Method Article

التنبؤ ببتر باستخدام خلايا السلف أحادية النوى في المرضى الذين يعالجون من الأوعية مع الإقفاريات الحرجة

DOI:

10.3791/61503

⸱

September 22nd, 2020

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Experimental Metabolism and Clinical Research Laboratory, Clinical Research Department, Division of Biomedical Research, Centro Médico Nacional 20 de Noviembre, ISSSTE, 2Vascular Surgery and Angiology Department, Centro Médico Nacional 20 de Noviembre, ISSSTE, 3Regenerative Medicine and Tissue Engineering Laboratory; Coordination of Research, Centro Médico Nacional 20 de Noviembre, ISSSTE

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

قد يحدث بتر الأطراف السفلية حتى بعد رأب الأوعية من الأوعية المعرقلة في الإقفارية الطرف الحرج (CLI). تعكس خلايا السلف أحادية النوى (MPCs) إصلاح الأوعية الدموية. يصف هذا البروتوكول القياس الكمي لثناء الغدد العاملة من الدورة الدموية بالقرب من رأب الأوعية، وعلاقته بالخلل البطاحلي والتنبؤ ببتر الأطراف السفلية.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يمثل إقفار الأطراف الحرجة (CLI) مرحلة متقدمة من مرض الشرايين المحيطية. عملية رأب الأوعية تحسن تدفق الدم إلى الطرف السفلي; ومع ذلك، تقدم بعض المرضى بشكل لا رجعة فيه إلى بتر الأطراف. إن مدى تلف الأوعية الدموية وآليات إصلاح الأوعية الدموية هي عوامل تؤثر على نتيجة ما بعد الرأب الوعائي. خلايا السلف أحادية النوى (MPCs) هي رد فعل على تلف الأوعية الدموية وإصلاحها ، مع القدرة على عكس أمراض الأوعية الدموية. يصف هذا البروتوكول القياس الكمي لـ MPCs التي تم الحصول عليها من الدورة الدموية من الأوعية القريبة من موقع رأب الأوعية، وكذلك علاقتها بالخلل البطايني وقدرتها التنبؤية على بتر الأطراف في الأيام الثلاثين التالية بعد رأب الأوعية في المرضى الذين يعانون من CLI.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يتميز مرض الشرايين الطرفية (PAD) بانسداد الأوعية الدموية المزمن والتقدمي مع الحد من إمدادات الدم1. على نطاق عالمي، يؤثر PAD من الأطراف السفلية على حوالي 10٪ من السكان المسنين، في حين يتم تقديم ما يصل إلى 7٪ من هذه الحالات إلى بتر الأطراف2،3.

يمثل الإقفاريات الحرجة (CLI) العرض الأكثر خطورة لـ PAD1. المرضى عادة ما تعاني من الألم في الراحة, قرحة, أو الغرغرينا التي تعزى إلى الشرايين انسداد; في حين أن التشخيص السريري غير مواتية وتتميز بـ 30٪ من خطر بتر الأطراف والوفيات خلال 1 سنة3,4....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وافقت لجنة أخلاقيات البحوث المؤسسية من Centro Médico Nacional "20 de Noviembre" ISSSTE على هذا البروتوكول المحتمل ، وقدم جميع المرضى المسجلين موافقة خطية مستنيرة.

1- تقييم كتلة الأوعية الدموية في الأطراف السفلية، وأخذ عينات الدم، والبلاستيس الوعائي بالون

ملاحظة: عينة الدراسة المستخدمة في هذه التجربة تتألف من 20 مريضا بالسكري، الذين تتراوح أعمارهم بين 68 سنة و 10 من أصل 20 كانوا من الذكور. وكان نصف العينة من المدخنين وكانت معظم الاعتلالات المشتركة السائدة هي مرض السكري من النوع 2، وارتفاع ضغط الدم الشرياني الجهازي و/أو ديسليبيديميا. وكان القصد من هذه العينة أن تكون موحدة بالنسبة للأمراض العمرية والجنس والمراضة المشت....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وتم جمع عينات دم من الشرايين المسدودة، في الموقع الذي تم تناوله من أجل رأب الأوعية، من 20 مريضاً بالسكري، يبلغ عمرهم 68 عاماً، و10 من أصل 20 من الذكور. وكان نصف عينة السكان من المدخنين. وكانت الآفات الوعائية أساسا كما سجل روثرفورد الدرجة السادسة; في حين أظهر المرضى ارتفاع معدل انتشار مرض السكري من النوع 2 (100٪)، وارتفاع ضغط الدم (70٪) وعسر الدم (55٪).

30 يوما من المتابعة السريرية بعد أن أجريت عملية رأب الأوعية في الأطراف السفلية. نسبة السكان الفرعية لجنة السياسة النقدية في خط الأساس أو دينامي.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

قد تظهر عملية جمع الدم في الموقع الدقيق الكتلة الوعائية صعوبات تقنية؛ لذلك، قمنا بجمع الدم في القرب من كتلة الأوعية الدموية. وبالمثل، فإن كمية الـMPCs القريبة من اللويحات الوعائية تبدو ديناميكية للغاية وقد تنشأ اختلافات قبل وبعد رأب الأوعية. وفقا لملاحظاتنا، فمن المستحسن لتقييم خط الأساس و 30min-بعد تغيير الأوعية الدموية في عدد من MPCs، لأنها قد تعكس العديد من العمليات الفسيولوجية المرضية التي تحدث في الأضرار الوعائية وإصلاحها.

يوصى بإجراء معالجة عينات الدم لتحديد الـ MPCs في غضون الـ 3 ساعات .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يشكر المؤلفون دعم البرنامج المؤسسي E015 للمشروع ID 356.2015.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
BSARoche10735086001ألبومين مصل البقر (BSA) كعامل تخزين مؤقت ومثبت وقياسي وللمزج.
حبات المعايرةMiltenyi Biotec / MACS# 130-093-607MACيتم توفير حبات المعايرة في محلول مائي يحتوي على 0.05٪ أزيد الصوديوم. 3.5 مل لما يصل إلى 100 اختبار
CD133 / 1 (AC133) -PEMilteny Biotec / MACS# 130-080-801الأجسام المضادة المترافقة مع R-Phycoerythrin في PBS / EDTA buffer
CD184 (CXCR4) -PE-VIO770Miltenyi Biotec / MACS# 130-103-798أحادي النسيلة ، النوع المتماثل المؤتلف البشري IgG1 ، مترافق
CD309 (VEGFR-2 / KDR) -APCMiltenyi Biotec / MACS# 130-093-601جسم مضاد مترافق مع R-Phycoerythrin في PBS / EDTA buffer
CD34-FITCMiltenyi Biotec / MACS# 130-081-001استنساخ الجسم المضاد أحادي النسيلة AC136 يفصل حاتم من الفئة الثالثة من CD34
CD45- VioBlueMiltenyi Biotec / MACS# 130-092-880الجسم المضاد CD45 أحادي النسيلة ،
الأنابيب المخروطيةالبشرية الحرارية العلمية# 33965115 مل أنابيب الطرد المركزي المخروطية
أنابيب القياس الخلويFALCON Corning العلامة التجارية# 3520525 مل أنبوب البوليسترين المستدير القاع. نمط 12x75. عقيم.
EDTABIO-RAD# 161-0729المعادن الثقيلة ، (مثل الرصاص) < ؛ 10 جزء في المليون ، Fe< 0.01٪ ، As< 1 جزء في المليون ، غير قابل للذوبان < ؛ 0.005٪
تحسين Neubauerبدون علامة تجاريةبدون رقم كتالوجمقياس الدم لعد الخلايا. (النطاق 0.1000 مم ، 0.0025 مم 2)
جمع الدم K2 EDTA BDVacutainer# 367863أنبوب فراغ بلاستيكي أرجواني (K2E) 10.8 مجم ، 6 مل.
تقنيات الخلايا الجذعيةالليمفاوية01-63-12-002-Aمعقمة والتحقق من وجود السموم الداخلية. الكثافة: 1.077 & plusmn; 0.001 جم / مل
بارافورمالدهايدSIGMA-ALDRICHتثبيت العينات البيولوجية ، (مسحوق ، 95٪)
نقل الماصة 1،3 ملCRM GlobePF1016 ، PF1015ماصة النقل هي أداة تسهل نقل السوائل بدقة أكبر.
أنابيب الاختبارKIMBLE CHASE45060 13100أنابيب اختبار مقاومة للحرارة. الحجم / الغطاء 13 × 100 مم
المترافقة أنابيب #SZBF0920V

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Serrano-Hernando, F. J., Martín-Conejero, A. Peripheral artery disease: Pathophysiology, diagnosis and treatment. Revista Española de Cardiología. 60 (9), 969-982 (2007).
  2. Agarwal, S., et al. Burden of re-admis....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Mononuclear Progenitor CellsCritical Limb IschemiaAngioplasty treated PatientsFlow CytometryDensity Gradient CentrifugationEndothelial DysfunctionLimb Amputation PredictionRutherford ClassificationBrachial Artery FMDVascular Obstruction Blood Collection

Related Articles