الإباء من جدار الوعاء. وبالإضافة إلى ذلك، مع التدريب البسيط، يتم تخفيض إعداد المتلقي إلى 15.5 دقيقة. هذه التقنية يقلل من تعقيد العملية ولا تتطلب ممارسة إضافية أو استخدام موسع الأوعية الدموية. ويمكن تطبيقها في جميع البحوث المناعية زرع، وخاصة للتحقق من طرف ثالث التسامح المناعي الذي يتلقى المتلقي اثنين من allografts القلب، واحد داخل البطن والآخر في الرقبة11. كما نوصي بالتعاون بين جراحين ماهرين لإنشاء هذا النموذج، حيث يقوم أحد الجراحين بإعداد الحيوان المتلقي والآخر الذي يقوم بحصاد وزرع قلب المتبرع. ويمكن لهذا التعاون تقصير وقت التشغيل إلى 25 دقيقة. باستخدام هذا الإجراء الأمثل، أنشأنا syngeneic، الزوج12،,13،,14،,15،,16،,17،,18،,19،وxenogeneic فأر زرع القلب نماذج20.
وكان الأساس المنطقي لتطوير تقنية الأنبوب الداخلي هو تقليل وقت التشغيل لإنشاء نموذج زرع قلب الفأر بمعدل نجاح مرتفع. تحسين نموذج زراعة القلب العنقي يسهل الحصول على معدلات نجاح عالية في فترة قصيرة من وقت الجراحة مقارنة مع تقنية الخياطة التقليدية والكفة21. علاوة على ذلك، يمكن لنموذج التعاون تقليل الوقت الإقفار الدافئ للقلب المانح مقارنة بالعمليات الجراحية التي تتم مع مشغل واحد.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الحيوانات (BALB / c، C57BL/6، الذكور، 8-12 أسبوعا) يتم إيواء في منشأة محددة خالية من مسببات الأمراض في جامعة شيامن مركز الحيوانات المختبرية. ويستخدم C57BL/6 كمتلقي ويستخدم BALB/c كمتبرع. يتم تنفيذ جميع الإجراءات وفقا للمبادئ التوجيهية للجنة الرعاية واستخدام الحيوان المؤسسية (IACUC).
ملاحظة: مجموعة من الأدوات الجراحية الدقيقة، بما في ذلك مقص الصغرى، ملقط مستقيمة الصغرى، ملقط منحنية الصغرى وأصحاب الإبرة الصغيرة، ضرورية للعملية (الجدول والمواد، الشكل 1B، C، D، E). زوج واحد من المشابك البلدغ واحد الاستخدام(الشكل 1F)وهناك حاجة. يتم إعداد الأصفاد اثنين للورد الوداجي الخارجي والشريان السباتي عن طريق قطع أنابيب البولي أميد المخصصة مع مشرط رقم 10 تحت المجهر. قطر الوريد والشريان هو 0.9 مم و 0.55 ملم ، على التوالي. بالإضافة إلى ذلك ، فإن قطر الأنبوب الداخلي للوقي المقابل للرقي هو 0.6 مم ، وهذه من الأنبوب الداخلي للصفة الشريانية المقابلة هي 0.28 مم (الشكل 1G).
1 - إعداد المتلقي
2 - إعداد المانحين
3. زرع القلب
4. الرعاية بعد الجراحة وتقييم الكسب غير المشروع
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
وقت العملية الجراحية
بعد التدريب، يمكن للجراح الماهر إجراء العملية بنجاح في غضون 35 دقيقة باستخدام تقنية الأنبوب الداخلي، حيث يلزم حوالي 15.5 دقيقة لإعداد المتلقي، و10.9 دقيقة لإعداد المتبرع، و4.4 دقيقة مطلوبة لمصابي حشرات القلب المانحة. يتم تقليل وقت الإقفار البارد والدافئ (من إعداد المانحين إلى زرع القلب) إلى 15.3 دقيقة مقارنة بالعملية باستخدام تقنية الكفة دون تقنية الأنبوب الداخلي وتقنية الخياطة(الجدول 1)21.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
نماذج زرع قلب الماوس هي أدوات مهمة لأبحاث علم المناعة زرع، والأدوات والمواد اللازمة لتقييم الآليات المناعية لهذا النموذج وعدد كبير من الفئران المعدلة الجينات المتاحة. ومع ذلك، فإن التحديات التقنية المجهرية، مثل خياطة السفن والإيجاز، حدت من استخدامها على نطاق واسع. في هذه الدراسة، قمنا بدراسة بعض التحديات التقنية الأساسية لزراعة القلب murine وحصلنا على نتائج جيدة. خطوة حاسمة من البروتوكول إدخال أنبوب داخلي في التجويف كدعامة ل إيفرت جدار السفينة فوق الكفة. هذه الخطوة الأمثل يحل التحدي التقني من everting الأوعية الشريان بسب...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
ليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.
وقد دعم هذا العمل مشروع البحوث المشتركة للتثقيف الصحي في مقاطعة فوجيان (WKJ2016-2-20)، والمؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (81771271 و81800664)، والبرنامج الوطني للبحث والتطوير الرئيسي في الصين (2018YFA010) 8304) ومشروع التعليم والبحث العلمي للمعلمين الشباب ومتوسطي العمر في مقاطعة فوجيان (JAT170714)، ومؤسسة العلوم الطبيعية في مقاطعة هونان الصينية (2019JJ50842) والمواهب الشبابة Huxiang من مقاطعة هونان (2019RS2013).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| صفعة الشريان | أنبوب البولي أميد عصامي. القطر: 0.55 مم ، الطول: 1.0 مم | ||
| قطر الدائرة: 0.28 مم | |||
| ملقط منحني صغير | شنغهاي للأدوات الطبية (المجموعة) المحدودة ، مصنع الأدوات الجراحية | WA3050 | 1/8 قوس ، طرف 0.3 مم بدون خطاف |
| حاملات إبرة صغيرة | شنغهاي للأدوات الطبية (المجموعة) المحدودة ، مصنع الأدوات الجراحية | WA2050 | مقص صغير ذو طرف 0.2 مم |
| شنغهاي للأدوات الطبية (المجموعة) المحدودة ، مصنع الأدوات | الجراحيةWA1050 | مستقيم ، طول الشفرة: 10 مم | |
| ملقط مستقيم صغير | شنغهاي للأدوات الطبية (المجموعة) المحدودة ، مصنع الأدوات الجراحية | WA3060 | طرف 0.15 مم بدون خطاف |
| Scanlan Vascu-Statt Bulldog Clamps | Scanlan International Inc | 1001-531 | ضغط التثبيت 20 & ndash ؛ 25 جرام |
| الكفة الوريد | أنبوب البولي أميد عصامي. القطر: 0.9 مم ، الطول: 1.2 مم | ||
| القطر: 0.6 ملم |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.