يتم تقديم بروتوكول لمنع تدفق اللمفية عن طريق خياطة جراحية من الأوعية اللمفاوية afferent.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
منع تدفق اللمفاوية عن طريق خياطة الأوعية اللمفاوية Afferent في الفئران
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الأوعية اللمفاوية حاسمة في الحفاظ على توازن سوائل الأنسجة وتحسين الحماية المناعية عن طريق نقل المستضدات، السيتوكينات، والخلايا إلى استنزاف الغدد الليمفاوية (LNs). انقطاع تدفق اللمفية هو وسيلة هامة عند دراسة وظيفة الأوعية اللمفاوية. الأوعية اللمفاوية الموفاوية من اللوحات اللمفية المورين إلى الغدد الليمفاوية الزفيرة (pLNs) هي محددة جيداً على أنها الطرق الوحيدة لتصريف الغدد الليمفاوية في النفصال. يمكن خياطة هذه الأوعية اللمفاوية afferent منع تدفق اللمفية بشكل انتقائي إلى pLNs. هذه الطريقة تسمح للتدخل في تدفق الليمفاوية مع الحد الأدنى من الضرر للخلايا البطانية اللمفاوية في التصريف pLN، والأوعية اللمفاوية afferent، فضلا عن غيرها من الأوعية اللمفاوية في جميع أنحاء المنطقة. وقد استخدمت هذه الطريقة لدراسة كيفية تأثير اللمفية على النفّة الغدد الليمفاوية العالية (HEV) والتعبير chemokine في LN، وكيف تتدفق اللمفية من خلال الأنسجة الدهنية المحيطة LN في غياب الأوعية اللمفاوية الوظيفية. مع الاعتراف المتزايد لأهمية وظيفة اللمفاوية، وسوف يكون لهذه الطريقة تطبيقات أوسع لزيادة كشف وظيفة الأوعية اللمفاوية في تنظيم البيئة الدقيقة LN والاستجابات المناعية.
المقدمة
يوفر التنظيم المكاني للنظام اللمفاوي الدعم الهيكلي والوظيفي لإزالة السوائل خارج الخلية ومضادات النقل والخلايا التي تقدم المستضدات (APCs) إلى LNs المستنزفة. الأوعية اللمفاوية الأولية (تسمى أيضا الشعيرات الدموية اللمفاوية) هي نفاذية للغاية بسبب تقاطعاتها بين الخلايا غير المترابطة ، والتي تسهل جمع فعال من السوائل والخلايا وغيرها من المواد من المساحات خارج الخلية المحيطة1. الأوعية اللمفاوية الأولية دمج في جمع الأوعية اللمفاوية، والتي لديها تقاطعات ضيقة بين الخلايا، وغشاء الطابق السفلي المستمر، وتغطية العضلات اللمفاوية. جمع الأوعية اللمفاوية هي المسؤولة عن نقل اللمف التي تم جمعها إلى LNs استنزاف والعودة في نهاية المطاف الليمفاوية إلى الدورة الدموية<....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
يجب أن يتم اعتماد جميع الأعمال الحيوانية من قبل لجنة الأخلاقيات المؤسسية والحكومية ومناولة الحيوانات. هذه جراحة غير نجاة
1- إعداد المواد
- إعداد 100 مل من 70٪ الإيثانول عن طريق خلط 70 مل من 100٪ الإيثانول مع 30 مل من الماء المعقم. الأوتوكلاف جميع الأدوات الجراحية قبل الجراحة والحفاظ على الأدوات في 70٪ الإيثانول قبل وأثناء الجراحة للحفاظ على التعقيم.
- إعداد جهاز حقن.
- قطع ~ 30 سم من أنابيب البولي إيثيلين (0.28 ملم في القطر). قم بتوصيل طرف إبرة 30 G × 1/2 (إبرة A) إلى طرف واحد من أنابيب البولي إيثيلين. طرد بعناية آخر 30 G × 1/2 إبرة (إبرة B) وربط الجانب المكسور إلى الطرف الآخر من أنابيب البولي إيثيلين.
- إرفا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
وقد استخدمت خياطة الأوعية اللمفاوية في الدراسات السابقة15,16,17,19, حيث كان بمثابة أداة هامة لدراسة وظيفة تدفق الليمفاوية قبل علم الأحياء الجزيئية لالأوعية اللمفاوية كان مفهوما بشكل أفضل. حظر تدفق اللمفية يقطع التوازن LN، الأمر الذي يؤدي إلى فقدان HEVs التعبير الجيني الحرجة اللازمة للمعالجة الليمفاوية الأمثل إلى LN15،16،
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
سيكون لحجب تدفق اللمفية تطبيقات واسعة في معالجة تسليم المستضد إلى LN في ظروف صحية ومريضة. من الممكن استخدام هذه الطريقة للتحكم في توقيت تسليم المستضد من أجل دراسة كيفية استمرار تدفق الليمفاوية ينظم الاستجابة المناعية في استنزاف LNs. ويمكن أيضاً استخدام هذه الطريقة لانقطاع تدفق اللمفية لدراسة كيفية تأثير اللمفاوة على تجزئة الخلية، وتنشيط الخلية، وترحيل الخلايا، وتفاعلات الخلايا الخلوية في LN.
الفئران على وجه التحديد التعبير عن مستقبلات السم الخناق البشري (DTR) في الخلايا البطانية الليمفاوية.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ولا يوجد لدى أصحاب البلاغ أي تضارب في المصالح للكشف عنه.
شكر وتقدير
يشكر المؤلفون آفا زاردينشاد على تدقيقها في المخطوطة. ويدعم هذا العمل المعهد الكندي للبحوث الصحية (CIHR، PJT-156035)، والمؤسسة الكندية للابتكار من أجل SL (32930)، والمؤسسة الوطنية الصينية للعلوم الطبيعية ليوخيا لين (81901576).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| <قوي >0.9٪ كلوريد الصوديوم الملحي < / قوي > | باكستر | JB1323 | |
| < قوي > 100٪ إيثانول < / قوي > | خدمات التوزيع بجامعة جرينفيلد العالمية | في كالجاري UN1170. | |
| <قوي > كريم مزيل الشعر < / قوي > | ناير | تركيبة حساسة لإزالة الشعر Cr & egrave ؛ لي بزيت اللوز الحلو وزيت الأطفال ، 200 مل. أو منتج مماثل. | |
| <قوي> إيفانز بلو صبغة | سيجما لايف ساينس | E2129-10G | للحصول على 1 مل من صبغة إيفانز الزرقاء ، أضف 0.1 جرام من إيفانز الأزرق إلى 10 مل PBS. سيتم ترشيح محلول Evens Blue من خلال مرشحات 0.22 مم والحفاظ عليه معقما في 1 مل. |
| <قوي> أيزومر إيزوثيوسيانات الفلوريسئين الأول (FITC) < / strong> | Sigma Life Science | F7250-1G | |
| ملقط دومون # 3< / strong> | WPI | 500337 | |
| ملقط دومون # 5< / strong> | WPI | 500233 | |
| < قوي > جهاز حقن < / قوي> | قم بتوصيل أحد طرفي أنابيب البولي إيثيلين ب 30G & times ؛ ½ إِبْرَة. نعلق حقنة 1 مل تيرابايت على الإبرة. إزاحة عمود الإبرة من 30G & مرات أخرى ؛ ½ إِبْرَة. أدخل الطرف الحاد ل 30G & مرات ؛ ½ عمود الإبرة في الطرف الآخر من الأنبوب. القطر الداخلي لهذا الأنبوب 0.28 مم. وبالتالي ، فإن 1.6 سم من السائل في الأنبوب هو 1 مل. | ||
| <قوي>حقنة الأنسولين< قوية> بيكتون | ديكنسون وشركاه (BD) | 329461 | |
| IRIS Forcep مستقيم< / قوي> | WPI | 15914 | |
| <قوي>قزحية قزحية< / قوي> | WPI | 14218-G | |
| Ketamine< / strong> | Narketan | DIN 02374994 | عادة ما يخضع موردو الكيتامين والزيلازين للتنظيم المؤسسي والحكومي. |
| <قوي >إبر (26 جيجا × 3 / 8) < / قويا > | بكتون ديكنسون وشركاه (دينار بحريني) | 305110 | |
| < قوي > إبر (30 جيجا × 1 / 2) < قويا > | بكتون ديكنسون وشركاه (BD) | 305106 < | |
| قوي >حامل إبرة باتون < / قوي> | ROBOZ | RS6403 | مستقيم ، بدون قفل ؛ مسننة |
| < قوية > ملحية مخزنة بالفوسفات (PBS) < / قوية > | سيجما لايف ساينس | P4417-100TAB | |
| <قوية >أنابيب البولي إيثيلين < / قوية > | بكتون ديكنسون وشركاه (BD) | 427401 | |
| < قوي > شريط جراحي (1.25 سم × 9.1 م) < / قوي > | Transpore | 1527-0 | |
| <قوي> شريط جراحي (2.5 سم × 9.1 م) < / قوي> | Transpore | 1527-1 | |
| خياطة < / قوي> | ديفيس وجيك سياناميد كندا | 11/04 | 0.7 متري أحادي البولي بروبيلين |
| < قوي >حقنة (1 مل) < / قوي> | بكتون ديكنسون وشركاه (دينار) | 309659 < | |
| قوي > مقص VANNAS < / قوي > | أدوات الدقة العالمية (WPI) | 14122-G | |
| Xylazine | Rompun | DIN02169606 | عادة ما يخضع موردو الكيتامين والزيلازين للتنظيم المؤسسي والحكومي. |
| <قوي>المعدات< قوي> | |||
| <قوي>تشريح المجهر | أوليمبوس | أوليمبوس S261 (522-STS OH141791) مع مصدر الضوء: أوليمبوس هايلايت 3100 | |
| <قوي>مجهر متحد البؤر | لايكا | SP8 |
المراجع
- Pflicke, H., Sixt, M. Preformed portals facilitate dendritic cell entry into afferent lymphatic vessels. The Journal of Experimental Medicine. 206, 2925-2935 (2009).
- Schmid-Schonbein, G. W. Microlymphatics and lymph flow. Physiological Reviews. 70
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
