تقدم هذه الدراسة منهجيات لدراسة الآليات البكولوجية والجزيئية الكامنة الكامنة في الحمص – تفاعلRhizoctonia bataticola. طريقة ورقة النشاف مفيد لدراسة بسرعة استجابات الحمص النمط الجيني، في حين أن الطريقة المريضة القائمة على وعاء يمكن استخدامها لفرض الجفاف في وقت واحد وعدوى R. bataticola والشاشة للنوعين الجينيين متسامح.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
التعفن الجاف تعفن التعفن في الحمص: منهجية مفصلة
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يُشكل مرض تعفن الجذر الجاف (DRR) تهديدًا ناشئًا للإجهاد الحيوي لزراعة الحمص في جميع أنحاء العالم. ويتسبب في ذلك من قبل مسببات الأمراض الفطرية التي تحملها التربة، Rhizoctonia bataticola. في الأدبيات ، وشاملة ومفصلة بروتوكولات خطوة بخطوة على مقايسات المرض متناثرة. تقدم هذه المقالة تفاصيل كاملة عن الخطوات التي تتضمنها في إعداد تقنية الورق النشاف لفرز النماذج الجينية بسرعة لمقاومة DRR. تقنية الورق النشاف سهلة وأقل تكلفة. طريقة أخرى، استنادا إلى نهج وعاء المريض، هو تقليد العدوى الطبيعية ويمكن تطبيقها لدراسة المكونات التفاعل - النبات، الممرض، والبيئة- المشاركة في مثلث المرض.
وعلاوة على ذلك، يحدث في الطبيعة معدل الجفاف في معظم الأحيان في مناطق زراعة الحمص البعلي، حيث تنحسر رطوبة التربة مع تقدم نمو المحاصيل. ومن المعروف الإجهاد الجفاف لضمير نباتات الحمص لمرض DRR. يمكن أن يمهد الفهم الباثومورفولوجي والجزيئي للتفاعل بين النبات والأورام تحت ضغط الجفاف الطريق لتحديد أصناف مقاومة للحمض الكاسح من بركة الحمص الجرثومية. توفر هذه المقالة منهجية تدريجية لإعداد وعاء مريض ومقايسة المرض اللاحقة. وعموما، فإن المعلومات المقدمة هنا سوف تساعد الباحثين على إعداد R. bataticola inoculum الفطرية، والحفاظ على هذا الممرض، وإعداد تقنية ورقة النشاف، وإعداد الثقافة المريضة ووعاء المرضى، وتقييم العدوى المسببة للأمراض في نباتات الحمص.
المقدمة
تعفن الجذر الجاف (DRR) هو واحد من الأمراض ذات الأهمية الاقتصادية في الحمص1،2. وهو مرض الجذر محددة الناجمة عن Rhizoctonia bataticola (teleomorph، Macrophomina phaseolina). النباتات المصابة تفتقر إلى الجذور الجانبي وتمتلك taproots هشة وأوراق الشجر الصفراء1,3. وقد أفيد عن أن DRR تحت ضغط الجفاف يشكل تهديدا ناشئا لزراعة الحمص1،2،3. وعلاوة على ذلك، أفيد أن حالات الحد من مخاطر الكوارث قد تفاقمت في ظل ضغوط الجفاف في ظل الظروف الميدانية1و2و3. DRR هو أكثر انتشارا في المناطق البعلية مما هو عليه في الحقول المروية4. استخدام أصناف مقاومة هو السبيل للتغلب على المرض والتحايل على استخدام مبيدات الفطريات1،13. لأن الجرثومة الحمص المتاحة في جميع أنحاء العالم الموانئ الاختلاف الجيني ل السمة5، والفرز وتحديد المقاومة / الأنماط الجينية المعرضة أمر بالغ الأهمية للتربية الجزيئية لتحسين المحاصيل.
قوية وسهلة وفعالة من حيث التكلفة اختبار المرض ضرورية للتحقيق في أنماط العدوى R. bataticola في الحمص. إن فحص المرض الأساسي المستخدم لمراقبة استجابة الأنماط الجينية للحمص إلى عدوى R. bataticola هو تقنية الورق النشاف1،4. بل هو تقنية بسيطة ويمكن تنفيذها باستخدام inoculum الفطرية السائلة، الشتلات مع الجذور، ورق النشاف العقيمة. ومع ذلك، لم يتم استخدام هذه التقنية إلى أقصى حد لأنه لا يوجد بروتوكول خطوة بخطوة متوفرة في الأدبيات.
وفي الوقت نفسه، ينطوي أسلوب وعاء المريض إعداد ثقافة المرضى المحتملين وفرض الإجهاد الجفاف. وبالنظر إلى أن الإجهاد الجفاف يؤدي إلى تفاقم الإصابة بمرض DRR3، فمن الضروري دراسة التفاعل النباتي - الممرض تحت ضغط الجفاف6،7. توفر تقنية الوعاء المريضة منصة لمثل هذه الدراسة المتزامنة ، وتعزيز إمكانيات أفضل لفحص الجرثومي وفهم الأساس الميكانيكي للتفاعل. يمكن معالجة التغيرات في علم المناخ مثل زيادة في طول الجذر والحد من عدد الجذر الجانبي — المتأصلة في مرض DRR — باستخدام تقنية وعاء المريض1,3,7.
هنا، يتم تقديم بروتوكول مفصل للورق النشاف وتقنيات وعاء المريضة، والتي يمكن استخدامها لدراسة التفاعل بين الحمص وR. bataticola وشاشة الحمص الجرثومية. وترد تفاصيل المواد المستخدمة في الدراسة في جدول المواد.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. عزل R. bataticola وتخزين
- تفاصيل النمط الجيني للحمص وأعراض DRR
- استخدام النباتات الحمص (نوع وراثي، JG 62) التي تظهر عموما أعراض DRR نموذجية، مثل الجافة، وهشاشة الجذر الأساسي مع عدم وجود جذور جانبية وmicrosclerotia تحت لحاء وداخل11،3.
- جمع وغسل
- النباتات اقتلاع تظهر أعراض مثل الجافة القش الملونة ورقة وهشاشة الجذر الأساسي مع microsclerotia تحت طبقة البشرة. في حين اقتلاع، جزء كبير من الجذور سيبقى داخل التربة كما الجذور المصابة هشة. إزالة حطام التربة الخشنة تعلق على الجذر. قطع الجذور بشكل منفصل وجمعها في مغلفات ورقية (27.5 سم × 12 سم) مع التسمية المناسبة ووضعها في صندوق جمع العينات.
- بعد نقل العينات إلى المختبر، ضع الجذور في 200 مل من القارس وتغطية مع شبكة (شبكة نايلون مع حجم المسام من 3 مم قطر)، وغسل الجذور جيدا مع مياه الصنبور الجارية لإزالة جزيئات التربة التمسك.
- استخدام التناضح العكسي (RO) الماء لشطف مرة واحدة في نهاية.
- التعقيم السطحي
- كسر الجذور إلى أربع قطع بطول 2 سم مع كل من شفرة مشرط ووضعها في منقار 200 مل نظيفة.
- تجميع الماء RO autoclaved، 2٪ NaOCl، جرة التخلص، والورق النشاف autoclaved (5 سم2)داخل غرفة تدفق لارينار.
- غسل الجذور مع 50 مل من الماء RO autoclaved ثلاث مرات ثم مع 50 مل من 2٪ NaOCl لمدة 10 دقيقة. غسل الجذور مع 50 مل من الماء RO ثلاث مرات مرة أخرى لإزالة NaOCl.
- لطخة تجف الجذور عن طريق وضع الجذور على ورقة النشاف autoclaved وترك حتى يتم تجفيف الجذور.
- الإعلام والحضانة
- إزالة حواف الجذور مع شفرة مشرط معقمة. تقسيم الجذور باستخدام شفرة واستخدام ملقط تعقيم لوضعها على البطاطا dextrose أجار (المساعد الشخصي الرقمي) وسائل الإعلام بيتري لوحة تحتوي على كبريتات ستريبتوميسين (50 ملغ L-1)و ampicillin (50 ملغ L-1).
- أغلق الطبق، وختمه بالبارا فيلم، وحضن في حاضنة عند درجة حرارة 28 درجة مئوية لمدة يومين في الظلام.
- طريقة طرف الواصلة
- بعد يومين من الحضانة، وجلب لوحات في غرفة تدفق laminar. قطع غيض من نمو الواصلة8 تحت منظار مجسم (Leica EZ4 stereomicroscope التعليمية) ونقلها إلى لوحة المساعد الشخصي الرقمي الطازجة مع كبريتات الستربتومايسين و ampicillin.
- احتضان لوحات في الحاضنة في 28 درجة مئوية لمدة عشرة أيام في الظلام.
- تخزين وصيانة R. bataticola فطرية inoculum
- جعل الائلات المساعد الشخصي الرقمي في أنابيب الاختبار ونقل المكونات agar الفطرية من لوحة ثقافة عشرة أيام باستخدام حلقة التلقيح تعقيم لهب. ختم غطاء أنبوب الاختبار مع parafilm.
- احتضان الهات على 28 درجة مئوية لمدة عشرة أيام في الظلام.
- ختم الغطاء مع parafilm مرة أخرى وتخزينها في 4 درجة مئوية في الثلاجة للاستخدام في المستقبل.
- ثقافة فرعية كل ستة أشهر للحفاظ على الفطريات.
- الحفاظ على الفوعة
- تصيب النباتات مع inoculum الفطرية النقية أعدت كما ذكر في تقنية وعاء المريض3. عزل نفس الفطريات من النباتات المصابة (ستسلمات كوخ)9 واستخدامها لإجراء المزيد من التجارب.
ملاحظة: في هذه الدراسة، تم استخدام سلالة معزولة حقل من الفطريات (GenBank: MH509971.1 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/MH509971)
- تصيب النباتات مع inoculum الفطرية النقية أعدت كما ذكر في تقنية وعاء المريض3. عزل نفس الفطريات من النباتات المصابة (ستسلمات كوخ)9 واستخدامها لإجراء المزيد من التجارب.
2. تقنية الورق النشاف
ملاحظة: تقنية الورق النشاف ينطوي على إعداد inoculum الفطرية السائلة، وإعداد الشتلات، وتقييم المرض.
- إعداد السائل R. bataticola inoculum
ملاحظة: السائل R. باتاتيتشولا الفطرية inoculum يحتوي على كل من الميكريلا وmicrosclerotia. وتعمل هذه الهياكل على حد سواء باعتبارها inoculum الأولية.- إعداد 500 مل من وسائل الإعلام PDB في قارورة 1000 مل وautoave في 121 رطلا لمدة 15 دقيقة.
- بعد تبريد وسائل الإعلام ، تلقيح المرق مع القابس من agar الفطرية loopful من ثقافة مائلة فطرية واحتضان في 28 درجة مئوية لمدة خمسة أيام في شاكر في 180 دورة في الدقيقة في الظلام.
- تجميع الزجاج أو قمع البلاستيك autoclaved (10 سم)، قارورة مخروطية لتر واحد، وطبقتين من شبكة (10 سم2 حجم) (شبكة نايلون مع حجم المسام من 3 مم قطر) على الطاولة. تصفية mycelia الفطرية وmicrosclerotia باستخدام شبكة. لطخة تجفيف الفطريات في ورقة النشاف autoclaved.
- تزن 100 غرام mycelia ل50٪ inoculum والحفاظ على درجة حرارة الغرفة.
- إعداد نبات الحمص
- حدد 50 بذور صحية (في هذه الدراسة، تم استخدام النمط الجيني DRR-عرضة JG 62)، ووضعها في 100 مل من الكوابر، وتغطية مع شبكة.
- غسل البذور مع مياه الصنبور أولا لإزالة حطام التربة.
- خذ القارص مع البذور في غرفة تدفق الفلامي وغسلها مع تعقيم 50 مل من الماء RO ثلاث مرات لمدة 1 دقيقة لكل غسل.
- تعقيم البذور مع 50 مل من 2٪ NaOCl مائي لمدة 2 دقيقة مع اهتزاز مستمر وغسل البذور مع 50 مل من المياه المعقمة خمس مرات لمدة 1 دقيقة لكل من.
- ملء كيس البوليثين (47.5 سم × 25 سم) مع Soilrite (خليط من الصف البستانية الموسع البيرلايت، الطحالب الخث الأيرلندية، والفيرميكوليت المقشر في نسبة متساوية أي، 1/3:1/3:1/3)، بذر البذور 50 معقم سطح 50 سم عمق، والحفاظ في غرفة النمو مع 28 درجة مئوية ± درجة حرارة 2 درجة مئوية، 16 ساعة photoperiod مع كثافة الضوء من 150 ميكرومولمتر −2 -1،والرطوبة النسبية من 70٪. المياه لهم مع المياه RO واقتلاع النباتات بعد ثمانية أيام من بذر.
- غسل الجذور في مياه الصنبور لإزالة جزيئات Soilrite. شطف الجذور مع المياه عقمة RO، والاحتفاظ بها في الماء RO في 1000 مل من القارص.
- إعداد الورق النشاف في الصواني
- خذ ورقة النشاف وقطعها إلى قطع (30 سم × 23 سم) بأعداد كافية لتلبية النسخ المتماثلة.
- احزم الأوراق في كيس البوليثين القابل للتكلاف التلقائي وأتلافها بـ 121 رطلاً لمدة 15 دقيقة واحفظها في فرن الهواء الساخن للتجفيف.
- أضعاف كل ورقة النشاف في النصف.
- ضع الورق على صينية بلاستيكية نظيفة ، مسحت الروح ، كما هو موضح في الشكل 2i-iv.
- تلقيح النبات عن طريق غمس
- قم بحل 100 غرام من inoculum الفطرية في 200 مل ماء RO autoclaved في 200 مل من الكأس للحصول على 50٪ inoculum.
- تراجع جذور النبات في inoculum المعدة لمدة 1 دقيقة مع حركة متقطعة صعودا وهبوطا لضمان التعلق موحدة من inoculum الفطرية.
- وضع النباتات في ورقة النشاف
- الرطب في الجانب السفلي من ورقة النشاف وضعت على صينية مع الماء RO العقيمة. ضع النباتات على الورق بطريقة لا تغطيها الورقة إلا الجذور، وتُترك البراعم خارجها.
- أغلقها عن طريق طي الجانب العلوي من الورق النشاف والرطب ورقة كاملة لتوفير ما يكفي من المياه للحفاظ على نمو النبات.
- اسقي الصينية مرة واحدة في اليوم وإبقاء الصواني عند 28 درجة مئوية. مراقبة الأعراض مثل نخر، تعفن الجذر، ورقة اصفرار يوميا.
3. المريضة وعاء تقنية
ملاحظة: تقنية وعاء المريضة ينطوي على إعداد inoculum خبيثة ووعاء المرضى، والحفاظ على مستوى الرطوبة، وتقييم أعراض المرض.
- إعداد الركيزة
- خذ كيلوغرام واحد من أي بذور الحمص المتاحة تجاريا. إزالة البذور المصابة (البذور مع النمو الفطري، وبقع العدوى، والأضرار الحشرية). وضعها في 5 لتر من البلاستيك واغسل بالماء الصنبور بدقة 3-4 مرات لإزالة الحطام الرئيسية.
- غسل البذور مع 2 لتر من الماء RO ثلاث مرات ونقع بذور 1 كجم في 5 لتر من الكوابر مع ثلاثة أضعاف المزيد من المياه لمدة خمسة ساعات.
- مرة واحدة البذور imbibed الماء، وإعادة غسلها بالماء RO ثلاث مرات لإزالة البذور exudates.
- إزالة الماء تماما وحزم البذور في زجاجات مربى (300 مل، 12 سم ارتفاع، 6 سم قطرها 155 غرام الوزن) إلى حوالي 1/4th القدرة (100 غرام لكل زجاجة مربى) وإغلاق الزجاجات مع قبعات. حزمة 10 زجاجات مربى في كيس بلاستيكي قابل للوتوماتيك (48 سم × 30 سم) الأوتلاك مرتين في 121 رطلا لمدة 15 دقيقة بشكل مستمر.
- جفف البذور على حرارة 40 درجة مئوية في فرن بين عشية وضحاها لإزالة قطرات الماء داخل الزجاجة.
- إعداد ثقافة المرضى
- قم بتشغيل غرفة تدفق الفارني BSL-2 مستوى. امسح الأرض بدقة مع 70٪ من الإيثانول، واقلب الأشعة فوق البنفسجية لمدة 15 دقيقة. ثم، والحفاظ على البذور داخل غرفة تدفق لارينار.
- خذ ثقافة R. bataticola المعزولة حديثًا لمدة 10 أيام (الجزء 1). ثم، واتخاذ ثلاثة المقابس أجار الفطرية (4 ملم قطر) باستخدام طرف ماصة معقمة أو الفلين بور، ووضعها في زجاجات مربى aseptically. تغطية الزجاجات مع قبعات وختم مع parafilm.
- يهز الزجاجات لخلط القرص الفطري مع بذور الحمص بشكل موحد.
- احتضان الزجاجات في 30 درجة مئوية لمدة 15 يوما في الظلام.
- خذ زجاجات المربى مع نمو الفطريات السوداء(الشكل 4iii)ونقل الثقافة المريضة (البذور مع microsclerotia) من زجاجات المربى إلى لوحة بيتري الزجاج باستخدام ملقط العقيمة. جففها في درجة حرارة الغرفة لمدة يومين في طبق من الزجاج.
- مسحوق كتلة الفطرية باستخدام هاون وحشرات، وتخزين مسحوق في 4 درجة مئوية.
- Autoclave Soilrite مرتين في 121 رطلا لمدة 15 دقيقة.
- جفف مزيج Soilrite المُتَرَكَف تحت اِشِدِة شمسية.
- اخلطي مسحوق الفطريات مع Soilrite بنسبة 50٪ ث/ث، واملأ الأواني بالخليط، واحفظيها في درجة حرارة الغرفة لمدة يوم.
- زرع بذور الحمص القابلة للجفاف القابلة للسطح في وعاء (10 سم جولة الأواني)(جدول المواد)والحفاظ على مستوى الرطوبة من 80٪ قدرة الحقل (FC).
- مراقبة الأعراض مثل نخر وتعفن الجذر عن طريق اقتلاع النباتات بعد الإنبات.
- تقييم كفاءة وعاء المرضى
ملاحظة: تظهر النباتات أعراض صفراء صفراء عندما تكون الجذور فاسدة تمامًا.- وضع درجة المرض على أساس الآفة (البقع النخرية) (الشكل التكميلي 2C)أرقام وشدة تعفن الجذر. يمكن استخدام الأواني المرضية التي تظهر 90٪ من وفيات النباتات.
- فحص النمط الجيني
- إعداد الثقافة المريضة بكميات كبيرة وخلطها إما مع Soilrite معقمة أو التربة الحقل (5٪ ث / ث) في الأواني 30 سم طويل القامة. المياه الأواني لتبلل السطح وتركها دون عائق لمدة سبعة أيام.
- زرع واحدة من البذور السطحية المعقمة لكل وعاء جولة 10 سم وثلاث بذور لكل 30 سم جولة الأواني والمياه لهم بشكل كاف.
- مراقبة صفراء ورقة وجذور أعراض التعفن.
- الجفاف المشترك وعدوى R. bataticola
- فرض ضغوط الجفاف باتباع البروتوكولات المذكورة في سنها وآخرون (2019).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تهدف هذه الدراسة إلى إظهار تقنيات مثل الورق النشاف وتقنيات الوعاء المريض لتسهيل الفهم ال pathomorphological والجزيئية للتفاعل بين النبات ومسببات الأمراض تحت ضغط الجفاف. لتحقيق ذلك، تم جمع النباتات التي تظهر أعراض DRR1،3،4 من حقل الحمص ، وتم عزل الفطريات باستخدام طريقة طرف الواصلة8. R. ثقافة فطرية bataticola يظهر رمادي داكن على لوحة المساعد الشخصي الرقمي ومائل على أربعة أيام بعد الحضانة (
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
توفر تقنية الورق النشاف نهجًا مباشرًا لفحص الأنماط الجينية للحمص في ظل ظروف المختبر. التلقيح الانخفاض تمكن من التحقيق في التفاعل على أساس زمني مع سهولة السيطرة على الحمل inoculum(الشكل التكميلي 1)ويسهل فحص في المختبر. وعلاوة على ذلك، يمكن استخدام الشتلات حتى الشباب. يمكن أن تعطي ثقافة فطرية عمرها خمسة أيام(الشكل 1B)ما يكفي من التلقيح لتصيب النباتات. يحتوي inoculum السائل على كل من الميكوليا وmicrosclerotia (الشكل 1D & E). يمكن ا...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدينا ما نكشفه
شكر وتقدير
ويدعم المعهد الوطني لبحوث الجينوم النباتي المشاريع في مختبر M.S.K. 6- تعترف المنظمة السادسة بـ DBT-JRF (DBT/2015/NIPGR/430). نشكر الطلاب المتدربين، الآنسة ريشيكا، والسيد جاياشندرانيان، والآنسة دورغاديفي على المساعدة التقنية أثناء تصوير الفيديو، والسيد سانديب ديكسيت، والآنسة أنجالي، والدكتور أفانيش راي على تقييم البيانات الأولية وملفات المخطوطات تقييماً نقدياً. ونشكر السيد رحيم هـ طرافدار والسيد سوندر سولانكي على مساعدتهما في المختبر. ونحن نعترف DBT-eLibrary كونسورتيوم (DeLCON) ومكتبة NIPGR لتوفير الوصول إلى الموارد الإلكترونية ومرفق نمو النبات NIPGR لدعم نمو النبات / الفضاء.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| Fungus- Rhizoctonia bataticola< / em> | لقاح مسببات الأمراض | من النوع الهندي مجموعة الثقافة رقم 8365 | GenBank: MH509971.1 ، ITCC 8635 (https://www.iari.res.in/index.php?option=com_content&view=article& ؛ id = 1251 & Itemid = 1370) |
| مزيج التربة | وسط التربة في المختبر | Keltech Energies Limited ، بنغالور ، الهند | http://www.keltechenergies.com/ |
| ورق الترشيح | النشاف لدعم نمو النبات | هيميديا | http://himedialabs.com/catalogue/chemical2017/index.html#374 |
| وعاء | زراعة النباتات | أواني بحجم 10 و 30 سم | أواني الحضانة المستخدمة بشكل روتيني ، على سبيل المثال ، https://dir.indiamart.com/impcat/nursery-pots.html |
| سكر العنب البطاطس أجار / مرق | ثقافة الفطر والحفاظ على الفطر | Cat # 213400 ، DifcoTM ، MD ، الولايات المتحدة الأمريكية | https://www.fishersci.com/shop/products/bd-difco-dehydrated-culture-media-potato-dextrose-agar-3/p-4901946 |
| حاضنة | زراعة الفطريات | LOM-150-2 و S / N AI13082601-38 و MRC وحاضنة وشاكر | http://www.mrclab.com/productDetails.aspx?pid=91131 |
| غرفة النمو | زراعة النباتات في حالة خاضعة للرقابة | نموذج رقم A1000 ، كونفيرون ، كندا | https://www.conviron.com/products/gen1000-reach-in-plant-growth-chamber |
| تدفق الهواء الرقائقي | تنفيذ تمارين معقمة | Telstar ، Bio II advance ، خزانة من الفئة الثانية ، EN-12469-2000 | https://www.telstar.com/lab-hospitals-equipment/biological-safety-cabinets/bio-ii-advance-plus/ ، شبكة http://www.atlantisindia.co.in/laminar-air-flow.html |
| تصفية الفطريات | الفطرية شبكة ناموسية نايلون | مع حجم المسام بقطر 0.6-1 مم | |
| الأوتوكلاف | الأوتوكلافينج وسائل الإعلام وبذور الحمص | الأوتوكلاف | http://www.scientificsystems.in/autoclave |
| المجاهر | تصور العدوى انج الفطريات | الفطرية SMZ25 / SMZ18 ، المجاهر المجسمة البحثية ، المجهر المجسم التعليمي Leica EZ4 | https://www.microscope.healthcare.nikon.com/products/stereomicroscopes-macroscopes/smz25-smz18 https://www.leica-microsystems.com/products/stereo-microscopes-macroscopes/p/leica-ez4/ https://www.microscopyu.com/museum/eclipse-80i |
| ميزان | الوزن وزن الفطريات والمواد الكيميائية | Sartorius ميزان الوزن الإلكتروني Sartorius ، BSA 4202S-CW | https://www.sartorius.com/en/products/weighing/laboratory-balances |
| WGA-FITC | تلطيخ الفطريات | Sigma | https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/l4895?lang=en®ion=IN |
| الفطريات الأزرق الأنيلين | هيميديا | http://www.himedialabs.com/intl/en/products/Chemicals/Dyes-Indicators-and-Stains/Aniline-blue-Water-soluble-Practical-grade-GRM901 |
المراجع
- Sharma, M., Ghosh, R., Pande, S. Dry root rot (Rhizoctonia bataticola (Taub.) Butler): an emerging disease of chickpea - where do we stand. Archives of Phytopathology and Plant Protection. 48 (13-16), 797-812 (2015).
- Srinivas, P. Studies on dry root rot of chickpea (Cicer arietinum L.). , Available from: http://krishikosh.egranth.ac.in/handle/1/93135 (2016).
- Sinha, R., Irulappan, V., Mohan-Raju, B., Suganthi, A., Senthil-Kumar, M. Impact of drought stress on simultaneously occurring pathogen infection in field-grown chickpea. Scientific Reports. 9 (1), (2019).
- Nene, Y., Haware, M., Reddy, M. Chickpea diseases: resistance screening techniques, information bulletins No. 10. Patancheru. Information Bulletin No. 10. Patancheru, A.P., India: International CroDS Research Institute for the Semi-Arid Tropics. , 1-10 (1981).
- Pande, S., Krishna Kishore, G., Upadhyaya, H. D., Narayana Rao, J. Identification of sources of multiple disease resistance in mini-core collection of chickpea. Plant Disease. , (2006).
- Pandey, P., Irulappan, V., Bagavathiannan, M. V., Senthil-Kumar, M. Impact of combined abiotic and biotic stresses on plant growth and avenues for crop improvement by exploiting physio-morphological traits. Frontiers in Plant Science. 8, (2017).
- Irulappan, V., Senthil-Kumar, M. Morpho-physiological traits and molecular intricacies associated with tolerance to combined drought and pathogen stress in plants. Biotechnologies of Crop Improvement, Volume 3: Genomic Approaches. , (2018).
- Jensen, A. B., et al. Standard methods for fungal brood disease research. Journal of Apicultural Research. 52 (1), 1-39 (2013).
- Agrios, G. Plant Pathology: Fifth Edition. , 9780080473(2004).
- Coley-Smith, J. R., Cooke, R. C. Survival and germination of fungal sclerotia. Annual Review of Phytopathology. , (1971).
- Nagamma, G., Saifulla, M., Sab, J., Pavitra, S. Screening of chickpea genotypes against dry root rot caused by Macrophomina phaseolina (tassi) goid. 10 (4), 1795-1800 (2015).
- Infantino, A., et al. Screening techniques and sources of resistance to root diseases in cool season food legumes. Euphytica. 147 (1-2), 201-221 (2006).
- Khaliq, A., et al. Integrated control of dry root rot of chickpea caused by Rhizoctonia bataticola under the natural field condition. Biotechnology Reports. 25, 00423(2020).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
