يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

التحليل المرضي لنقائل الرئة بعد الحقن الجانبي الوريد الذيل من الخلايا السرطانية

9.3K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/61270

⸱

مايو 20, 2020

 ,  ,  , 
1Department of Radiation Oncology, Arthur G. James Comprehensive Cancer Center and Richard L. Solove Research Institute, The Ohio State University Medical Center, 2Department of Veterinary Biosciences, Comparative Pathology and Digital Imaging Shared Resource, The Ohio State University

في هذه المقالة

إشعار تصحيح

Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice

ملخص

غالبا ما يستخدم الحقن الوريدي للخلايا السرطانية في أبحاث الانبثاث ، ولكن عبء الورم النقيلي قد يكون من الصعب تحليله. هنا، ونحن نظهر نموذج حقن ذيل الوريد من الانبثاث وتشمل نهجا جديدا لتحليل عبء ورم الرئة النقيلي الناتجة.

الملخص

الانبثاث، السبب الرئيسي للمراضة والوفيات بالنسبة لمعظم مرضى السرطان، يمكن أن يكون تحديا لنموذج قبل السريرية في الفئران. تتوفر نماذج قليلة من الانبثاث التلقائي. وبالتالي ، فإن نموذج الانبثاث التجريبي الذي ينطوي على حقن الوريد الخلفي لخطوط الخلايا المناسبة هو الدعامة الأساسية لأبحاث الانبثاث. عندما يتم حقن الخلايا السرطانية في الوريد الذيل الجانبي ، فإن الرئة هي موقعها المفضل للاستعمار. أحد القيود المحتملة لهذه التقنية هو التحديد الكمي الدقيق لعبء ورم الرئة النقيلي. في حين أن بعض المحققين عد macrometastases من حجم محدد مسبقا و / أو تشمل micrometastases بعد تقسيم الأنسجة، والبعض الآخر تحديد منطقة الآفات النقيلي بالنسبة لمنطقة الأنسجة العادية. كل من هذه الطرق الكمي يمكن أن تكون صعبة للغاية عندما يكون العبء النقيلي عالية. هنا، ونحن نظهر نموذج حقن الوريد من الانبثاث الرئة تليها طريقة متقدمة لقياس عبء الورم النقيلي باستخدام برنامج تحليل الصورة. تسمح هذه العملية بالتحقيق في معلمات متعددة لنقطة النهاية ، بما في ذلك متوسط حجم الانبثاث ، والعدد الإجمالي للنقائل ، وإجمالي منطقة الانبثاث ، لتوفير تحليل شامل. وعلاوة على ذلك، تم استعراض هذه الطريقة من قبل مجلس الأمراض البيطرية معتمدة من قبل الكلية الأمريكية لأخصائيي الأمراض البيطرية (SEK) لضمان الدقة.

المقدمة

على الرغم من كونه عملية معقدة للغاية وغير فعالة1 ، فإن الانبثاث هو مساهم كبير في مراضة ووفيات مرضى السرطان2. وفي الواقع، تعزى معظم الوفيات المرتبطة بالسرطان إلى الانتشار النقيلي للمرض 3،4. من أجل أن تنتشر الخلايا السرطانية بنجاح ، يجب أن تنفصل عن الموقع الأساسي ، وتغزو من خلال ستروما المجاورة ، وتتغلغل في الدورة الدموية أو اللمفاويات ، والسفر إلى السرير الشعري لموقع ثانوي ، والبذخ في الأنسجة الثانوية ، وتتكاثر أو تنمو لتشكيل الآفات النقيلية5. وكان استخدام نماذج الماوس حاسما لتعزيز فهم الآليات الجزيئية المسؤولة عن البذر النقيلي والنمو6،7. هنا، ونحن نركز على الانبثاث سرطان الثدي، والتي غالبا ما تستخدم نماذج الماوس المعدلة وراثيا، فضلا عن أساليب زرع - كل مع مجموعة خاصة بهم من المزايا والقيود.

نماذج الورم الثديي المعدلة وراثيا الاستفادة من المروجين الغدة الثديية محددة، بما في ذلك MMTV-LTR (الماوس فيروس الورم الثديي تكرار محطة طويلة) وWAP (بروتين مصل اللبن الحمضية)، لدفع التعبير عن المتحولين جنسيا في ظهارة الثديي8. وقد تم التعبير عن الأورام المتجانسة بما في ذلك مستضد بوليوما تي الأوسط (PyMT) ، ErbB2 / Neu ، c-Myc ، Wnt-1 ، وفيروس سيميان 40 (SV40) بهذه الطريقة9،10،11،12،13 ، وبينما هذه النماذج الوراثية مفيدة لدراسة بدء الورم الأولي وتطوره ، إلا أن القليل منها ينتشر بسهولة إلى الأعضاء البعيدة. وعلاوة على ذلك، فإن نماذج الماوس الوراثية هذه غالبا ما تكون أكثر تكلفة والوقت باهظة من نماذج الانبثاث التلقائي أو التجريبي. نظرا للحد من معظم نماذج الأورام الثديية المعدلة وراثيا لدراسة الانبثاث ، أصبحت تقنيات الزرع طرقا جذابة لدراسة هذه العملية المعقدة. وهذا يشمل orthotopic, ذيل الوريد, داخل القلب, وحقن داخل الجمجمة من خطوط الخلايا المناسبة.

على الرغم من أن العديد من خطوط خلايا سرطان الثدي تنتشر بسهولة بعد الحقن التقويمي في وسادة الدهون الثديية14,15 ، فإن اتساق واستنساخ عبء الورم النقيلي يمكن أن يكون تحديا ، ويمكن أن تكون مدة هذه الدراسات على مدار عدة أشهر. لتقييم الانبثاث الرئوي، على وجه الخصوص، الحقن الوريدي في الوريد الذيل غالبا ما يكون طريقة أكثر استنساخا وفعالة من حيث الوقت مع انتشار النقيلي التي تحدث عادة في غضون بضعة أسابيع. ومع ذلك ، بما أن نموذج الحقن الوريدي يتجاوز الخطوات الأولية لسلسلة النقيلي ، يجب توخي الحذر في تفسير نتائج هذه الدراسات. في هذه المظاهرة، نعرض حقن الوريد الذيل من الخلايا السرطانية الثديية جنبا إلى جنب مع طريقة دقيقة وشاملة للتحليل.

على الرغم من أن مجتمع الأبحاث قد أحرز تقدما كبيرا في فهم العملية المعقدة للانبثاث سرطان الثدي، ويقدر أن أكثر من 150،000 امرأة حاليا سرطان الثدي النقيلي16. من بين المصابين بسرطان الثدي في المرحلة الرابعة، يعاني >36٪ من المرضى من انبثاث الرئة17؛ ومع ذلك، يمكن أن يختلف نمط وحدوث الانبثاث الخاصة بالموقع استنادا إلى النوع الفرعي الجزيئي18,19,20,21. المرضى الذين يعانون من انبثاث الرئة المرتبطة بسرطان الثدي لديهم متوسط البقاء على قيد الحياة من 21 شهرا فقط تسليط الضوء على الحاجة إلى تحديد العلاجات الفعالة والمؤشرات الحيوية الجديدة لهذا المرض17. استخدام نماذج الانبثاث التجريبية، بما في ذلك الحقن الوريدي للخلايا السرطانية، سوف تستمر في تعزيز معرفتنا بهذا التحدي السريري الهام. عند دمجها مع علم أمراض التصوير الرقمي وطريقة تحليل عبء ورم الرئة النقيلي الموصوف في هذا البروتوكول ، فإن حقن الوريد الخلفي هي أداة قيمة لأبحاث الانبثاث لسرطان الثدي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

يتبع استخدام الحيوان لوائح الموارد الحيوانية في مختبر الجامعة (ULAR) بموجب لجنة الرعاية والاستخدام المؤسسية للحيوانات (IACUC) - البروتوكول المعتمد 2007A0120-R4 (PI: Dr. Gina Sizemore).

1. حقن الوريد الذيل من خلايا سرطان الثدي

  1. إعداد الخلايا والمحاقن للحقن
    1. لوحة عدد مناسب من الخلايا على أساس عدد الفئران وتركيز الخلايا لاستخدامها.
      ملاحظة: عدد الخلايا حقن والوقت لتطوير الانبثاث سوف تعتمد على خط الخلية المستخدمة، وسوف تحتاج إلى تحسين. في هذه المظاهرة، يتم حقن 1 × 106 خلايا MDA-MB-231 عن طريق الوريد في فئران NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG)، ويلاحظ وجود آفات رئوية بالمنظار الكلي في موعد لا يتجاوز 24 يوما بعد الحقن. بالنسبة لخط الخلية السرطانية MVT1 murine mammary17 ، يتم حقن 3 × 106 خلايا في فئران FVB / N المختصة بالمناعة مع العديد من الانبثاث الرئوي الذي لوحظ من قبل 14 days22،23.
    2. أسبيرات وسائل الإعلام وشطف لوحات الخلية مع برنامج تلفزيوني 1x. جرب الخلايا في الحد الأدنى من الحجم، إضافة حجم مناسب من الوسائط، وعدد الخلايا باستخدام مقياس الدم أو طريقة أخرى مفضلة. يمكن استخدام التريبان الأزرق (0.4٪) أو غيرها من الأصباغ الحية / الميتة لتحديد عدد الخلايا القابلة للتطبيق.
    3. بيليه الخلايا عن طريق الغزل في 180 × ز لمدة 5 دقائق.
    4. Resuspend العدد المناسب من الخلايا في برنامج تلفزيوني 1x عقيمة بحيث يتم حقن حجم 100 ميكرولتر لكل فأر. الحفاظ على تعليق الخلية على الجليد للحفاظ على البقاء.
    5. قبل الحقن، إعادة ضغط الخلايا بدقة مع ماصة 200 ميكرولتر أو 1 مل لتجنب تكتل. وضع 100 ميكرولتر في حقنة الأنسولين 28 غرام (انظر جدول المواد).
    6. القضاء على أي فقاعات الهواء عن طريق الحفاظ على حقنة عمودية، والتنصت على الحقنة، وضبط ببطء المكبس. حقن فقاعات الهواء في الوريد من المرجح أن يسبب انسداد الهواء / الغاز التي يمكن أن تكون قاتلة.
  2. حقن ذيل الوريد الجانبي
    ملاحظة: بالنسبة لمقايسات الانبثاث التجريبية لسرطان الثدي، يتم إجراء الحقن على الفئران الأنثوية البالغة من العمر 6 أسابيع >.
    1. التعامل مع الماوس من الذيل والشريحة الحيوانية في أنبوب مشقوق / جهاز ضبط النفس من حجم مناسب (انظر جدول المواد لجهاز ضبط النفس المستخدمة).
    2. أدخل الجزء المكون لجهاز ضبط النفس وضع الماوس على جانبها بحيث يكون من السهل عرض الوريد الذيل الجانبي. يحتوي الفأر على شريان بطني يتماشى مع الأعضاء التناسلية ، وريد الظهر ، وعروقين وريديين وريديين.
    3. تنظيف سطح ذيل الماوس مع مسح مطهر. فهم الذيل بين السبابة والإبهام مع اليد غير المهيمنة وتطبيق التوتر طفيف.
    4. بدءا من الجزء القاصي من الذيل ، أدخل الإبرة الموازية للوريد مع شطبة في نهاية المطاف.
    5. إذا سمح، وتلخيص بعناية الإبرة والانحناء إلى زاوية 20-30 درجة. ينصح بشدة باتباع نهج بيد واحدة أو جهاز لتلخيص الإبر.
      ملاحظة: ليس من الضروري أن يستنشق لأن هذا قد يتسبب في طي الوريد. ومع ذلك، يمكن رؤية ومضة صغيرة من الدم عند وضعها لأول مرة. الإبرة سوف تتقدم بسلاسة في الوريد مع الموضع الصحيح.
    6. الاستغناء ببطء عن حجم كامل في الوريد. لا ينبغي أن تكون هناك مقاومة عندما يتم دفع المكبس.
    7. إذا شعر أي مقاومة, إزالة فورا إبرة حقنة. إذا لزم الأمر، إعادة إدراج الإبرة (من الناحية المثالية لا أكثر من 3 محاولات) تتحرك نحو الطرف القريب من الذيل أو الوريد الجانبي المعارض.
    8. ومن المرجح أن يتم إزاحة كمية صغيرة من الدم بعد الحقن. تطبيق ضغط لطيف مع الشاش العقيم ومسح مع مسح مطهر.
    9. التخلص فورا من حقنة في حاوية حادة المناسبة.
    10. أعد الماوس إلى قفص نظيف ومهوى وراقب علامات الضيق.
    11. رصد الفئران 2-3x / أسبوعيا لعلامات تشكيل الانبثاث (التنفس شاقة، موقف حدب، وفقدان الوزن) والضيق العام. الوقت لتطوير الانبثاث سوف تعتمد على خط الخلية وسلالة الماوس.
    12. إذا كنت تستخدم جهاز تصوير حي للحيوانات الحية في الجسم الحي ، فإن فئران الصور مباشرة بعد حقن الوريد الخلفي لتأكيد الحقن الناجح للخلايا والحصول على بيانات "صفر" للوقت (لا يتم تضمين تفاصيل محددة حول التصوير الحيوي في الجسم الحي هنا ، ولكن يتم وصفها من قبل Yang et al.24).

2. تثبيت أنسجة الرئة وتحليل عبء ورم الرئة النقيلي

  1. تضخم أنسجة الرئة للحفاظ على الشكل الهيكلي للرئتين لعلم الأمراض النسيجية
    1. بعد اتباع إجراءات القتل الرحيم المعتمدة (مثل ثاني أكسيد الكربون في 30 - 70٪ من حجم الغرفة / دقيقة) ، قم بتأمين جثة الماوس إلى لوحة تشريح مع دبابيس. إما رش أو تطبيق الإيثانول 70٪ للحفاظ على الفراء الماوس للخروج من الطريق أثناء تشريح.
      ملاحظة: يمكن أن يسبب اختناق ثاني أكسيد الكربون الهمورهاج الرئوي كآفة خلفية متوقعة ، خاصة بمعدلات تدفق أبطأ.
    2. فتح الصدر مع شق خط الوسط، وتوسيع شق cranially / caudally من خلال الصفاق، وقطع الحجاب الحاجز عن طريق استيعاب عملية xyphoid.
    3. باستخدام مجموعة منفصلة من مقص لا مملة ريش، وقطع الأضلاع على طول كل جانب من القص وإزالة القفص الصدري بعناية ترك مجالا للرئتين لتوسيع.
    4. عزل القصبة الهوائية عن طريق إزالة الغدد اللعابية تحت الفك السفلي والعضلات تحت الهيداوي. يمكن أن يؤدي وضع دبابيس على جانبي القصبة الهوائية إلى منع الحركة غير المرغوب فيها أثناء إدخال الإبرة.
    5. ملء حقنة 26 G مع 2-3 مل من 10٪ محايدة عازلة الفورمالين وإدراجها في القصبة الهوائية.
    6. حقن ببطء الفورمالين ومشاهدة للرئتين لتوسيع (عادة ما يتطلب ~ 1.5 مل من الفورمالين).
    7. بمجرد أن يبدأ الفورمالين في التسرب من الرئتين (تجنب التضخم) ، قرصة قبالة القصبة الهوائية مع زوج من ملقط ، وإزالة إبرة حقنة وفصل الجهاز التنفسي بأكمله. وضع الرئتين والقلب، وما إلى ذلك مباشرة في الفورملين كما يمكن أن يتم تشذيب إضافية من الأنسجة بعد التثبيت.
    8. معالجة كاملة، وتضمين، وتقسم من الأنسجة، والهيماتوكسيلين واليوزين (H &؛ E) تلطيخ باستخدام الطرق القياسية.
  2. تحليل عبء ورم الرئة النقيلي
    1. تفحص أقسام الرئة الملطخة ب H&E على ماسح ضوئي عالي الدقة، وشريحة عند تكبير 40x (الشكل 3).
    2. استيراد الصور إلى برامج تحليل الصور (مثل تحليل صورة Visiopharm) من أجل تحديد كمي لنقائل الرئة.
      ملاحظة: نوصي المستخدمين الجدد إما الحصول على التدريب في الموقع أو عبر الإنترنت لاستخدام برنامج تحليل الصور. كما تتوفر العديد من الندوات عبر الإنترنت من خلال صفحة الويب التجارية.
    3. حدد تطبيق Visiopharm 10118 H&E Lung Metastasis من مكتبة تطبيقات البرنامج.
      ملاحظة: الغرض من هذا التطبيق هو تسمية وقياس انبثاث الرئة على الشرائح H & E الملطخة. كجزء من تطبيق H&E Lung Metastasis 10118، فإن الخطوة الأولى لمعالجة الصور تجزئ أنسجة الرئة باستخدام تطبيق اكتشاف الأنسجة. تستخدم الخطوة الثانية لمعالجة الصور تطبيق اكتشاف الانبثاث الذي يحدد الانبثاث داخل أنسجة الرئة. يتم تحديد الانبثاث عن طريق الشكل جنبا إلى جنب مع المناطق التي هي إما مشوه جدا، أحمر جدا أو متناثرة جدا بحيث لا يمكن تحديدها على أنها الانبثاث.
    4. ضبط المعلمات تحديد الشكل والتشتت لتناسب أفضل الصور التمثيلية. يمكن عرض المناطق المجزأة من الانبثاث الورم وأنسجة الرئة الطبيعية باستخدام تسميات لون مختلفة لكل نوع من أنواع الأنسجة.
      ملاحظة: في حالة عدم تمكن التطبيق من فصل الانبثاث بدقة عن أنسجة الرئة العادية، قد يحتاج تطبيق مخصص يستخدم برنامج Visiopharm Decision Forest إلى الكتابة كما تم إجراؤه للتجارب (انظر الشكل 2 والشكل 3). تفاصيل لكتابة خوارزمية مخصصة اتبع أدناه. وإلا، انتقل إلى الخطوة 2.2.9.
    5. افتح برنامج غابة القرار، الذي يعمل من خلال تدريب فئات متعددة [أي أنسجة الرئة (غير النيوبلاستيك)، والانبثاث، وخلايا الدم الحمراء، والظهارة، و / أو الفضاء الأبيض] على الصورة المطلوبة. في الشكل 2، الانبثاث الورم الأزرق، والأنسجة الطبيعية خضراء، وظهارة الشعب الهوائية هو الأصفر. أيضا، خلايا الدم الحمراء في مساحات حمراء وهوائية باللون الوردي.
    6. اتبع السلسلة التي تمت المطالبة بها من الأسئلة نعم أو لا لتدريب كل فئة بشكل مناسب للحصول على صورة. دقة الخوارزمية ستحدد عدد الأسئلة نعم / لا. للتحليل، تمت كتابة الخوارزمية/التطبيق المخصص بدقة تم تعيينها إلى 50 (النطاق 0-100).
    7. ضبط ميزات لكل فئة من خلال تطبيق مرشحات لشحذ، طمس، فرز حسب الشكل، وما إلى ذلك لتعزيز دقة الخوارزمية / التطبيق. تغير الميزات كيفية رؤية الفئة للصورة لإخراج ألوان أو شدة معينة.
      ملاحظة: بالنسبة للخوارزمية المخصصة، يتم تصنيف الانبثاثات التي تبلغ مساحتها 8500 ميكرومتر2 وما فوق وقياسها على أنها نقائل. وهذا يفسر تباين الحجم ونقائل صغيرة جدا للكشف. تم تضمين المناطق الصغيرة المشوهة والمناطق النقيلية الصغيرة تحت 8500 ميكرومتر2 في القياس الكمي الطبيعي للأنسجة.
    8. حفظ الإعدادات المعدلة من التطبيق أو خوارزمية مخصصة ومن ثم، تطبيق خوارزمية / التطبيق على مجموعة كاملة أو سلسلة من الأنسجة الملطخة H & E.
    9. وأخيرا، تصدير كافة متغيرات الإخراج، والتي تشمل تلك المدرجة في الجدول 1. ويمكن قياس المساحة في ميكرون مربع (μm2) كميا لكل نوع من أنواع الأنسجة وتستمد النسب المئوية من إجمالي مساحة الأنسجة الصافية للعينة (أي إجمالي الأنسجة ناقص الفضاء الجوي).
    10. عند إنشاء خوارزمية مخصصة، قم بمراجعة علامات الأنسجة بالتشاور مع مجلس الأمراض البيطرية المعتمد من قبل الكلية الأمريكية لأخصائيي علم الأمراض البيطرية لضمان قياسات دقيقة والتمييز بين أنواع الأنسجة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

إذا كان استخدام الخلايا غير الملساء لحقن الوريد الذيل، قد يكون من الصعب تأكيد استعمار الرئة حتى (1) وقت التشريح إذا كان يمكن ملاحظة الماكروميتاستاز أو (2) بعد التحليل النسيجي إذا كانت الانبثاث المجهرية موجودة. مع عبء ورم الرئة النقيلي واسعة النطاق، الفئران سيكون لها التنفس شاقة. كما هو الحال مع أي دراسة الورم، الفئران يجب أن تراقب بعناية طوال مدة الدراسة. استخدام الخلايا المسماة هو وسيلة سهلة لتأكيد حقن الوريد الذيل ناجحة; ومن ثم استخدام لوسيفيراز الموسومة MDA- MB-231 الخلايا في المظاهرة. ومع ذلك ، في التصوير في الجسم ال...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

مع استمرار الباحثين في استخدام الحقن الوريدي للخلايا السرطانية كنموذج تجريبي للانبثاث ، تفتقر إلى الممارسات القياسية لتحليل عبء الورم النقيلي الناتج. في بعض الحالات، يمكن ملاحظة اختلافات كبيرة في عبء الورم النقيلي عند التلاعب بخطوط خلايا معينة و / أو استخدام المركبات الكيميائية بشكل كلي. ومع ذلك ، في حالات أخرى ، قد يتم تجاهل الاختلافات الدقيقة في البذر والنمو النقيلي أو يساء تفسيرها دون تحليل مرضي شامل. تقدم هذه الدراسة بروتوكولات حقن الوريد الخلفي المنشورة سابقا من خلال تضمين طريقة شاملة لتحليل عبء ورم الرئة النقيلي. ا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.

شكر وتقدير

تم تمويل البيانات التمثيلية من خلال المعهد الوطني للسرطان (K22CA218549 إلى S.T.S). بالإضافة إلى مساعدتهم في تطوير طريقة التحليل الشامل المذكورة هنا ، نشكر مركز السرطان الشامل بجامعة ولاية أوهايو على علم الأمراض المقارن والموارد المشتركة في Phenotyping Mouse (مدير - كريستا لا بيرل ، DVM ، دكتوراه) لخدمات الأنسجة والكيمياء المناعية وجوهر تصوير علم الأمراض لتطوير الخوارزميات وتحليلها.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
منصات تحضير الكحولفيشر Scientific22-363-750 لتنظيف الذيل قبل الحقن < / مقص تشريح قوي >
فيشر ساينتفيك08-951-5<قوي>لتشريح الفأر وتضخم أنسجة الرئة< / قوي >
DMEM مع L-Glutamine ، 4.5 جم / لتر من الجلوكوز وبيروفات الصوديومفيشر ScientificMT10013CVقاعدة وسائط زراعة الخلايا لخطوط خلايا MDA-MB-231 و MVT1
محلول الملح المخزن بالفوسفات من Dulbecco 1xMT21030CVفيشر العلمييستخدم لإعادة تعليق الخلايا السرطانية لحقن
الإيثانول (محلول 70٪)OSUلتقليل فراء الفأر أثناء التشريح ؛ توخي الحذر -
صبغة إيفان الزرقاءMillipore SigmaE2129تستخدم بنسبة 1٪ في PBS المعقمة للممارسة باستخدام طريقة حقن الوريد الذيل ؛ توخي الحذر - كاشف خطير
مصل الأبقار الجنينيMillipore SigmaF4135مادة مضافة لوسائط زراعة الخلايا ؛ تستخدم بنسبة 10٪ في
ملقطفيشر Scientific10-270للتشريح وتضخم أنسجة الرئة
الفئران FVB / NJمختبر جاكسون001800سلالة الفأر المتزايقة لخلايا MVT1
مقياس الدم (Bright-Line)Millipore SigmaZ359629للاستخدام في زراعة الخلايا للحصول على عدد الخلايا
حقنة الأنسولين (28 جم)فيشر ساينتفيك14-829-1Bلحقن الوريد الذيل (BD 329424) خلايا
MDA-MB-231ATCCخط خلايا سرطان الثدي البشري
MVT1 خلاياالفأر خلايا الورم
إبر (26 جم)فيشر ساينتفيك14-826-15تستخدم لتضخيم الفأر الرئتين
الفورمالين المحايد المخزن (10٪)يستخدم فيشر 245685العلمي كمثبت للأنسجة ولتضخيم أنسجة الرئة ؛ توخي الحذر - كاشف خطير
NOD. الفئران Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl / SzJ (NSG)005557 مختبر جاكسونالذي تحتفظ به OSUCCC Target Validation Shared Resource
Penicillin Streptomycin 100xThermoFisher15140163وسائط زراعة الخلايا المضافة
الشاش المعقمفيشرNC9379092لتطبيق الضغط على ذيل الفأر في حالة حدوث نزيف
حقنة (5 مل)فيشر ساينتفيك14-955-458تستخدم لتضخيم نسيج الرئة في الفأر
وتقييد ذيل الوريدBraintree Scientific، Inc.يستخدم TV-150 STDلكبح جماح الفأر لحقن الوريد
الذيل Trypan blue (0.4٪)ThermoFisher15250061في زراعة الخلايا لتقييم الجدوى
Trypsin-EDTA 0.25٪ThermoFisher25200-114المستخدم في زراعة الخلايا لفصل الخلايا السرطانية عن الصفيحة
تستخدم القابلة للاشتعال DMEM الثديي يستخدم

المراجع

  1. Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites. Nature Reviews: Cancer. 2 (8), 563-572 (2002).
  2. Steeg, P. S. Targeting metastasis. Nature Reviews: Cancer. 16 (4), 201-218 (2016).
  3. Gupta, G. P., Massague, J. Cancer metastasis: building a framework. Cell. 127 (4), 679-695 (2006).
  4. Steeg, P. S. Tumor metastasis: mechanistic insights and clinical challenges. Nature Medicine. 12 (8), 895-904 (2006).
  5. Chaffer, C. L., Weinberg, R. A. A perspective on cancer cell metastasis. Science. 331 (6024), 1559-1564 (2011).
  6. Eckhardt, B. L., Francis, P. A., Parker, B. S., Anderson, R. L. Strategies for the discovery and development of therapies for metastatic breast cancer. Nature Reviews Drug Discovery. 11 (6), 479-497 (2012).
  7. Gomez-Cuadrado, L., Tracey, N., Ma, R., Qian, B., Brunton, V. G. Mouse models of metastasis: progress and prospects. Disease Models & Mechanisms. 10 (9), 1061-1074 (2017).
  8. Fantozzi, A., Christofori, G. Mouse models of breast cancer metastasis. Breast Cancer Research. 8 (4), 212(2006).
  9. Schoenenberger, C. A., et al. Targeted c-myc gene expression in mammary glands of transgenic mice induces mammary tumours with constitutive milk protein gene transcription. EMBO Journal. 7 (1), 169-175 (1988).
  10. Nusse, R., Varmus, H. E. Many tumors induced by the mouse mammary tumor virus contain a provirus integrated in the same region of the host genome. Cell. 31 (1), 99-109 (1982).
  11. Muller, W. J., Sinn, E., Pattengale, P. K., Wallace, R., Leder, P. Single-step induction of mammary adenocarcinoma in transgenic mice bearing the activated c-neu oncogene. Cell. 54 (1), 105-115 (1988).
  12. Lin, E. Y., et al. Progression to malignancy in the polyoma middle T oncoprotein mouse breast cancer model provides a reliable model for human diseases. American Journal of Pathology. 163 (5), 2113-2126 (2003).
  13. Green, J. E., et al. The C3(1)/SV40 T-antigen transgenic mouse model of mammary cancer: ductal epithelial cell targeting with multistage progression to carcinoma. Oncogene. 19 (1), 1020-1027 (2000).
  14. Iorns, E., et al. A new mouse model for the study of human breast cancer metastasis. PloS One. 7 (10), 47995(2012).
  15. Kim, I. S., Baek, S. H. Mouse models for breast cancer metastasis. Biochemical and Biophysical Research Communications. 394 (3), 443-447 (2010).
  16. Mariotto, A. B., Etzioni, R., Hurlbert, M., Penberthy, L., Mayer, M. Estimation of the Number of Women Living with Metastatic Breast Cancer in the United States. Cancer Epidemiology, Biomarkers and Prevention. 26 (6), 809-815 (2017).
  17. Xiao, W., et al. Risk factors and survival outcomes in patients with breast cancer and lung metastasis: a population-based study. Cancer Medicine. 7 (3), 922-930 (2018).
  18. Smid, M., et al. Subtypes of breast cancer show preferential site of relapse. Cancer Research. 68 (9), 3108-3114 (2008).
  19. Kennecke, H., et al. Metastatic behavior of breast cancer subtypes. Journal of Clinical Oncology. 28 (20), 3271-3277 (2010).
  20. Soni, A., et al. Breast cancer subtypes predispose the site of distant metastases. American Journal of Clinical Pathology. 143 (4), 471-478 (2015).
  21. Leone, B. A., et al. Prognostic impact of metastatic pattern in stage IV breast cancer at initial diagnosis. Breast Cancer Research and Treatment. 161 (3), 537-548 (2017).
  22. Pei, X. F., et al. Explant-cell culture of primary mammary tumors from MMTV-c-Myc transgenic mice. In Vitro Cellular and Developmental Biology: Animal. 40 (1-2), 14-21 (2004).
  23. Mathsyaraja, H., et al. CSF1-ETS2-induced microRNA in myeloid cells promote metastatic tumor growth. Oncogene. 34 (28), 3651-3661 (2015).
  24. Yang, S., Zhang, J. J., Huang, X. Y. Mouse models for tumor metastasis. Methods in Molecular Biology. 928, 221-228 (2012).
  25. La Perle, K. M. D. Comparative Pathologists: Ultimate Control Freaks Seeking Validation. Veterinary Pathology. 56 (1), 19-23 (2019).
  26. Blomberg, O. S., Spagnuolo, L., de Visser, K. E. Immune regulation of metastasis: mechanistic insights and therapeutic opportunities. Disease Models & Mechanisms. 11 (10), (2018).
  27. Gonzalez, H., Hagerling, C., Werb, Z. Roles of the immune system in cancer: from tumor initiation to metastatic progression. Genes and Development. 32 (19-20), 1267-1284 (2018).
  28. Borowsky, A. D., et al. Syngeneic mouse mammary carcinoma cell lines: two closely related cell lines with divergent metastatic behavior. Clinical and Experimental Metastasis. 22 (1), 47-59 (2005).
  29. Yang, Y., et al. Immunocompetent mouse allograft models for development of therapies to target breast cancer metastasis. Oncotarget. 8 (19), 30621-30643 (2017).
  30. Resch, M., Neels, T., Tichy, A., Palme, R., Rulicke, T. Impact assessment of tail-vein injection in mice using a modified anaesthesia induction chamber versus a common restrainer without anaesthesia. Laboratory Animals. 53 (2), 190-201 (2019).
  31. Rashid, O. M., et al. Is tail vein injection a relevant breast cancer lung metastasis model. Journal of Thoracic Disease. 5 (4), 385-392 (2013).
  32. Goodale, D., Phay, C., Postenka, C. O., Keeney, M., Allan, A. L. Characterization of tumor cell dissemination patterns in preclinical models of cancer metastasis using flow cytometry and laser scanning cytometry. Cytometry Part A. 75 (4), 344-355 (2009).
  33. Goddard, E. T., Fischer, J., Schedin, P. A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer. Journal of Visualized Experiments. (118), (2016).
  34. Wright, L. E., et al. Murine models of breast cancer bone metastasis. BoneKEy Reports. 5, 804(2016).
  35. Simmons, J. K., et al. Animal Models of Bone Metastasis. Veterinary Pathology. 52 (5), 827-841 (2015).
  36. Liu, Z., et al. Improving orthotopic mouse models of patient-derived breast cancer brain metastases by a modified intracarotid injection method. Scientific Reports. 9 (1), 622(2019).
  37. Kodack, D. P., Askoxylakis, V., Ferraro, G. B., Fukumura, D., Jain, R. K. Emerging strategies for treating brain metastases from breast cancer. Cancer Cell. 27 (2), 163-175 (2015).
  38. Brown, D. L. Practical Stereology Applications for the Pathologist. Veterinary Pathology. 54 (3), 358-368 (2017).
  39. Aeffner, F., et al. Digital Microscopy, Image Analysis, and Virtual Slide Repository. Institute for Laboratory Animal Research Journal. 59 (1), 66-79 (2018).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

تصحيح


Formal Correction: Erratum: Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells
Posted by JoVE Editors on 12/02/2020. Citeable Link.

An erratum was issued for: Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells. The author list was updated.

The author list was updated from:

Katie A. Thies1, Sue E. Knoblaugh2, and Steven T. Sizemore1
1Department of Radiation Oncology, Arthur G. James Comprehensive Cancer Center and Richard L. Solove Research Institute, The Ohio State University Medical Center
2Department of Veterinary Biosciences, Comparative Pathology and Digital Imaging Shared Resource, The Ohio State University

to:

Katie A. Thies1, Sarah Steck1, Sue E. Knoblaugh2, and Steven T. Sizemore1
1Department of Radiation Oncology, Arthur G. James Comprehensive Cancer Center and Richard L. Solove Research Institute, The Ohio State University Medical Center
2Department of Veterinary Biosciences, Comparative Pathology and Digital Imaging Shared Resource, The Ohio State University

الوسوم

التحليل المرضي لنقائل الرئة بعد الحقن الجانبي الوريد الذيل من الخلايا السرطانية
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.