تقدم هذه الدراسة منهجيات لدراسة الآليات البكولوجية والجزيئية الكامنة الكامنة في الحمص – تفاعلRhizoctonia bataticola. طريقة ورقة النشاف مفيد لدراسة بسرعة استجابات الحمص النمط الجيني، في حين أن الطريقة المريضة القائمة على وعاء يمكن استخدامها لفرض الجفاف في وقت واحد وعدوى R. bataticola والشاشة للنوعين الجينيين متسامح.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
التعفن الجاف تعفن التعفن في الحمص: منهجية مفصلة
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يُشكل مرض تعفن الجذر الجاف (DRR) تهديدًا ناشئًا للإجهاد الحيوي لزراعة الحمص في جميع أنحاء العالم. ويتسبب في ذلك من قبل مسببات الأمراض الفطرية التي تحملها التربة، Rhizoctonia bataticola. في الأدبيات ، وشاملة ومفصلة بروتوكولات خطوة بخطوة على مقايسات المرض متناثرة. تقدم هذه المقالة تفاصيل كاملة عن الخطوات التي تتضمنها في إعداد تقنية الورق النشاف لفرز النماذج الجينية بسرعة لمقاومة DRR. تقنية الورق النشاف سهلة وأقل تكلفة. طريقة أخرى، استنادا إلى نهج وعاء المريض، هو تقليد العدوى الطبيعية ويمكن تطبيقها لدراسة المكونات التفاعل - النبات، الممرض، والبيئة- المشاركة في مثلث المرض.
وعلاوة على ذلك، يحدث في الطبيعة معدل الجفاف في معظم الأحيان في مناطق زراعة الحمص البعلي، حيث تنحسر رطوبة التربة مع تقدم نمو المحاصيل. ومن المعروف الإجهاد الجفاف لضمير نباتات الحمص لمرض DRR. يمكن أن يمهد الفهم الباثومورفولوجي والجزيئي للتفاعل بين النبات والأورام تحت ضغط الجفاف الطريق لتحديد أصناف مقاومة للحمض الكاسح من بركة الحمص الجرثومية. توفر هذه المقالة منهجية تدريجية لإعداد وعاء مريض ومقايسة المرض اللاحقة. وعموما، فإن المعلومات المقدمة هنا سوف تساعد الباحثين على إعداد R. bataticola inoculum الفطرية، والحفاظ على هذا الممرض، وإعداد تقنية ورقة النشاف، وإعداد الثقافة المريضة ووعاء المرضى، وتقييم العدوى المسببة للأمراض في نباتات الحمص.
المقدمة
تعفن الجذر الجاف (DRR) هو واحد من الأمراض ذات الأهمية الاقتصادية في الحمص1،2. وهو مرض الجذر محددة الناجمة عن Rhizoctonia bataticola (teleomorph، Macrophomina phaseolina). النباتات المصابة تفتقر إلى الجذور الجانبي وتمتلك taproots هشة وأوراق الشجر الصفراء1,3. وقد أفيد عن أن DRR تحت ضغط الجفاف يشكل تهديدا ناشئا لزراعة الحمص1،2،3. وعلاوة على ذلك، أفيد أن حالات الحد من مخاطر الكوارث قد تفاقمت في ظل ضغوط الجفاف في ظل الظروف الميدانية
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. عزل R. bataticola وتخزين
- تفاصيل النمط الجيني للحمص وأعراض DRR
- استخدام النباتات الحمص (نوع وراثي، JG 62) التي تظهر عموما أعراض DRR نموذجية، مثل الجافة، وهشاشة الجذر الأساسي مع عدم وجود جذور جانبية وmicrosclerotia تحت لحاء وداخل11،3.
- جمع وغسل
- النباتات اقتلاع تظهر أعراض مثل الجافة القش الملونة ورقة وهشاشة الجذر الأساسي مع microsclerotia تحت طبقة البشرة. في حين اقتلاع، جزء كبير من الجذور سيبقى داخل التربة كما الجذور المصابة هشة. إزالة حطام التربة الخشنة تعلق على الجذر. قطع الجذور بشكل منفصل وجمعها في مغلفات ورقية (27.5 سم × 12 سم) مع التسمية المناسبة ووض....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تهدف هذه الدراسة إلى إظهار تقنيات مثل الورق النشاف وتقنيات الوعاء المريض لتسهيل الفهم ال pathomorphological والجزيئية للتفاعل بين النبات ومسببات الأمراض تحت ضغط الجفاف. لتحقيق ذلك، تم جمع النباتات التي تظهر أعراض DRR1،3،4 من حقل الحمص ، وتم عزل الفطريات باستخدام طريقة طرف الواصلة8. R. ثقافة فطرية bataticola يظهر رمادي داكن على لوحة المساعد الشخصي الرقمي ومائل على أربعة أيام بعد الحضانة (
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
توفر تقنية الورق النشاف نهجًا مباشرًا لفحص الأنماط الجينية للحمص في ظل ظروف المختبر. التلقيح الانخفاض تمكن من التحقيق في التفاعل على أساس زمني مع سهولة السيطرة على الحمل inoculum(الشكل التكميلي 1)ويسهل فحص في المختبر. وعلاوة على ذلك، يمكن استخدام الشتلات حتى الشباب. يمكن أن تعطي ثقافة فطرية عمرها خمسة أيام(الشكل 1B)ما يكفي من التلقيح لتصيب النباتات. يحتوي inoculum السائل على كل من الميكوليا وmicrosclerotia (الشكل 1D & E). يمكن ا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدينا ما نكشفه
شكر وتقدير
ويدعم المعهد الوطني لبحوث الجينوم النباتي المشاريع في مختبر M.S.K. 6- تعترف المنظمة السادسة بـ DBT-JRF (DBT/2015/NIPGR/430). نشكر الطلاب المتدربين، الآنسة ريشيكا، والسيد جاياشندرانيان، والآنسة دورغاديفي على المساعدة التقنية أثناء تصوير الفيديو، والسيد سانديب ديكسيت، والآنسة أنجالي، والدكتور أفانيش راي على تقييم البيانات الأولية وملفات المخطوطات تقييماً نقدياً. ونشكر السيد رحيم هـ طرافدار والسيد سوندر سولانكي على مساعدتهما في المختبر. ونحن نعترف DBT-eLibrary كونسورتيوم (DeLCON) ومكتبة NIPGR لتوفير الوصول إلى الموارد الإلكترونية ومرفق نمو النبات NIPGR لدعم نمو النبات / الفضاء.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| Fungus- Rhizoctonia bataticola< / em> | لقاح مسببات الأمراض | من النوع الهندي مجموعة الثقافة رقم 8365 | GenBank: MH509971.1 ، ITCC 8635 (https://www.iari.res.in/index.php?option=com_content&view=article& ؛ id = 1251 & Itemid = 1370) |
| مزيج التربة | وسط التربة في المختبر | Keltech Energies Limited ، بنغالور ، الهند | http://www.keltechenergies.com/ |
| ورق الترشيح | النشاف لدعم نمو النبات | هيميديا | http://himedialabs.com/catalogue/chemical2017/index.html#374 |
| وعاء | زراعة النباتات | أواني بحجم 10 و 30 سم | أواني الحضانة المستخدمة بشكل روتيني ، على سبيل المثال ، https://dir.indiamart.com/impcat/nursery-pots.html |
| سكر العنب البطاطس أجار / مرق | ثقافة الفطر والحفاظ على الفطر | Cat # 213400 ، DifcoTM ، MD ، الولايات المتحدة الأمريكية | https://www.fishersci.com/shop/products/bd-difco-dehydrated-culture-media-potato-dextrose-agar-3/p-4901946 |
| حاضنة | زراعة الفطريات | LOM-150-2 و S / N AI13082601-38 و MRC وحاضنة وشاكر | http://www.mrclab.com/productDetails.aspx?pid=91131 |
| غرفة النمو | زراعة النباتات في حالة خاضعة للرقابة | نموذج رقم A1000 ، كونفيرون ، كندا | https://www.conviron.com/products/gen1000-reach-in-plant-growth-chamber |
| تدفق الهواء الرقائقي | تنفيذ تمارين معقمة | Telstar ، Bio II advance ، خزانة من الفئة الثانية ، EN-12469-2000 | https://www.telstar.com/lab-hospitals-equipment/biological-safety-cabinets/bio-ii-advance-plus/ ، شبكة http://www.atlantisindia.co.in/laminar-air-flow.html |
| تصفية الفطريات | الفطرية شبكة ناموسية نايلون | مع حجم المسام بقطر 0.6-1 مم | |
| الأوتوكلاف | الأوتوكلافينج وسائل الإعلام وبذور الحمص | الأوتوكلاف | http://www.scientificsystems.in/autoclave |
| المجاهر | تصور العدوى انج الفطريات | الفطرية SMZ25 / SMZ18 ، المجاهر المجسمة البحثية ، المجهر المجسم التعليمي Leica EZ4 | https://www.microscope.healthcare.nikon.com/products/stereomicroscopes-macroscopes/smz25-smz18 https://www.leica-microsystems.com/products/stereo-microscopes-macroscopes/p/leica-ez4/ https://www.microscopyu.com/museum/eclipse-80i |
| ميزان | الوزن وزن الفطريات والمواد الكيميائية | Sartorius ميزان الوزن الإلكتروني Sartorius ، BSA 4202S-CW | https://www.sartorius.com/en/products/weighing/laboratory-balances |
| WGA-FITC | تلطيخ الفطريات | Sigma | https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/l4895?lang=en®ion=IN |
| الفطريات الأزرق الأنيلين | هيميديا | http://www.himedialabs.com/intl/en/products/Chemicals/Dyes-Indicators-and-Stains/Aniline-blue-Water-soluble-Practical-grade-GRM901 |
المراجع
- Sharma, M., Ghosh, R., Pande, S. Dry root rot (Rhizoctonia bataticola (Taub.) Butler): an emerging disease of chickpea - where do we stand. Archives of Phytopathology and Plant Protection. 48 (13-16), 797-812 (2015).
- Srinivas, P. Studies on dry root rot of chickpea (Cicer arietinum L.). , Available from:
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
