وصفنا في هذا البروتوكول نموذج الماوس تحت العنكبوتي القياسي (SAH) عن طريق حقن مزدوج من الدم الكامل الذاتي في ماجنا سيستيرنا. تمثل درجة عالية من توحيد إجراء الحقن المزدوج نموذجًا متوسطًا إلى حادًا من SAH مع أمان نسبي فيما يتعلق بالوفيات.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
مزدوجة الحقن المباشر للدم في ماغنا سيستيرنا كنموذج للنزف تحت العنكبوتية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
بين السكتات الدماغية، الباسور تحت العنكبوتية (SAH) متتالية لتمزق تمدد الأوعية الدموية الشرياني الدماغي يمثل 5-9٪ ولكنه مسؤول عن حوالي 30٪ من إجمالي الوفيات المرتبطة بالسكتة الدماغية مع مراضة هامة من حيث النتيجة العصبية. قد يحدث في معظم الأحيان في الدماغ تأخر vasospasm (CVS) في معظم الأحيان بالاشتراك مع الإقفار الدماغي المتأخر. نماذج حيوانية مختلفة من SAH تستخدم الآن بما في ذلك ثقب الأوعية الدموية وحقن الدم المباشر في ماغنا سيستيرنا أو حتى خزان قبلية، كل عرض مزايا وعيوب متميزة. في هذه المقالة، يتم تقديم نموذج الماوس موحدة من SAH عن طريق الحقن المباشر المزدوج من وحدات التخزين المحددة من الدم الكامل الذاتية في ماغنا cisterna. لفترة وجيزة ، تم وزن الفئران ثم تخديرها عن طريق استنشاق isoflurane. ثم وضع الحيوان في وضع متكأ على بطانية ساخنة تحافظ على درجة حرارة المستقيم من 37 درجة مئوية ووضعها في إطار مجسم مع منعطف عنق الرحم من حوالي 30 درجة. مرة واحدة في مكانها، تم وضع غيض من ميكروبيبت الزجاج ممدود مليئة الدم الشرياني المتجانس مأخوذة من الشريان السباتي من فأر آخر من نفس العمر والجنس (C57Bl/6J) وضعت في زاوية الحق في اتصال مع غشاء atlanto القذال عن طريق ميكرومانيبولاتور. ثم تم حقن 60 ميكرولتر من الدم في ماغنا سيسترنا تليها 30 درجة من الميل إلى الأسفل من الحيوان لمدة 2 دقيقة. تم ضخ الثانية من 30 ميكرولتر من الدم في ماغنا سيستيرنا 24 ح بعد أول واحد. تتم متابعة كل على حدة يوميا (تقييم دقيق للوزن والرفاه). يسمح هذا الإجراء بتوزيع الدم القابل للتنبؤ والقابل للاستنساخ للغاية ، ويصاحبه على الأرجح ارتفاع الضغط داخل الجمجمة الذي يمكن محاكاته عن طريق حقن مكافئ لسائل العمود الفقري الدماغي الاصطناعي (CSF) ، ويمثل نموذجًا حادًا إلى معتدلًا من SAH الذي يسبب انخفاض معدل الوفيات.
المقدمة
يمثل البواسير تحت العنكبوتية (SAH) ما يصل إلى 5٪ من جميع حالات السكتة الدماغية ويشكل أمراضًا شائعة نسبيًا مع حدوث 7.2 إلى 9 مرضى لكل 100,000 سنويًا ، بمعدل وفيات 20٪ -60٪ اعتمادًا على الدراسة1،2،3. في المرحلة الحادة ، يعزى الوفيات إلى شدة النزيف ، rebleeding ، vasospasm الدماغي (CVS) و / أو المضاعفات الطبية4. في الناجين, إصابات الدماغ المبكرة (EBI) يرتبط مع تمديد parenchymal من نزيف وزيادة مفاجئة في الضغط داخل الجمجمة, مما قد يؤدي إلى نقص التروية الدماغية الأولية5 والموت الفوري في حوالي 10% -15% من الحالات6
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وقد تم تنفيذ جميع الإجراءات تحت إشراف H. Castel وفقا للجنة الأخلاقية الفرنسية والمبادئ التوجيهية للبرلمان الأوروبي 2010/63/EU ومجلس حماية الحيوانات المستخدمة للأغراض العلمية. وقد وافق على هذا المشروع كل من اللجنة المحلية المعنية بأخلاقيات الحيوان واللجان الوطنية المعنية بالبحوث والاختبارات الحيوانية. ذكور C57Bl/6J Rj الفئران (Janvier), الذين تتراوح أعمارهم بين 8-12 أسابيع, وكان يسكن تحت رقابة الظروف البيئية القياسية: 22 درجة مئوية ± 1 °C, 12 ساعة/12 ساعة دورة خفيفة/الظلام, والمياه والغذاء المتاحة الإعلانية libitum.
1. إعداد جراحة SAH والتحضير للحقن
- قبل بداية الجراحة، سحب عدد كاف من الشعيرات الدموية الزجاجية باستخد....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
الجدول الزمني التجريبي، والإجراءات، والمتابعة، ومعدل الوفيات
تلخص الشكل 1A والشكل 1B بروتوكول نموذج SAH بالحقن المزدوج للدم. باختصار، في اليوم الأول من التعريفي SAH (D-1)، تم حقن 60 ميكرولتر من الدم المسحوب من فأر متماثل أو 60 ميكرولتر من السائل النخاعي الاصطناعي (aCSF) في ماغنا سيستيرنا في ظروف ساه أو صورية، على التوالي. في اليوم التالي (D0)، تم حقن 30 ميكرولتر من الدم المسحوب من فأرة متجانسة أو 30 ميكرولتر من ACSF في ماغنا سيستيرنا في شروط .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
على الرغم من كثافة البحث في مجال SAH وتطوير استراتيجيات علاجية مثل خيارات العلاج داخل الأوعية الدوائية والأدوية المتزايدة على مدى السنوات العشرين الماضية، إلا أن معدل الوفيات لا يزال مرتفعاً خلال الأسبوع الأول من دخول المستشفى ويصل إلى حوالي 50% خلال الأشهر الـ6 التالية24،,25.. وقد اعترف هذا النموذج قبل الظهر الحالي عن طريق حقن مزدوج يوميا من الدم الشرياني المثلي في ماغنا cisterna لصحيته وارتباطه مع معدل وفيات منخفض. في الواقع، بين نماذج القوارض.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
نشكر منصة بريبن (جامعة نورماندي روان، فرنسا) لمعدات التصوير والسيد أرنو أرنو أرنو، والسيدة جولي ماوكوتيل والسيدة مارتين دوبوا، على السكن الحيواني والرعاية. ونشكر السيدة سيليست نيكولا على تقديم صوتها إلى شريط الفيديو الخاص بالبروتوكول. وقد دعم هذا العمل من قبل برنامج نضوج سيناري نورماندي، مؤسسة AVC تحت رعاية FRM، جامعة نورماندي روان و Inserm. منطقة نورماندي والاتحاد الأوروبي (مشروع 3R). أوروبا تشارك في نورماندي مع صندوق التنمية الإقليمية الأوروبية (ERDF).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| تمتص hemostat | Ethicon | Surgicel | |
| خيط خياطة قابل للامتصاص | Ethicon | Vicryl 5.0 | |
| بطانية كهربائية منظمة تلقائيا | Harvard Apparatus | 50-7087-F | |
| bluetack لتثبيت الشعيرات الدموية | UHU | Patafix | |
| التوازن الإلكتروني | دنفر Instrument | MXX-2001 | |
| الشعيرات الدموية الزجاجية | هارفارد جهاز | GC150F-15 | القطر الداخلي 0.86 مم القطر الخارجي 1.5 مم |
| مبخر الأيزوفلوران | Phymep | V100 | |
| مجتذب الماصات | الدقيقة Sutter Instrument Company | P-97 | |
| إبرة 26 G | BD microbalance | 300300 | |
| خيط خياطة غير قابل للامتصاص | Peters الجراحي | Filapeau 4.0 | |
| إطار تجسيمي | ديفيد كوبف الأدوات | نموذج 902 | |
| المعدات الجراحية | كينت | المشبك العلمي ، مقص دقيق ، حقنة مقص | |
| 20 مل TERUMO | Thermofisher | 11866071 |
المراجع
- Rincon, F., Rossenwasser, R. H., Dumont, A. The epidemiology of admissions of nontraumatic subarachnoid hemorrhage in the United States. Neurosurgery. 73 (2), 212-222 (2013).
- Sandvei, M. S., et al. Incidence and mortality....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
