مقالة منهجية

ثقافة الخلايا الشحمية ثلاثية الأبعاد كنموذج لدراسة إعادة تشكيل الأنسجة الدهنية البيضاء الناجمة عن الدنف

DOI:

10.3791/61853

⸱

يناير 18, 2021

 ,  ,  ,  , 
1Department of Integrated Biotechnology, University of Mogi das Cruzes, 2Department of Biochemistry, Boston University School of Medicine, 3Obesity Research Center, Department of Medicine, Boston University School of Medicine

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف هذا البروتوكول نظام ثقافة الطباعة المغناطيسية ثلاثي الأبعاد (3D) الذي يسمح بتشريح الأنسجة الدهنية البيضاء (WAT) الناجمة عن وسط مكيف من الخلايا السرطانية. يسمح استخدام نظام ثقافة ثلاثي الأبعاد للخلايا الشحمية UCP1 + التي تعبر عن بروتين فلوري أخضر (GFP) بدراسة الخلايا الشحمية البيج التي تساهم في إعادة تشكيل الأنسجة الدهنية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يقدم دنف السرطان (CC) نفسه على أنه متلازمة ذات مظاهر متعددة ، مما يتسبب في اختلال التوازن الأيضي الملحوظ متعدد الأعضاء. في الآونة الأخيرة ، تم اقتراح تحفيز الهزال الشبكي بواسطة العديد من الوسطاء الالتهابيين ، مما قد يعطل علم وظائف الأعضاء التكاملي للأنسجة الدهنية والأنسجة الأخرى مثل الدماغ والعضلات. في هذا السيناريو ، يمكن للورم البقاء على قيد الحياة على حساب المضيف. في الأبحاث السريرية الحديثة ، ارتبطت شدة استنفاد رواسب الدهون المختلفة سلبا بنتيجة بقاء المريض. أظهرت الدراسات أيضا أن اضطرابات التمثيل الغذائي المختلفة يمكن أن تغير إعادة تشكيل الأنسجة الدهنية البيضاء (WAT) ، خاصة في المراحل المبكرة من تطور الدنف. يعد الخلل الوظيفي في WAT الناتج عن إعادة تشكيل الأنسجة مساهما في دنف الكلي ، حيث تتكون التعديلات الرئيسية في WAT من التغيرات الوظيفية المورفولوجية ، وزيادة تحلل الدهون في الخلايا الشحمية ، وتراكم الخلايا المناعية ، وتقليل تكوين الشحم ، والتغيرات في عدد الخلايا السلفية ، وزيادة "المنافذ" التي تحتوي على خلايا البيج / برايت.

لدراسة الجوانب المختلفة لإعادة تشكيل WAT الناجم عن دنف ، لا سيما التغييرات في الخلايا السلفية وإعادة تشكيل البيج ، كانت الثقافة ثنائية الأبعاد (2D) هي الخيار الأول للدراسات في المختبر. ومع ذلك، فإن هذا النهج لا يلخص بشكل كاف تعقيد واتضاع واتسا. تساعد المقايسات المحسنة لإعادة بناء AT ex vivo الوظيفية على فهم التفاعلات الفسيولوجية بين مجموعات الخلايا المتميزة. يصف هذا البروتوكول نظاما فعالا ثلاثي الأبعاد لزراعة أنسجة الطباعة (3D) يعتمد على الجسيمات النانوية المغناطيسية. تم تحسين البروتوكول للتحقيق في إعادة تشكيل WAT الناجمة عن العوامل الناجمة عن الدنف (CIFs). تظهر النتائج أن الثقافة ثلاثية الأبعاد هي أداة مناسبة لدراسة نمذجة WAT خارج الجسم الحي وقد تكون مفيدة للشاشات الوظيفية لتحديد الجزيئات النشطة بيولوجيا لتطبيقات مجموعات الخلايا الدهنية الفردية والمساعدة في اكتشاف العلاج المضاد للدفق الخلوي القائم على WAT.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تتكون الكائنات الحية من خلايا في بيئات مكروية ثلاثية الأبعاد مع تفاعل خلية خلية ومصفوفة خلية وديناميكيات نقل متقنة للمغذيات والخلايا1،2. ومع ذلك ، فقد تم إنشاء معظم المعرفة الأساسية المكتسبة في بيولوجيا الخلية باستخدام زراعة الخلايا أحادية الطبقة (2D). على الرغم من أن الثقافة ثنائية الأبعاد يمكن أن تجيب على بعض الأسئلة الميكانيكية ، إلا أن هذا النهج يلخص بشكل غير كاف البيئة الطبيعية التي توجد فيها الخلايا وقد يكون غير متوافق مع التنبؤ باستجابة دوائية معقدة1. علاوة على ذلك ، تشعر الخلايا بمحيطها المادي من خلال النقل الميكانيكي. في الواقع ، تترجم القوى الميكانيكية إلى إشارات كيميائية حيوية تؤثر في النهاية على أنماط التعبير الجيني ومصير الخلية. في العقود القليلة الماضية ، ظهرت زراعة الأنسجة ثلاثية الأبعاد كأداة جديدة في المختبر يمكنها محاكاة البيئة المكروية في الجسم الحي بدقة أكبر. يمكن أن يؤدي ذلك إلى تجنب بعض المزالق الميكانيكية الناتجة عن مناهج 2D في المختبر3.

يعرف دنف السرطان (CC) بأنه متلازمة ذات مظاهر متعددة ، مما يتسبب في اختلال التوازن الأيضي الملحوظ متعدد الأعضاء. أثناء تطور دنف ، يخضع WAT للعديد من التغييرات المورفولوجية مما يؤدي إلى زيادة تحلل الدهون في الخلايا الشحمية ، وتراكم الخلايا المناعية ، وانخفاض تكوين الشحم ، وتغيرات في عدد الخلايا السلفية ، وزيادة "المنافذ" التي تحتوي على خلايا بيج / برايت (إعادة تشكيل البيج)4. ومع ذلك ، فإن تلخيص الآلية التي يؤثر بها الدنف على إعادة تشكيل WAT باستخدام النماذج المختبرية يمثل تحديا تقنيا كبيرا. في الواقع ، استخدمت بعض الدراسات التي حاولت التحقيق في اتصال الورم / الأنسجة طبقة أحادية في ثقافة الخلايا المختبرية (2D) ، للتحايل على تعقيد البيئة المكروية ثلاثية الأبعاد ل WAT.

على الرغم من أن العديد من الأساليب التجريبية تولد ثقافة ثلاثية الأبعاد ، إلا أنه يفضل استخدام ثلاث طرق تجميع مختلفة لإنتاج الأديبوسفيرويدات: الرفع المغناطيسي أو الطباعة5 ، والقطرة المعلقة6 ، وأنظمة السقالةMatrigel 7. على الرغم من كونها مناسبة للشحميات ، إلا أن هذه الأنظمة لها مزايا وعيوب ويجب اختيارها وفقا لخصائص كل تصميم تجريبي. بناء على القيود المذكورة أعلاه ، تم استخدام طريقة الطباعة المغناطيسية لتوليد ثقافات الخلايا ثلاثية الأبعاد5. تستخدم هذه الطريقة مجموعة من الجسيمات النانوية المغناطيسية التي تتكون من جزيئات الذهب النانوية وأكسيد الحديد ، مما يجعل طريقة الطباعة مناسبة لمعظم أنواع الخلايا. هنا ، تم استخدام مزارع الخلايا ثلاثية الأبعاد للحث على تكوين الشحم ، وتم استخدام CIFs لإعادة إنتاج الحالة البيئية ل CC.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. حضانة الخلايا ثنائية الأبعاد مع الجسيمات النانوية المغناطيسية

  1. تنمو الثقافات ثنائية الأبعاد الملتصقة إلى ~ 70٪ التقاء باستخدام إجراءات زراعة الخلايا القياسية.
  2. تحضير مجموعة الجسيمات النانوية المغناطيسية. أخرجيها من الثلاجة واتركيها دافئة إلى درجة حرارة الغرفة (20-25 درجة مئوية) لمدة 15 دقيقة1.
  3. الوسط المختلط: أضف الجسيمات النانوية المغناطيسية مباشرة إلى 12 مل من الوسط في ألواح زراعة الخلايا مقاس 100 مم. قم بتعليق الوسط وإعادة تعليقه عدة مرات للحصول على توزيع متجانس للجسيمات النانوية.
    ملاحظة: سيظهر الوسط داكنا بسبب اللون البني لأكسيد الحديد. يوصى بتركيز 2.5 ميكرولتر / سم2 من منطقة الاستزراع.
  4. اغسل صفيحة الثقافة ثنائية الأبعاد مقاس 100 مم ثلاث مرات بمحلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS).
  5. أضف 12 مل من الوسط المختلط من الخطوة 1.3 إلى ألواح زراعة الخلايا 100 مم. احتضان الألواح طوال الليل في حاضنة (37 درجة مئوية ، 5٪ ثاني أكسيدالكربون 2) للسماح بربط الجسيمات النانوية المغناطيسية بالخلايا

2. إنشاء ثقافات ثلاثية الأبعاد مع تجميع كروي في لوحات 96 بئر

  1. بعد الحضانة طوال الليل ، اغسل الخلايا لإزالة أي وسيط متبقي وجسيمات نانوية مغناطيسية غير متصلة عن طريق تحريك الألواح برفق باستخدام 3 × 10 مل من PBS.
  2. قم بشفط PBS من طبق بتري وافصل الخلايا عن طريق الحضانة بمحلول حمض رباعي الأسيتيك تريبسين - إيثيلين ديامين (EDTA) بنسبة 0.25٪ لمدة 2-5 دقائق عند 37 درجة مئوية.
  3. أثناء انتظار انفصال الخلايا ، قم بتطهير المحركات المغناطيسية بنسبة 70٪ من الإيثانول1.
  4. بعد انفصال الخلايا ، أضف وسيطا يحتوي على مصل بحجم 4 أضعاف حجم محلول التربسين EDTA لتحييد تأثير التربسين ، ثم انقل المعلق إلى أنبوب مخروطي الشكل.
  5. جهاز الطرد المركزي للتعليق ، عند 500 × جم لمدة 10 دقائق. استنشق المادة الطافية ، مع الحرص على عدم لمس الحبيبات.
    ملاحظة: بعد الطرد المركزي ، يجب أن تظهر الخلايا بنية اللون ، ويجب أن تظهر معلقات الخلايا في الوسط أغمق من المعتاد. يجب أن تظهر الخلايا مليئة بالجسيمات النانوية1.
  6. عد الخلايا المعلقة واحسب حجم الأحجام المتوسطة اللازمة لإنشاء ثقافات ثلاثية الأبعاد. بالنسبة للأديبوسفيرويدات، استخدم 5,000 إلى 10,000 خلية في 150 ميكرولتر في ألواح 96 بئرا.
  7. باستخدام مجموعة الطباعة الحيوية المكونة من 96 بئرا ، ضع لوحة طاردة للخلايا من 96 بئرا في الجزء العلوي من محرك الأقراص الكروي.
  8. ماصة 150 ميكرولتر من تعليق الخلية في كل بئر من الصفيحة المكونة من 96 بئرا وأغلق اللوحة للسماح للخلايا بالتجمع في الأسفل على شكل مغناطيس.
  9. اترك اللوحة على محرك كروي في الحاضنة لمدة 1-2 ساعة للحصول على كروي كفء.
    ملاحظة: يجب أن تظهر هذه الثقافات كثيفة وبنية ويجب طباعتها في اللوحة (الشكل S1). يقدم الشكل S2 سير عمل ملخص للخطوات الرئيسية للطباعة المغناطيسية ثلاثية الأبعاد للتجميع الكروي في ألواح 96 بئرا.

3. تحريض الشحم الأبيض

  1. إعداد وسائط الصيانة والحث8 ؛ تحضير وسط الحث قبل كل استخدام.
    1. تحضير وسط الصيانة الذي يحتوي على 5 ميكروغرام / مل من الأنسولين (مخزون 10 مجم / مل مخزن عند 4 درجات مئوية لمدة أسبوع واحد) و 0.5 ميكرومتر روزيغليتازون (10 ملي مولار مخزون في ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO)).
    2. تحضير وسط تحريضي يحتوي على 125 ميكرومتر من الإندوميتاسين من مخزون 0.125 م في الإيثانول ، و 2 ميكروغرام / مل من ديكساميثازون من مخزون 2 مجم / مل في الإيثانول ، و 0.5 ملي مولار من إيزوبوتيل -1 ميثيل زانثين (IBMX) من مخزون 0.25 مليون في DMSO ، و 0.5 ميكرومتر روزيغليتازون من مخزون 10 ملي مولار في DMSO.
      ملاحظة: سخني الإندوميتاسين إلى 60 درجة مئوية حتى يذوب.
  2. بعد 24-48 ساعة من طباعة الكرويات ، استبدل الوسط الكامل العادي بوسط الحث (اليوم 0).
  3. بعد 48 ساعة (اليوم 2) ، استبدل وسط الحث بوسط الصيانة.
  4. قم بتغيير الوسط كل 3-5 أيام حتى تتمايز الخلايا تماما.
    ملاحظة: بشكل عام ، بعد 7-8 أيام من التحفيز باستخدام وسط الحث ، تتمايز الخلايا إلى خلايا دهنية ناضجة وتمتلئ بقطرات الزيت التي يمكن رؤيتها عند حواف الأديبوسفيرويدات.

4. إنتاج وسط مكيف لسرطان الرئة لويس (LLC-CM)

  1. خلايا سرطان الرئة لويس بذرة (LL / 2) في صفائح زراعة الخلايا 100 مم في وسط النمو بكثافة 6000 خلية / سم2.
    ملاحظة: يحتوي وسط النمو على وسط النسر المعدل (DMEM) من Dulbecco مع 10٪ مصل بقري للجنين (FBS) و 100 وحدة / مل من البنسلين والستربتومايسين.
  2. بعد يومين ، استبدل الوسط الموجود في كل طبق بوسط نمو جديد.
    ملاحظة: تحتوي خلايا LL / 2 على مزيج غير متجانس من الخلايا الملتصقة (العدد الأعلى) والخلايا العائمة.
  3. بعد يومين (اليوم 4) ، قم بحصاد الوسط المكيف ، وقم بتنظيفه من الخلايا والحطام عن طريق الطرد المركزي (500 × جم ، 10 دقائق).
  4. قم بتجميد كميات الوسط المكيف في النيتروجين السائل لاستخدامها لاحقا.
    ملاحظة: لعلاج الكرات بالوسط المكيف ، استخدم مزيجا من 75٪ وسط نمو طازج و 25٪ وسط مكيف LLC.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الأديبوسفيرويد من ثقافة ثلاثية الأبعاد لخلايا الكسر الوعائي اللحمي (SVF)
تم إعداد كل من الثقافات ثلاثية الأبعاد و 2D المتجمعة بنفس الأعداد من خلايا SVF من نفس مستحضر WAT الإربي للفأر (الشكل 1 أ ، الشكل 1 ب) وإخضاعها لنفس البروتوكول التجريبي لمقارنة علامة التعبير الجيني. تم تحفيز الكرات بوسط الحث الذي تم توسيعه بمرور الوقت. يوضح الشكل 2 ب زيادة في كثافة الخلايا متعددة الأبعاد ثنائي...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يضع هذا البروتوكول نظاما ثلاثي الأبعاد لزراعة الخلايا الشحمية لدراسة تمايز الخلايا الشحمية في الأديبوسفيرويد المشتقة من خلايا SVF الأولية من WAT. بالمقارنة مع ثقافة التمسك 2D التقليدية ، يسهل هذا النظام ثلاثي الأبعاد إعادة عرض AT ، والذي يشبه إلى حد كبير ظروف الجسم الحي. في السنوات القليلة الماضية ، أظهرت الدراسات أن زراعة الخلايا في 3D ينتج مورفولوجيا خلوية وإشارات مميزة مقارنة بنظام الثقافة ثنائي الأبعاد3. يختلف مورفولوجيا الخلايا الليفية في 3D عن تلك الموجودة ف...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويعلن أصحاب البلاغ أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم دعم هذا العمل من خلال منح من المعاهد الوطنية للصحة DK117161 ، DK117163 إلى SRF ، و P30-DK-046200 لبيولوجيا الدهون والتمثيل الغذائي للمغذيات الأساسية لمركز أبحاث التغذية والسمنة في بوسطن ، ومن قبل منح مؤسسة أبحاث ساو باولو (FAPESP): 2018/20905-1 و CNPq 311319 / 2018-1 إلى MLBJr.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
3-Isobutyl-1-methylxanthineSigma-Aldrich (سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية)I-5879لثقافة الخلايا
96-Well ، Greiner الأسود(مونرو ، نورث كارولاينا ، الولايات المتحدة الأمريكية)655841زراعة الخلايا
Alexa Fluor 647 AffiniPure F (ab') 2< / sub> جزء حمار مضاد للأرانب IgG (H + L) JacksonImmunoResearch711-606-152تلطيخ التألق المناعي ، ثانوي ، 1: 400 في TBS مع 0.1٪ Tween-20
CELL CULTURE MICROPLATE ، 96 بئر ، PS ، F-BOTTOM ، & micro ؛ شفاف ، أسود ، سيليستار ، سطح طارد للخلايا ، غطاء ، معقم ، 8 قطع / كيسغرينر (مونرو ، نورث كارولاينا ، الولايات المتحدة الأمريكية)655976زراعة الخلايا
ديكساميثازونسيجما ألدريتش (سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية)D-1756ثقافة الخلايا
DMEMCorning (ماناساس ، فيرجينيا ، الولايات المتحدة الأمريكية)10-017-CVثقافة الخلايا
مصل الأبقار الجنينية (توفا)الجوزاء الحيوي (غرب ساكرامنتو ، كاليفورنيا)100-500ثقافة الخلايا
إندوميتاسينسيجما ألدريتش (سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية)I-7378زراعة الخلايا
الأنسولينسيجما ألدريتش (سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية)I0516زراعة الخلايا
LL / 2 (LLC1) (ATCC CRL-1642) مجموعةالثقافة من النوع الأمريكي (ماناساس ، فيرجينيا ، الولايات المتحدة الأمريكية)CRL-1642خط خلايا سرطان الرئة لويس
NanoShuttle-PLGreiner (مونرو ، نورث كارولاينا ، الولايات المتحدة الأمريكية)657843زراعة الخلايا
NucBlue Fixed Cell ReadyProbes Reagent (DAPI)ThermoFisher (Waltham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية)R37606تلطيخ التألق المناعي ، باتباع تعليمات الشركة المصنعة
StrepCorning (Manassas ، VA ، الولايات المتحدة الأمريكية)30-002-CIثقافة الخلايا
Perilipin-1 (D1D8) XP & nbsp ؛ تقنية إشارات خلايا الأرانب mAb (دانفرز ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية)9349تلطيخ التألق المناعي ، أساسي ، 1: 1000 في TBS مع 0.1٪ Tween-20
RosiglitazoneSigma-Aldrich (سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية)R-2408زراعة الخلايا
Trypsin-EDTA ، 0.05٪Corning (ماناساس ، فيرجينيا ، الولايات المتحدة الأمريكية)25-052-CIثقافة الخلايا
<قوي > نسخ عكسي PCR الاشعال < / قوي >
< قوي > التمهيدي < / قوي >< قوي > إلى الأمام < / قوي >< قوي > عكسي < / قوي ><
م > Adipoq < / em >GTTCCCAATGTACCCATTCGCTGTTGCAGTAGAACTTGCCAG
em > Col4a1 < / em >TCCAAGGGCGAAGTGGTTACCCTTGCTCGCCTTTGACT
em>Cyclophilin a< / em>ATGGCACTGGCGGCAGGTCCTTGCCATTCCTGGACCCAAA
Fabp4< / em>TGGTGACAAGCTGGTGGTGGATGTCCAGGCCTCTTCCTGGCTCA
em>Fn1< / em>GCTTCCCAACTGGTTACCCTGGGTTGGTGATGAAGGGGGT
Pgc1a< / em>GAAAACAGGAACAGCAGCAGAGGGGGTCAGAGAAGAGATAAAG
em>Ucp1< / em>TCCTAGGGACCATCACCACCCAGCCGGCTGAGATCTTGTTTCC
strong>Mouse Genoping
Primer nameDescriptionSequence
Cre FGeneric Cre إلى الأمامGCG GTC TGG CAG TAA AAA CTA TC
Cre RGeneric Cre عكسGTG AAA CAG CAT TGC TGT CAC TT
oIMR7318mT / mG إلى الأمامCTC TGC TGC CTC CTG GCT TCT
oIMR7319mT / mG النوع البري العكسيCGA GGC GGA TCA CAA GCA ATA
oIMR7320mT / mG عكسTCA ATG GGC GGG GGT CGT T
WH336UCP1 متحولة إلى الأمامCAA TCT GGG CTT AAC GGG TCC
UCP1 عكس متحولةGTT GCA TCG ACC GGT TAA TGC AG
WH338UCP1 نوع البري إلى الأمامGGT CAG CCT AAT TAG CTC
WH339UCP1 النوع البري عكسGAT CTC CAC CTC CTC TGT C
مجموعة الطباعة الحيوية Pen < <<<< WH337

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Haisler, W. L., et al. Three-dimensional cell culturing by magnetic levitation. Nature Protocol. 8 (10), 1940-1949 (2013).
  2. Pampaloni, F., Reynaud, E. G., Stelzer, E. H. The third dimension bridges the gap between cell culture and live tissue. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 8 (10), 839-845 (2007).
  3. Eisenstein, M. Organoids: the body builders. Nature Methods. 15 (1), 19-22 (2018).
  4. Henriques, F., Júnior, M. L. B. Adipose tissue remodeling during cancer-associated cachexia: Translational features from adipose tissue dysfunction. Immunometabolism. 2 (4), 200032(2020).
  5. Tseng, H., et al. A spheroid toxicity assay using magnetic 3D bioprinting and real-time mobile device-based imaging. Scientific Reports. 5 (1), 13987(2015).
  6. Akama, T., Leung, B. M., Labuz, J., Takayama, S., Chun, T. H. Designing 3-D adipospheres for quantitative metabolic study. Methods Molecular Biology. 1566, 177-183 (2017).
  7. Muller, S., et al. Human adipose stromal-vascular fraction self-organizes to form vascularized adipose tissue in 3D cultures. Scientific Reports. 9 (1), 7250(2019).
  8. Aune, U. L., Ruiz, L., Kajimura, S. Isolation and differentiation of stromal vascular cells to beige/brite cells. Journal of Visualized Experiments. (73), e50191(2013).
  9. Henriques, F., et al. Toll-like receptor-4 disruption suppresses adipose tissue remodeling and increases survival in cancer cachexia syndrome. Scientific Reports. 8 (1), 18024(2018).
  10. Kir, S., et al. Tumour-derived PTH-related protein triggers adipose tissue browning and cancer cachexia. Nature. 513 (7516), 100-104 (2014).
  11. Petruzzelli, M., et al. A switch from white to brown fat increases energy expenditure in cancer-associated cachexia. Cell Metabolism. 20 (3), 433-447 (2014).
  12. Lopes, M. A., Oliveira Franco, F., Henriques, F., Peres, S. B., Batista, M. L. LLC tumor cells-derivated factors reduces adipogenesis in co-culture system. Heliyon. 4 (7), 00708(2018).
  13. Wang, H., Liu, L., Lin, J. Z., Aprahamian, T. R., Farmer, S. R. Browning of white adipose tissue with roscovitine induces a distinct population of UCP1(+) adipocytes. Cell Metabolism. 24 (6), 835-847 (2016).
  14. Grinnell, F. Fibroblast biology in three-dimensional collagen matrices. Trends Cell Biology. 13 (5), 264-269 (2003).
  15. Vidi, P. A., Bissell, M. J., Lelievre, S. A. Three-dimensional culture of human breast epithelial cells: the how and the why. Methods Molecular Biology. 945, 193-219 (2013).
  16. Fisher, M. F., Rao, S. S. Three-dimensional culture models to study drug resistance in breast cancer. Biotechnology Bioengineering. 117 (7), 2262-2278 (2020).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Cachexia Induced WAT RemodelingMagnetic Nanoparticle SystemProgenitor CellsBeige RemodelingAdipocyte LipolysisAdipogenesis ReductionImmune Cell AccumulationBeige Brite Cells
الفيديو قريباً

مقالات ذات صلة