التحقق الدوائي من تثبيط النبضات المسبقة للاستجابة المفاجئة في يرقات الزرد باستخدام نظام وبرامج آلية تجارية

Nancy  Saana Banono; Camila V. Esguerra

doi:10.3791/61423

مقالة منهجية

التحقق الدوائي من تثبيط النبضات المسبقة للاستجابة المفاجئة في يرقات الزرد باستخدام نظام وبرامج آلية تجارية

DOI:

10.3791/61423

⸱

يوليو 2, 2020

Nancy Saana Banono¹^,² , Camila V. Esguerra¹^,²

¹Chemical Neuroscience Group, Centre for Molecular Medicine Norway (NCMM), Faculty of Medicine, University of Oslo, ²Section for Pharmacology and Pharmaceutical Biosciences, Department of Pharmacy, Faculty of Mathematics and Natural Sciences, University of Oslo

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نصف هنا بروتوكولا يستخدم الأنظمة الآلية المتاحة تجاريا للتحقق من صحة مقايسة تثبيط النبضات (PPI) في سمك الزرد اليرقي.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في حين أن هناك وفرة من الأنظمة والبرامج الآلية التجارية والموحدة لإجراء اختبار تثبيط النبضات (PPI) في القوارض ، على حد علمنا ، فإن جميع فحوصات PPI التي تم إجراؤها في أسماك الزرد قد تم إجراؤها ، حتى الآن ، باستخدام أنظمة مخصصة كانت متاحة فقط للمجموعات الفردية. وبذلك يمثل ذلك تحديات، لا سيما فيما يتعلق بمسائل استنساخ البيانات وتوحيدها. في العمل الحالي ، أنشأنا بروتوكولا يستخدم الأنظمة الآلية المتاحة تجاريا للتحقق من صحة فحص PPI دوائيا في يرقات أسماك الزرد. تمشيا مع النتائج المنشورة ، تمكنا من تكرار نتائج أبومورفين وهالوبيريدول والكيتامين على استجابة PPI ليرقات الزرد بعد 6 أيام من الإخصاب.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تعتبر يرقة سمك الزرد (Danio rerio) مرشحا مناسبا لنمذجة الأمراض النفسية مثل الفصام (تمت مراجعته بواسطة Gawel et ^al.1) بسبب المزايا العديدة التي تمتلكها. وتشمل هذه الجينوم المتسلسل بالكامل مع تماثل تسلسل بنسبة 70٪ مع تقويم العظام البشري² ، ووجود أدوات وراثية أمامية وعكسية لمعالجة الجينوم وتحديد مساهمة جين معين في التطور أو المرض³ ، ووجود الناقلات العصبية الرئيسية للإنسان / القوارض في دماغ سمكة الزرد⁴. هناك توافر العديد من مجالات النمط الظاهري العصبي في الزرد ، مثل القلق والتعلم والذاكرة³. الشفافية البصرية والحساسية للفئات الرئيسية من الأدوية العصبية تجعلها مرشحا مثاليا للاختيار للتلاعب الدوائي وفحص الأدوية المظهرية⁵^،⁶.

لإجراء فحص عالي الإنتاجية للأدوية ، من المهم للغاية الأتمتة ووجود نمط داخلي قوي⁷. على سبيل المثال ، تم تطوير مجموعة متنوعة من تقنيات التسجيل التلقائي لقياس سلوك الزرد اليرقي مثل thigmotaxis ، والاستجابة المفاجئة ، والاستجابة البصرية ، والاستجابة الحركية البصرية ، والتعود ، والتقاط الفريسة ، وسلوك النوم / الاستيقاظ ، والسلوك الحركي والعديد من التقنيات الأخرى⁶. بينما تقوم بعض المختبرات بتطوير أنظمة مصممة خصيصا للقياسات الآلية وتحليل بعض هذه السلوكيات ، هناك أنظمة تصوير وبرامج متاحة^{تجاريا 8}^،⁹^،¹⁰^،¹¹. تم استخدام تثبيط النبضات المسبقة (PPI) ، وهو شكل من أشكال البوابات الحسية الحركية التي يتم فيها تقليل الاستجابة المفاجئة عند تقديم حافز ضعيف غير مذهل لفترة وجيزة قبل المنبه المذهل ، كنمط داخلي لدراسة الفصام في النماذج الحيوانية (تمت مراجعته^{بواسطة 12}^،¹³). بالإضافة إلى ذلك ، لعبت الاستجابة الصوتية للدهشة (ASR) و PPI أدوارا مفيدة في دراسة وظيفة السمع والسمع في النماذج الحيوانية بما في ذلك سمك الزرد¹⁴^،¹⁵. تظهر اليرقات السمكة الزردية بداية مميزة على شكل حرف C استجابة لمحفز مذهل غير متوقع يتم تقليله بواسطة حافز أضعف يسمى النبض. لطالما وصف C-start بأنه سلوك هروب تتحكم فيه مجموعات الخلايا العصبية المميزة وقد تم تمييزه بدقة في يرقات الزرد¹⁵^،¹⁶^،¹⁷.

هناك وفرة من الأنظمة والبرامج الآلية التجارية والموحدة لإجراء اختبار PPI في القوارض¹⁸^،¹⁹^،²⁰. ومع ذلك ، على حد علمنا ، تم إجراء جميع فحوصات PPI التي تم إجراؤها في أسماك الزرد حتى الآن باستخدام أنظمة مخصصة متاحة فقط للمجموعات الفردية¹⁵^،¹⁶^،²¹^،²². ويمثل هذا تحديات أمام تحقيق قابلية استنساخ البيانات وقابليتها للتكرار فيما يتعلق بالتوحيد^{القياسي 23}.

في الآونة الأخيرة ، طور بائع معروف في مجتمع أسماك الزرد إعدادا مضمنا بكاميرا سريعة وإضافات مولد PPI لإجراء اختبار PPI في يرقات أسماك الزرد²⁴. الكاميرا يسجل في 1000 إطار في الثانية مما يتيح تسجيل السلوكيات سريعة المفعول مثل C-start, بينما يسمح مولد PPI للتسليم الذي يتحكم فيه المستخدم من مختلف المحفزات الصوتية لإثارة استجابة مذهلة²⁴. هنا ، نجمع بين النظام المذكور أعلاه وحزمة برامج شاملة متاحة تجاريا مصممة للتحليل الآلي للسلوكيات المعقدة¹¹ ، لإنشاء بروتوكول لإجراء فحوصات استجابة PPI في يرقات الزرد. نقوم بالتحقق من صحة استجابة PPI دوائيا باستخدام 1) أبومورفين ، وهو ناهض دوبامين معروف بأنه يسبب عجزا في PPI. 2) هالوبيريدول ، مضاد للدوبامين ومضاد للذهان معروف بتعزيز PPI و 3) الكيتامين ، وهو مضاد لمستقبلات NMDA معروف بتعديل PPI.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت الموافقة على جميع التجارب على من قبل نظام الإشراف والتطبيق التابع لهيئة سلامة الأغذية النرويجية لإدارة التجريبية (FOTS-18 / 106800-1).

1. تربية أسماك الزرد

قم بتزاوج من الذكور والإناث من أسماك الزرد البالغة من النوع البري (Danio rerio) ، يتم الحفاظ عليها في ظل الظروف القياسية²⁵ في المساء السابق. هنا ، يتم استخدام سلالة Tupfel ذات الزعانف الطويلة (TL).
قم بإزالة الحواجز في صباح اليوم التالي واتركها تتزاوج من خلال التفريخ الطبيعي.
اجمع البيض من خزانات التزاوج.
قم بإزالة البيض غير المخصب والحطام الآخر ، ثم انقل البيض إلى أطباق بتري (ن = 60) وقم برفعه في حاضنة عند 28 درجة مئوية في وسط الجنين: 1.5 ملي مولار HEPES ، درجة الحموضة 7.6 ، 17.4 ملي كلوريد الصوديوم ، 0.21 ملي كلوريد الصوديوم ، 0.12 ملي مللي سوليكاليد المغنيسيوم 4 ، و 0.18 ملي كالسيوم (NO3) ₂.
تجديد نصف وسط الجنين وإزالة اليرقات الميتة يوميا حتى 6 dpf.
ملاحظة: تم إجراء جميع التجارب على اليرقات الفردية بعد 6 أيام من الإخصاب (dpf).

2. العوامل الدوائية والمعالجة المسبقة لليرقات

قم بإذابة الأبومورفين والكيتامين في وسط E3 لعمل محاليل مخزون 500 ميكرومتر و 10 ملي مولار على التوالي.
قم بإذابة هالوبيريدول في 100٪ ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) لعمل محلول مخزون 10 ملليمتر. كان التركيز النهائي ل DMSO المستخدم 0.1٪.
استخدم 0.1٪ DMSO و E3 وسيط كعناصر تحكم في السيارة.
استخدم التركيزات النهائية التالية من الأدوية: 10 ملغم/مل من أبومورفين، 1 ملي مولار كيتامين، 20 ميكرومولار هالوبيريدول¹⁶.
قم بتعريض يرقات مجموعات الأبومورفين والكيتامين مسبقا لمدة 10 دقائق ومجموعات التحكم في مركبات الهالوبيريدول و DMSO لمدة 20 دقيقة^{و 16}.

3. الإعداد قبل اختبار السلوك

في يوم التجربة ، انقل اليرقات وجميع المواد ذات الصلة إلى غرفة التجربة. اضبط غرفة التجربة على درجة حرارة 27 ± 1 درجة مئوية.
تأكد من أن ضوضاء الخلفية في غرفة الاختبار منخفضة قدر الإمكان، ويفضل ألا تزيد عن مستوى ضغط الصوت (SPL) 45 ديسيبل.
1. قم بتثبيت ميكروفون مقياس الموجات فوق الصوتية لمقياس الديسيبل (ديسيبل) في غرفة الاختبار (فتحة التثبيت مملة بالفعل من قبل الشركة المصنعة).
2. لتقليل ضوضاء الخلفية في الغرفة ، قم بعزل غرفة الاختبار بكابينة صوت مصممة خصيصا (انظر الشكل 1 ب للحصول على نظرة عامة على الإعداد).
قم بإعداد صفيحة 96 بئرا لاختبار تثبيط النبض.
ملاحظة: تتميز كاميرا الفيديو بدقة 2048 × 500 بكسل ، مما يعني أنه يمكن تصوير 3 ممرات كحد أقصى (33 بئرا) في المرة الواحدة.
1. استخدم لوحة أكريليك مصنوعة خصيصا بتنسيق 96 بئرا لتقليل التداخل من الظلال.
  ملاحظة: يمكن العثور على قياسات اللوحة المخصصة على الموقع التالي: https://zenodo.org/record/3739378#.XooyLW5uKas
بمساعدة ماصة النقل ، انقل 310 ميكرولتر من محلول / وسط مع يرقة واحدة في كل بئر.
قم بمعايرة وقياس شدة التحفيز باستخدام مقبض الصوت لمكبر الصوت الاستريو ومقياس الديسيبل على التوالي.
سجل الحد الأقصى لشدة الصوت في قسم "مرجع المستوى".

4. معلمات التحفيز والحصول على الفيديو

قم بتشغيل الكمبيوتر ونظام مكبر الصوت ومقياس ديسيبل (انظر الشكل 1A للحصول على نظرة عامة على الإعداد).
استخدم مقبض مستوى الصوت عن طريق تدويره إلى الحد الأدنى أو الحد الأقصى لضبط شدة الصوت.
1. تحقق من مستوى الصوت باستخدام مقياس ديسيبل في كل مرة ، يتم ضبط مقبض مستوى الصوت. هذا مهم في العثور على الحد الأقصى والحد الأدنى لشدة الصوت التي يمكن أن ينتجها الإعداد.
  ملاحظة: يحسب مقياس ديسيبل خرج ديسيبل RMS للتحفيز. يولد النظام الصوت داخل المكونات الصلبة لغرفة الاختبار ، مما يحافظ على ثبات اللوحة مع إنتاج اهتزاز في المستوى الأفقي لدعم اللوحة بالكامل.
  1. اضبط مقبض الصوت إلى الحد الأقصى ، وقم بقياس شدة الصوت باستخدام مقياس ديسيبل واستخدم هذه القيمة.
على واجهة مولد PPI ، حدد المعلمات: الفاصل الزمني بين التحفيز الممثل على أنه تأخير ؛ الفاصل الزمني بين المحاكمات ممثلة على أنها وقت دلتا الاستحواذ ؛ مدة النبض الخ.
1. بالنسبة لتجارب النبض المبذول وحده ، تأكد من ضبط "السعة" أو مدة التحفيز لمعلمات Startle على الصفر والعكس صحيح للتجارب المذهلة وحدها.
لإنشاء قائمة تجريبية، حدد إضافة > إعطاء اسم للإصدار التجريبي. على سبيل المثال ، "Prepulse 50 dB وحده".
ملاحظة: يمكن للمرء إنشاء العديد من التجارب حسب الرغبة ، ولكن كن حذرا من طول القائمة لأن هذا يمكن أن يتعطل البرنامج.
1. تجارب التشذير مع تجارب النبض وحده في جميع تجارب PPI باستخدام ترتيب عشوائي زائف. عندما يتم تقديم محفزات متعددة في التجربة ، يتم استخدام فاصل زمني بين المحاكمات (ITI) يبلغ 30 ثانية.
  ملاحظة: في هذه الدراسة ، تم استخدام محفز مذهل (نبض) 100 مللي ثانية بتردد 660 هرتز ، و 5 مللي ثانية محفزات النبضة المسبقة بتردد 440 هرتز. بالنسبة لتجارب PPI ، كان الفاصل الزمني بين التحفيز (ISI) 100 مللي ثانية.
لحفظ البروتوكول، حدد ملف > حفظ باسم.
اضبط ظروف الإضاءة في غرفة الاختبار على النحو التالي.
1. قم بتشغيل حوسبة قياس USB ، وحدد التناظرية ثم انتقل إلى D / A OUT O (P13) لإجراء تغييرات على الإضاءة. تعني قيمة الصفر عدم وجود ضوء مع زيادة قيمة D / A OUT O ، مما يزيد من شدة الضوء في الصندوق. تم استخدام شدة الضوء 100 في جميع التجارب.
إعداد الكاميرا
1. قم بتشغيل البرنامج وانتظر حتى يتم تحميل الكاميرا.
2. حدد التعديلات (الموجودة على الجانب الأيمن) واضبط معدل إطارات الاكتساب على 1,000 ثم انقر فوق تطبيق لتنفيذ التغيير.
تأقلم اليرقات مع غرفة اختبار مضاءة بالضوء بنسبة 100٪ لمدة 5 دقائق قبل بدء التجارب.
لبدء تجربة ، حدد قائمة التجربة في مولد PPI ، وانقر فوق تشغيل وتنسيق تحديد البئر (على سبيل المثال ، 33 بئرا).
1. تأكد دائما من تشغيل برنامج الكاميرا بالإعدادات الصحيحة قبل إجراء التجربة.
2. احصل على مقطع فيديو بطول 2 ثانية لكل إصدار تجريبي.
3. تأكد من تعيين معدل إطارات الاستحواذ على 1,000.

5. التتبع الآلي والتحليل للاستجابة الصوتية للذهاب و PPI

إعداد البروتوكول.
1. قم بتشغيل برنامج التحليل (انظر جدول المواد). اختر جديد من القالب > قم بتطبيق قالب محدد مسبقا ثم انتقل إلى القوائم الأخرى (التفاصيل أدناه).
  1. اختر من ملف الفيديو ضمن مصدر الفيديو.
  2. تصفح ملف الفيديو. قم بتعيين الموضوع كقالب منطقة > > يرقات سمك الزرد (بدون قالب). حدد عدد الساحات ضمن الساحات.
  3. حدد عدد الأهداف لكل ساحة (تم تعيينها على أنها 1) ضمن الموضوعات.
  4. حدد اكتشاف النقطة المركزية ونقطة الأنف وقاعدة الذيل ضمن الميزات المتعقبة (انظر الشكل 2أ ، ب).
    ملاحظة: هذا مهم لحساب زاوية الجسم لاستجابة C-start (انظر الشكل 2C).
  5. انقر على الاسم > حفظ باسم. الوحدات المستخدمة هي مم ، s ، درجة للمسافة والوقت والدوران على التوالي.
    ملاحظة: تذكر استخدام نفس الوحدة لمعايرة المقياس.
2. اختر إعداد الساحة.
  1. انقر فوق الاستيلاء على صورة الخلفية.
  2. اتبع الخطوات الموجودة في القائمة اليمنى (إذا كنت في شك ، فاستخدم قائمة المساعدة ).
  3. اختر أداة رسم الدائرة لرسم الساحات.
3. اختر إعدادات التحكم في الإصدار التجريبي > إنشاء اسم > جديد.
4. اختر إعدادات الاكتشاف ، واتبع الخطوات الموجودة في القائمة اليمنى.
  1. اضبط معدل العينة على 25. اختر إعدادات الكشف المتقدمة. ضمن الطريقة، حدد الطرح الديناميكي، النموذج المتقدم/الأسماك البالغة، ثم اضبط لون الموضوع مقارنة بالخلفية على أنه أغمق وحرك شريط التمرير لتحديد تباين اليرقة.
  2. تحت محيط الموضوع ، حدد تآكل أولا ، ثم قم بتوسيع وزيادة قيم تآكل الكنتور والتمدد حتى يتم اكتشاف تماما.
5. احفظ البروتوكول واستخدمه للتحليلات اللاحقة لمقاطع فيديو PPI التي تم الحصول عليها.
إعداد قائمة الإصدارات التجريبية.
1. اختر قائمة التجارب ، وحدد المتغيرات المستقلة مثل معرف اليرقات ، والعلاج ، ونوع التحفيز ، وما إلى ذلك. حدد مسار مقاطع الفيديو وحدد قائمة بالإصدارات التجريبية للحصول على دفعات.
إعداد الاستحواذ.
ملاحظة: إذا تم إنشاء قائمة تجريبية ، فيمكن للمرء إجراء عملية اقتناء دفعة واحدة لمقاطع الفيديو.
1. في حالة فقدان بعض المسارات، استخدم محرر المسارات لضبط الميزات التي تم تعقبها.
2. استبعاد أخطاء التتبع التي تظل دون حل بعد استخدام محرر المسار من التحليل.
3. اضبط ملف تعريف تنعيم المسار على 1 مم لتقليل التشويش من البيانات. يمكن تعديل ذلك بناء على نشاط خلفية اليرقات.
إعداد التحليل.
1. لتحديد الإصدارات التجريبية المراد تحليلها، اختر ملفات تعريف البيانات وحدد المسارات استنادا إلى المتغير المستقل محل الاهتمام.
  ملاحظة: إذا كانت المكونات مخفية، فانقر فوق رمز العين في الزاوية اليمنى العليا للعرض.
  1. تصفية أجزاء من التجارب المراد تحليلها (على سبيل المثال ، بناء على العلاج أو نوع مجموعة التحفيز).
  2. حدد جزءا من المسارات المراد تحليلها (التداخل). في هذه الدراسة ، تم تداخل البيانات للمسارات بين بداية التحفيز و 100 مللي ثانية بعد بداية التحفيز.
  3. تذكر توصيل جميع المرشحات ومربعات التعشيش بخطوط الأسهم لإكمال التعليمات.
2. حدد المتغيرات التابعة المراد تحليلها ، وحدد ملفات تعريف التحليل وحدد المتغيرات ذات الاهتمام (ركز على الجسم تحت المتغيرات التابعة).
  ملاحظة: إذا كانت المكونات مخفية، فانقر فوق رمز العين في الزاوية اليمنى العليا للعرض.
  1. انقر نقرا مزدوجا فوق زاوية الجسم. حدد الانحناء المطلق. انتقل إلى إعدادات الإصدار التجريبي وحدد الحد الأقصى، ثم انقر فوق إضافة.
3. انقر نقرا مزدوجا فوق حالة زاوية الجسم. قم بتعيين الفاصل الزمني للمتوسط إلى 5 عينات. تعيين عتبة زاوية الانحناء. لحساب إحصائيات الانحناء، انتقل إلى إحصائيات الإصدار التجريبي وحدد زمن الانتقال إلى > الإضافة الأولى. كرر الخطوات حتى يتم الحصول على عتبات متفاوتة (تم استخدام ما بين 20-80 درجة) وقم بالاسم وفقا لذلك.
4. إنشاء الإحصائيات والرسوم البيانية.
  1. اختر التحليل > النتائج > الإحصائيات والرسوم البيانية، ثم انقر على حساب.
  2. تأكد من تعيين ملفات تعريف البيانات والتحليل على القالب الصحيح حيث يمكن إنشاء العديد من القوالب تحت كل قسم.
5. تصدير إحصائيات المحاكمة والمجموعة كملفات جداول بيانات للمعالجة والتحليل.

6. تحليل البيانات

افتح ملف جدول البيانات الذي يحتوي على إحصائيات الإصدار التجريبي.
حدد الأعمدة زاوية الجسم أقصى درجة ، زمن انتقال منحني (من عتبات زاوية الجسم المختلفة).
ضع في اعتبارك كل تغيير في زاوية الجسم ≥ 30 درجة ضمن زمن انتقال قطع يبلغ 50 مللي ثانية بعد بداية التحفيز كاستجابة إيجابية لبدء C (أي مستجيب). أولئك الذين لديهم زاوية جسم < 30 درجة هم غير مستجيبين.
بطريقة ثنائية ، قم بتعيين 1 ليرقة مستجيبة و 0 لليرقات غير المستجيبة لكل لوحة.
1. احسب العدد الإجمالي للمستجيبين واليرقات غير المستجيبة لكل لوحة. احسب المستجيبين (٪) في كل حالة محسوبة على أنها (عدد اليرقات المستجيبة / العدد الإجمالي لليرقات) × 100. استبعاد اليرقات التي تستجيب أقل من 30٪ للتحفيز المذهل من التحليل¹⁶.
  ملاحظة: تعتبر أي شدة تحفيز قادرة على استنباط استجابة C-start تساوي أو تزيد عن 70٪ من اليرقات حافزا مذهلا مناسبا¹⁶.
احسب ٪ PPI على أنها 100 × (النسبة المئوية للاستجابة للتحفيز المذهل - النسبة المئوية للاستجابة للنبض المسبق + تسلسل الذهول) / (النسبة المئوية للاستجابة للتحفيز المذهل) ¹⁶.

7. التحليل الإحصائي

اعرض البيانات كمتوسط ± الانحراف المعياري، S.D. (انظر جدول المواد للبرامج الإحصائية).
تحديد تأثيرات شدة النبضة المتفاوتة على استجابة اليرقات باستخدام ANOVA أحادي الاتجاه متبوعا باختبار Tukey اللاحق .
استخدم ANOVA ثنائي الاتجاه متبوعا باختبار Holm-Sidak اللاحق لتحديد آثار العلاج بالعقاقير على استجابة PPI ٪ مع شدة نبضة متفاوتة.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم إجراء ثلاث تجارب للتحقق من صحة بروتوكول الجمع بين أنظمة متعددة لتحليل تثبيط النبضة المسبقة لاستجابة الذهول الصوتية في يرقات الزرد. أولا ، تم اختبار القدرة على تقديم المحفزات الصوتية بدقة والتقاط استجابة اليرقات للتحفيز المذهل. بعد ذلك ، تم التحقق من صحة القدرة على تخفيف الاستجابة المفاجئة عند تقديم حافز النبض. أخيرا ، تم إنشاء القدرة على الكشف عن التعديل الدوائي لتثبيط النبضات المسبقة للاستجابة المفاجئة بواسطة أدوية أبومورفين وهالوبيريدول والكيتامين.

استجابة يرقات الزرد لمحفزات الدهشة الصوتية
أظهرت الأعمال السابقة أن يرقات الزرد تظهر بداية C مميزة عند تقديمها مع حافز صوتي^{مذهل 16}. تم اختبار القدرة على تحريض سلوك اليرقات والتقاطها على المحفزات المذهلة. لوحظت أن اليرقات المسجلة تعرض استجابة C-start (الشكل 2). كان الحافز 70 ديسيبل إعادة (100 مللي ثانية ، 660 هرتز ، الشكل التكميلي 1 أ) قويا بما يكفي لاستنباط استجابة في ≥70٪ من اليرقات (الشكل 3 أ). عند تقديمه بشكل متكرر 30 مرة في فترة زمنية بين التجارب يبلغ 30 ثانية ، لم ينتج عن 70 ديسيبل إعادة التحفيز تعويد اليرقات (N = 3 مكررات ؛ 16 يرقات / تكرار) ، كما هو موضح في الشكل 3 ب.

يقلل النبض المفاجئ من الاستجابة المفاجئة ليرقات الزرد للمنبهات الصوتية
يظهر عدد كبير من الأدلة أن محفزات النبض تعدل استجابة اليرقات لمحفز مذهل¹⁵^،²¹^،²²^،²⁶. تم استخدام نموذج ثنائي النبضات ، حيث يسبق حافز ضعيف يسمى النبضة المسبقة الحافز المحفز للذهول المسمى النبض. كانت محفزات النبضة المسبقة المستخدمة إما أقل بمقدار 20 أو 17 أو 14 ديسيبل من محفز النبضة الذي تم ضبطه عند 70 ديسيبل إعادة. تم تقديم النبضة المسبقة (5 مللي ثانية ، 440 هرتز) دائما قبل 100 مللي ثانية من بداية النبضة (الشكل التكميلي 1 ب). قلل كل محفز نبضة تم اختباره بشكل كبير من استجابة اليرقات للنبض. في الشكل 4 ، تظهر استجابة اليرقات (٪) لمحفزات المفاجئة الصوتية ل 6 dpf TL في وسط E3 ، N = 6 (16 يرقة / مجموعة). كانت النسبة المئوية لليرقات المستجيبة للتحفيز المذهل (النبض) 79.86 ± 9.772. ومن المتوقع أن يكون التحفيز المذهل مسبوقا إما بنبضة أولية قدرها 50 أو 53 أو 56 ديسيبل، انخفضت استجابة اليرقات إلى 40.87٪ ± 11.30٪ و 39.58٪ ± 7.345٪ و 29.17٪ ± 9.350٪ على التوالي. كشف تحليل Anova أحادي الاتجاه عن اختلاف إحصائي في تأثير التحفيز على اليرقات (F (3 ، 48) = 57.23 ، P < 0.0001) مع كشف اختبار المقارنات المتعددة ل Tukey عن دلالة إحصائية عبر المجموعات عند فاصل ثقة 95٪.

التعديل الدوائي لتثبيط النبضة
أظهرت الدراسات السابقة أن أدوية الدوبامين ، أبومورفين وهالوبيريدول ، بالإضافة إلى عقار الجلوتاماتيرجيك ، الكيتامين ، معدلة بشكل كبير تثبيط النبضات في اليرقات تماما كما هو الحال في معادلاتها من الثدييات والقوارض¹⁶. تم اختيار تركيزات التحقق من صحة الإعداد بناء على هذه الدراسات. كان الفاصل الزمني بين التحفيز (ISI) لجميع التجارب الدوائية 100 مللي ثانية.

تأثير الأبومورفين على تثبيط النبضة
في الشكل 5 ، أظهرت اليرقات المعالجة مسبقا ب 10 مجم / مل أبومورفين لمدة 10 دقائق انخفاضا عاما في النسبة المئوية لقياس مضخة البروتين مقارنة باليرقات الضابطة E3 (ANOVA ثنائي الاتجاه ، غير RM (العوامل: شدة العلاج والنبضة المسبقة ؛ العلاج: F (1 ، 34) = 16.21 ، ص = 0.0003 ؛ شدة النبض: F (2 ، 34) = 8.674 ، P = 0.0009 ، أظهر هذا تفاعلا غير مهم: F (2 ، 34) = 2.514 ، ص = 0.0959). للتحقيق في الاختلافات بمزيد من التفصيل ، كشف اختبار Holm-Sidak اللاحق عن اختلافات ذات دلالة إحصائية في الاستجابة المذهلة بين التحكم E3 واليرقات المعالجة بالأبومورفين عند شدة النبضة 53 (p = 0.0126) و 56 (p = 0.0044) ولكن ليس عند 50 ديسيبل (p = 0.5813).

تأثير هالوبيريدول على تثبيط النبضة
يوضح الشكل 6 زيادة إجمالية في النسبة المئوية لقياس مضخة البروتابكسل في اليرقات المعالجة مسبقا لمدة 20 دقيقة مع 20 ميكرومتر هالوبيريدول مقارنة بتلك الموجودة في وسط E3 (ANOVA ثنائي الاتجاه ، غير RM (العوامل: شدة المعالجة والنبضة المسبقة ؛ العلاج: F (1 ، 32) = 20.75 ، ص < 0.0001 ؛ شدة النبضة: F (2 ، 32) = 3.147 ، p = 0.0565 ، مع عدم وجود تفاعل معتد به: F (2 ، 32) = 0.7455 ، ص = 0.4826). باستخدام اختبار Holm-Sidak اللاحق ، لوحظ وجود دلالة إحصائية فقط عند شدة النبضة 53 (p = 0.00489 و 56 (p = 0.0348) ولكن ليس عند 50 ديسيبل (p = 0.067).

تأثير الكيتامين على تثبيط النبضات
يوضح الشكل 7 أنه في شدة تحفيز النبضة المختلفة ، كانت هناك اختلافات في الاستجابة المذهلة بين يرقات التحكم في E3 وتلك المعالجة مسبقا لمدة 10 دقائق في 1.0 ملي مولار من الكيتامين (ANOVA ثنائي الاتجاه ، غير RM (العوامل: شدة العلاج والنبض المسبق ؛ العلاج: F (1 ، 35) = 25.46 ، ص < 0.0001 ؛ شدة النبض: F (2 ، 35) = 6.018 ، ص = 0.0057 ، مع عدم وجود تفاعل كبير: F (2 ، 35) = 0.8450 ، ص = 0.4381). أظهر اختبار Holm-Sidak اللاحق دلالة فقط عند شدة النبضة 50 (p = 0.0039) و 53 (p = 0.0027) ، ولكن ليس عند 56 ديسيبل (p = 0.0802).

figure-results-1
الشكل 1: جهاز الاختبار. (أ) لمحة عامة عن تجهيز المعدات. (ب) العزل الداخلي لمعدات الإعداد لتقليل ضوضاء الخلفية أثناء التجارب. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

figure-results-2
الشكل 2: تحليل استجابة الذهول الصوتية لسمك الزرد اليرقي. (أ) بداية C-start مميزة تعرضها 6 يرقات من سمك الزرد عند 6 dpf. (ب) صورة تمثيلية للملامح الثلاثة المتعقبة المتراكبة على يرقة 6 dpf: نقطة الوسط (حمراء) ونقطة الأنف (سماوي) وقاعدة الذيل (أرجوانية). (ج) صورة تمثيلية لزاوية الانحناء المطلقة التي تعرضها يرقات من النوع البري 6-dpf TL. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

figure-results-3
الشكل 3: تحديد عتبة الذهول الصوتي. (أ) شدة التحفيز البالغة 70 ديسيبل (ممثلة بخطوط اندفاعة حمراء) قادرة على استنباط استجابة C-start في >70٪ من اليرقات (N = 33 ؛ 6 dpf TL). (ب) لا تعتاد اليرقات على 70 ديسيبل إعادة التحفيز المقدمة 30 مرة (التجارب) في فاصل زمني بين التجارب قدره 30 ثانية (N = 3 مكررات؛ 16 يرقة / مكررة). يتم تقديم البيانات كمتوسط ± S.D. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

figure-results-4
الشكل 4: الانخفاض الناجم عن النبض المسبق في استجابة اليرقات (٪). تتسبب محفزات ما قبل النبض عند 20 و 17 و 14 ديسيبل أقل من 70 ديسيبل في انخفاض عدد المستجيبين C-start من النوع البري TL. جميع البيانات الممثلة كمتوسط ± SD ، N = 5 (16 يرقة / مجموعة) ، ****p < 0.0001 ، تختلف اختلافا كبيرا عن التحفيز المذهل بواسطة اختبار Tukey اللاحق بعد ANOVA أحادي الاتجاه. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

figure-results-5
الشكل 5: العجز الناجم عن الأبومورفين في ٪ PPI. يتم تقديم جميع البيانات كمتوسط ± SD ، N = 4 - 4 - 4 (16 يرقة / مجموعة) ، وهو فرق ذو دلالة إحصائية من خلال اختبار Holm-Sidak اللاحق بعد ANOVA ثنائي الاتجاه. * ص = 0.0126 ، المجموعة المعالجة E3 ctl / apomorphine عند 53 ديسيبل ؛ ** p = 0.0044 ، E3 ctl / apomorphine المجموعة المعالجة عند 56 ديسيبل. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

figure-results-6
الشكل 6: التعزيز الناجم عن الهالوبيريدول في ٪ PPI. يتم تقديم جميع البيانات كمتوسط ± S.D. ، N = 4 - 4 - 4 (16 يرقة / مجموعة) ، فرق ذو دلالة إحصائية من خلال اختبار Holm-Sidak اللاحق بعد Anova ثنائي الاتجاه. ** p = 0.0048 ، DMSO ctl / apomorphine المجموعة المعالجة عند 53 ديسيبل ؛ * ص = 0.0348 ، المجموعة المعالجة ب DMSO ctl / apomorphine عند 56 ديسيبل. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

figure-results-7
الشكل 7: التعزيز الناجم عن الكيتامين في ٪ PPI. جميع البيانات الممثلة كمتوسط ± SD ، N = 4 - 4 - 4 - مجموعة ، فرق ذو دلالة إحصائية من خلال اختبار Holm-Sidak اللاحق بعد Anova ثنائي الاتجاه ** p = 0.0039 ، E3 ctl / apomorphine المجموعة المعالجة عند 50 ديسيبل ، ** p = 0.0027 ، E3 ctl / apomorphine المجموعة المعالجة عند 53 ديسيبل. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

فيديو تكميلي 1: فيديو تمثيلي لليرقات تعرض بداية C استجابة لتحفيز مذهل صوتي قدره 70 ديسيبل. الرجاء النقر هنا لتنزيل هذا الفيديو.

الشكل التكميلي 1: أمثلة تمثيلية لظروف التحفيز المتولدة باستخدام مولد PPI. (أ) تجربة التحفيز وحده ، (ب) تجربة تثبيط ما قبل النبض (ما قبل النبض + النبض) ، (ج) لا توجد تجربة تحفيز لقياس زاوية انحناء خط الأساس لليرقات غير المحفزة. الرجاء النقر هنا لتنزيل هذا الرقم.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

من الضروري التحقق من صحة أي نظام فحص سلوكي جديد بهدف تحسين وتحسين بروتوكولات البحوث السلوكية العصبية. في التحقيق الحالي ، تم تقييم قدرة نظامين وبرمجيات متاحتين تجاريا على إحداث استجابة مذهلة صوتية في يرقات أسماك الزرد واكتشاف وتحديد التعديل الدوائي الموصوف سابقا لمثل هذه السلوكيات.

تم إجراء عدد من التعديلات واستكشاف الأخطاء وإصلاحها لتحسين الإعداد. كان البرنامج الافتراضي لتحليل استجابات C-start هو أن التحليل يستمر تلقائيا بعد الحصول على البيانات الخاصة بكل تجربة (شكلت 22 تجربة / لوحة تجربة). أدى ذلك إلى تقليل عدد اللوحات التي يمكن تشغيلها يوميا ، وبالتالي تقليل الإنتاجية (5 لوحات في اليوم). لتجنب هذا القيد ، كانت هناك حاجة لفصل برنامج التحليل عن عملية جمع البيانات ، مما أدى إلى زيادة الإنتاجية إلى متوسط 10 لوحات في اليوم. وبالتالي ، أثبت قرار اللجوء إلى برنامج تحليل مستقل للتحليل غير المباشر نجاحه وأكثر كفاءة. لتجنب التداخل من الظلال أو الحطام الآخر الذي يدخل ضوضاء للبيانات ، يوصى بملء الآبار بالكامل بالوسط ، وإزالة جميع الفقاعات وتجنب جزيئات الطعام أو ما شابه ذلك التي يمكن الخلط بينها وبين اليرقات ، وبالتالي توليد ضوضاء في البيانات. وبعد معايرة المحفزات الصوتية، كانت الكثافة القصوى التي يمكن أن يصل إليها نظام مكبر الصوت كما التقطها مقياس ديسيبل 85 ديسيبل إدعاء، في حين كانت ضوضاء الخلفية الأولية في غرفة الاختبار 60 ديسيبل إدعاء. نتج عن ذلك نافذة ديسيبل ضيقة للعمل فيها. وبالتالي ، كان من الأهمية بمكان الحفاظ على ضوضاء الخلفية في أدنى حد ممكن. لتحقيق ذلك ، تم استخدام مادة صوتيات parafon (انظر جدول المواد) لبناء طبقة إضافية من العزل حول غرفة الاختبار وطبقة إضافية من العزل باستخدام حزمة كشك صوتي (انظر جدول المواد). مع طبقات العزل هذه ، تم تقليل ضوضاء الخلفية داخل غرفة الاختبار بنجاح من 60 ديسيبل أولي إلى 45 ديسيبل إعادة.

حاليا ، تتمثل إحدى ميزات هذا الإعداد في أن جميع المكونات متاحة تجاريا وعلى هذا النحو ، لا تقتصر على عدد قليل من المختبرات فقط. يمكن للأفراد ذوي المعرفة المحدودة في لغة الترميز استخدامه ، حيث أن البروتوكول سهل الفهم والمتابعة. على سبيل المثال ، باستخدام نظام PPI ، كان من الممكن توصيل النبضات والنبضات المسبقة على فترات متفاوتة بين التحفيز وبين التجارب ، بالإضافة إلى التقاط استجابات اليرقات لمثل هذه المحفزات. بمجرد التقاط هذه السلوكيات ، يمكن تصنيفها باستخدام برنامج التحليل إلى مستجيبين وغير مستجيبين. تم تصنيف مجموعة المستجيبين على أنها يرقات عرضت بداية C تبلغ 30 درجة أو أكثر بزمن انتقال يبلغ <50 مللي ثانية. بالإضافة إلى ذلك ، يتم تعديل استجابة PPI بواسطة الأدوية التي تستهدف إشارات الدوبامين والجلوتاماتيرجيك (تمت مراجعتها بواسطة Geyer^{وزملاؤه 27}). تمشيا مع الدراسات السابقة ، قلل الأبومورفين ، ناهض مستقبلات الدوبامين غير الانتقائي ، من تثبيط ما قبل النبض للاستجابة المفاجئة في يرقات أسماك الزرد ، بينما عزز الهالوبيريدول مضاد للدوبامين الاستجابة. في يرقات أسماك الزرد ، ثبت أن الكيتامين يعدل PPI بشكل تفاضلي بناء على مدة ISI¹⁶. في الدراسة المذكورة أعلاه ، تم تحسين PPI اليرقات عند 30 مللي ثانية ولكن تم قمعها عند 500 مللي ثانية ISI عند معالجتها مسبقا بالكيتامين. على الرغم من أن هذه الدراسة لم تستخدم ISI المتغير ، إلا أن الملاحظة القائلة بأن الكيتامين عزز PPI عند ISI يبلغ 100 مللي ثانية ، تجعلها قابلة للمقارنة مع بيانات الدراسة السابقة عند استخدام ISI 30 مللي ثانية. أظهرت الدراسة أنه من خلال الجمع بين هذه الأنظمة المتاحة تجاريا ، من الممكن إجراء اختبار PPI واكتشاف التغيرات المستحثة عن طريق الدواء بشكل موثوق في استجابة PPI ليرقات الزرد. يتمثل أحد قيود النظام في أن ميزة نقطة الأنف التي يتتبعها برنامج التحليل تقع دائما على إحدى عيون اليرقات ، مما يخلق زاوية أساسية. للتغلب على هذا ، من الضروري دائما تحديد زاوية الانحناء الأساسية لليرقات غير المحفزة ، والتي وجد أنها ~ 30 درجة لليرقات المستخدمة في هذه الدراسة. وبالتالي ، فإن تشكيل الأساس لاختيار 30 درجة كعتبة لما كان يعتبر استجابة إيجابية لبدء C في اليرقات المذهولة. إذا تم أخذ هذه النقاط في الاعتبار ، فيجب أن يكون من الممكن إجراء اختبار PPI في أي مختبر مع إمكانية الوصول إلى معدات الإعداد. لم تركز هذه الورقة على تصنيف حركية الاستجابة المفاجئة إلى زمن انتقال قصير وزمن انتقال طويل كما ورد في وقت سابق¹⁶ ، نظرا لنطاق تباين زمن الوصول. ومن ثم ، تم استخدام استجابات C-start فقط <50 مللي ثانية بعد بداية^{التحفيز 15}.

تم الإبلاغ عن اختلافات السلالة للتأثير على سلوك سمك الزرد في العديد من المقايسات²⁸^،²⁹^،³⁰^،³¹ بالإضافة إلى التأثير على حساسية السمع³². وبالتالي ، من الضروري تحديد زاوية الانحناء الأساسية لكل سلالة تم اختبارها. نظرا لأن الحساسيات السمعية قد تكون مختلفة أيضا ، فمن الأهمية بمكان تحديد استجابات الذهول الأساسية ، وشدة الصوت الأكثر ملاءمة إما كتحفيز مسبق أو مذهل لكل سلالة ومدة تقديم التحفيز. ISI هي معلمة أخرى يجب مراعاتها بعناية لأن بعض الأدوية يمكن أن تعزز أو تقلل PPI بناء على الفاصل الزمني بين بداية النبضة والتحفيز^{المذهل 16}. من المتوقع أن تجد المختبرات المهتمة بدراسة الوظيفة المعرفية والاضطرابات العصبية والنفسية والسمع (الوظيفة السمعية) إعداد وبروتوكول PPI هذا مفيدا في فحص نماذجها الدوائية و / أو الجينية. يوفر هذا البروتوكول أيضا أساسا للفحص عالي الإنتاجية للمكتبات المركبة.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويعلن أصحاب البلاغ عدم وجود مصالح مالية متنافسة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نشكر آنا تافارا وجواو باولو آر بي سانتانا على العناية الممتازة بالأسماك والمساعدة التي لا تقدر بثمن في اختبار وإعداد الأكشاك العازلة للصوت ، والدكتور Wietske van der Ent على الدعم الأولي في إعداد برنامج EthoVision. تم تمويل هذه الدراسة من قبل مجلس البحوث النرويجي (ISP ، BIOTEK2021 / DigiBrain).

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
أبومورفين	سيجما ألدريتش	A4393	ناهض الدوبامين
ديسيبل متر	PCE الأدوات	PCE PCE 4	لقياس شدة التحفيز
DMSO	Sigma Aldrich	D8418	لإذابة المواد المذابة
العضوية Dynavox مكبر للصوت	Dynavox	CS-PA1 MK	لتقديم المحفزات الصوتية
EthoVision XT	Noldus ، هولندا	EthoVision XT ، الإصدار 14	برنامج التتبع الآلي
GraphPad Prism	GraphPad الإصدار	8	برنامج التحليل الإحصائي
Haloperidol	Sigma Aldrich	H1512	مضاد الدوبامين
Ketamine	Sigma Aldrich	Y0000450	NMDA مضاد
باروفون مواد صوتيات	Paroc	8528308	يساعد على تقليل ضوضاء الخلفية في خزانة الاختبار
t.akustik Vocal Booth Bundle	Thormann ، ألمانيا	458543	يساعد على تقليل ضوضاء الخلفية في خزانة الاختبار
ZebraBox Revo مع إضافات PPI	ViewPoint ، France	ZebraBox Revo مع إضافات PPI	يتضمن الأجهزة والبرامج

مستقبلات

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Gawel, K., Banono, N. S., Michalak, A., Esguerra, C. V. A critical review of zebrafish schizophrenia models: Time for validation. Neuroscience & Biobehavioral Reviews. 107, 6-22 (2019).
Howe, K., et al. The zebrafish reference genome sequence and its relationship to the human genome. Nature. 496 (7446), 498-503 (2013).
Kalueff, A. V., Stewart, A. M., Gerlai, R. Zebrafish as an emerging model for studying complex brain disorders. Trends in Pharmacological Sciences. 35 (2), 63-75 (2014).
Panula, P., et al. The comparative neuroanatomy and neurochemistry of zebrafish CNS systems of relevance to human neuropsychiatric diseases. Neurobiology of Disease. 40 (1), 46-57 (2010).
Kokel, D., Peterson, R. T. Chemobehavioural phenomics and behaviour-based psychiatric drug discovery in the zebrafish. Briefings in Functional Genomics and Proteomics. 7 (6), 483-490 (2008).
Basnet, R. M., Zizioli, D., Taweedet, S., Finazzi, D., Memo, M. Zebrafish Larvae as a Behavioral Model in Neuropharmacology. Biomedicines. 7 (1), 23(2019).
Henry, J., Wlodkowic, D. Towards High-Throughput Chemobehavioural Phenomics in Neuropsychiatric Drug Discovery. Marine Drugs. 17 (6), (2019).
Behavioural measurement system | Laval zebrafish | Drosophila | Daphnia | insects | Products | Zantiks. , Available from: https://zantiks.com/products/zantiks-mwp (2020).
Product List - ViewPoint. , Available from: http://www.viewpoint.fr/en/products (2020).
Observation chamber for zebrafish research - DanioVision. , Available from: https://www.noldus.com/daniovision/observation-chamber (2020).
EthoVision XT - Video tracking software | Noldus. , Available from: https://www.noldus.com/ethovision-xt (2020).
Gould, T. D., Gottesman, I. I. Psychiatric endophenotypes and the development of valid animal models. Genes, Brain and Behavior. 5 (2), 113-119 (2006).
van den Buuse, M. Modeling the Positive Symptoms of Schizophrenia in Genetically Modified Mice: Pharmacology and Methodology Aspects. Schizophrenia Bulletin. 36 (2), 246-270 (2010).
Acoustic startle modification as a tool for evaluating auditory function of the mouse: Progress, pitfalls, and potential. Abstract - Europe PMC. , Available from: https://europepnc.org/article/PMC/5446932 (2020).
Bhandiwad, A. A., Zeddies, D. G., Raible, D. W., Rubel, E. W., Sisneros, J. A. Auditory sensitivity of larval zebrafish (Danio rerio) measured using a behavioral prepulse inhibition assay. Journal of Experimental Biology. 216 (18), 3504-3513 (2013).
Burgess, H. A., Granato, M. Sensorimotor Gating in Larval Zebrafish. Journal of Neuroscience. 27 (18), 4984-4994 (2007).
Eaton, R. C., Farley, R. D., Kimmel, C. B., Schabtach, E. Functional development in the mauthner cell system of embryos and larvae of the zebra fish. Journal of Neurobiology. 8 (2), 151-172 (1977).
SR-LAB - San Diego Instruments Startle Response. San Diego Instruments. , Available from: https://sandiegoinstruments.com/product/sr-lab-startle-response/ (2020).
Startle packages - Med Associates Inc. Med Associates Inc. , Available from: https://www.med-associates.com/product-category/acoustic-startle-reflex-packages/ (2020).
Startle response & Pre-pulse inhibition test. O'HARA & CO.,LTD. , Available from: https://ohara-time.co.jp/products/startle-response-pre-pulse-inhibition-test/ (2020).
Thyme, S. B., et al. Phenotypic Landscape of Schizophrenia-Associated Genes Defines Candidates and Their Shared Functions. Cell. 177 (2), 478-491 (2019).
Privat, M., et al. Sensorimotor Transformations in the Zebrafish Auditory System. Current Biology. 29 (23), 4010-4023 (2019).
Gerlai, R. Reproducibility and replicability in zebrafish behavioral neuroscience research. Pharmacology Biochemistry and Behavior. 178, 30-38 (2019).
Add-on - Fast camera 1000 FPS - ViewPoint. , Available from: http://www.viewpoint.fr/app.php/en/p/equipment/add-on-fast-camera (2020).
Aleström, P., et al. Zebrafish: Housing and husbandry recommendations. Laboratory Animals. , (2019).
Bhandiwad, A. A., Sisneros, J. A. Revisiting Psychoacoustic Methods for the Assessment of Fish Hearing. Fish Hearing and Bioacoustics: An Anthology in Honor of Arthur N. Popper and Richard R. Fay. , 157-184 (2016).
Geyer, M. A., Krebs-Thomson, K., Braff, D. L., Swerdlow, N. R. Pharmacological studies of prepulse inhibition models of sensorimotor gating deficits in schizophrenia: a decade in review. Psychopharmacology. 156 (2-3), 117-154 (2001).
Lange, M., et al. Inter-Individual and Inter-Strain Variations in Zebrafish Locomotor Ontogeny. PLOS ONE. 8 (8), 70172(2013).
Liu, X., et al. Strain-dependent differential behavioral responses of zebrafish larvae to acute MK-801 treatment. Pharmacology Biochemistry and Behavior. 127, 82-89 (2014).
Loucks, E., Carvan, M. J. Strain-dependent effects of developmental ethanol exposure in zebrafish. Neurotoxicology and Teratology. 26 (6), 745-755 (2004).
van den Bos, R., et al. Further characterisation of differences between TL and AB zebrafish (Danio rerio): Gene expression, physiology and behaviour at day 5 of the larval stage. PLOS ONE. 12 (4), 0175420(2017).
Monroe, J. D., et al. Hearing sensitivity differs between zebrafish lines used in auditory research. Hearing research. 341, 220-231 (2016).

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

التحقق الدوائي من تثبيط النبضات المسبقة للاستجابة المفاجئة في يرقات الزرد باستخدام نظام وبرامج آلية تجارية

في هذه المقالة

ملخص

الملخص

المقدمة

البروتوكول

النتائج

المناقشة

الإفصاحات

شكر وتقدير

المواد

المراجع

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

مقالات ذات صلة