تقدم هذه الورقة طريقة لإنشاء نموذج التهابي جلدي الصدفي في المختبر على مستوى النسخ باستخدام مزيج من خمسة سيتوكينات (IL-17A ، IL-22 ، IL-1α ، TNF-α ، OSM) على خط خلية HaCaT.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
* These authors contributed equally
تقدم هذه الورقة طريقة لإنشاء نموذج التهابي جلدي الصدفي في المختبر على مستوى النسخ باستخدام مزيج من خمسة سيتوكينات (IL-17A ، IL-22 ، IL-1α ، TNF-α ، OSM) على خط خلية HaCaT.
الصدفية هي مرض جلدي التهابي مزمن شائع بوساطة أجهزة مناعية فطرية وتكيفية ، وتتميز بالتكاثر والتمايز غير الطبيعي للخلايا الكيراتينية للبشرة وتسلل الخلايا الالتهابية. الخلايا الكيراتينية الخاصة بالجلد هي مشاركون رئيسيون في المناعة الفطرية ، وتستجيب للخلايا المناعية والتحفيز البيئي ، وبالتالي تؤدي دورا مهما في التسبب المناعي للصدفية. هنا ، نقدم طريقة لتحفيز التهاب الخلايا الكيراتينية الصدفية على مستوى النسخ باستخدام خط خلايا HaCaT باستخدام خمسة تركيبات من السيتوكينات المسببة للالتهابات (تركيبة M5) ، بما في ذلك IL-17A و IL-22 و IL-1α و TNF-α و oncostatin M. أظهرت النتائج أن خلايا HaCaT المستحثة في تركيبة M5 أظهرت مستويات متزايدة من الببتيدات المضادة للميكروبات (BD2 و S100A7 و S100A8 و S100A9) والكيموكينات والسيتوكينات (CXCL1 و CXCL2 ، CXCL8 و CCL20 و IL-1β و IL-6 و IL-18). تم تنظيم مستويات mRNA لعلامات تمايز الخلايا الكيراتينية (Keratin1 و Keratin10 و Filaggrin و Loricrin) ، وهو ما كان متوافقا مع بيانات النسخ المشتقة من الخلايا الكيراتينية الشبيهة بالصدفية. لذلك ، فإن الطريقة الموضحة هنا تؤسس التهابا جلديا في المختبر الصدفي على مستوى النسخ وتساهم في البحث عن التسبب الجزيئي للصدفية.
الصدفية هي مرض جلدي التهابي مزمن شائع غير معدي ناتج عن استجابة مناعية غير منظمة ، وتؤثر على الخلايا الكيراتينية التي تشكل البشرةفي الغالب 1 ، وتتميز بالتكاثر السريع بشكل غير طبيعي للخلايا الكيراتينية مع فرط التقرن والزبغاء. تصيب الصدفية حوالي 3٪ من سكان البرية في العالم2. يزداد عبء المرض بسبب العديد من الأمراض المصاحبة ، بما في ذلك أمراض القلب والأوعية الدموية ومتلازمة التمثيل الغذائي التي تسببها المتلازمة3.
تتكون البشرة من خمس طبقات من الخلايا الكيراتينية وتخضع لتغيير مورفولوجي مع عملية التمايز: الطبقة القاعدية ، والطبقة الشوكية ، والط....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
قم بتنفيذ الخطوات من 1 إلى 3 في حالة معقمة. احتوت جميع وسط الاستزراع على 0.1 مجم / مل من البنسلين والستربتومايسين.
1. تحضير الخلية
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تحفيز M5 المركب المستحث على الاستجابة الالتهابية لخلايا HaCaT.
تم تحفيز خلايا HaCaT مع أو بدون تركيبة السيتوكينات M5 لمدة 24 ساعة. تم تقييم تعبير mRNA للجينات المرتبطة بالصدفية ، والتي تشارك في تنظيم الكيموكينات المناعية والالتهابية والببتيدات المضادة للميكروبات. تمت زيادة كيموكينات العدلات CXCL138 و CXCL239 و CXCL840 وكيميائيات الخلايا التائية CCL20
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الموصوفة هنا هي طريقة تستخدم مجموعة خمسة سيتوكينات (IL-17A ، IL-22 ، IL-1α ، TNF-α ، OSM) في خط خلايا HaCaT لإنشاء ملف تعريف التهاب جلدي الصدفي في المختبر على مستوى النسخ. يمكن تكييف هذا البروتوكول لدراسة آلية الجينات في التسبب في الصدفية وكذلك فحص الأدوية العلاجية للصدفية. أظهرت التقارير الحديثة أن الإفراط في التعبير عن IL-17A و IL22 التي تنتج خلايا CD8 T في الجلد الآفة يشير إلى تورطها في التسبب في الصدفية61. يمكن أن تسبب IL-1α و IL-22 و IL-17A التهاب الجلد في ال.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
ولم يبلغ أصحاب البلاغ عن أي تضارب محتمل في المصالح.
تم دعم هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين [81703132 و 31271483 و 81472650 و 81673061 و 81573050 و 31872739 و 81601462]
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| DMEM&[مدش] Dulbecco's Modified Eagle Medium | Gibco | 11965092 | |
| مصل الأبقار الجنيني | Gibco | 10100139C | |
| خلايا HaCaT | المركز الصيني لثقافة النوعجمع | GDC0106 | أقل من 15 جيلا |
| بشريا IL-1 & بيتا ؛ طقم ELISA | Beyotime | PI305 | |
| Human IL-6 ELISA Kit | Beyotime | PI330 | |
| Human IL-8 ELISA Kit | Beyotime | PI640 | |
| IL-1 alpha Human | Prospec | CYT-253 | البروتين المؤتلف |
| IL-17 Human | Prospec | CYT-250 | البروتين المؤتلف |
| IL-22 Human | Prospec | CYT-328 | البروتين المؤتلف |
| OSM Human | Prospec | CYT-231 | البروتين المؤتلف |
| PBS | Gibco | 10010049 | درجة الحموضة 7.4 |
| البنسلين الستربتومايسين | جيبكو | 15140163 | |
| PrimeScrip RT كاشف | كيت تاكارا | RR047A | |
| TB الأخضر بريمكس Ex | Taq TAKARA | RR420A | |
| TNF alpha Human | بروسبيك | CYT-223 | بروتين مؤتلف |
| كاشف TRIzo | Invitrogen | 15596018 | |
| Trypsin-EDTA (0.25٪) ، فينول أحمر | Gibco | 25200072 |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تم نشر هذه المقالة
الفيديو قريباً