خلق مطابقة في الجسم الحي / في المختبر المريض المستمدة من أزواج نموذج PDX وPDX المستمدة Organoids لأبحاث الصيدلة السرطان

Xiaoxi Xu; Limei Shang; Philip Wang; Jun Zhou; Xuesong Ouyang; Meiling Zheng; Binchen Mao; Likun Zhang; Bonnie Chen; Jingjing Wang; Jing Chen; Wubin Qian; Sheng Guo; Yujun Huang; Qi-Xiang Li

doi:10.3791/61382

يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

خلق مطابقة في الجسم الحي / في المختبر المريض المستمدة من أزواج نموذج PDX وPDX المستمدة Organoids لأبحاث الصيدلة السرطان

6.4K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/61382

⸱

مايو 5, 2021

Xiaoxi Xu¹ , Limei Shang¹ , Philip Wang² , Jun Zhou² , Xuesong Ouyang² , Meiling Zheng¹ , Binchen Mao² , Likun Zhang² , Bonnie Chen¹ , Jingjing Wang² , Jing Chen³ , Wubin Qian² , Sheng Guo² , Yujun Huang² , Qi-Xiang Li³

¹Crown Bioscience Inc., Changping District, Beijing, China, ²Crown Bioscience Inc., Taicang, Jiangsu, China, ³Crown Bioscience Inc., San Diego, CA, USA

في هذه المقالة

ملخص

يتم وصف طريقة لإنشاء organoids باستخدام xenografts المشتقة من المريض (PDX) للفحص في المختبر ، مما أدى إلى أزواج متطابقة من نماذج في الجسم الحي / في المختبر. تم حصاد أورام PDX / معالجتها إلى قطع صغيرة ميكانيكيا أو أنزيميا ، تليها طريقة Clevers لزراعة الأعضاء السرطانية التي تم تمريرها والتبريد وتميزها ضد PDX الأصلي.

الملخص

تعتبر xenografts الورم المشتقة من المريض (PDXs) النماذج قبل السريرية الأكثر تنبؤا، ويعتقد إلى حد كبير أن تكون مدفوعة بالخلايا الجذعية السرطانية (CSC) لتقييم أدوية السرطان التقليدية. مكتبة كبيرة من PDXs يعكس تنوع مجموعات المرضى، وبالتالي تمكن التجارب قبل السريرية القائمة على السكان ("المرحلة الثانية مثل التجارب السريرية الماوس"); ومع ذلك، فإن PDX لديها قيود عملية على الإنتاجية المنخفضة، والتكاليف المرتفعة والمدة الطويلة. يمكن اعتبار الأورام العضوية ، التي هي أيضا نماذج مشتقة من المريض مدفوعة ب CSC ، مكافئا في المختبر ل PDX ، متغلبة على بعض قيود PDX للتعامل مع المكتبات الكبيرة من الأعضاء العضوية أو المركبات. تصف هذه الدراسة طريقة لإنشاء الأجهزة العضوية المشتقة من PDX (PDXO) ، مما يؤدي إلى نماذج مقترنة لأبحاث الصيدلة في المختبر وفي الجسم الحي. تم جمع الأورام المزروعة تحت الجلد PDX-CR2110 من الفئران الحاملة للورم عندما وصلت الأورام إلى 200-800 مم³، وفقا لإجراء تشريح معتمد ، يليه إزالة الأنسجة غير السرطانية المجاورة والتفكك إلى شظايا ورم صغيرة. تم غسل شظايا الورم الصغيرة ومرت عبر مصفاة خلايا 100 ميكرومتر لإزالة الحطام. تم جمع مجموعات الخلايا وتعليقها في محلول مستخلص غشاء الطابق السفلي (BME) ومطلية في لوحة من 6 آبار كقطرات صلبة مع الوسائط السائلة المحيطة للنمو في_حاضنة ثاني أكسيد الكربون. تم رصد نمو الجهاز مرتين أسبوعيا تحت المجهر الخفيف وسجلت عن طريق التصوير الفوتوغرافي، تليها تغيير متوسط السائل 2 أو 3 مرات في الأسبوع. تم تمرير الأعضاء المزروعة كذلك (7 أيام في وقت لاحق) بنسبة 1:2 عن طريق تعطيل الأجهزة العضوية المضمنة BME باستخدام القص الميكانيكي ، بمساعدة إضافة التريبسين وإضافة 10 ميكرومتر Y-27632. وكانت الأرغنويدات تقدم في أنابيب التبريد للتخزين الطويل الأجل، بعد إطلاقها من BME عن طريق الطرد المركزي، كما تم أخذ عينات منها (مثل الحمض النووي والحمض النووي الريبي وكتلة FFPE) لمزيد من التوصيف.

المقدمة

السرطانات هي مجموعة من الاضطرابات الوراثية والمناعية المتنوعة. يعتمد التطوير الناجح للعلاجات الفعالة بشكل كبير على النماذج التجريبية التي تتنبأ بفعالية بالنتائج السريرية. مكتبات كبيرة من xenografts المريض المستمدة من سمات جيدة (PDX) منذ فترة طويلة ينظر إليها على أنها ترجمة في النظام الحي للاختيار لاختبار العلاج الكيميائي و / أو العلاجات المستهدفة بسبب قدرتها على تلخيص خصائص ورم المريض، وعدم التجانس والاستجابة للأدوية المريض^1،وبالتالي تمكين المرحلة الثانية مثل التجارب السريرية الماوس لتحسين النجاح السريري²^،³. تعتبر PDXs عموما كأمراض الخلايا الجذعية السرطانية، ويضم الاستقرار الوراثي، على النقيض من خط الخلية المستمدة xenografts². على مدى العقود القليلة الماضية ، تم إنشاء مجموعات كبيرة من PDXs في جميع أنحاء العالم ، لتصبح العمود الفقري لتطوير أدوية السرطان اليوم. وعلى الرغم من استخدامها على نطاق واسع وقيمتها النقلية الكبيرة، فإن هذه النماذج الحيوانية مكلفة في جوهرها، وتستغرق وقتا طويلا، وتستغرق إنتاجية منخفضة، وبالتالي فهي غير كافية للفحص على نطاق واسع. PDX هي أيضا غير مرغوب فيها لاختبار الأورام المناعية (IO) بسبب طبيعة المناعة للخطر⁴. وبالتالي فمن غير العملي الاستفادة الكاملة من المكتبة الكبيرة المتوفرة من PDXs.

وقد أدت الاكتشافات الأخيرة، رائدة من قبل مختبر هانز ذكيز^5،إلى إنشاء الثقافات في المختبر من organoids ولدت من الخلايا الجذعية الكبار في معظم الأعضاء البشرية من أصل^{ظهاري 5}. وقد تم تنقيح هذه البروتوكولات للسماح لنمو organoids من CSCs المفترضة في سرطان الإنسان من مؤشرات مختلفة⁶^،⁷. هذه الأجهزة المشتقة من المريض (PDOs) هي مستقرة جينيا⁸^،⁹ وقد ثبت أنها تنبؤية للغاية لنتائج العلاج السريري¹⁰^،¹¹^،¹². بالإضافة إلى ذلك ، فإن الطبيعة المختبرية ل PDOs تمكن من الفحص عالي الإنتاجية (HTS)¹³، وبالتالي من المحتمل أن تقدم ميزة في نماذج الجسم الحي والاستفادة من المكتبات العضوية الكبيرة كبديل للسكان المرضى. تستعد PDOs لتصبح منصة اكتشاف وترجمة مهمة ، والتغلب على العديد من القيود المفروضة على PDXs المذكورة أعلاه.

كل من PDO و PDX هي نماذج مشتقة من المريض وCSC مدفوعة ، مع القدرة على تقييم العلاجات في سياق العلاج الشخصي أو شكل التجربة السريرية. المكتبات الكبيرة الموجودة من PDXs ، مثل مجموعة الملكية من >3000 PDXs¹⁴^،¹⁵^،¹⁶^،¹⁷، وبالتالي فهي مناسبة لتوليد سريع من المكتبات من organoids الورم (PDX المستمدة من الأجهزة العضوية ، أو PDXO) ، مما أدى إلى مكتبة مطابقة من نماذج PDX و PDXO المقترنة. يصف هذا التقرير الإجراء لإنشاء وتوصيف سرطان القولون والمستقيم PDXO-CR2110 فيما يتعلق بنموذجه الأبوي PDX-CR2110¹⁶.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تم مراجعة جميع البروتوكولات والتعديلات أو الإجراءات التي تنطوي على رعاية واستخدام الحيوانات والموافقة عليها من قبل لجنة الملكية للعلوم الحيوية المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها (IACUC) قبل إجراء الدراسات. تم إجراء رعاية الحيوانات واستخدامها وفقا للمبادئ التوجيهية الدولية ل AAALAC (رابطة تقييم واعتماد العناية بالحيوانات المختبرية) كما ورد في دليل رعاية واستخدام المختبر، المجلس الوطني للبحوث (2011). وكانت جميع الإجراءات التجريبية للحيوانات في ظروف معقمة في مرافق SPF (محددة خالية من مسببات الأمراض) وأجريت وفقا صارما لدليل رعاية واستخدام المختبر من مختلف المؤسسات الحكومية (مثل المعاهد الوطنية للصحة). وقد وافقت لجنة أخلاقيات التجارب على الحيوانات في مؤسسة المرفق (مثل اللجنة المؤسسية التابعة للجنة المشتركة بين اللجان المشتركة بين اللجان).

1. التحضير لزرع الورم

إسكان الحيوانات
1. البيت بالب / ج الفئران عارية (ن = 5) في أقفاص التهوية الفردية، في 20-26 درجة مئوية، 30-70٪ الرطوبة، ودورة الإضاءة من 12 ساعة ضوء/ 12 ساعة الظلام، مع الفراش كوب الذرة تغيرت أسبوعيا، وتشعيع أغذية الحبيبات الجافة المعقمة بالإضافة إلى مياه الشرب العقيمة الإعلانية libitum.
إعداد جزء الورم المانح
1. مراقبة الفئران المانحة الحاملة للورم عن كثب لوزن الجسم (BW ، عن طريق توازن الوزن) ، وحجم الورم (التلفزيون ، عن طريق قياس الفرجار).
2. عندما يصل التلفزيون 800-1000 ملم³، القتل الرحيم الحيوانات الحاملة للورم في غطاء محرك السيارة الخطرة بيولوجيا.
  1. ضع الفئران في غرفة القتل الرحيم مع غطاء يسلم_غاز ثاني أكسيد الكربون إلى الغرفة. تفريغ الغاز في الغرفة بمعدل تدفق التي تنتج اللاوعي السريع مع الحد الأدنى من الضيق للحيوان. معدل التدفق الأمثل ل_ثاني أكسيد الكربون حوالي 2-2.5 لتر في الدقيقة.
  2. ضمان القتل الرحيم من خلال ملاحظة أن الحيوانات لا تستعيد وعيها.
  3. بعد الوفاة السريرية الواضحة، حافظ على تدفق الغاز لمدة >1 دقيقة لتقليل احتمال تعافي الحيوان.
3. تعقيم الجلد حول الورم باستخدام مسحات iodophor. جمع الأورام عن طريق إزالة الأنسجة غير السرطانية المجاورة ووضعها في طبق بيتري يحتوي على 20 مل من برنامج تلفزيوني، مبردة مسبقا (4 درجة مئوية) قبل القتل الرحيم.
4. غسل الأورام مع برنامج تلفزيوني في طبق بيتري آخر لإزالة مكونات الدم تليها قطع في النصف وإزالة أي الجلد إضافية، والأوعية الدموية، والتكلس و / أو نخر.
5. ضع قطع الورم السليمة فقط في أنبوب طرد مركزي معقم سعة 50 مل مع 20 مل من PBS ، قبل نقله إلى غرفة منفصلة لزرعها.

2. نمو الورم تحت الجلد

تلقيح تحت الجلد من قطعة الورم إلى فئران مناعة
1. قطع الورم PDX إلى قطع 2 ملم مع مشرط، ووضع كل في trocars لزرع تحت الجلد (SC).
2. تخدير الحيوانات المتلقية مع 5٪ isoflurane (التي تحتفظ بها مخروط الأنف في 1٪). الحيوانات الاسترخاء، وفقدان منعكس الحق وتصبح في نهاية المطاف غير متحركة، حتى لا تستجيب للألم. إصلاح الفئران تخدير على لوحة التجارب في الموضع الجانبي الأيمن وتعقيم مع مسحات iodophor، ولا سيما المناطق المحيطة موقع تلقيح الورم.
3. على جلد الجناح الأيسر فقط الجمجمة إلى الورك، وجعل شق 0.5 سم مع مشرط وإنشاء نفق تحت الجلد نحو الأطراف الأمامية، 2-3 سم، وذلك باستخدام ملقط حادة.
4. نقل مطهر مكعب واحد من جزء الورم لكل موقع تلقيح من المتوسطة ومكان عميق داخل النفق تحت الجلد. تأكيد موضع الجزء بصريا قبل إغلاق الجرح بمقاطع الجرح.
5. مراقبة الفئران المزروعة الورم (5) حتى تصبح واعية للحفاظ على الحثالة القصية، ومن ثم إعادتها إلى قفصهم إلا بعد شفائهم الكامل من التخدير.
مراقبة صحة الفئران الحاملة للورم
1. تحقق من استهلاك المياه والغذاء يوميا وسجل وزن الجسم أسبوعيا.
2. تحقق من الفئران أثناء المراقبة الروتينية. سجل أي آثار على التنقل والتنفس والاستمالة والمظهر العام ، واستهلاك الطعام والماء ، وكسب / خسارة BW ، والاستسقاء ، وما إلى ذلك.
3. قياس التلفزيون مرتين أسبوعيا باستخدام الفرجار والتعبير في مم³ لكل: TV = 0.5 × ب²، حيث أ وب هي طول وعرض الورم، على التوالي.
4. التضحية بالحيوانات لجمع العينات عند ظهور أي من العلامات التالية: فقدان BW >20٪؛ ضعف الحركة (غير قادر على تناول الطعام أو الشراب)؛ غير قادر على التحرك بشكل طبيعي بسبب استسقاء كبير أو تضخم البطن. الجهد المبذول في التنفس؛ موت.

3. النخر وحصاد الورم

عندما وصل حجم الورم إلى 200-800 مم³، قم بالقتل الرحيم للفئران وفقا للبروتوكولات المعتمدة (انظر الخطوة 1.2.2).
جمع أنسجة الورم عن طريق إزالة الأنسجة غير الورم المجاورة، تليها وضع الأنسجة في أنبوب بلاستيكي 50 مل مع AD +++ (على الجليد) قبل الانفصال.

4. التحضير لثقافة الجهازية المشتقة من PDX

ملاحظة: تم تنفيذ جميع الخطوات التالية داخل خزانة السلامة البيولوجية لكل إرشادات معيار زراعة الأنسجة. احتفظ بمخزونات مسبقة الحرارة من 96-و24 و6 آبار في حاضنة 37 درجة مئوية قبل الاستخدام.

استعدادات الكاشف
1. إعداد الطابق السفلي استخراج الغشاء (BME) حل (عامل النمو خفضت، فينول الأحمر خالية). احتفظ ب 10 مل من BME في ثلاجة 4 درجات مئوية طوال الليل. بمجرد إذابة، قم بتدوير زجاجة BME لضمان التشتت.
2. إعداد الوسائط الأساسية/المخزن المؤقت للغسيل AD+++. إضافة 5 مل من 200 MM L-الجلوتامين, 1 M HEPES والقلم / ستريب إلى وسائل الإعلام المتقدمة DMEM/F12 عن طريق pipetting مع ماصة 5 مل.
3. إعداد القولون الجهازية المتوسطة كما وصفها ساتو وآخرون.¹⁸ من خلال استكمال الوسائط الأساسية مع N-Ac (1 mM)، A83-01 (500 nM)، B27 (1x)، EGF (50 نانوغرام/مل)، نوجين (100 نانوغرام/مل)، نيكوتيناميد (10 mM)، SD2021 90 (10 نانومتر)، R-spondin (500 نانوغرام/مل)، L-الجلوتامين (2 mM)، HEPES (10 ميكرومتر)، البنسلين-الستربتومايسين (1x) وY-27623 (10 ميكرومتر)¹⁹.
4. إعداد AD +++Digestion المتوسط: 10 مل من وسائط الثقافة العضوية 1x مع 500 ميكرولتر من نوع الكولاجيناز الثاني (20 ملغم / مل) و 10 ميكرولتر من RhoKI Y-27632 (10 mM).
فصام الورم²⁰
1. نقل الورم في أنبوب بلاستيكي 50 مل إلى طبق بيتري 10 سم. التقط صورة بالمنظار إلى جانب المسطرة وسجل وصفا لظروفها (أي الحجم والأنسجة الدهنية والأوعية الدموية والنخر وما إلى ذلك).
2. إزالة AD الزائدة +++ عن طريق الطموح، وقطع أنسجة الورم إلى قطع صغيرة عن طريق مقص تليها نقل من 1-2 قطعة إلى 2 مل ميكروtube للمفاجئة تجميد على الجليد الجاف. تخزين في -80 درجة مئوية للتنميط الجينومي. فرم القطع المتبقية إلى قطع أدق بمقص قبل نقلها إلى أنبوب بلاستيكي سعة 50 مل باستخدام AD+++.
3. غسل الأنسجة المفرومة 2-3 مرات في 35 مل من AD +++، تليها إضافة 10 مل من متوسط الهضم (انظر الخطوة 4.1.4) ووضع على شاكر المداري في 4 × ز ل 1 ساعة في 37 درجة مئوية.
4. تجانس الأنسجة المهضومة عن طريق الأنابيب صعودا وهبوطا باستخدام ماصة بلاستيكية معقمة 5 مل ، تليها إضافة 20 مل من AD +++ والترشيح بواسطة مصفاة خلية 100 ميكرومتر.
5. غسل تمرير من خلال مرتين مع AD +++ (تدور في 450 × ز لمدة 5 دقائق)، تليها إعادة الإنفاق في BME (إضافة حجم 4X من BME إلى بيليه للتعليق) والحفاظ على الجليد¹⁹.
إعداد الثقافة العضوية
1. أضف تعليق الخلية BME إلى لوحة 6-well في قطرات متعددة إلى ما مجموعه 200 ميكرولتر لكل بئر.
2. نقل لوحة إلى حاضنة 37 درجة مئوية. بعد 30 دقيقة، يسقط الجل.
3. إضافة 2 مل من الوسائط العضوية إلى كل بئر ، مع قطرات الممثل المسجلة عن طريق التصوير المجهري قبل نقلها إلى حاضنة (37 درجة مئوية و 5 ٪ CO_2).
4. الحفاظ على الثقافات organoid مع تغيير متوسط كل 3-4 أيام، والمرور بنسبة 1:2 كل 7 أيام أو اعتمادا على نموها وكثافتها.

5. علم الأنسجة وتحليل تسلسل الجيل التالي (NGS)

علم الأنسجة
1. جمع organoids من البئر مع المتوسطة القائمة باستخدام ماصة P1000، تليها الطرد المركزي (تدور في 450 × ز لمدة 5 دقائق)، وغسل مع برنامج تلفزيوني والتثبيت في 10٪ الفورمالين لمدة 1 ساعة.
2. ضع الأجهزة العضوية الثابتة في الجيلاتين بنسبة 100٪ في الجزء السفلي من أنبوب مخروطي سعة 50 مل ، يليه معالجة الأنسجة الروتينية وتضمينها.
3. إجراء تلطيخ haematoxylin-eosin (H&؛E) باستخدام بروتوكولات قياسية على أقسام البارافين 4 مم.
RNAseq وتسلسل إكسوم كله
1. جمع organoids من البئر مع وسيط الثقافة القائمة باستخدام ماصة P1000 ، تليها الطرد المركزي باستخدام جهاز الطرد المركزي الدقيق بأقصى سرعة (12000 × غرام)لمدة 5 دقائق في 4 درجة مئوية.
2. جمع بيليه عن طريق إزالة supernatant المتوسطة لضمان عدم وجود BME مرئية، تليها تجميد المفاجئة في microtube (الجليد الجاف) ومن ثم نقل إلى الفريزر -80 درجة مئوية.
3. استخراج الحمض النووي الريبي أو الحمض النووي باستخدام الإجراء القياسي من الشركات المصنعة وإجراء تحليل NGS لكل من تسلسل RNAseq و exome كله (WES).

6. IC₅₀ المقايسة²⁰

البذر العضوي في لوحة 384 جيدا لIC₅₀ المقايسة
1. الأجهزة التفككية في BME قطرات من كل بئر (هضم BME) عن طريق إضافة 20 ميكرولتر من محلول 100x ديسباس لكل بئر (لوحة 6-جيدا)، والتي تحتوي على 2 مل من المتوسطة العضوية، تليها 10 دقيقة من الحضانة في 37 درجة مئوية.
2. ماصة هضم organoids من جميع الآبار من خلال مرشح 70 ميكرومتر في أنبوب بلاستيكي 50 مل لجمع organoids.
3. عد organoids تحت المجهر لتحديد تركيز organoid. تعليق organoids باستخدام ثقافة المتوسطة، قبل إضافة BME للوصول إلى التركيز النهائي من 5٪ (v/v) على الجليد.
4. أضف 50 ميكرولتر من التعليق العضوي إلى كل لوحة من 384 بئرا مع موزع السائل ، وفقا لخريطة اللوحة مع كثافة بذر تبلغ 200 CR2110 PDXOs لكل بئر في متوسط الثقافة العضوية المقابلة.
علاج سيسبلاتين والإيرينوتكان
1. استخدام سيسبلاتين (مع تركيز أعلى من 100 ميكرومتر) و "irinotecan" (مع تركيز أعلى من 10 ميكرومتر). إضافة SN-38 (المستقلب من irinotecan, بدلا من irinotecan الذي يستخدم عادة في الدراسات في الجسم الحي) إلى كل بئر وفقا لمخطط تخفيف المخدرات لمدة 9 جرعات, في تخفيف المسلسل عن طريق dispener الرقمية.
2. إنشاء خريطة لوحة باستخدام أداة برنامج موزع الرقمية. وتشمل مركبة التحكم السلبية مع 100٪ البقاء والسيطرة على وظيفة من 5 ميكرومتر ستاروروسبورين, التي أظهرت 0٪ البقاء.
3. ضع الصفائح المعالجة بالمخدرات 384 بئرا مرة أخرى في حاضنة 37 درجة مئوية.
تحديد صلاحية الخلية العضوية بعد العلاج من المخدرات
1. في نهاية 5 أيام من العلاج الدوائي، حدد صلاحية الخلية العضوية باستخدام كاشفات قابلية بقاء الخلايا الإنارة وفقا للإجراء الموصى به من قبل الشركة المصنعة. إضافة كاشف الإنارة في كل بئر مع المفك السائل ومزيج لمدة 5 دقائق على شاكر لوحة، تليها حضانة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة في الظلام.
2. سجل إشارة الإنارة على قارئ لوحة متعددة الآبار.
3. حساب viabilities تطبيع كل بئر باستخدام قراءات الخام من قارئ لوحة وخلق منحنى الجرعة والاستجابة والقيم IC₅₀ من قبل منحنى غير الخطية المناسب.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

مورفولوجيا PDXOs ، نموذجية من organoids تحت المجهر الخفيف ، ومتسقة مع PDX الأبوية لكل تلطيخ H &؛ E
تحت المجهر الخفيف ، PDXO - CR2110 يوضح المورفولوجيا الكيسية النموذجية(الشكل 1A)، كما هو موضح سابقا للأعضاء المشتقة من المريض (PDO) ، والأدلة التي تدعم التشابه بين PDXO وPDO في ظل ظروف الثقافة نفسها.

يكشف الفحص النسيجي بواسطة تلطيخ H &؛ E أن هياكل الأنسجة وأنواع الخلايا PDXO-CR2110(الشكل 1B)تعكس PDX-CR211...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

تدعم البيانات الأولية ل PDX-/PDXO-CR2110 في هذا التقرير التكافؤ البيولوجي بين PDX ومشتقه ، PDXO ، فيما يتعلق بعلم الجينوم وعلم الأنسجة وعلم الأدوية ، لأن كلا النموذجين يمثلان أشكال المرض المستمدة من CSC الأصلي للمريض. كلا النموذجين هي نماذج المرض المشتقة من المريض، ويحتمل أن تكون تنبؤية للاستجابة السريرية للمرضى¹⁰^،¹¹^،¹²^،²¹. يمكن للزوج المطابق من نماذج المختبر وفي الجسم الحي أن يكمل كل منهما الآ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

جميع المؤلفين هم الموظفون الحاليون بدوام كامل في شركة كراون للعلوم الحيوية

شكر وتقدير

ويود المؤلفون أن يشكروا الدكتور جودي باربو وفيديريكا باريزي وراجندرا كوماري على القراءة النقدية للمخطوطة وتحريرها. كما يود المؤلفون أن يشكروا فريق كراون للأورام في مجال العلوم البيولوجية في المختبر وفي الجسم الحي على جهودهم التقنية الكبيرة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
Advanced DMEM / F12	Life Technologies	12634028	المتوسط الأساسي
DMEM	Hyclone	SH30243.01	وسط الغسيل
Collagenese النوع II	Invitrogen	17101015	Digest Tumor
Matrigel	Corning	356231	مصفوفة الثقافة العضوية (مستخلص الغشاء القاعدي ، عامل النمو المخفض)
N-Ac	Sigma	A9165	وسط الثقافة العضوية
A83-01	Tocris	2939	وسط الثقافة العضوية
B27	Life Technologies	17504044	وسط الثقافة العضوية
EGF	Peprotech	AF-100-15	وسط الثقافة العضوية
Noggin	Peprotech	120-10C	وسط الثقافة العضوية
نيكوتيناميد	سيجما	N0636	وسط الثقافة العضوية
SB202190	Sigma	S7076	وسط ثقافة العضوية
Gastrin	Sigma	G9145	وسط الثقافة العضوية
Rspondin	Peprotech	120-38-1000	متوسط الثقافة العضوية
L-glutamine	Life	Technologies 35050038	وسط الثقافة العضوية
Hepes	Life Technologies	15630056	الثقافة العضوية
البنسلين الستربتومايسين	Life Technologies	15140122	وسط الثقافة العضوية
Y-27632	Abmole	M1817	وسط الثقافة العضوية
Dispase	Life Technologies	فحص 17105041
فحص CellTiter-Glo 3D	Promega	G9683	فحص (مؤشر ATP المضيء)
موزع متعدد	القطرات حراري فيشر	Multidrop combi	طلاء العضيات / CellTiter-Glo 3D إضافة
موزع رقمي	Tecan	D300e	إضافة مركبة
Envision Plate	Reader Perkin Elmer	2104	قراءة تلألؤ
Balb / c الفئران العارية	Beijing HFK Bio-Technology Co
RNAeasy Mini Kit	Qiagen	74104	tRNA طقم
تنقيةDNA سهل الدم & مجموعة الأنسجة	Qiagen	69506	طقم تنقية الحمض النووي
Histogel	Thermo Fisher	HG-4000-012	تضمين عضوي

وسيط

المراجع

Tentler, J. J., et al. Patient-derived tumour xenografts as models for oncology drug development. Nature Reviews Clinical Oncology. 9 (6), 338-350 (2012).
Gao, H., et al. High-throughput screening using patient-derived tumor xenografts to predict clinical trial drug response. Nature Medicine. 21 (11), 1318-1325 (2015).
Yang, M., et al. Overcoming erlotinib resistance with tailored treatment regimen in patient-derived xenografts from naive Asian NSCLC patients. International Journal of Cancer. 132 (2), 74-84 (2013).
Li, Q. X., Feuer, G., Ouyang, X., An, X. Experimental animal modeling for immuno-oncology. Pharmacology & Therapeutics. 173, 34-46 (2017).
Sato, T., et al. Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche. Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).
Drost, J., Clevers, H. Organoids in Cancer Researchearch. Nature Reviews Cancer. 18 (7), 407-418 (2018).
Muthuswamy, S. K. Organoid Models of Cancer Explode with Possibilities. Cell Stem Cell. 22 (3), 290-291 (2018).
Sachs, N., et al. A Living Biobank of Breast Cancer Organoids Captures Disease Heterogeneity. Cell. 172 (1-2), 373-386 (2018).
Weeber, F., et al. Preserved genetic diversity in organoids cultured from biopsies of human colorectal cancer metastases. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (43), 13308-13311 (2015).
Vlachogiannis, G., et al. Patient-derived organoids model treatment response of metastatic gastrointestinal cancers. Science. 359 (6378), 920-926 (2018).
Yao, Y., et al. Patient-Derived Organoids Predict Chemoradiation Responses of Locally Advanced Rectal Cancer. Cell Stem Cell. 26 (1), 17-26 (2020).
Ganesh, K., et al. A rectal cancer organoid platform to study individual responses to chemoradiation. Nature Medicine. 25 (10), 1607-1614 (2019).
van de Wetering, M., et al. Prospective derivation of a living organoid biobank of colorectal cancer patients. Cell. 161 (4), 933-945 (2015).
Yang, J. P., et al. A novel RNAi library based on partially randomized consensus sequences of nuclear receptors: identifying the receptors involved in amyloid beta degradation. Genomics. 88 (3), 282-292 (2006).
Zhang, L., et al. A subset of gastric cancers with EGFR amplification and overexpression respond to cetuximab therapy. Scientific Reports. 3, 2992(2013).
Chen, D., et al. A set of defined oncogenic mutation alleles seems to better predict the response to cetuximab in CRC patient-derived xenograft than KRAS 12/13 mutations. Oncotarget. 6 (38), 40815-40821 (2015).
Guo, S., et al. Molecular Pathology of Patient Tumors, Patient-Derived Xenografts, and Cancer Cell Lines. Cancer Research. 76 (16), 4619-4626 (2016).
Sato, T., et al. Long-term expansion of epithelial organoids from human colon, adenoma, adenocarcinoma, and Barrett's epithelium. Gastroenterology. 141 (5), 1762-1772 (2011).
Tiriac, H., French, R., Lowy, A. M. Isolation and Characterization of Patient-derived Pancreatic Ductal Adenocarcinoma Organoid Models. Journal of Visualized Experiments. (155), (2020).
Kopper, O., et al. An organoid platform for ovarian cancer captures intra- and interpatient heterogeneity. Nature Medicine. 25 (5), 838-849 (2019).
Corcoran, R. B., et al. Combined BRAF and MEK Inhibition With Dabrafenib and Trametinib in BRAF V600-Mutant Colorectal Cancer. Journal of Clinical Oncology. , (2015).
Huch, M., et al. Long-term culture of genome-stable bipotent stem cells from adult human liver. Cell. 160 (1-2), 299-312 (2015).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

طعوم غريبة مشتقة من المرضى هضم الأنسجة مستخلص الغشاء القاعدي زراعة العضوانيات القص الميكانيكي الحفظ بالتجميد مقايسات الحساسية الدوائية مقارنة الملف الجينومي

خلق مطابقة في الجسم الحي / في المختبر المريض المستمدة من أزواج نموذج PDX وPDX المستمدة Organoids لأبحاث الصيدلة السرطان